Manual Completo Bioquimica Clinica.manual de Practicas
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LABORATORIO DE BIOQUIMICA CLINICA FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICOBIOLOGICAS
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Practicas de Bioquimica
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LABORATORIO DE BIOQUIMICA CLINICA
INTRODUCCION
'Laboratorio clínico' es el lugar donde los alumnos aprenderán a realizar análisis clínicos que contribuyen al estudio, prevención, diagnóstico y tratamiento de los
problemas de salud de los pacientes. También se le conoce como Laboratorio
de Patología clínica. Los laboratorios de análisis clínicos, de acuerdo con sus funciones,
se pueden dividir en:
1. Laboratorios de Rutina o de seguimiento. Los laboratorios de rutina tienen cuatro
departamento básicos: Hematología, Inmunología, Microbiología y Química
Clínica (o Bioquímica).
Los laboratorios de rutina pueden encontrarse dentro de un hospital o ser externos
a éste. Los laboratorios hospitalarios, con frecuencia tiene secciones consideradas
de urgencia, donde se realizan estudios que servirán para tomar decisiones
críticas en la atención de los pacientes graves. Estudios tales
como citometría hemática, tiempos de coagulación, glucemia, urea, creatinina y
gases sanguíneos.
2. Laboratorios de Especialidad. En los laboratorios de pruebas especiales se
realizan estudios más sofisticados, utilizando metodologías como amplificación de
ácidos nucléicos, estudios cromosómicos, citometría de flujo y cromatografía dealta resolución, entre otros. Estas pruebas requieren instalaciones y
adiestramiento especial del personal que las realiza. Con frecuencia, estos
laboratorios forman parte de programas de investigación.
Es importante también considerar, dentro del proceso de análisis, la obtención de las
muestras biológicas. Este proceso conocido como toma de muestras, abarca
la flebotomía, proceso por el cual se extráe una muestra de sangre; la obtención de otro
tipo de muestras, como orina y heces; y la extracción de otros líquidos corporales, como
líquido cefalorraquídeo o líquido articular.
Ubicación y Relación con otros servicios clínicos
A los laboratorios acuden pacientes externos, puesto que los exámenes que se requieren
de los enfermos hospitalizados se hacen mediante muestras que se toman en las
unidades de hospitalización. En consecuencia su ubicación será preferentemente en la
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planta baja, con fácil acceso a la sección de recepción del Archivo Clínico y en menor
grado con el departamento de Consulta Externa.
Este servicio deberá ubicarse en relación cercana a los servicios de consulta
externa, urgencias, terapia intensiva, quirófano y con fácil acceso hacia las áreas de
hospitalización
.
Áreas de Servicio
Sala de Espera y Recepción. Donde los pacientes esperarán cómodamente a ser
atendidos.
Cubículos de Toma de Muestras. En este punto se obtienen las muestras para luego
ser distribuidas a las diversas secciones del laboratorio.
Secciones de Laboratorio:
Hematología:En este se efectúan diversas pruebas que se resumen para el objeto
que persigue este estudio en tres: pruebas de coagulación, pruebas de
contabilidad sanguínea y morfología.
Química Clínica: Aquí se realizan análisis que se clasifican de la siguiente forma:
Química sanguínea de rutina
Exámenes generales de orina
Determinación de reserva electrolítica y bióxido de carbono en la sangre
Microbiología: Las diversas labores que se realizan aquí pueden clasificarse en la
siguiente forma:
Coproparasitología:Tiene por objeto investigar la presencia de parásitos en
materias fecales.
Bacteriología : Consiste en examinar directa o indirectamente la presencia o
actividad de organismos microscópicos en sangre,orina, materia fecal, jugo
gástrico y exudados orgánicos.
Inmunología: Realiza pruebas sobre los anticuerpos que revelan la presencia y
actividad de microorganismos en el cuerpo humano
Se tendrá el área de Preparación de medios de cultivo, que por sí sola se define,
además, la zona de lavado y esterilización de material.
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En este manual se hallan reunidas las técnicas de los estudios más frecuentes en el área
de bioquímica clínica de acuerdo al plan de estudios de los estudiantes
Practica 1
Conocimiento del laboratorio y medidas de seguridad
Introducción
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El trabajo en el laboratorio implica un riesgo latente desde el momento en que se pone un pie al interior del mismo .Es una zona donde se reúne el mayor numerode reactivos químicos ,tipos de energía y utensilios especializados ,de todo deestudio , llámese universidad ,centro e investigación , hospital ,industria o centrode servicios .Es por todo esto que impera la necesidad de abordar este tema aliniciar un periodo de prácticas de laboratorio ,y al mismo tiempo ,iniciar una cultura
de la prevención de accidentes ,de atención al entorno de trabajo ,y de seguridadcomo modo de trabajar en cualquier ámbito profesional.Pongamos pues las siguientes premisas para plantear un esquema de trabajohacia la prevención y la seguridad en el laboratorio o en cualquier área de trabajo.
• La seguridad es responsabilidad en línea jerárquica• Todos los accidentes pueden ser evitados• Las personas son la base fundamental en la gestión de la prevención de
riesgos• Una gestión eficaz de la prevención de riesgos produce una mejora en el
sistema de calidad , así como el aumento de producción ( días / clase )
La prevención efectiva de riesgos evita días perdidos debido a las bajas causadaspor accidente o por enfermedades derivadas del trabajo
Riesgos específicos
A continuación se enumeran los diferentes riesgos a que se pueden exponer las personas
que trabajan en un laboratorio clínico.
Exposición a patógenos presentes en sangre mientras manipulan muestras
contaminadas como sangre o fluidos corporales (ejemplo: líquido cerebroespinal,
y semen).
Exposición a tuberculosis al trabajar con especímenes que puedan contener
tuberculosis y sida. Otros fluidos que pueden ser fuentes potenciales de tuberculosis
son esputo, líquido cerebrorraquídeo en la orina, y líquidos recolectados de lavado
gástrico o branquial.
Exposición a formaldehído que es utilizado como fijador y que se encuentra
comúnmente en la mayoría de laboratorios y morgue.
Riesgos químicos. Exposición a solventes utilizados para fijar tejidos de especímenes
y quitar manchas. Se encuentran principalmente en las áreas
de histología, hematología, microbiología y citología.
Exposición a PPS debido a heridas con agujas o cortaduras por objetos afilados al
trabajar con especímenes, tubos de centrífugas.
Exposición a materiales / organismos infecciosos.
Exposición al látex y alergia al látex debido al uso de guantes de látex.
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Riesgo de deslizarse o caerse si líquido o muestras caen al suelo.
Dolor muscular en diferentes partes del cuerpo por permanecer tiempos prolongados
en una misma posición, ya sea sentado o de pie, o por realizar movimientos repetitivos
al manipular muestras.
Riesgo de quemaduras
.Seguridad en el laboratorio
En los laboratorios de análisis clínicos los riesgos que existen pueden evitarse conel uso de una buena técnica, precauciones sencillas y conocimiento de lasmedidas a tomar en casos de accidentes leves. Los accidentes sencillos que no semanejen correctamente pueden resultar de consecuencias graves. Los accidentespueden ser:
1. Incendio y explosión por el uso de solventes, inflamables, etc. Los
solventes deben guardarse en lugares frescos, bien ventilados y a pruebade fuego. No deben manejarse cerca de flamas, ni en lugares cerradosdonde los vapores pueden acumularse y formar con el aire mezclasexplosivas.
2. Reactivos venenosos, corrosivos y cáusticos. Algunos compuestos notienen efecto importante sobre la piel; pero su ingestión es peligrosa, por ejemplo: cianuros , alcohol metílico, compuestos de arsénico, mercurio,bario , etc. Debe insistirse en la importancia de rotular correctamente todoslos frascos de laboratorio y evitar contaminaciones de pipetas, cigarrillos,etc .dejados sobre la mesa. Por su constante uso estas sustancias semanejas sin la debida precaución; las quemaduras con ácidos y bases
fuertes, en manos, ojos y cara son las más frecuentes. En caso dequemaduras leves deben seguirse las instrucciones de cada reactivo y encasos extremos, atención medica.
3. Quemaduras y escaldaduras, incluyendo choques eléctricos. Generalmenteson causadas por objetos calientes y secos, ó por exposición prolongada alos rayos ultravioleta o infrarojo. Los choques eléctricos en el laboratorioson de pocas importancia; pero si el contacto accidental es intenso, elchoque produce perdida de la conciencia y se debe solicitar atenciónmedica de inmediato.
4. Heridas causadas por manipulación de vidriería, cuchillas de micrótomo,etc. Son las mas frecuentes en el laboratorio. Los fragmentos de vidrio,especialmente el grueso, presentan un borde irregular que produce heridasgraves. Estos accidentes pueden evitarse con la manipulación cyuidadosa.
Medidas de control. Las medidas de control en los laboratorios de análisis clínicosson de gran importancia, ya que estas determinan la calidad del trabajo.
1. Buen estado de limpieza del material de vidrio:la limpieza se efectuarasegún los requerimientos de cada practica.
2. Menejo y comprobación del buen funcionamiento de los aparatos: antes deusarlos deben leerse cuidadosamente los instructivos. Colocar los aparatos
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en lugares adecuados y darles el mantenimiento ylimpieza debidos. Verificar su exactitud y buen funcionamiento.
3. Revisión de técnicas y curvas de calibración: los pasos en las técnicasdeben seguirse estrictamente, las temperaturas t tiempos de incubación,deben usarse controles y curvas de calibración con soluciones estándar.
4. Conservación y uso correcto de los reactivos: de acuerdo con las
instrucciones de cada reactivo, se tomara en cuenta refrigeración ,descomposición con la luz, contaminación , etc.
Limpieza del material de vidrioLos resultados de los experimentos, dependen en gran parte, de la limpieza delequipo: 1) muchos reactivos se usan en miligramos o microgramos, por lo tantocualquier contaminación,podría contribuír a un porcentaje significativo de la
muestra experimental total del experimento. 2) Muchas sustancias son sensible auno o más contaminantes, como iones metálicos, detergentes o residuosorganicos.
Objetivos:Los alumnos conocerán el laboratorio , los materiales , los reactivos, lasinstalaciones eléctricas , de gas ,de agua y el funcionamiento de cada uno de ellos, sus interacciones ,utilidades ,modos de desecharlos ,etc. Con la finalidad deaprender el manejo de los mismos en las practicas a realizar ,en casos extremos
de riesgos y contingencias. De igual manera aprenderán a usar los utensilios deprimeros auxilios y contra incendios ,así como las rutas de evacuación,elaborando un plan estratégico de emergencia para cada caso.Rombo de seguridad para sustancias químicas.
