ALERGIA MECANISMOS INMUNOLOGICOS METODOS DE DIAGNOSTICODr. Edgar Matos BenavidesInmunologo Alergologo

PREVALENCIA DE LAS ENFERMEDADES ALERGICASEN LA POBLACION PEDIATRICA GENERAL

En la actualidad se estima que: un 3% de los nios son alrgicos a alimentos un 8 % presentan dermatitis atpica entre un 8 % y un 10% padecen asma casi un 20 % sufren de rinitis o rinoconjuntivitis.

La mitad de la poblacin mundial ser alrgica en 2050

El Pas, martes 24 de junio de 2003

ENFERMEDAD ALERGICA: ETIOLOGIAPredisposicinGENETICAExposicin aALERGENOSENFERMEDAD ALERGICACONTAMINACIONHUMO TABACOVIRUS-BACTERIAS

ALERGIA Reaccin exagerada de defensa a una sustancia particular, que puede ser inhalada, ingerida o inoculada en nuestro cuerpo y provocar una respuesta inmunolgica de tipo inflamatorio.

Alergia una Enfermedad Sistmica RINITIS ALERGICACONJUNTIVITISSINUSITISOTITISRGEALERGIA ALIMENTARIADERMATITIS ATOPICAASMA BRONQUIAL AlergiaURTICARIAANGIOEDEMAPRURIGO PORINSECTOS

histamina,factor quimiotctico de los eosinfilosfactor quimiotctico de los neutrfilosleucotrienos prostaglandinas y tromboxanos factor activador de las plaquetas IL- 4 e IL- 5 vasodilatacin aumento de la permeabilidad vascular postcapilar edema contraccin de la musculatura lisa aumento de la secrecin de las glndulas mucosas

Componentes principales que se requieren para que la reaccin alrgica se desencadene

IgE

ALERGENOS

Mastocitos

HistaminaLeucotrienos

1Identificar y relacionar la clnica del paciente con los posibles alrgenos: HISTORIA CLNICA Etapas diagnsticas2Demostracin de sensibilizacin mediada por IgE para el o los alergenos sospechoso:P CUTNEA, IgE SRICA ESPECFICA3Confirmacin de que el alrgeno es el responsable de la clnica:P de PROVOCACION o EXPOSICIN CONTROLADATEST DE ACTIBACION DE BASOFILOS

PRUEBA CUTANEA INTRAEPIDERMICA

PRUEBA CUTANEA INTRAEPIDERMICA+Dimetro 3 mm15 minutos

solo estn indicadas en el estudio de la alergia medicamentosa y venenos

Prick-Film. Lectura de prick test con Escner

Prick-Film. Lectura de prick test con Escner

Aplicacin Alergenos Puncin con LancetaSecado Piel Espera de Reaccin

Contorneado de Habones Traslado a Hoja Codificada Lectura Escner Impresin Resultados

FUNDAMENTO RIDA.pdfLa prueba se basa en el principio del anlisis del immunoblot. Los alrgenos especiales estn pegados a la superficie de las membranas de la nitrocelulosa que se colocan en un canal de reaccin. .

Comparacin con el mtodo de referencia (IgE):Comparacin con el skin-prick test:Sensibilidad: 84.3 %Sensibilidad: 95.1 %

FUNDAMENTO immulite.pdfIMMULITE 2500 3gAllergy IgE Especfica es un anlisis enzimoinmunomtrico quimioluminiscente en fase slida, en dos pasos, Se basa en cinticas en fase lquida en formato de bola10,11 . Representa un avance significativo sobre los mtodos convencionales basados en la unin de los alrgenos a un soporte slido, como los discos de papel. Los alrgenos se unen covalentemente a una matriz polmero/copolmero soluble, la cual a su vez est marcada con un ligando. El uso de un copolmero aminoacdico aumenta la cantidad de alrgeno que puede soportar la matriz.

FUNDAMENTOUNICAPSYSTEM.docUniCAP IgE total es un anlisis cuantitativo in vitro para la medida de IgE total en muestras humanas del suero o del plasma. Anti-IgE, covalente unida a ImmunoCAP, reacciona con el IgE total en el espcimen paciente.Se los anticuerpos contra IgE marcados con una enzima se agregan para formar un complejo. Se agrega una solucin de desarrollo y una para parar la reaccin.Despus de parar la reaccin, la fluorescencia se mide. La fluorescencia es directamente proporcional con la concentracin de IgE en la muestra..

Tecnologa ImmunoCAP CAP SystemImmunoCAP

ImmunoCAPCapacidad de ligando: tubo recubierto; disco papel; esponja celulosa

TuborecubiertoImmunoCAPDisco papelactivadoEsponja celulosaactivada150150 Fases slidas:

IgE del paciente

Alergenos (Anti-IgE acoplado al ImmunoCAP)

Anti-IgE paciente unido a enzima -GalactosidasaComplejo: Alergeno-IgE paciente

Sustrato de la enzima -GalactosidasaComplejo: Alergeno-IgE paciente-Anti-IgE

Reaccin enzimtica: -Galactosidasa

Sustrato no fluorescente Sustrato fluorescente DeteccinFEIA: Fluoroenzimoimmunoensayo

N. Liappis, A. Starke, Allergologie, Jahrgang 20; no 6/1997: 291-295Reproducibilidad del Sistema ImmunoCAP

Patrn WHO 75/502 Tecnologa ImmunoCAPEl primer test alergolgico del mundo con calibracindirecta segn patrones 2 IRP WHO 75/502 pera IgE.

