Practicas Laboratorio Bioquimica Prop 09

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CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO INDUSTRIAL Y DE SERVICIOS No. 224 PRÁCTICAS DE LABORATORIO BIOQUÍMICA ING. MARÍA XOCHITL MORALES GONZÁLEZ DOCENTE
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CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLGICO INDUSTRIAL Y DE SERVICIOS No. 224

PRCTICAS DE LABORATORIO

BIOQUMICA

ING. MARA XOCHITL MORALES GONZLEZ DOCENTE

NDICE PPAGUA------------------------------------------------------------------------------------ 1

CARBOHIDRATOS------------------------------------------------------------------- 4

PROTENAS---------------------------------------------------------------------------- 8

ENZIMAS------------------------------------------------------------------------------- 12

LPIDOS--------------------------------------------------------------------------------- 16

BIBLIOGRAFA------------------------------------------------------------------------ 18

REGLAMENTO------------------------------------------------------------------------ 19

EL AGUA Y SU RELACIN CON LOS SERES VIVOS

INTRODUCCIN.La inmensa mayora de las clulas son soluciones acuosas al 20%, esto es, estn compuestas por 80% de agua y 20% de todas las dems molculas. As, la vida en la Tierra se presenta como una solucin acuosa, por lo que la molcula de agua es la ms abundante de todas las que integran a los seres vivos. En consecuencia con lo anterior, el organismo humano intercambia con su medio externo, mayor nmero de molculas d e agua que de todas las dems molculas juntas. Adems de su abundancia, las caractersticas de la molcula de agua ejercen una profunda influencia en la estructura, organizacin y funcionamiento de los seres vivos. Las propiedades fisicoqumicas del agua y el hecho de ser el solvente del resto de los componentes celulares, influyen decisivamente en la organizacin y disposicin espacial de todas las dems molculas depositarias de la vida: los lpidos, las protenas, los cidos nucle icos y los polisacridos. De lo que se desprende la importancia de conocer las propiedades de la molcula de agua, su participacin como solvente y las repercusiones que las propiedades de sta tienen en los sistemas biolgicos. Adems, el conocimiento adecuado del metabolismo del agua y los electrolitos es de gran inters mdico, como los casos de prdida de lquidos y sales por vmitos y diarreas, traumatismos y quemaduras, o los de retencin de agua y sales en la insuficiencia cardiaca congestiva, la insuficiencia renal del s ndrome nefrtico, etctera. Los lquidos corporales muestran una gran constancia en la concentracin de sus componentes inicos, pH, temperatura; adems tienen mecanismos muy efectivos para su regulacin y sistemas protectores contra la prdida de agua, como la piel y el rin, cuyo fin es el conservar constante, al grado mximo posible, la concentracin de los distintos componentes del medio interno; esto es, en rigor, la expresin del clsico aforismo de Bernard: La constancia del medio interno es la c ondicin de la vida libre De igual manera, en organismos vegetales, el conocimiento del papel del agua en fenmenos de gran trascendencia como la germinacin, imbibicin, la deshidratacin, el estrs por sales, la adaptacin al medio, as como en todos lo s procesos metablicos de stas, reviste gran importancia, en reas como la agricultura, disciplinas afines, o bien en el rea de alimentos. La distribucin del agua y los solutos en las clulas est regida por las leyes de la presin osmtica, las cuales se ven influidas por dos fenmenos: a) las macromolculas normalmente no atraviesan las membranas celulares, por lo tanto influyen poderosamente en la presin osmtica, b) las membranas celulares requieren energa para distribuir selectivamente un gran nm ero de solutos a ambos lados de la membrana. Las presiones osmticas del plasma sanguneo, las secreciones digestivas como el jugo gstrico, el pancretico, el intestinal y la bilis, otros lquidos como el cefalorraqudeo, el sinovial, etc., son prcticamente idnticas; en general, estos lquidos tienen una concentracin de partculas disueltas equivalente a 0.3 molal, comprendiendo tanto sustancias ionizadas como sus electrolitos. La distribucin del agua y de los solutos a ambos lados de una membrana depe nde de diversos factores, entre los cuales destaca la difusibilidad de los diversos componentes, muy elevada para determinadas sustancias, compuestos orgnicos no electrolitos como la urea, etc. en este caso, estas sustancias estn igualmente distribuidas y no ejercen efectos osmticos netos en ningn lado. En el caso de otras molculas, por ejemplo, la glucosa, podra aumentar la presin osmtica efectiva

entre el lquido intersticial y las clulas, pues su distribucin en clulas como las musculares y los adipositos depende de la actividad de la clula para captarla y no de un proceso de simple difusin. PROCEDIMIENTO. PARTE I.y y y y y y y y