Material• Mesas de laboratorio• Tomas de gas• Agua• Electricidad• Material de vidrio• De metal• Aparatos
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• Instrumental
Reactivos• Solidos•
Acidos• Soluciones• Alcoholes ,etc.
Procedimiento experimental:
A través de la observación y conocimiento del equipo de laboratorio, los reactivosy materiales, se plantearan formas de trabajar( vestimenta , organización , lentes ,
guantes) ,de prever posibles accidentes (distribución de espacio , rutas deevacuación , anaqueles ), zonas de riesgo , puntos críticos , y todos los casos querequieran revisión y modificación para mejorar la seguridad al interior del lugar detrabajo
Cuestionario1. Elabora un proyecto que implique un plan de seguridad para casos de
contingencia en el laboratorio, detectando puntos críticos , manejo de
reactivos ,posibles soluciones y estrategias para asegurar la estancia yevacuación de las personas presentes durante el fenómenocorrespondiente ( sismo , incendio , accidente ,etc.)
2. ¿Cómo se clasifican los reactivos de laboratorio?3. ¿Cuáles son los colores utilizados para diferenciar la reactividad de las
sustancias, y que significa cada uno de ellos?4. ¿Cuál es el procedimiento adecuado para tratar un accidente donde hubo
contacto con un acido, con una base , con fuego , con electricidad y conagua hirviendo?
5. ¿ porque es tan importante el mantenimiento de equipos y reactivos en lastécnicas de análisis clínicos?
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Practica 2Toma de muestra
OBJETIVOS:1. Que el alumno aplique las técnicas estandarizadas más comunes deobtención de muestras de sangre periférica con calidad analítica.
INTRODUCCIÓN:La sangre es una suspensión, en la que aproximadamente el 50% del volumentotal de esta corresponde al plasma y el otro 50% de este volumen
corresponde a células que se encuentran suspendidas en el plasma.La obtención de muestras de sangre para los estudios hematológicos requierede la aplicación de las recomendaciones internacionales de control de calidad,que garanticen la integridad de la muestra.La punción venosa es uno de los procedimientos más comunes para extraersangre, ya que posibilita la recolección de sangre venosa para posterioresanálisis de laboratorio, se requiere que el paciente esté en condiciones basales(ayuno de 8 horas).Los sitos para punción venosa son las venas del antebrazo y fosa antecubital;la vena basílica, cefálica y mediana del antebrazo y radial superficial, cubitalsuperficial y mediana de la fosa antecubital.La obtención de sangre capilar actualmente está limitada a estudiospediátricos, sin embargo anteriormente era el método ideal de extracción desangre para realizar frotes sanguíneos, ya que inmediatamente después de lapunción se recoge en las laminillas para realizar los extendidos, sin que hayanecesidad del uso de anticoagulantes que puedan alterar la el volumen de lasangre y morfología celular.Para realizar los extendidos de sangre periférica, se utiliza sangre venosaanticoagulada generalmente con EDTA (ácido etilendiaminotetraacético)
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preferentemente en su forma seca analizados los extendidos antes de quetranscurran 2 horas desde la extracción de sangre, o bien sangre capilardirectamente de la punción al portaobjetos( es lo ideal). Es recomendable quela sangre anticoagulada sea utilizada inmediatamente para impediralteraciones morfológicas.
El control de calidad en todas las fases del análisis hematológico esindispensable para lograr confiabilidad de los resultados, por lo que serecomienda obtener muestras de sangre con calidad analítica, siguiendo elprotocolo para la toma de muestra que sea apropiada al estudio. La calidad delas extensiones de sangre es indispensable y esto depende del anticoagulanteusado, el tipo de sangre (venosa o capilar) con o sin anticoagulante.
MATERIAL:• 1 gradilla• Tubos de ensaye DE 13 X 100 mm con anticoagulante EDTA ( 3 por
equipo)• 1Pipeta automática de 10L 5 puntas amarillas• Jeringas o dispositivos para extracción de sangre con tubos al vacío• Torundas• Torniquete o ligadura de 25 a 30 cm de largo• Alcohol al 70%• Lancetas estériles• Papel absorbente suave• Etiquetas para identificar al paciente•
Contenedor de objetos punzo cortantes• Jabón de tocador para lavarse las manos• Toallas de papel• Franela o esponja• Lápiz graso o crayola
Reactivos:• EDTA (ácido etilendiaminotetraacético)• Metanol absoluto 100 mL• Agua destilada pH 7• Amortiguador de fosfatos pH 6.4 100 mL (1 gotero)• Solución de hipoclorito al 5% para desinfección de mesas de trabajo.
Material biológico:
• Muestras de sangre total
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RECOMENDACIONES DE SEGURIDAD:1.- ponerse la bata y despejar el área de trabajo dejando sobre la mesa solo elmaterial que va a utilizar en la práctica.2.- desinfectar la mesa de trabajo con hipoclorito de sodio al 5% (cloro de usodoméstico).3.-seguir las recomendaciones universales para disminuir los riesgos alexponerse a productos biológicos potencialmente contaminados, en la prácticaclínica. Debido a que todos los pacientes pueden ser potenciales portadores depatologías que se transmiten por la vía parenteral, sin tener un diagnósticoobjetivable, LAS PRECAUCIONES UNIVERSALES deben aplicarse en la prácticade la atención de cualquier paciente en todo momento y en cualquier ámbitode la atención de salud, siendo esto lo que les confiere el carácter deUniversales.a) Uso de gafas o tapabocas con visera durante la recolección de muestras conriesgo de salpicaduras procedentes de pacientes de con enfermedades
infectocontagiosas.b) No re-enfundar agujas y desecharlas en el recipiente adecuado (o desecharla aguja y la jeringa en un galón destinado para tal fin, evitando lamanipulación.c) Preservar la técnica aséptica en la obtención de muestras medianteprocedimientos invasivos (venopunción periférica, catéter central etc.)
PROCEDIMIENTO PARA PUNCIÓN VENOSA1.- Lavarse las manos perfectamente con agua y jabón.2- Verificar que cada muestra esté acompañada de información que incluya;
nombre y apellidos del paciente, edad, sexo, procedencia cuando proviene deotra institución, tipo de muestra, diagnóstico presuntivo, fecha y hora de tomade la muestra, medicación (si el paciente está recibiendo tratamiento), tipo deestudio a realizar. Por lo que las muestras de los alumnos deben estaracompañadas de esta información.3.- Preguntar al paciente si guardó el ayuno adecuado (en caso necesario),preguntar la hora de la última ingesta.4- Tranquilizar al paciente e informarle del procedimiento al que será sometido.5.-Colocar adecuadamente al paciente; sentado paralelamente a la mesa detrabajo, apoyará el brazo sobre la mesa colocando una almohadilla bajo el codoy la palma de la mano hacia
.arriba.6.-Verificar el material a utilizar; tubos, jeringas torniquete, torundas etc.7.-Pedir al paciente que abra y cierre el puño para palpar mejor las venas.8.-Seleccionar una avena adecuada para la punción. Evitar tomar la muestra enel brazo donde hay catéter. No extraer sangre de la misma extremidadutilizada para la administración intravenosa de medicamentos, líquidos otransfusiones. Si no existe otro sitio disponible, asegurarse que la punciónvenosa se localiza por debajo del catéter IV. Evitar las áreas edematosas,
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paralizadas o el mismo lado de una masectomía, al igual que las infecciones yproblemas cutáneos. La punción venosa causa infección, alteracionescirculatorias o retraso en la cicatrización.9.- Desinfectar el sitio de punción con una torunda con alcohol al 70%, conmovimientos en espiral comenzando por el sitio que se puncionará yprosiguiendo hacia fuera, dejar que la zona se seque y no tocar con ningúnobjeto que no haya sido esterilizado previamente.10.- Aplicar el torniquete varios centímetros arriba de la zona de punción, esteno se dejará más de un minuto.11.- Fijar firmemente la vena por encima y por debajo del sitio de punción conayuda de los dedos pulgar y medio o índice y pulgar de la mano izquierda.12.- Realizar la venopunción;
a) Penetrar a través de la piel con la aguja formando un ángulo de 15º entre elbrazo y la aguja con el bisel hacia arriba, seguir la dirección de la vena con laaguja.
b) Introducir la guja con suavidad pero con rapidez para reducir las molestias alpaciente.c) Si se usa jeringa, tirar del émbolo hacia atrás con tensión lenta y uniforme, amedida que la sangre fluye en su interior, este movimiento no debe ser muyrápido ya que se puede bemolizar la sangre o colapsar la vena.d) Si se utilizan tubos al vacío, en cuanto la aguja haya penetrado la vena, sedirigirá el tubo todo lo posible hacia delante en el dispositivo de sujeción, almismo tiempo sujetar tenuemente la aguja en su lugar. Se debe permitir que eltubo al vació se llene hasta la marca indicada.
13.-Retirar la ligadura tirando del extremo doblado después de obtener elvolumen de sangre deseado.14.-Colocar un pedazo de algodón seco sobre la parte donde se encuentraoculta la aguja. Sacar la aguja con un movimiento rápido y depositarla en elrecipiente de metal con desinfectante.15.-Pedir al paciente que presione firmemente el algodón durante 3 minutos,con el brazo extendido. No se recomienda que se flexione el brazo a causa delriesgo que se forme un hematoma.
16.-Mezclar por inversión suave la sangre 15 veces (cuando el tubo colectortiene anticoagulante).
17.-Si la hemorragia de la punción continúa durante un tiempo prolongado,eleve el área y aplique una curación con presión. Observe al paciente yverifique si no ha ingerido anticoagulante o ácido acetilsalicílico. Si el pacientese marea o tiende al desmayo, haga que coloque la cabeza entre las rodillas ose acueste y pídale respirar profundamente. Aplique una toalla fría en alcabeza o parte posterior del cuello. En caso que permanezca inconsciente,notifique de inmediato al médico tratante.
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18.-Los hematomas se previenen con una técnica adecuada que consiste enevitar que la aguja atraviese la vena, liberar el torniquete antes de extraer laaguja, aplicación de suficiente presión sobre el sitio de la punción y almantener la extremidad extendida hasta que se detenga la hemorragia.