Similitudes y diferencias entre la tecnologa Phadia ImmunoCAPin vitro y la prueba cutnea in vivo Referencia: From In Vitro Veritas Broschyre

IG E Especifica

Tests de screening

Tests de screening

Tests de screening

Tests de screening

Tests de screening

1.-La identificacin precoz de los nios que padecern asma persistente es de capital importancia2.-La atopia es el principal factor de riesgo en el padecimiento de asma

3.-Es posible reconocer la atopia, desde muy temprana edad, identificando la sensibilizacin a alimentos y a inhalantes4.-En nios con dermatitis atpica, la presencia de esta sensibilizacin tiene un alto valor pronstico de evolucin futura a asmaConclusiones

1Identificar y relacionar la clnica del paciente con los posibles alrgenos: HISTORIA CLNICA Etapas diagnsticas2Demostracin de sensibilizacin mediada por IgE para el o los alergenos sospechoso:P CUTNEA, IgE SRICA ESPECFICA3Confirmacin de que el alrgeno es el responsable de la clnica:P de PROVOCACION o EXPOSICIN CONTROLADATEST DE ACTIBACION DE BASOFILOS

COMO SE Dx ALERGIAS2PRUEBAS CUTANEASIg E Srica

1 HISTORIA CLINICA

3PRUEBAS DE PROVOCACIONTEST DE ACTIVACION BASOFILOS

BASOFILOS

TAB

CITOMETRIA DE FLUJO

CITOMETRIA DE FLUJOProcedimiento que mide caractersticas de dispersin y fluorescencia que poseen las clulas conforme pasan por un rayo de luzLas clulas interaccionan con un rayo de luz causando dispersin dependiendo del tamao y la complejidad

CITOMETRIA DE FLUJODIGITALIZACION REPRESENTACION GRAFICA ANALISIS

Test de Activacion de Basofilos (TAB)Es una herramienta til en el diagnstico in vitro de las reacciones de hipersensibilidad inmediata a los Alergenos, Medicamentos, si estas son causados por mecanismos dependientes de IgE u otros mecanismos que conduzcan a la liberacin de histamina.

MARCADORES CELULARESCD63CD203cEs una protena granular tetraespan de 53 Kda Est anclada en los grnulos de la membrana de los basfilos Por CM se detecta Anti CD63 PE y anti IgE FITC

Es un Ag de superficie, expresado en basfilos humanos recientemente reconocida por el Acm 97A6Es una ectoenzima multifuncional llamada pirofosfatasa ectonucleotide phophodiesterase 3 (E-NPP3)

La poblacin celular de inters se marca con anticuerpos monoclonales en presencia del alrgeno. Previamente al anlisis por citometra de flujo, los eritrocitos se someten a lisis. A continuacin se excluyen los linfocitos T (clulas positivas CD3) y despus se analizan los basfilos utilizando la expresin de CRTH2 y CD203c. Los basfilos no activados y en reposo se identifican como CRTH2posCD203cdimCD3neg, mientras que los basfilos activados in vitro se identifican como CRTH2posCD203cbrightCD3neg. FUNDAMENTO

muestra

TEST DE ACTIVACIN DE BASFILOS USANDO CD203C VERSUS PRUEBAS CUTANEAS EN LA DETERMINACION DE REACCIONES ADVERSAS A METAMIZOL: UN ESTUDIO PILOTO

Matos Edgar1, Loyola-Sosa Steev1,2, Paredes Jos1, Inocente Rosario1, Paiva Mario1, Ros Hugo1, lvarez Marco11 Instituto de Hemafresis y Terapia Celular (IHEMATEC)2 Universidad Peruana Cayetano Heredia

Mtodos y MaterialesParticiparon 40 pacientes: 75.0% (30/40) con historia clnica positiva.

Historia Clnica de RAM AINEAINE no MetamizolMetamizolPruebas CutneasTest de Activacin de Basfilos CD203cPrick TestIntradermorreaccin

Resultados% sensibilizacin por RAM a Metamizol (30/40) segn:Prick Test: 0.0% (0/30)Intradermorreacin: 3.3% (1/30)TAB CD203c: 13.3% (4/30)

PRUEBAS CUTNEASPrick TestIntradermorreacinTAB CD203cPositivoNegativoPositivoNegativoPositivo04 (FN)13 (FN)Negativo036036TOTAL040139

ResultadosPT vs. TAB-CD203c:Sensibilidad: 0.0%Especificidad: 100.00% Valor Predictivo Negativo: 90.0%IR vs. TAC-CD203c:Sensibilidad: 25.0%Especificidad: 100.00% Valor Predictivo Negativo: 92.3%Valor Predictivo Positivo: 100.0%

ConclusionesSe tiene exitosamente una primera fase de evaluacin de desempeo del TAB-CD203c.TAB-CD203c presenta mejor performance para determinar alergia a frmacos; tipo Metamizol, frente a pruebas cutneas. Es necesario realizar estudios que evalen el costo-beneficio del uso del TAB-CD203c.

DISCUSIONLa BAT constituye una herramienta diagnstica valiosa de inters en el estudio de reacciones de hipersensibilidad inmediata a los medicamentos. Reproduce in vitro mecanismos de hipersensibilidad involucrados en reacciones alrgicas inmediatas.Tambin permite el diagnstico de reacciones alrgicas y pseudoalrgicas, particularmente por medicamentos que a menudo no son detectables por tcnicas serolgicas como la determinacin de IgE especfica.

DISCUSIONLa reproducibilidad intra-ensayo es muy notable en la alergia a medicamentos con coeficiente de variacin intra-ensayo de 0.89 (P