SMOSIS

Poner 15 ml de cada una de las soluciones de sacarosa que se te proporcione en bolsas de dilisis y cirralas perfectamente como se te indique. En otra bolsita de dilisis coloca 15 ml de agua destilada Coloca cada bolsita sobre una toallita para retirar el exceso de humedad Pesa cada una de las bolsas en una balanza granataria y registra los datos. En 3 vasos desechables coloca aproximadamente partes de agua y coloca en el interior de cada uno, una bolsa de dilisis (de las que acabas de preparar). Deja transcurrir 15 minutos y pesa una a una, todas las bolsas, quitando el exceso de agua con un papel absorbente. Registra este nuevo peso. Compara los pesos de todas las bolsas qu ocurri? Registra y analiza los resultados en equipo y explcalos en tus notas.

BOLSA

CONCENTRACIN DE SACAROSA 0.25 0.5 1.0 H2 O

PESO DE LAS BOLSAS ANTES DESPUS(A los 15 min)

INTERPRETACIN

1 2 3 4

PARTE II. POTENCIAL HDRICO A) A NIVEL TEJIDO y Corta 9 cilindros de papa del tamao indicado por el maestro, psalos y mdelos en grupos de 3. Registra tus datos. y Coloca cada grupo de 3 cilindros en los vasos que contienen las distintas concentraciones de sacarosa que te proporciona el maestro. Recuerda: 3 cilindros por cada concentracin. y Deja transcurrir 15 minutos y vuelve a pesar y a medir cada grupo de 3 cilindros. Antes de pesar o medir scalos con papel absorbente. No exprimas. y Registra y analiza los resultados en equipo y explcalos en tus notas.

GRUPO Tejidos

CONC. SACAR. 0.25 0.5 1.0 H2 O

LONGITUD INICIAL FINAL

INTERPRETAC.

PESO INICIAL FINAL

INTERPRETACIN

12 3 4

B) A NIVEL CELULAR y Prepara una serie de soluciones de sacarosa como te indique el maestro y ponlas en vasos de precipitado pequeos. Cada concentracin se har tantas veces como tejidos diferentes se deseen valorar. y Sumerge los tejidos por 5 minutos en cada una de las soluciones a prueba. y Transcurrido este tiempo saca las muestras de tejido y colcalas en un portaobjetos y Coloca una gota de la solucin de la muestra sobre sta y ponle un cubreobjetos, presionando suavemente sobre l y Coloca tu preparacin en el microscopio y observa detalladamente las clulas y Verifica la presencia de clulas plasmolizadas y turgentes. y Compara tus muestras y determina en cul de stas (concentracin) aparecen mayor nmero de clulas turgentes y en cul mayor nmero de clulas plasmolizadas. Registra tus resultados y Esquematiza en los recuadros de abajo, una clula plasmolizada y una clula turgente.CLULA TURGENTE CLULA PLASMOLIZADA