PROCEDIMIENTO PARA PUNCION CAPILAR:
1.-Si la punción se realizará a un RN éste debe ser inmovilizado2.-seleccionar el sitio de punción
3.- en adultos el sitio adecuado para la punción capilar es el pulpejo del dedomediano o anular, cerca del borde, en niños el lóbulo de la oreja, y en RN eltalón del pie4.-Se recomienda el lavado clínico de manos y uso de guantes si es necesario5.-realizar la asepsia de la zona6.-introducir la lanceta de 2 a 2.5 mm con un movimiento rápido7.-presionar para extraer la cantidad necesaria de sangre desechando laprimera gota8.-depositar la muestra en capilar o laminilla.9.-realizar hemostasis en el sitio de punción y proteger con gasa estéril10.- verificar confort del RN11.- si se presenta dificultades durante la punción se recomienda repetirla,sobre todo cuando la muestra es insuficiente y se ha exprimido excesivamentela zona de punción, ya que puede sufrir una hemodilución por el líquido hístico.
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CUESTIONARIO
1. ¿Cuál es el objeto de usar sangre total en los estudios de bioquímica clinica?2. Explica porque es importante el ayuno de determinadas horas para lasdiferentes pruebas clínicas.3. ¿Qué entiende por hemostasis?4.Una muestra de sangre capilar obtenida del talon de un bebe,¿Para queestudio se emplea generalmente?5.Mencione algunas de las precauciones que se deben tomar al trabajar conmuestras sanguíneas y ¿Por qué?
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Practica 3
Cuantificación de glucosa
INTRODUCCIÓNEl estudio del metabolismo de la glucosa es esencial para poder apreciar las variacionesen la concentración sanguínea de la glucosa que pueden reflejar alteraciones primariasdel metabolismo de los carbohidratos al igual que ser manifestaciones secundarias queacompañan otras enfermedades.
Absorción y digestión. Las enzimas (amilasas disacáridos) liberadas por las glándulassalivales, el intestino delgado y el páncreas escinden el almidón, que es el polisacáridomás importante de los hidratos de carbono que se ingieren, y los disacáridos (maltosa,lactosa y sacarosa), a hexosas (glucosa, fructuosa y galactosa) o pentosas. Los
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monosacáridos son absorbidos por el intestino delgado por difusión (gradiente deconcentración) y por transporte activo (sodio dependiente), pasando la mayor cantidad ala sangre portal para su transporte al hígado.
Las enfermedades gastrointestinales que reducen la superficie de absorción o lasenzimas descritas, disminuyen la absorción de las hexosas. La tiroxina acelera laabsorción de las hexosas de tal manera que las alteraciones y enfermedades de lafunción tiroidea, al igual que la función adrenocortical, pueden afectar la velocidad ycantidad de hexosas absorbidas.
El metabolismo periférico de los carbohidratos puede considerarse casi por completo entérminos de glucosa, ya que la utilización de fructuosa y galactosa por los tejidos extrahepáticos es mínima.
Tras la absorción de la glucosa a la sangre, los niveles normales de ayunas, que oscilanentre 60 y 90 mg/100 ml de sangre, se elevan a 120-150 mg/100 ml o incluso más. En lossujetos normales, estos niveles de glucosa bajan en seguida de sus valores máximos, demanera que tras 1 hora y 30 min a 2 horas, se vuelvan a alcanzar los niveles que enayunas. Sin embargo el diabético es incapaz de utilizar de manera eficiente la glucosa
administrada y los niveles hematicos después de la ingestión de glucosa retornan al nivelbasal solo después de un periodo prolongado de tiempo. La constancia de laconcentración de glucosa entre las comidas, se obtiene a través de de un equilibrio entrela utilización hística de la glucosa y la glucogenólisis. Una parte de la glucosa sanguíneala convierte el hígado en glucógeno (glucogénesis). Otra parte se utiliza directamente paraobtener energía, pero la mayor parte de la glucosa derivada de la digestión de loscarbohidratos de la ingesta es convertida en grasa.El azúcar de la sangre es la glucosa, que proviene de tres fuentes: 1) De la digestión delos almidones y azucares que produce azúcar que es absorbido en el intestino; 2)De laconversión de precursores no carbohidraticos en la glucosa, por ejemplo, aminoácidos,produce intermediarios de la escisión de la glucosa (ácidos láctico, piruvico y succínico), yglicerol derivado de la hidrólisis de la grasa neutra; y 3) De la glucogenolisis (hidrólisis del
glucógeno depositado en el hígado).La glucosa continuamente filtrada por los glomérulos, vuelve en su totalidad a la sangreya que es absorbida a nivel de los túbulos renales. La capacidad de los túbulos renal espara reabsorber la glucosa (fosforilización) está limitada por la concentración enzimáticade las células tubulares y se realiza a razón de unos 250 mg/100 ml. Por tanto, laglucosuria puede aparecer con hiperglucemia. En individuos con función renal normal, laglucosuria ocurre cuando la concentración de glucosa en sangre excede los 160 gr/100ml. Esto se describe como el umbral renal de glucosa. Sin embargo, los defectos en eltúbulo renal pueden causar glucosuria en presencia de normo glucemia. La glucosuria deorigen renal la originan defectos congénitos o adquiridos como consecuencia deenfermedades. Los diabéticos con enfermedad renal pueden tener un <<umbralelevado>>, apareciendo entonces la glucosuria solamente cuando la concentración de laglucemia sobrepasa los 250 mg/100 ml.
Una clasificación de la diabetes se expone en la siguiente tabla:
*Primaria
*De origen endocrinoHiperpituitarismoHiperadrenalismo
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Hipertiroidismo
*Destrucción de los islotes pancreáticos
*MisceláneaTemperatura con clorotiacidasStress, cirugía y embarazo
Ayuno prolongado y la ingesta pobre en hidratos de carbono
Pruebas de selección. Las pruebas para la detección de la diabetes mellitus en lapoblación comprenden determinaciones de la glucosa en la sangre y orina.
Glucosa en la orina
Glucemia en ayunas
Glucemia postprandial a las 2 horas
Curva de tolerancia
Determinaciones en sangre
Glucosa:(Técnica de Hultman con ortotoluidina)
1. Fundamento
La ortotodulina reacciona específicamente con las aldohexosas en solución acéticacaliente, para formar una mezcla en equilibrio de glicosilamina y la correspondiente baseSchiff. El color verde formado es proporcional a la cantidad de glucosa presente.
2. Material y apartados
SustanciasOrtotoludina
Ticurea Acido acético glacialDextrosa
Acido benzoico
ReactivosOrtotoludina 100ªSolución de glucosa 10 mg en 1 ml
Preparación de reactivos
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Reactivo 100 a: 1.5 gTiourea 60 ml
Acido acético glacial 940ml
Disolver la tiourea en acido acético glacial y agregar la ortotoludinaSolución de glucosa10 mg en 1 mlDextrosa 10 g
Acido benzoico 0.2 por ciento c.b.p. 1000 mlDisolver yaforar
Método
Material biológico:Suero, plasma, líquido cefalorraquídeo u orina
Tecnica:a) En un tubo de ensaye de 16 por 150 mm, medio 0.1 ml de suero, plasma,
liquido cefalorraquídeo u orinab) Agregar 5 ml de reactivo de ortotodulina y mezclar
c) Tapar los tubos y colocarlos en baño maria durante 10 minutosd) Enfriar en baño de hielo durante 10 minutose) Leer en longitud de onda de 630 micras contra blanco de reactivos antes de que
trascurran 30 min
Calibración
De la solución de glucosa 10 mg en 1 ml medir 5, 7.5, 10, y 20 ml en matracesvolumétricos de 10 ml y aforar. Esas soluciones contienen 50, 75, 100, 150 y 200 mg deglucosa en 100 ml
Matraz aforadode 100 ml
Mililitros desolución deglucosa 10 mgen un ml
Agua destiladac.b.p.
Mililitros en 100ml
1 5.0 100 502 7.5 100 503 10.0 100 1004 15.0 100 1505 20.0 100 200
De cada una de estas diluciones tomar 0.1 ml y proseguir como se indica en la técnica apartir del paso b)
CálculosEn caso de que no se disponga de curva de calibración, se puede proceder de la manera
siguiente:Trabajar, al mimso tiempo que el problema, un estanndar que contega 1 mg de glucosaen 1 ml y seguir la misma técnica que se indico antes.
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D.O.ProblemaD.O.Estandar x 100 = mg por ciento de glucosa
D.O. = Densidad óptica
Valores normales
70 – 100 mg / 100 ml80 – 120 mg / 100 ml
Es importante consultar los valores normales de acuerdo a la técnica empleada y ellaboratorio , pues estos varian de uno a otro.
Cuestionario.1. ¿para que sirve una prueba de cuantificación de glucosa?2. ¿ cual es el espécimen que generalmente se emplea para esta determinación .3. ¿ cuantos tipos de deabetes conoce.?4. Si un paciente no se presenta en ayunas ¿se veria aletrado su resultado y porque?5. Mencione las diferentes determinaciones de glucosa que nos sirven para
determinar si un paciente es diabético.
Practica 4 Examen general de Orina
Introducción:El examen de orina con fines diagnósticos se ha practicado durante siglos yprobablemente es el más antiguo de los procedimientos de laboratorio que hoy en día seusan en medicina.
Los antiguos dieron mucha importancia a las características de la orina en la enfermedad.La escuela de medicina de Hipócrates en el siglo V a.C. probablemente contaba conenseñanzas anteriores.
Hipócrates se dio cuenta que la cantidad de orina debe ser proporcional a la cantidad debebidas ingeridas y algo más densa que el liquido ingerido. Distinguió entre los cambiosde orina que se producen por una enfermedad generalizada, una observación que mástarde seria elogiada por Galeno , en la edad media también se realizaban estudios enorina en que se involucraban 20 colores , tres densidades y cuatro zonas para predecir elcurso de una enfermedad. Entre 1210-1280 Saliceto relaciono la retracción del riñón con
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los cambios en la orina, pero fue hasta el siglo XVIII con el desarrollo de la química yfisiología en que el estudio de la orina paso de un mito a una ciencia.
Durante muchos año fue transcurriendo el empleo de la orina y sus componentes comobase del diagnostico clínico, pero fue en 1863 que Neubauer y Vogel al igual queHipócrates en el siglo V a C. exhortaron a los médicos “provistos de los métodos más
nuevos y más simples para el análisis, puede descubrir la presencia de componentesanormales y darse cuenta de la presencia de una enfermedad renal o de otrasenfermedades”. Este principio tiene vigencia aun en nuestros días.
La orina es un líquido acuoso transparente y amarillento, de olor característico (sui géneris),
secretado por los riñones y eliminado al exterior por el aparato urinario. En los laboratorios clínicos
se abrevia u o uri (del latín urinam).
