Deteccin instrumental de antibiticos en alimentos

Cravzov, Alicia L. - Avallone, Carmen M. - Dupertuis, Patricia I.

Ctedra de Qumica Analtica Instrumental - Depto. de Qumica - Facultad de Agroindustrias - UNNE. Comandante Fernndez 755 - (3700) Pcia. Roque Senz Pea - Chaco - Argentina. Tel./Fax: +54 (03732) 420137 E-mail: acravzov@fai.unne.edu.ar ANTECEDENTES

Los antibiticos, del griego anti (=contra) y bios (=vida), son sustancias medicinales seguras que tienen el valor para destruir o inhibir el crecimiento de organismos infecciosos para el cuerpo, los que pueden ser bacterias, hongos, o animales minsculos llamados protozoos. Los antibiticos son aquellas sustancias producida por microorganismos que tienen accin bacteriosttica (multiplicacin de las bacterias), o bactericida (matan las bacterias), fungisttica o funguicida; ejercen su actividad antimicrobiana. La accin antibacterial de los antibiticos ocasiona un cambio en la capacidad de reproducirse y/o alimentarse, de las clulas microbianas. El gran xito teraputico en la lucha contra enfermedades de origen bacteriano trajo como consecuencia natural, para contrarrestar el deterioro microbiano de los alimentos, su empleo continuo y se comenz a utilizarse, en forma progresiva, a partir de 1945. Los antibiticos se encuentran incluidos entre los aditivos alimentarios, en la categora de conservadores. En las Preservatites in Food Regulations se los define como: Cualquier sustancia que tiene capacidad de inhibir, retardar o detener el crecimiento de los microorganismos, o cualquier deterioro de los alimentos debido a los microorganismos, o bien de ocultar los signos de cualquier tipo de deterioro. El C.A.A. en su Seccin XVIII - Aditivos Alimentarios, lista los antibiticos permitidos como conservantes en la Repblica Argentina, bajo los cdigos que figuran a continuacin: 58. Clorotetraciclina Segn pautas de la Farmacopea Nacional Argentina, FNA 100.1 Nisina (Incorporado por R 1130/85) FAO - Nutrition Meeting Series N 45A (1969) 100.3 Natamicina (Incorporado por R 19/95) FAO/OMS 103. Oxitetraciclina FNA Como los antibiticos pueden resultar una amenaza para el hombre y los animales, el uso excesivo de estos compuestos genera resistencia bacteriana, provocando as muchos problemas mdicos y veterinarios en todo el mundo; otra complicacin que presenta su uso, es la posibilidad de generar reacciones alrgicas en aquellos individuos con hipersensibilidad a dichos compuestos. Los residuos de antibiticos en materias primas pueden generar fermentaciones anormales en los salames y otros productos crnicos fermentados, como as tambin en leches fermentadas y quesos. El yogurt es el producto ms sensible, con solo 0,02 UI de penicilina por ml de leche, los microbios resistentes a la misma, se desarrollan haciendo que el aroma y aspecto del producto sean inaceptables. Resulta elemental la importancia del anlisis de antibiticos y de sus residuos en los alimentos. Las investigaciones existentes se centran en la penicilina y sus residuos, pero dada la gran variedad que existe, los estudios deben continuarse y ampliarse. MATERIALES Y M ETODOS

Para la investigacin se utiliz la bibliografa disponible en la Facultad de Agroindustrias e Internet, a fin de obtener elementos que puedan aportar algunas ideas de los mtodos disponibles y actualmente empleados para el anlisis de estas sustancias o sus residuos en los alimentos de consumo diario. Con los materiales valederos se diagram una compilacin bibliogrfica sobre el tema.

DISCUSION DE LOS RESULTADOS

Dada la problemtica planteada por el uso de los antibiticos en los alimentos o la presencia de sus residuos, hoy en da existen investigadores que estn trabajando arduamente en la preparacin y perfeccionamiento de mtodos analticos de suficiente sensibilidad para las determinaciones de estos compuestos. En la valoracin se emplean preferentemente los mtodos microbiolgicos, cuyo fundamento es la sensibilidad de ciertos microorganismos para los diversos antibiticos aplicados a distintas tcnicas, que se basan en la respuesta positiva, negativa, o graduada. Estos mtodos pueden demandar unos minutos, horas o hasta una noche entera de inoculacin, en el caso de los ms comunes; tambin los hay por dilucin en medio slido o en medio lquido, usando diferentes mtodos para determinar el efecto, como: desarrollo de bacterias testigos cambio de pH hemlisis turbidimetra reduccin de nitratos a nitritos etc. Los mtodos estandarizados por la A.O.A.C. para la determinacin de residuos de antibiticos en los alimentos pueden agruparse de la siguiente manera (Tabla N 1):