CARBOHIDRATOSLos carbohidratos son fisiolgicamente importantes ya que realizan en nuestro organismodiversas funciones: sirven como fuente de energa, forman parte de los componentes estructurales de las clulas, por ejemplo: glucolpidos y glucoprotenas. Adems pueden formar carbohidratos de almacenamiento como el glucgeno y participan en la estructura de los cidos nucleicos. Los carbohidratos se clasifican en tres clases: 1. Los monosacridos (unidades monomricas), a veces mencionados como azcares simples, 2. Los oligosacridos (de dos a ocho monmeros en enlace glucosdico) 3. Polisacridos (son sustancias con altsimo peso molecular, con 100 a unos pocos miles de unidades monomricas) El trmino sacrido (derivado del griego sakchar, que significa azcar o dulzura) est relacionado con el sabor caracterstico de muchos de los carbohidratos simples. Dada la importancia de estas molculas, existen pruebas para su identificacin y caracterizacin, en la que los resultados positivos se manifiestan por la aparicin de un producto coloreado o la formacin de un precipitado, esto ocurre mediante reacciones especiales en las que juega un papel importante la estructura y propiedades qumicas de los carbohidratos. Algunos de los carbohidratos estudiados sern: glucosa (dextrosa), fructosa, maltosa, lactosa, sacarosa, ribosa, desoxirribosa y almidn. Entre las pruebas ms comunes se encuentran las siguientes: LA PRUEBA DE BENEDICT. Empleada para identificar azcares reductores o algunas otras sustancias con poder reductos. Esta prueba puede ser utilizada para la deteccin de este tipo de compuestos en orina como por , ejemplo: cido ascrbico presente en sta segn su ingestin y monosacridos como glucosa, fructosa, galactosa, etc., que se encuentran presentes en la orina en cantidades detectables bajo circunstancias patolgicas. PRUEBA DE SELIWANOFF. Se utiliza para la identificacin de cetoazcares. La fructosa por ser cetoazcar, puede ser detectada en orina en la fructosuria esencial, padecimiento hereditario causado por la deficiencia de la fructocinasa heptica, lo que ocasiona un aumento en la concentracin de fructosa en sangre excretndose en cantidades elevadas en orina. LA PRUEBA DE BIAL. Se utiliza para la identificacin de pentosas. LA PRUEBA DE LUGOL. Tambin conocida como la prueba del yodo, es utilizada para la identificacin de algunos polisacridos incluyendo el almidn y el glucgeno, formando complejos coloreados. PROCEDIMIENTO. PARTE UNO: IDENTIFICACIN DE CARBOHIDRATOS EN ALIMENTOS

A) DETECCIN DE POLISACRIDOS: 1. En la serie de tubos etiquetados como a del 1 al 6 coloca 0.5 gr de: TUBO A1: almidn TUBO A4: harina de trigo TUBO A2: harina de arroz TUBO A5: papa rallada TUBO A3: harina de maz TUBO A6: jugo de naranja

2. A cada tubo agrega 1 ml de agua y 1 gota de lugol. 3. Agita, observa y registra el resultado en el cuadro anexo B) DETECCIN DE MONOSACRIDOS Y DISCRIDOS REDUCTORES 1. En la serie de tubos etiquetados como B del 1 al 8 coloca de 5 a 10 gotas de: TUBO 1B: glucosa TUBO 2B: jugo procesado TUBO 3B: manzana rallada TUBO 4B: zanahoria TUBO 5B: papa rallada TUBO 6B: granadina TUBO 7B: vino TUBO 8B: ginseng 2. A cada uno de los tubos agrega 1 ml de agua y agita 3. Aade 1 ml de Benedict en cada tubo, agita y somete a bao Mara a ebullicin. Observa y registra. HOJA DE REGISTRO DETECCIN DE CARBOHIDRATOS EN ALIMENTOS SERIE A RESULTADO E SERIE B RESULTADO E (TUBOS) MUESTRA INTERPRETACIN (TUBOS) MUESTRA INTERPRETACIN A1 B1

A2

B2

A3

B3

A4

B4

A5

B5

A6

B6

B7

B8

PARTE DOS:

IDENTIFICACIN Y CARACTERIZACIN DE CARBOHIDRATOS

NOTA: Con la finalidad de que las pruebas sean lo ms precisas posibles, se trabajar a razn de una prueba por equipo, pero los resultados debern ser socializados por todos los equipos, de tal forma que todos puedan llenar su tabla registro completamente, cuidando incluso de anotar con mayor nfasis los resultados positivos de cada prueba.