Después de la producción de orina por los riñones, esta recorre los uréteres hasta la vejiga
urinaria donde se almacena y después es expulsada al exterior del cuerpo a través de la uretra,
mediante la micción.
.
.
Funciones de la orina
Las funciones de la orina influyen en la homeostasis como son::
1. Eliminación de sustancias tóxicas producidas por el metabolismo celular como la urea.
2. Eliminación de sustancias tóxicas como la ingesta de drogas.
3. El control electrolítico, regulando la excreción de sodio y potasio principalmente.
4. Regulación hídrica o de la volemia, para el control de la tensión arterial.
5. Control del equilibrio ácido-base.
6. Eliminación de sustancias tóxicas como la ingesta de drogas.
7. El control Eliminación de sustancias tóxicas producidas por el metabolismo celular como
la urea.
8. electrolítico, regulando la excreción de sodio y potasio principalmente.
9. Regulación hídrica o de la volemia, para el control de la tensión arterial.
10.Control del equilibrio ácido-base.
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.
Composición de la orina
En los seres humanos la orina normal suele ser un líquido transparente o amarillento. Se eliminan
aproximadamente 1,4 litros de orina al día. La orina normal contiene un 96% de agua, un 4% de
sólidos en solución y aproximadamente 20 g de urea por litro. Cerca de la mitad de los sólidos
son urea, el principal producto de degradación del metabolismo de las proteínas. El resto
incluye nitrógeno,cloruros, cetosteroides, fósforo, amonio, creatinina y ácido úrico.
Composición de la orina en mg/100 ml de fluido - Urea: 2.0 - Ácido úrico: 0.05 - Sales
inorgánicas: 1.50
La orina puede ayudar al diagnóstico de varias enfermedades mediante el análisis de orina o
el urocultivo.
Contenidos anormales de la orina
Los cristales de urato de amonio son anormales solo si se encuentran en orinas recién emitidas.
Glucosuria: Es la presencia de glucosa en la orina y aparece sobre todo en la diabetes mellitus.
Hematuria : Es la presencia de sangre en la orina, debiendo descartarse: infección
urinaria,litiasis urinaria, glomerulonefritis, neoplasia (cáncer de vejiga, uréter , riñón, próstata,
etc.)
Bacteriuria: Es la presencia de bacterias en la orina, cuando normalmente es estéril.
Piuria: Es la presencia de pus en la orina.
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Proteinuria : Es la presencia de proteínas en la orina como suele observarse en:
glomerulonefritis, infección urinaria, intoxicaciones, diabetes, etc.
Producción de la orina
Se divide en los siguientes pasos:
1. Filtración: Tiene lugar en una de las múltiples nefronas que hay en los riñones, concretamente
en los glomérulos. La sangre, al llegar a las nefronas, es sometida a gran presión extrayendo de
ella agua, glucosa, aminoácidos, sodio, potasio, cloruros, urea y otras sales. Esto equivale a,
aproximadamente, el 20% del volumen plasmático que llega a esa nefrona, es aproximadamente
180 litros/día, que es 4,5 veces la cantidad total de líquidos del cuerpo, por lo que no se puede
permitir la pérdida de todos estos líquidos, pues en cuestión de minutos el individuo acusaría una
deshidratación grave.
2. Reabsorción: Cuando este filtrado rico en sustancias necesarias para el cuerpo pasa al túbulo
contorneado proximal, es sometido a una reabsorción de glucosa, aminoácidos, sodio, cloruro,
potasio y otras sustancias. Esta equivale, aproximadamente, al 65% del filtrado. Aunque la mayor
parte se absorbe en el túbulo contorneado proximal, este proceso continúa en el asa de Henle y en
el túbulo contorneado distal para las sustancias de reabsorción más difícil. Los túbulos son
impermeables al filtrado de la urea.
3. Secreción: En el túbulo contorneado distal ciertas sustancias, como la penicilina, el potasio e
hidrógeno, son excretadas hacia la orina en formación. Después el cerebro manda una señal para
cuando esté lista la orina.
Términos relacionados
Anuria, falta de producción de orina.
Oliguria , disminución del volumen de orina por debajo del normal (1,4 l/dia).
Retención urinaria , imposibilidad de eliminación de la orina acumulada en la vejiga urinaria.
Usos
La orina como fertilizante contiene nutrientes útiles para las plantas como grandes cantidades
de nitrógeno en forma de urea y una pequeña cantidad en forma de ácido úrico. También
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contiene potasio además de otros nutrientes necesarios en menor cantidad como el magnesio y
el calcio todos ellos de asimilación rápida.
La orina por si sola no es una solución nutriente completa, por ejemplo para usar
en hidroponía pues carece de fósforo, en caso de ser usada debería complementarse, por ejemplo,
con guano.
La composición de la orina varía según la alimentación. La producida por
animales herbívoros suele ser más alcalina, contiene más potasio y menos nitrógeno y es la más
adecuada para usar como fertilizante. La de los humanos contiene más sodio, que las plantas no
necesitan en grandes cantidades por lo que podría perjudicarlas. El nitrógeno se encuentra
principalmente en forma de urea, que se convierte bastante rápido en amoníaco. S i l a
concentración es excesiva puede perjudicar a las plantas. Los microorganismos del suelo
convierten parte en nitratos y nitritos.
A pesar del asco que produce la orina es un líquido estéril como el semen o la sangre y contiene
menos bacterias que la saliva o lasheces por lo que sólo en caso que el animal esté enfermo esta
puede ser fuente de enfermedades. Es posible almacenarla durante un tiempo para que la subida
del pH al formar amonio, mate los posibles patógenos.
Aunque al poco tiempo de ser expulsada la orina huele muy fuerte a amoníaco, al utilizarla como
abono en dosis adecuadas no debería oler. Las plantas y los microorganismos lo deben absorber.
Ya en la antigüedad era costumbre utilizar la orina para lavarse los dientes. Este tipo
de orinoterapia la observaron los romanos, por ejemplo, cuando conquistaron la península
Ibérica entre los pueblos del norte (cántabros, galaicos, etc.). De hecho, la orina deLusitania llegó a
convertirse en un bien muy preciado en la metrópoli romana, en donde se comercializaba a buen
precio, aunque esta se usaba principalmente para blanquear la ropa.
Razones por las que se realiza el examen
Un análisis de orina se puede hacer:
• Como parte de un examen médico de rutina para detectar los signos iniciales de una
enfermedad.
• Si la persona tiene signos de diabetes o enfermedad renal, o para vigilar si está recibiendo
tratamiento para tales afecciones
• Para verificar la presencia de sangre en la orina
• Para diagnosticar infecciones urinarias
Otras afecciones por las cuales se puede realizar el examen son:
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• Uropatía obstructiva aguda bilateral
• Síndrome nefrítico agudo
• Necrosis tubular aguda
• Uropatía obstructiva aguda unilateral
•
Alcalosis• Síndrome de Alport
• Nefropatía por analgésicos
• Anorexia nerviosa
• Enfermedad renal ateroembólica
• Mixoma auricular
• Cálculos en la vejiga
• Uropatía obstructiva bilateral crónica
• Glomerulonefritis crónica• Infección urinaria crónica o recurrente
• Insuficiencia renal crónica
• Uropatía obstructiva unilateral crónica
• Uretritis crónica
• Infección complicada de las vías urinarias (pielonefritis)
• Síndrome nefrótico congénito
• Cistinuria
• Delirio
• Demencia
• Demencia de origen metabólico
• Diabetes insípida central
• Nefropatía/esclerosis diabética
• Enuresis
• Epididimitis
• Retraso en el desarrollo
• Glomeruloesclerosis focal y segmentaria
• Síndrome de Goodpasture
• Insuficiencia cardíaca
• Síndrome urémico hemolítico (HUS)
• Púrpura de Henoch-Schoenlein
• Diabetes mellitus insulinodependiente (DMID)
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• Nefropatía por IgA (enfermedad de Berger)
• Lesión del riñón y del uréter
• Nefritis intersticial
• Vejiga irritable
•
Insuficiencia cardíaca izquierda• Nefritis lúpica
• Hipertensión maligna (nefroesclerosis arteriolar)
• Nefropatía quística medular
• GN membranoproliferativa I
• GN membranoproliferativa II
• Nefropatía membranosa
• Mielomeningocele (niños)
• Vasculitis necrosante• Síndrome nefrótico
• Diabetes mellitus no insulinodependiente (DMNID)
• Orquitis
• Cáncer de ovario
• Hemoglobinuria paroxística nocturna (HNP)
• Poliquistosis renal
• GN posestreptocócica
• Azotemia prerrenal
• Amiloidosis primaria
• Cáncer de la próstata
• Prostatitis aguda
• Prostatitis crónica
• Prostatitis abacteriana
• Pielonefritis aguda
• Glomerulonefritis (semilunar) rápidamente progresiva
• Nefropatía por reflujo
• Necrosis papilar renal
• Acidosis tubular renal distal
• Acidosis tubular renal proximal
• Trombosis de la vena renal
• Eyaculación retrógrada
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• Rabdomiólisis
• Insuficiencia cardíaca derecha
• Amiloidosis sistémica secundaria
• Incontinencia urinaria de esfuerzo
•
Lupus eritematoso sistémico• Esclerosis sistémica (esclerodermia)
• Púrpura trombocitopénica trombótica
• Lesión traumática de la vejiga y la uretra
• Ureterocele
• Estenosis o estrechez uretral
• Uretritis
• Granulomatosis de Wegener
• Tumor de Wilms
El estado de nutrición, el estado de los procesos metabólicos y la capacidad del riñónpara manejar selectivamente las sustancias que recibe son los tres factores principalesque determinan la composición de la orina. En un adulto normal, unos 1.200 ml de sangrepasan por el riñón en un minuto. La composición de la orina es urea, sodio cloro, acidoúrico, potasio, pequeñas cantidades de azúcar, metabolitos intermediarios como el acidooxálico, piruvico y cítrico ácidos grasos libres e indicios de colesterol, así comocantidades pequeñas de colesterol.
Existen también hormonas y aminas biogenéticas que son reflejo metabólico yendocrino.
En general la composición de la orina refleja la capacidad de los riñones para retener oexcretar los diferentes elementos necesarios, productos fina les o tóxicos para elorganismo.
El examen de orina puede considerarse desde dos puntos de vista generales: eldiagnostico y tratamiento de la enfermedad renal del aparato urinario y la detección deenfermedades metabólicas o sistémicas que no están directamente relacionadas con elriñón.
La orina puede también ser investigada para detectar metabolitos de fármacos.