Tabla N 1: Mtodos Estandarizados ANTIBITICO MTODO

MICR OBIOLGICO MTODO QUIMICO

INSTRUMENTAL MTODOS EN

ESTUDIO Bacitracina Met. del Plato

Cilndrico, inoculo de M. flavus

Cromatografa Liquida con detector fotomtrico u.v.

Lasalocidina Met. Microbiolgico, inoculo de B. subtilis

Met Espectrofotometrico (determinacin fuorimetrica con correccin no especfica de fluorescencia por compejacion H3BO3)

Sulfametazina Espectrometra de masas y Cromatografa gaseosa con impacto de electrn, EIGC/MS Cromatografa gaseosa con detector de captura de electrones

Cloranfenicol E.L.I.S.A. por enzimoinmunoensayo competitivo en microplaca

Clorotetraciclina CTC

Met. Turbimetrico, inculo de S. aureus.

Ensayo microscopico con el reactivo de Sakaguchi

Griseofulvina Met. Espectrofotometrico, con columnacromatografica rellena con alumina activada

Sulfonamida Cromatografa en Capa Fina, TLC, con uso de fluorescamina y escaneo por densitometra de fluorescencia

H.P.L.C con arreglo de diodos

Tetraciclinas HPLC con arreglo de diodos

Existen adems otra metodologa de anlisis y es mediante la utilizacin de kits, basados en tcnicas inmunocromatogrficas, para realizar determinaciones rpidas de presencia o no de antibiticos principalmente para alimentos como leche y carnes. Podemos citar a modo de ejemplo la siguiente tcnica (Ver Diagrama N 1):

CARACTERSTICAS DEL TEST IC-BOVINO Diagrama N1: Ensayo de Inmunocromatografa

Amplio rango de deteccin Resultados en 5 minutos Nmero de etapas: 1 Anlisis de leche y queso Sin manipulacin previa de las muestras No necesita instrumentacin Elevada sensibilidad Alta especificidad Fcil de usar Interpretacin sencilla de los resultados Estabilidad: 1 ao.

CONCLUSION

Las tcnicas instrumentales son ms rpidas y tienen una elevada selectividad y limite de cuantificacin, pero no deben dejarse de lado los mtodos microbiolgicos, ya que la informacin ms fehaciente se obtendr realizando ambos tipos de estudios con su comparacin posterior. Un laboratorio bioqumico bromatolgico que quiera dedicarse al tipo de anlisis antes citado deber contar con equipamiento especfico de alta tecnologa. Adems de una seccin dedicada exclusivamente a los anlisis microbiolgicos. BIBLIOGRAF IA Y BIBLIOGRAFIA WEB

AOAC, Edited by Kennet Felrich, Edicin, 1990. CAA, Actualizacin Acumulada, Texto Actualizado de la Ley N 18.284 y del Decreto N 2.126/71, Marzocchi

Ediciones. Ecologa Microbiana de los Alimentos-Vol.1- International Commission on Microbiogical Specifications for Foods,

Editorial Acribia, Zaragoza, 1980. Ciencia de los Alimentos, Nutricin y Salud; B.A. Fox, A.G.Cameron, Editorial Limusa S.A., Mexico, 1 Edicin. Aditivos y Auxiliares de la Fabricacin en las Industrias Agroalimentarias, J.L. Multon, Editorial Acribia,

Zaragoza, 1988. Higiene y Toxicologa de los Alimentos, B.C. Hobbs, R.J. Gilbert, Editorial Acribia, Zaragoza 1996. Ciencia de los Alimentos, G.C. Birch, A.G. Cameron, M. Spencer, Editorial Hemisferio Sur, 1982. www.zeu-inmunotec.com members. tripod.com www. calidadalimentaria.com ww2. grn.es/avalls/genetic usembassy.state.gov/colombia www.healting.com www.icn.ch/matters-foodsp. www.oie.org.co www.cancunall.com www.ugr.es www.onunet.org.uy www.uvigo.es www.regargentina.com www.cfnavarra.es www.angelfire.com