PRUEBA SELIWANOFF: 1. Coloca el frasco gotero con el reactivo de Seliwanoff en un bao Mara hirviente, durante dos minutos. 2. Enumera 9 tubos de ensayo. 3. En cada tubo, coloca 3 gotas de uno de los carbohidratos a utilizar: glucosa, sacarosa, almidn, fructosa, lactosa, maltosa, ribosa, desoxirribosa, etc. 4. En el tubo 9 coloca 3 gotas de agua destilada (blanco) 5. Agrega a cada uno 2.5 ml del reactivo de Seliwanoff (al que previamente hayas sometido a bao Mara hirviente por al menos 2 minutos). Mezcla perfectamente. 6. Somete todos los tubos a bao Mara hirviente durante 1 minuto 7. Extrae los tubos, deja enfriar y observa. Registra tus resultados. PRUEBA DE BIAL: 1. Enumera 9 tubos de ensayo 2. Agrega a los 8 primeros tubos 1 ml de los carbohidratos a utilizar: glucosa, sacarosa, almidn, fructosa, lactosa, maltosa, ribosa, desoxirribosa, etc. 3. En el tubo 9 coloca 20 gotas de agua destilada (blanco) 4. Aade 2 ml de Reactivo de Bial. 5. Mezcla y somete a bao Mara a ebullicin durante 1 min. 6. Extrae los tubos, deja enfriar y observa. Registra los resultados. PRUEBA DE BENEDICT: 1. Enumera 9 tubos de ensayo 2. Agrega a los 8 primeros tubos 1 ml de los carbohidratos a utilizar: glucosa, sacarosa, almidn, fructosa, lactosa, maltosa, ribosa, desoxirribosa, etc. 3. En el tubo 9 coloca 20 gotas de agua destilada (blanco) 4. Aade 1 ml de Reactivo de Benedict. 5. Mezcla y somete a bao Mara a ebullicin durante 3 min. 6. Extrae los tubos, deja enfriar y observa. Registra los resultados. PRUEBA DE YODO: 1. Enumera 9 tubos de ensayo 2. Agrega a los 8 primeros tubos 1 ml de los carbohidratos a utilizar: glucosa, sacarosa, almidn, fructosa, lactosa, maltosa, ribosa, desoxirribosa, etc. 3. En el tubo 9 coloca 10 gotas de agua destilada (blanco) 4. Agrega a cada tubo una gota de lugol 5. Mezcla y observa. Registra los resultados.

EQUIPO: TUBO 1

HOJA DE REGISTRO IDENTIFICACIN Y CARACTERIZACIN DE CARBOHIDRATOS I II III REACCIN MUESTRA SELIWANOFF BIAL BENEDICTGLUCOSA

IV YODO

2

SACAROSA

3

FRUCTOSA

4

ALMIDN

5

LACTOSA

6

MALTOSA

7

RIBOSA

8

DESOXIRRIBOSA

9

AGUA DESTILADA

INTERPRETACIN

NOTA: Recuerda resaltar con algn color los resultados positivos en cada una de las pruebas. En la lnea de interpretacin anota el tipo de carbohidrato que te reconoce cada prueba o bien una nota general sobre el sabor, caramelizacin y solubilidad de los carbohidratos probados.

PROTENAS

Las protenas son polmeros de alto peso molecular, compuestos por aminocidos unidos entre s por enlaces peptdicos, que cuando se solubilizan son de dimensiones coloidales. Presentan propiedades fsicas y qumicas que dependen directamente de factores intrnsecos del propio polmero, como son su estructura y composicin de aminocidos, o bien de factores extrnsecos, como pueden ser el pH, la temperatura, las sales, etc. Existen varios mtodos para la identificacin y cuantificacin de las protenas, pero la mayora tiene como principio alguna reaccin qumica caracterstica de los grupos R de los diferentes aminocidos. Puede decirse que las protenas reflejan las propiedades qumicas de los residuos de aminocidos que contienen, por lo que la mayora de las reacciones coloridas de identificacin dependen de la existencia de un aminocido especfico en ellas. As, la reaccin de plomo es caracterstica para grupos sulfihidrilos. La reaccin de la ninhidrina es caracterstica para grupos amino libres. El reactivo de milln contiene una mezcla de nitritos y nitratos mercricos en cido concentrado. Debido a la presencia del grupo fenlico, se produce un compuesto de color rojo. La reaccin xantoproteica es positiva para aminocidos aromticos activados como protenas en solucin, aunque es mucho ms sensible cuando stas se encuentran probablemente secas. Esta reaccin depende de la nitracin de los anillos bencnicos activados produciendo un color amarillo (incluso anaranjado). La prueba resulta negativa para protenas que no contengan aminocidos aromticos activados . Aunque ciertos derivados del benceno, como el cido pcrico, reaccionan formando los nitro derivados amarillos. La reaccin de biuret, es una prueba general para protenas y pptidos de cadena no menor de 3 unidades de aminocidos. Una utilidad de esta reaccin es seguir el proceso de una hidrlisis proteica, ya que la reaccin ser negativa cuando la hidrlisis sea completa.y

Bajo determinadas condiciones, las protenas pueden experimentar cambios irreversibles en su conformacin. Cuando esto ocurre, las propiedades ca talticas se pierden hay un descenso brusco en la solubilidad y cambios en las propiedades fsicas y qumicas que pueden ser observados. Por medio de la desnaturalizacin, la estructura completa de la protena, que previamente mantena un estado de riguroso orden, cambia a un estado de desorden drstico, llamado "enrollamiento azaroso".