Muestra de orina.El volumen necesario depende del número de pruebas que van a efectuarse, debenconservarse refrigeradas sino se van a analizar inmediatamente, deben estar libres decontaminación fecal y vaginal.
El examen de orina comprende tres aspectos: Físico
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QuímicoMicroscópico
Dentro del examen físico se determina:Color: amarillo claro, amarillo oscuro, café, rojizo, etc.
Olor: característico Aspecto: transparente, turbio, hemorrágico, etc.Sedimento. Escaso, abundante, etc.Densidad: que se determina en el refractómetro por capilaridad, leyendo en la primeraescala de la izquierda.Turbidez: que está dada por células, cristales, bacterias, blastosporas, leucocitos,eritrocitos, la mucina no da turbidez.
El examen químico que se puede llevar a cabo manualmente, con tiras reactivas oautomatizado.
Fundamento de las tiras reactivas.1. pH.la mezcla de los colorantes rojo de metilo y azul de bromotimol, permite
obtener pH de 5 a 9, coloraciones que varían de amarillo verde y azul.2. Proteínas. El indicador de tetrabromofenol azul tiene color amarillo, que en
presencia de proteínas cambia de verde amarillento a azul verde. La soluciónamortiguadora de acetato que tiene la zona reactiva permite mantener el pHconstante.
3. Glucosa. La glucosa oxidada reacciona con la glucosa presente en la orina, con laeliminación de 2 átomos de hidrogeno, los que se combinan con el oxigenoatmosférico y forman peróxido de hidrogeno (H₂O₂), el que en presencia de
peroxidasa oxida la ortotoluidina que pasa de incolora a color azul, proporcional ala cantidad de glucosa presente.4. Acetona. El acido acético con nitroprusiato de sodio y en presencia de acido amino
acético forman un complejo colorido.5. Hemoglobina. La hemoglobina de la sangre catalíticamente desdobla el peróxido
de hidrogeno con la liberación de oxigeno, el cual oxida la ortotoluidina, conformación de color azul.
Examen microscópico. Este se lleva a cabo revisando el sedimento, obtenidodespués de centrifugar la orina, en un microscopio, se buscan células, mucina,bacterias, leucocitos (numero /campo) eritrocitos, cilindros, zoospermos,
tricomonas, etc.
Material• Tiras reactivas• Tubo de ensaye• Portaobjetos• Cubreobjetos• Pipetas Pasteur
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• Centrifuga• Microscopio
Material biológico
• Orina (preferentemente de la primera micción de la mañana)
Procedimiento.
1. Observar las características físicas de la muestra dentro del recipiente derecolección.
2. Colocar en un tubo de ensaye orina, hasta 1 cm del borde.3. Medir la densidad.4. Introducir la tira reactiva y leer según especificaciones del fabricante.5. Centrifugar, decantar el sobrenadante y hacer el examen microscópico del
sedimento.
Valores normales:
• Volumen : 800 – 1500 ml en 24 horas• Densidad : 1.003 – 1.030• pH : 6 – 7• Albumina: no contiene• Glucosa : no contiene• Cuerpos cetonicos. No contiene• Hemoglobina: no contiene• Bilirrubinas: no contiene• Urobilinogeno. 0 – 4 mg en 24 horas• Leucocitos : menos de 10 por campo• Eritrocitos : 0 – 1 por campo• Cilindros : no contiene
Cuestionario:1. ¿Cuál es la importancia de un análisis de orina?2. ¿a que se asocia la presencia de glucosa en la orina?3. Si en una muestra de orina encontramos hemoglobina ¿que nos sugiere?
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4. La presencia de +++ de bacterias en orina ¿Qué significa?5. Mencione cuales serian las condiciones de una muestra de orina normal.
Practica 5
Determinación de Proteínas totales
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Las proteínas son biomoléculas formadas por cadenas lineales de aminoácidos. El
nombre proteína proviene de la palabra griega πρωτε ος ῖ ("proteios"), que significa
"primario" o deldios Proteo, por la cantidad de formas que pueden tomar.
Por sus propiedades físico-químicas, las proteínas se pueden clasificar en proteínas
simples (holoproteidos), que por hidrólisis dan solo aminoácidos o sus derivados;
proteínas conjugadas (heteroproteidos), que por hidrólisis dan aminoácidos acompañados
de sustancias diversas, y proteínas derivadas, sustancias formadas
por desnaturalización y desdoblamiento de las anteriores. Las proteínas son
indispensables para la vida, sobre todo por su función plástica (constituyen el 80%
del protoplasma deshidratado de toda célula), pero también por sus
funciones biorreguladora (forma parte de las enzimas) y de defensa (losanticuerpos son
proteínas).1
Las proteínas desempeñan un papel fundamental para la vida y son las biomoléculas más
versátiles y más diversas. Son imprescindibles para el crecimiento del organismo.
Realizan una enorme cantidad de funciones diferentes, entre las que destacan:
Estructural. Ésta es la función más importante de una proteína
Inmunológica (anticuerpos),
Enzimática (sacarasa y pepsina),
Contráctil (actina y miosina).
Homeostática: colaboran en el mantenimiento del pH,
Transducción de señales (rodopsina)
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Protectora o defensiva (trombina y fibrinógeno)
Las proteínas están formadas por aminoácidos los cuales a su vez están formados por
enlaces peptídicos para formar esfingocinas.
Las proteínas de todos los seres vivos están determinadas mayoritariamente por
su genética (con excepción de algunos péptidos antimicrobianos de síntesis no
ribosomal), es decir, la información genética determina en gran medida qué proteínas
tiene una célula, un tejido y un organismo.
Las proteínas se sintetizan dependiendo de cómo se encuentren regulados los genes que
las codifican. Por lo tanto, son susceptibles a señales o factores externos. El conjunto de
las proteínas expresadas en una circunstancia determinada es denominado proteoma.
Características
Los prótidos o proteínas son biopolímeros, están formadas por gran número de
unidades estructurales simples repetitivas (monómeros). Debido a su gran tamaño,
cuando estas moléculas se dispersan en un disolvente adecuado, forman
siempredispersiones coloidales, con características que las diferencian de las
disoluciones de moléculas más pequeñas.
Por hidrólisis, las moléculas de proteína se dividen en numerosos compuestos
relativamente simples, de masa molecular pequeña, que son las unidades fundamentales
constituyentes de la macromolécula. Estas unidades son los aminoácidos, de los cuales
existen veinte especies diferentes y que se unen entre sí mediante enlaces peptídicos.
Cientos y miles de estos aminoácidos pueden participar en la formación de la gran
molécula polimérica de una proteína.
Todas las proteínas tienen carbono, hidrógeno, oxígeno y nitrógeno, y casi todas poseen
también azufre. Si bien hay ligeras variaciones en diferentes proteínas, el contenido
de nitrógeno representa, por término medio, 16% de la masa total de la molécula; es
decir, cada 6,25 g de proteína contienen 1 g de N. El factor 6,25 se utiliza para estimar la
cantidad de proteína existente en una muestra a partir de la medición de N de la misma.
La síntesis proteica es un proceso complejo cumplido por las células según las directrices
de la información suministrada por losgenes.
Las proteínas son largas cadenas de aminoácidos unidas por enlaces peptídicos entre el
grupo carboxilo (-COOH) y el grupo amino (-NH2) de residuos de aminoácido adyacentes.
La secuencia de aminoácidos en una proteína está codificada en su gen (una porción de
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ADN) mediante el código genético. Aunque este código genético especifica los 20
aminoácidos "estándar" más la selenocisteína y —en ciertos Archaea— la pirrolisina, los
residuos en una proteína sufren a veces modificaciones químicas en la modificación
postraduccional: antes de que la proteína sea funcional en la célula, o como parte de
mecanismos de control. Las proteínas también pueden trabajar juntas para cumplir unafunción particular, a menudo asociándose para formar complejos proteicos estables.
Funciones
Las proteínas ocupan un lugar de máxima importancia entre las moléculas constituyentes
de los seres vivos (biomoléculas). Prácticamente todos los procesos biológicos dependen
de la presencia o la actividad de este tipo de moléculas. Bastan algunos ejemplos para
dar idea de la variedad y trascendencia de las funciones que desempeñan. Son proteínas:
Casi todas las enzimas, catalizadores de reacciones químicas en organismos
vivientes;
Muchas hormonas, reguladores de actividades celulares;
La hemoglobina y otras moléculas con funciones de transporte en la sangre;
Los anticuerpos, encargados de acciones de defensa natural contra infecciones o
agentes patogenos;
Los receptores de las células, a los cuales se fijan moléculas capaces de
desencadenar una respuesta determinada;
La actina y la miosina, responsables finales del acortamiento del músculo durante la
contracción;
El colágeno, integrante de fibras altamente resistentes en tejidos de sostén.
Funciones de reserva. Como la ovoalbúmina en el huevo, o la caseína de la leche.
Estructura
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Es la manera como se organiza una proteína para adquirir cierta forma. Presentan una
disposición característica en condiciones fisiológicas, pero si se cambian estas
condiciones como temperatura, pH, etc. pierde la conformación y su función, proceso
denominado desnaturalización. La función depende de la conformación y ésta viene
determinada por la secuencia de aminoácidos.
Para el estudio de la estructura es frecuente considerar una división en cuatro niveles de
organización, aunque el cuarto no siempre está presente.
Conformaciones o niveles estructurales de la disposición tridimensional:
Estructura primaria.
Estructura secundaria.
Nivel de dominio.
Estructura terciaria.
Estructura cuaternaria .
A partir del nivel de dominio sólo las hay globulares
Propiedades de las proteínas
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Solubilidad: Se mantiene siempre y cuando los enlaces fuertes y débiles estén
presentes. Si se aumenta la temperatura y el pH, se pierde la solubilidad.
Capacidad electrolítica: Se determina a través de la electroforesis, técnica analítica en
la cual si las proteínas se trasladan al polo positivo es porque su molécula tiene carga
negativa y viceversa.
Especificidad: Cada proteína tiene una función específica que está determinada por
su estructura primaria.
Amortiguador de pH (conocido como efecto tampón): Actúan como amortiguadores de
pH debido a su carácter anfótero, es decir, pueden comportarse como ácidos
(donando electrones) o como bases (aceptando electrones).
Desnaturalización
: Desnaturalización de proteínas
Si en una disolución de proteínas se producen cambios de pH, alteraciones en
la concentración, agitación molecular o variaciones bruscas de temperatura,
la solubilidad de las proteínas puede verse reducida hasta el punto de producirse
su precipitación. Esto se debe a que los enlaces que mantienen la conformación
globular se rompen y la proteína adopta la conformación filamentosa. De este modo, la
capa de moléculas de agua no recubre completamente a las moléculas proteicas, las
cuales tienden a unirse entre sí dando lugar a grandes partículas que precipitan. Además,sus propiedades biocatalizadores desaparecen al alterarse el centro activo. Las proteínas
que se hallan en ese estado no pueden llevar a cabo la actividad para la que fueron
diseñadas, en resumen, no son funcionales.