PARTE UNO:

PROCEDIMIENTO IDENTIFICACIN Y CARACTERIZACIN DE PROTENAS

NOTA. Con la finalidad de que las pruebas sean lo ms precisas posibles, se trabajar a razn de una prueba por equipo, pero los resultados debern ser socializados por todos los equipos, de tal forma que todos puedan llenar su tabla registro completamente, cuidando incluso de anotar con mayor nfasis los resultados positivos de cada prueba.

REACCIN DEL PLOMO: 1. Adiciona a 1 ml de las soluciones problema (*), 2 ml de NaOH al 10% y calienta ligeramente a bao Mara. 2. Aade de 3 a 5 gotas de acetato de plomo al 5% y calienta nuevamente hasta ver la aparicin de un precipitado negro. 3. Anota tus resultados en la tabla correspondiente.

REACCIN DE LA NINHIDRINA: 1. A 1 ml de las soluciones problema (*), agrega 5 gotas de solucin de ninhidrina. Observa a temperatura ambiente la aparicin de color azul o violeta que se debe a la presencia de grupos amino libres. 2. Si es necesario, calienta a bao Mara 1 o 2 minutos los tubos en los que no aparece el color. 3. Anota tus resultados y observaciones en la tabla correspondiente.

REACCIN DE MILLN: 1. A 1 ml de las soluciones problema (*), agrega 5 gotas de solucin de 2 a 5 gotas del reactivo de Milln 2. Calienta a bao Mara a ebullicin. La aparicin de un color rojo ser una prueba positiva. 3. Anota tus resultados y observaciones en la tabla correspondiente.

REACCIN XANTOPROTEICA: 1. A 1 ml de las soluciones problema (*), agrega 1 ml de cido ntrico concentrado. 2. Calienta la mezcla y enfra 3. Agrega cuidadosamente 1 ml de hidrxido de amonio concentrado. La aparicin de un color amarillo o naranja en la interfase ser una prueba positiva. 4. Anota tus resultados y observaciones en la tabla correspondiente.

REACCIN DE BIURET: 1. A 1 ml de las soluciones problema (*), agrega 2 ml de NaOH y de 3 a 5 gotas de solucin de reactivo de biuret, mezcla bien. La formacin de un color violceo o la precipitacin de hidrxido cprico ser una prueba positiva. 2. Si la reaccin de biuret no se presenta inmediatamente, deja reposar de 10 a 15 minutos. 3. Anota tus resultados y observaciones en la tabla correspondiente

(*) Las soluciones de prueba son las siguientes: 1. 2. 3. 4. Leche Gelatina sin sabor (grenetina) Caldo de pollo (u otra carne) Albmina de huevo 5. Peptona 6. Casena 7. Aspartame (canderel) 8. Aminocido (el profesor lo proporciona)

EQUIPO:

TUBO 1

HOJA DE REGISTRO IDENTIFICACIN Y CARACTERIZACIN DE PROTENAS REACCIN I II III IV MUESTRA XANTOPROTEICA PLOMO NINHIDRINA MILLN GELATINA

V BIURET

2

LECHE

3

CALDO

4

ALBMINA

5

PEPTONA

6

CASENA

7

ASPARTAME

8

TIROSINA

9

CISTENA

10

ARGININA

11

ALANINA

12

AGUA

INTERPRETACIN

NOTA: Recuerda resaltar con algn color los resultados positivos en cada una de las pruebas. En la lnea de interpretacin anota el tipo de aminocido que te reconoce cada prueba.

PARTE DOS:

DESNATURALIZACIN DE PROTENAS

1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13.