Esta variación de la conformación se denomina desnaturalización. La desnaturalización
no afecta a los enlaces peptídicos: al volver a las condiciones normales, puede darse el
caso de que la proteína recupere la conformación primitiva, lo que se denomina
renaturalización.
Ejemplos de desnaturalización son la leche cortada como consecuencia de ladesnaturalización de la caseína, la precipitación de la clara de huevo al desnaturalizarse
la ovoalbúmina por efecto del calor o la fijación de un peinado del cabello por efecto
de calor sobre las queratinas del pelo.
Clasificación
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Según su forma
Fibrosas: presentan cadenas polipeptídicas largas y una estructura secundaria
atípica. Son insolubles en agua y en disoluciones acuosas. Algunos ejemplos de
éstas son queratina, colágeno y fibrina
Globulares: se caracterizan por doblar sus cadenas en una forma esféricaapretada o compacta dejando grupos hidrófobos hacia adentro de la proteína y
grupos hidrófilos hacia afuera, lo que hace que sean solubles en disolventes
polares como el agua. La mayoría de las enzimas, anticuerpos, algunas hormonas
y proteínas de transporte, son ejemplos de proteínas globulares.
Mixtas: posee una parte fibrilar (comúnmente en el centro de la proteína) y otra
parte globular (en los extremos).
según su composición química
Simples: su hidrólisis sólo produce aminoácidos. Ejemplos de estas sonla insulina y el colágeno (globulares y fibrosas).
Conjugadas o heteroproteínas: su hidrólisis produce aminoácidos y otras
sustancias no proteicas con un grupo prostético
Fuentes de proteínas
Las fuentes dietéticas de proteínas incluyen carne, huevos, soya,
granos, leguminosas y productos lácteos tales como queso o
yogurt. Las fuentes animales de proteínas poseen los 20aminoácidos. Las fuentes vegetales son deficientes en
aminoácidos y se dice que sus proteínas son incompletas. Por
ejemplo, la mayoría de las leguminosas típicamente carecen de
cuatro aminoácidos incluyendo el aminoácido esencial metionina,
mientras los granos carecen de dos, tres o cuatro aminoácidos
incluyendo el aminoácido esenciallisina.
Calidad proteica
Las diferentes proteínas tienen diferentes niveles de familia
biológica para el cuerpo humano. Muchos alimentos han sido
introducidos para medir la tasa de utilización y retención de
proteínas en humanos. Éstos incluyen valor biológico, NPU (Net
Protein Utilization), NPR (Cociente Proteico Neto) y PDCAAS
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(Protein Digestibility Corrected Amino Acids Score), la cual fue
desarrollado por la FDA mejorando el PER (Protein Efficiency
Ratio). Estos métodos examinan qué proteínas son más
eficientemente usadas por el organismo. En general, éstos
concluyeron que las proteínas animales que contienen todos losaminoácidos esenciales (leche, huevos, carne) y la proteína
de soya son las más valiosas para el organismo.
Reacciones de reconocimiento
Reacción de Biuret
El reactivo de Biuret está formado por una disolución de sulfato
de cobre en medio alcalino, este reconoce el enlace peptídico de
las proteínas mediante la formación de un complejo de
coordinación entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no
compartidos delnitrógeno que forma parte de los enlaces
peptídicos, lo que produce una coloración rojo-violeta.
Reacción de los aminoácidos Azufrados
Se pone de manifiesto por la formación de un precipitado
negruzco de sulfuro de plomo. Se basa esta reacción en la
separación mediante un álcali, del azufre de los aminoácidos, el
cual al reaccionar con una solución de acetato de plomo, forma el
sulfuro de plomo.
Reacción de Millon
Reconoce residuos fenólicos, o sea aquellas proteínas que
contengan tirosina. Las proteínas se precipitan por acción de los
ácidos inorgánicos fuertes del reactivo, dando un precipitado
blanco que se vuelve gradualmente rojo al calentar.
Reacción xantoproteica
Reconoce grupos aromáticos, o sea aquellas proteínas que
contengan tirosina o fenilalanina, con las cuales el ácido
nítrico forma compuestos nitrados amarillos.
Deficiencia de proteínas
Deficiencia de proteínas en el tercer mundo La deficiencia de
proteína es una causa importante de enfermedad y muerte en
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eltercer mundo. La deficiencia de proteína juega una parte en la
enfermedad conocida como kwashiorkor . La guerra, la hambruna,
lasobrepoblación y otros factores incrementaron la tasa
de malnutrición y deficiencia de proteínas. La deficiencia de
proteína puede conducir a una inteligencia reducida o retardo mental. La malnutrición proteico calórica afecta a 500 millones de
personas y más de 10 millones anualmente. En casos severos el
número de células blancas disminuye, de la misma manera se ve
reducida drásticamente la habilidad de los leucocitos de combatir
una infección.
Deficiencia de proteínas en países desarrollados La
deficiencia de proteínas es rara en países desarrollados pero un
pequeño número de personas tiene dificultad para obtener
suficiente proteína debido a la pobreza. La deficiencia de proteína
también puede ocurrir en países desarrollados en personas que
están haciendo dieta para perder peso, o en adultos mayores
quienes pueden tener una dieta pobre. Las personas
convalecientes, recuperándose de cirugía, trauma o
enfermedades pueden tener déficit proteico si no incrementan su
consumo para soportar el incremento en sus necesidades. Una
deficiencia también puede ocurrir si la proteína consumida por
una persona está incompleta y falla en proveer todos losaminoácidos esenciales.
Exceso de consumo de proteínas
Como el organismo es incapaz de almacenar las proteínas, el
exceso de proteínas es digerido y convertido
en azúcares o ácidos grasos. El hígado retira el nitrógeno de
los aminoácidos, una manera de que éstos pueden ser consumidos como combustible, y el nitrógeno es incorporado en
la urea, la sustancia que es excretada por los riñones. Estos
órganos normalmente pueden lidiar con cualquier sobrecarga
adicional, pero si existe enfermedad renal, una disminución en la
proteína frecuentemente será prescrita.
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El exceso en el consumo de proteínas también puede causar la
pérdida de calcio corporal, lo cual puede conducir a pérdida de
masa ósea a largo plazo. Sin embargo, varios suplementos
proteicos vienen suplementados con diferentes cantidades
de calcio por ración, de manera que pueden contrarrestar elefecto de la pérdida de calcio.
Algunos sospechan que el consumo excesivo de proteínas está
ligado a varios problemas:
Hiperactividad del sistema inmune.
Disfunción hepática debido a incremento de residuos tóxicos.
Pérdida de densidad ósea; la fragilidad de los huesos se debe
a que el calcio y la glutamina se filtran de los huesos y el
tejido muscular para balancear el incremento en la ingesta de
ácidos a partir de la dieta. Este efecto no está presente si el
consumo de minerales alcalinos (a partir de frutas y vegetales
[los cereales son ácidos como las proteínas; las grasas son
neutrales]) es alto.
En tales casos, el consumo de proteínas es anabólico para el
hueso. Muchos investigadores piensan que un consumo excesivo
de proteínas produce un incremento forzado en la excreción del
calcio. Si hay consumo excesivo de proteínas, se piensa que un
consumo regular de calcio sería capaz de estabilizar, o inclusive
incrementar, la captación de calcio por el intestino delgado, lo
cual sería más beneficioso en mujeres mayores.[1]
Las proteínas son frecuentemente causa de alergias y reacciones
alérgicas a ciertos alimentos. Esto ocurre porque la estructura de
cada forma de proteína es ligeramente diferente. Algunas pueden
desencadenar una respuesta a partir del sistema inmune,
mientras que otras permanecen perfectamente seguras. Muchaspersonas son alérgicas a la caseína (la proteína en la leche),
al gluten (la proteína en el trigo) y otros granos, a la proteína
particular encontrada en el maní o aquellas encontradas
en mariscos y otras comidas marinas.
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Es extremadamente inusual que una misma persona reaccione
adversamente a más de dos tipos diferentes de proteínas, debido
a la diversidad entre los tipos de proteínas o aminoácidos. Aparte
de eso, las proteínas ayudan a la formación de la masa muscular ,
para todas aquellas personas que les guste hacer ejercicio, encuyo caso se recomienda la pechuga de pollo salcochado debido
al alto índice de proteína que tiene (no se debe consumir la
grasa).[3]
Análisis de proteínas en alimentos
El clásico ensayo para medir concentración de proteínas en
alimentos es el método de Kjeldahl. Este ensayo determina el
nitrógeno total en una muestra.
El único componente de la mayoría de los alimentos que contiene
nitrógeno son las proteínas (las grasas, los carbohidratos y la
fibra dietética no contienen nitrógeno). Si la cantidad de nitrógeno
es multiplicada por un factor dependiente del tipo de proteína
esperada en el alimento, la cantidad total de proteínas puede ser
determinada. En las etiquetas de los alimentos, la proteína es
expresada como el nitrógeno multiplicado por 6,25, porque el
contenido de nitrógeno promedio de las proteínas es de
aproximadamente 16%. El método de Kjeldahl es usado porquees el método que la AOAC International ha adoptado y por lo
tanto es usado por varias agencias alimentarias alrededor del
mundo
Proteinas totales en suero
Es una medición aproximada de todas las proteínas encontradas en la porción líquida de
la sangre. Esta prueba examina específicamente la cantidad total de dos clases de
proteínas: albúmina y globulina.
Las proteínas son partes importantes de todas las células y tejidos. Por ejemplo, la
albúmina ayuda a mantener un cierto tipo de presión arterial, impidiendo que el líquido se
escape fuera de los vasos sanguíneos.
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Razones por las que se realiza el examen
Este examen a menudo se hace para diagnosticar problemas nutricionales, enfermedad
renal o enfermedad hepática. Si la proteína total es anormal, se tienen que realizar
exámenes adicionales para identificar el problema específico.
Valores normales
El rango normal es de 6.0 a 8.3 gm/dl (gramos por decilitro).
Los valores normales pueden variar levemente entre laboratorios.
Significado de los resultados anormales
Los niveles superiores a los niveles normales pueden deberse a:
• Inflamación o infección crónica, incluyendo VIH y hepatitis B o hepatitis C
• Mieloma múltiple
• Enfermedad de Waldenstrom
Los niveles inferiores a los normales pueden deberse a:
• Agamaglobulinemia
• Sangrado (hemorragia)
• Quemaduras (extensas)
Determinación de proteínas totalesTécnica de Biuret
Fundamento: las proteínas dan coloración violeta en presencia de iones cúpricos ensolución alcalina, proporcional a la cantidad de proteínas presentes. La reacción es delenlace peptidico de las proteínas.
Material• Cloruro de sodio• Sulfato de cobre• Tartrato de sodio y potasio• Hidróxido de sodio• Yoduro de potasio• Acido clorhídrico
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• Fenoftaleina• Sulfato de sodio
Preparación de reactivos.Cloruro de sodio 0.85% 115 aCloruro de sodio 85g
Agua c.b.p. 1000 mlDisolver y aforar
Reactivo de Biuret 115 bSulfato de cobre 1.5 gTartrato de sodio y potasio 6 gYoduro de potasio 1 g
Agua c.b.p. 1000 mlEn un matraz volumétrico de 1000 ml poner el sulfato de cobre y el tartrato de sodio ypotasio, agregar aproximadamente 500 ml de agua destilada y agitar hasta disolución;agregar con agitación constante 300 ml de hidróxido de sodio 2.5N y mezclar. Agregar elyoduro de potasio y agitar hasta disolución. Aforar a 1 litro y conservar en frasco oscuro.La estabilidad del reactivo es grande, pero debe descartarse si se forma un precipitadonegro ó rojizo.
Hidróxido de sodio 1.5 NHidróxido de sodio 100 g
Agua libre de CO₂ c.b.p. 1000mlDisolver y aforar..Diluir 20 ml de esta solución a 100 ml y titular con acido clorhídrico 0.5 N; usandofenoftaleina como indicador.
Para 20 ml de la dilución anterior deben gastarse 20 ml de la solución de acido clorhídrico0.5N.
Sulfato de sodio 26.8 %Sulfato de sodio 268 g
Agua c.b.p. 1000 mlDisolver y aforar
Material biológico1.0 ml de suero sanguíneo
Técnica:1. En un tubo de ensaye poner 9.5 ml de cloruro de sodio al 0.85% y 0.5 ml de suero
problema, agitar para mezclar 2. En otro tubo de ensaye poner 2 ml de la muestra diluida.3. En otro tubo que servirá de blanco poner 2 ml de cloruro de sodio 0.85%.4. A cada tubo agregar 8 ml de reactivo de Biuret y mezclar por inversión
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5. Dejar 30 minutos a temperatura ambiente y leer a una longitud de onda de 540 µmo filtro 540.
6. Ajustar el % de trasmitancia con blanco de reactivos.
Valores normales
Proteínas totales 6 a 8 g / 100 ml de suero.
Cuestionario1. ¿ para que nos sirve la determinación de proteínas totales?2. ¿ a que puede deberse un nivel por arriba de los valores normales de proteínas
totales.?3. ¿ cuales son las 2 clases de proteínas que generalmente se cuantifican?4. ¿ cual es el fundamento de la técnica de Biuret.?5. ¿ como se clasifican las proteínas?
Practica 7
Determinación de hierro
INTRODUCCIÓN
El elemento hierro es esencial para la mayoría de los organismos vivientes. El hierro esun componente fundamental de muchas enzimas y pigmentos transportadores de
oxigeno. En el organismo fácilmente sufre procesos de oxidación y reducción; por ello, elhierro es un constituyente importante de las enzimas que participan en el trasporte deelectrones. La distribución de hierro en el organismo es como sigue:
Hemoglobina 900 mgMioglobina 40Citocromo 0.8Catalasa 5Ferritina 3Siderofilina 7.5
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Hierro orgánico total 3.900Hierro restante 300
Solamente del 11 al 14 % de la ingesta de hierro (12 a 18 mg al día) se absorbe en elaparato gastrointestinal. Sin embargo, en los estados que cursan con deficiencia de hierroy durante el crecimiento y embarazo se produce un aumento en la retención normal deeste mineral de cerca de 2 ó 3 veces.
El hierro es expulsado a través de la piel, por el sudor y la exfoliación de las célulasescamosas, a través de las heces y la orina, y en la mujer por menstruación. El embarazoorigina una perdida materna de aproximadamente 280 mg que van a parar al feto y 100mg durante el momento del parto. La lactancia constituye otra perdida materna de hierro.
El proceso de la regulación de la absorción del hierro a través del intestino esprácticamente desconocido. El hierro, sin embargo, se absorbe en la porción superior delintestino delgado directamente a la sangre. Cuando el hierro atraviesa la mucosaintestinal pasa a la sangre donde rápidamente se una a la trasferrina. El hierro tras suabsorción va a parar en gran parte a la medula ósea, hígado y en cantidades máspequeñas a otros tejidos.
Aproximadamente el 25 % de hierro del organismo se encuentra en los depósitos comoferritinas y hemosiderinas. Estos representan la reserva disponible para cuando surja lanecesidad.
Fundamento de la determinación de hierro.Se libera el hierro de las proteínas a estas se les precipita, después se añade al filtradouna solución de bathophenantrolina, sustancia que forma un compuesto coloreado con elhierro , la intensidad del color es directamente proporcional a la concentración de hierro.
Material.• Agua libre de Fe•
HCl• Acido tricloroacetico• Acido tioglicolico al 80 %• Acetato de sodio• Bathophenentrolina
Preparación de los reactivos.1. Acido clorhídrico: 0.2 N.0.67 ml de acido clorhídrico concentrado y agua libre de
Fe c.b.p. 100 ml.2. Acido tricloroacetico al 30 %: 30 g de acido tricloroacetico agua libre de Fe c.b.p.
100 ml.3. Acido tioglicolico, solución de 10 mg / 100 ml: sulfato ferroso amónico..En un
matraz aforado poner una pequeña cantidad de agua libre de Fe y después 0.15ml de acido sulfúrico concentrado, disolver y aforar a 100 ml.
4. Solución de bathophenantrolina al 0.02% : 20 mg de bathophenantrolina y alcoholisopropilico c.b.p. 100 ml
5. Solución saturada de acetado de sodio. En un tubo, poner 2 ml de agua libre de Fey se añade hasta la mitad de este volumen acetato de sodio, se agita hasta que yano se disuelvan algunos cristales que quedan en el sedimento.
Material biológico.
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Se toman de 7 a 9 ml de sangre venosa y se colocan en 2 tubos de ensaye sinanticoagulante. La toma de la muestra debe ser en ayunas y entre 7 y 9 de la mañana.Se centrifuga la sangre dentro de las 2 horas que siguen a la toma de la muestra y sesepara el suero el cual debe estar libre de hemolisis.
Técnica.
1. Se ponen 2 ml del suero en un tubo de ensaye.2. Se agregan 3.0 ml del HCl 0.2 N y una gota del acido tioglicolico al 80 % y se
mezcla3. Se deja reposar 30 minutos4. Se mezcla con un agitador de cristal hasta que se disuelvan los grumos.5. Se deja reposar 15 – 30 minutos a temperatura ambiente, manteniendo el tubo
tapado con papel parafilm.6. Se centrifuga a 2000 r.p.m. durante 15 minutos, se decanta el sobrenadante.7. Se ponen 4.0 ml en una celda del espectrofotómetro8. Se agregan 0.5 ml de la solución saturada de acetato de sodio9. Se mezcla y agregan 2.0 ml de la solución de bathophenentrolina al 0.02%10. Se agita se deja reposar 15 minutos a temperatura ambiente.
11. Se lee la absorvancia a una longitud de3 onda de 535 µm , después de ajustar acero con un blanco que tiene todos los reactivos y en lugar de suero 2.0 ml deagua destilada.
Calibración:
No. de matraz Sol. Con 10 mg agua c.b.p. Conc. en mg %de 100 ml de Fe
ml ml
1 0.5 100 502 1.5 100 1003 2.0 100 2004 3.0 100 300
Se procede con el contenido de cada matraz como si fuera suero.
D.O. del problema x 200 = microgramos de Fe/ 100 ml de suero
D.O. del estándar
La reacción colorida sigue la ley de Beer hasta la concentración de 300 mg en 100 ml;si el valor es mayor se usa 1.0 ml de suero y el resultado se multiplica por 2.
Valores normales:Hombres 60 – 185 meg / 100 mlMujeres 65 – 180 meg / 100 ml
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LABORATORIO DE BIOQUIMICA CLINICA
Cuestionario:1. ¿Cómo encontramos el hierro en el organismo?2. ¿a qué padecimientos está ligada la ausencia de hierro?3. ¿Cuál es la vía de absorción de hierro?4. ¿Cuál es el fundamento de la técnica para cuantificación de hierro?5. ¿porque usar agua libre de Fe en esta determinación?
Practica 8
TGO TGP
INTRODUCCIÓN
En los procesos de análisis clínicos que involucren directamente al tejido hepático, resultade gran utilidad el determinar los niveles sericos de Transaminasas , como lo son laalanina aminotransferasa (ALT ó TGP) y la aspartato aminotransferasa (AST ó TGO), yaque comparando los valores de actividad ALT v/s AST, es posible determinar el origenhepático, ó en su defecto cardiaco , al observar alteraciones en estos patronesenzimáticos.
Por otro lado , resulta muy útil para diferenciar hepatitis alcohólicas de otras hepatitisagudas, esto relacionando AST/ALT: En las hepatitis alcohólicas(con necrosis) este índicees generalmente mayor a 1 (AST aumentada por sobre ALT), mientras que en lashepatitis virales es generalmente menor a 1 (AST disminuida ante ALT).
En fin cualquiera que sea el caso , la determinación de estas enzimas adquiereimportancia diagnóstica cuando sus valores son enfrentados con valores de otras enzimasde similar origen tisular, permitiendo así completar un perfil enzimático de órganos comoel hígado.
MÉTODO DE REFERENCIA Y DE RUTINA
TGO
(AST, ASPARTATO AMINOTRANFERASA)
METODO DE IFCC (FEDERACION INTERNACIONAL DE QUIMICA CLINICA)
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LABORATORIO DE BIOQUIMICA CLINICA
Descripción.
La Aspartato aminotransferasa es una enzima que se encuentra localizada tanto anivel citoplasmático como mitocondrial, de allí que se diga que es una enzimabilocular , se encuentra ampliamente distribuida en músculo esquelético, riñón ,cerebro y principalmente en higado y corazón, donde esta en mayor concentración.Cualquier alteración en estos tejidos, se vera reflejado en un
aumento en el torrente circulatorio de esta enzima, el cual será directamenteproporcional al daño tisular.
En aquellos pacientes con afecciones hepáticas se observan las mayores elevaciones de AST, sobre todo en aquellos casos de hepatitis con necrosis.
Fundamento.
La reacción es catalizada por la TGO (AST), ésta desplaza la reacción hacia la formaciónde Oxaloacetato que reacciona con la MDH (Malato Deshidrogenasa), de modo que lavelocidad de oxidación del NADH medida a 340 nm, es directamente proporcional a laactividad de TGO en la muestra.
En el medio de reacción hay además LDH (Lactato Deshidrogenasa) suficiente paraconsumir los cetoácidos de origen endógeno, evitando así su interferencia.
Reacción.
TGO
L-aspartato + 2-oxoglutarato Oxalacetato + L-glutamato
Oxalacetato + NADH + H+ L-malato + NAD+
MDH
Muestra.
• Suero, Plasma (Heparinizado, EDTA).
• Muestras hemolizadas no se aceptan ya que poseen elevados niveles de ASTdentro de los eritrocitos.
Linealidad.Si el cambio por minuto de absorbancia excede de 0.160 (340nm y 334 nm) ó 0.080 (365),diluir la muestra 1+ 4 con suero fisiológico. Multiplicar el resultado por 5.
La absorbancia inicial debe ser superior a 0.8 A. En caso de no serlo se puede estar enpresencia de actividades enzimáticas muy elevadas y obtener resultados erróneos. Diluir la muestra y reprocesarla.
Metodología de Análisis.
*Lectura: Hg 365 nm, 340 nm, 334 nm.
*Paso Óptico: 1 cm.
*Temperatura: 37°C.
*Medición: Contra aire.
Los reactivos y cubetas deben ser llevados a la temperatura del ensayo, la que debemantenerse constante durante el desarrollo del test.
Valores Normales.
37°C (U/L)
Hombre Hasta 37
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Mujer hasta 31
Ventajas.
• Simple y Rápido
Desventajas.
• Resulta imposible o poco práctico modificar las mezclas reactivas preestablecidas.• Sueros hemolizados dan valores falsamente aumentados.
• Los sueros con concentraciones de cetoácidos endógenos elevados generanvalores
falsos elevados.
• Pacientes hemodializados o con hipovitaminosis u otras patologias asociadas condéficit de Piridoxal Fosfato (coenzima), generan valores falsamente disminuídos.
Consideraciones.
• A mayor temperatura se obtiene mayor sensibilidad , pero un menor rango delinealidad .
• La preincubación con parte del reactivo es para evitar interferencia con cetoacidosendógenos del suero.
• El Piridoxal fosfato es una coenzima necesaria en la actividad de la TGO, por elloesta última se ve afectada en ausencia de la misma. ejemplo: pacienteshemodializados o con hipovitaminosis.
• Para evitar contaminación de reactivos , usar pipetas nuevas y no intercambiar lastapas de los reactivos.
MÉTODO DE RUTINA Y REFERENCIA.
TGP
(ALT, ALANINA AMINOTRANFERASA)
METODO IFCC (FEDERACION INTERNACIONAL DE QUIMICA CLINICA)
Descripción.
La alanina aminotranferasa es una enzima que tiene como única localización elcitoplasma , de ahí que se le denomine unilocular. Su mayor actividad la presenta en eltejido hepático y la menor actividad en músculo esquelético, corazón, riñón, páncreas yeritrocitos (en ese orden).
Por lo tanto la destrucción o cambio en la permeabilidad de membrana celular provoca laliberación de ALT a la circulación sanguínea. Su aumento se debe principalmente aalteración hepática (como colestiasis, hepatitis tóxicas o virales).
En hepatitis viral el aumento de ALT precede a la aparición de ictericia, si los valores
están aumentados por sobre 6 semanas, nos debe hacer pensar en una hepatitis activa oel comienzo de una hepatitis crónica.
Fundamento.
La reacción catalizada por ALT esta desplazada hacia al formación de piruvato, quereacciona inmediatamente con la LDH (Lactato Deshidrogenasa), de modo que lavelocidad de oxidación del NADH, medida a 340 nm, es proporcional a la actividad de ALTen la muestra. El exceso de LDH en el medio es para consumir cetoácidos de origenendógeno, evitando así su interferencia.
Reacción.
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LABORATORIO DE BIOQUIMICA CLINICA
TGP
L-alanina + 2-oxoglutarato Piruvato + L-glutamato
Piruvato + NADH + H L-lactato + NAD+
LDH
Muestra.
Suero, plasma heparinizado o EDTA.
El oxalato , la heparina no inhiben la actividad enzimática , pero pueden causar ciertaturbidez.
La ALT es estable en suero durante 3 dias a temperatura ambiente y hasta una semana a4°C.En
la orina se encuentra poca o ninguna actividad, por lo cual no se recomienda para elanálisis.
Porcentaje de pérdida de actividad.
Refrigerada 10%
Hasta 25°C 17%
Linealidad.
Si el cambio por minuto de absorbancia excede de 0.160 (340 nm y 334 nm) ó 0.080 (365nm), diluir la muestra 1 + 4 con suero fisiológico. Multiplicar el resultado por 5.
La absorbancia inicial debe ser superior a 0.80 A. En el caso de no serlo se puede estar en presencia de actividades enzimáticas muy elevadas y obtener resultados erróneos.Diluir la muestra y reprocesarla.
Valores de referencia.
37°C (U/L)
Hombre Hasta 40
Mujer Hasta 31
Metodología de análisis.
• Lectura: Hg 365 nm, 340 nm, 334 nm.
• Paso Óptico: 1 cm.
• Temperatura: 37°C.
• Medición: contra aire.
Los reactivos y cubetas deben ser llevados a la temperatura del ensayo, la que debemantenerse constante durante el desarrollo del test.
Ventajas.
• Simple y Rápido.
• El uso de buffer TRIS nos permite que el NADH sea más estable que en otrosmétodos que usan fosfato.
• El piridoxal 5-Fosfato(PP) es un activador más efectivo de la ALT en buffer Trisque en el de fosfato.
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LABORATORIO DE BIOQUIMICA CLINICA
• Este método tiene una alta especificidad , carencia de interferencias, altalinealidda, reproductibilidad y rapidez.
Desventajas.
• Sueros hemolizados generan valores falsos elevados, debido a que el eritrocitocontiene 3 a 5 veces más ALT que el suero.
•
Sueros con concentraciones de cetoácidos endogenos elevados generan valoresfalsamente elevados.
Consideraciones.
• Muestras de pacientes hemolizadializados o con hipovitaminosis u otraspatologías asociadas
con déficit de Piridoxal Fosfato generan valores falsamente disminuidos.
• A mayor temperatura , mayor sensibilidad, pero menor rango de linealidad .
• Una absorvancia inicial bajo 0,800 D.O., estando reactivos en condiciones, indicauna
muestra con muy alta actividad de TGP. Por lo tanto es necesario diluir la muestra.
• Cuando la técnica se realiza como ensayo de punto final, la reacción presenta unefecto de retroinhibición por piruvato, este disminuye la linealidad.
• No es conveniente modificar la formulación de un fabricante luego de adquirir losreactivos.
MÉTODOS ALTERNATIVOS.
Método de Reitman y Frankel.
Esta es una reacción acoplada con dinitrofenilhidrazina (DNPH). Es una técnicacolorimétrica y cuantitativa.
Reacción.
Alanina + cetoglutarato Glutamato + Piruvato
Piruvato + DNPH Complejo formado por Pir-DNP-Hidrazona.
La lectura se hace a 505 nm. Es una reacción de punto final.
Es necesario un tiempo de retardo de la reacción con cetoglutarato, lo que permite elconsumo de cetoglutarato endógeno y todo otro proceso que consuma NADH. Esteretardo no debe ser inferior a 90 segundos.
Muestra.
• Suero.
Método de Wrodlewski y LaDue.
Este es un método enzimático cuantitativo.Alanina + cetoglutarato Glutamato + Piruvato
LD
Piruvato + NADH + H+ Lactato + NAD+
Esta es una medición del consumo de NADH a 340 nm. Es de uso muy frecuente.
La diferencia con el método de referencia es que este método requiere un tiempo deretardo no inferior a 90 segundos antes de la reacción con cetoglutarato para
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LABORATORIO DE BIOQUIMICA CLINICA
permitir el consumo de cetoglutarato endogeno y todo otro proceso que consumaNADH.
Además se recomienda un período de preincubación de 10 minutos con el cofactor piridoxal-5-fosfato.
Muestra.
•Suero
MÉTODO ALTERNATIVO.
(método propuesto por la AACC)
A propuesto un método para los laboratorios pequeños de Química Clínica, el cualse diferencia del de la IFCC en que:
1.- Se emplea un solo reactivo para evitar el procedimiento en dos pasos.
2.- La reacción se lee después de 150 segundos , durante los 180 segundossiguientes.
3.- No se agrega Fosfato de Piridoxal.
Cuestionario
1. ¿Para que nos sirve la determinación de TGO y TGP.?
2. ¿Con que otro nombre se conocen TGO y TGP respectivamente?
3. Mencione como se altera la relación TGO, TGP en casos e hepatitis viral y comoen hepatitis cirrótica
4. ¿ Porque no se emplea suero hemolisado para la determinación de estasenzimas?
BIBLIOGRAFIA
Título: Procedimientos Técnicos de Laboratorio Clínico Autor : Instituto de Salud Públicade Chile
Editorial: El Instituto Santiago de Chile 1994
Título: Química Clínica Autor: Anderson, Shauna C.
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Practica 9
Proyecto fina
Determinación de glucosa posprandial
La determinación de glucossa posprandial es un estudio que nos sirve para conocer la
asimilación de glucosa en un paciente , y así determinar si esta propenso a diabetes.
La prueba consiste en tomar una muestra en ayunas ,en la cual se valorara o determinara
el nivel de azúcar basal. Posteriormente el paciente tomara un desayuno rico en
azúcar(malteada, hot-cakes, pastel, jugo,etc.) siempre y cuando no sea diabético o tenga
alguna dieta indicada por su medico, anotan el tiempo en que empieza a desayunar.
Al cumplir 2 horas de haber desayunado se le tomara una nueva muestra, se determinara
glucosa y se hara el estudio y conclusiones obtenidos de dichos valores.
Procedimiento.
El alumno haciendo uso de los conocimientos adquiridos en este curso, toma de muestra,
realización de la cuantificación de glucosa, material necesario, etc. Podrá entregar
resultados.
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