Etiqueta 8 tubos de ensaye Agrega a cada uno 1 ml de albmina de huevo En el tubo 1 agrega 1ml de base dbil En el tubo 2 agrega 1 ml de base fuerte En el tubo 3 agrega 1 ml de cido actico En el tubo 4 agrega 1 ml de cido actico y unos granitos de sal que te proporcione el instructor Calienta suavemente los tubos 3 y 4. Observa y anota (qu ocurri?) El tubo 5 se somete a ebullicin (con precaucin) En el tubo 6 agrega 2 ml de alcohol etlico. Mezcla En el tubo 7 aade 10 gotas de acetato de plomo Al tubo 8 aade 2 ml de detergente biolgico En el vaso de precipitado coloca una pequea porcin de albmina y agita vigorosamente En el vidrio de reloj, coloca un poco de albmina y somtela a radiacin ultravioleta siguiendo las indicaciones del instructor (este paso es opcional, sobre la marcha se te indicar) 14. Observa, interpreta y registra en el cuadro anexo, lo ocurrido en cada caso. Preferentemente saca el cogulo formado y siente su textura entre tus dedos, para que se te facilite la interpretacin. HOJA DE REGISTRO DESNATURALIZACIN DE PROTENAS EQUIPO: REACCIN RESULTADOS INTERPRETACIN DE RESULTADOS MUESTRA TUBO

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11

BASE DBIL BASE FUERTE CIDO DBIL CIDO+SAL EBULLICIN ALCOHOL VENENO METABLICO DETERGENTE BIOLGICO AGITACIN FUERTE RADIACIN UV UREA

EN

A

Las e as s s s anc as e naturale a rote ca u e actan como catalizadores de las reacciones umicas ue se lleven a cabo en el citoplasma celular. Cada clula produce las enzimas necesarias para el uncionamiento del organismo en el cual se encuentran de acuerdo con las "instrucciones" contenidas en el D . El nmero de enzimas en un organismo puede ser muy grande dependiendo de su complejidad. Las enzimas se caracterizan por sus propiedades catalticas contienen uno o ms centros de accin capaces de transmitir la informacin de su entorno. Estos centros son: De adhesin al sustrato o co-sustrato Activos donde se cataliza la reaccin) De regulacin Asimismo, contienen componentes proteicos, aunque la gran mayora de las enzimas contienen componentes de otras familias. Las enzimas pueden contener iones metlicos slidos o coenzimas tales como el AD+ FAD formando parte del centro activo. N 2REA A

La reaccin de la ureasa produce una hidrlisis y causa que el pH de la solucin de reaccin se eleve. La eleccin de un indicador adecuado, en este caso la fenolftalena, permite que la ruptura de urea sea visible. E isten varios mtodos de hidrlisis de urea, de entre los cuales, los ms empleados son los bsicos y aquellos que utilizan a la enzima ureasa. Las protenas contienen grupos -SH libres en sus cadenas laterales, los cuales pueden ser directa o indirectamente responsables de la accin cataltica de la enzima. Bajo determinadas condiciones las enzimas pueden e perimentar cambios irreversibles en su conformacin. Cuando esto ocurre, las propiedades catalticas se pierden, hay un descenso brusco en la solubilidad y cambios en las propiedades fsicas y qumicas que pueden ser observados. or medio de la desnaturalizacin, la estructura completa de la enzima que previamente mantena un estado de riguroso orden, cambia a un estado de desorden drstico, llamado "enrollamiento azaroso". Hay numerosa vas de desnaturalizacin de las s enzimas, siendo stas utilizadas de acuerdo a los fines que se tengan, en Biotecnologa generalmente se utiliza el calor, la acetona y el perxido de hidrgeno. Las enzimas son extremadamente especficas, es decir, nicam ente reaccionan con una sustancia en particular, y no con otras sustancias a pesar de que la estructura de sta sea muy similar. Algunas enzimas reaccionan lentamente a concentraciones elevadas de sustrato que a concentraciones bajas del mismo. En este caso se asume que ms de una sola molcula de sustrato se adhiere al centro activo de la enzima, inhibiendo la reaccin. La inhibicin competitiva de una reaccin enzimtica ocurre cuando una molcula con estructura similar a la del sustrato empleado, compite por adherirse al mismo centro activo, obteniendo como resultado que la reaccin enzimtica disminuya.

REA

N 2

=C

+

2

2N 2

+ C

2

"

!

#

PROCEDIMIENTO PARTE A EFECTO DEL CALOR SOBRE EL SUSTRATO (Testigo negativo) 1. Calienta en un tubo de ensayo 2 ml de la solucin de sustrato, exponindola a la flama de un mechero durante 2 minutos. 2. Aade dos gotas del indicador y mezcla por medio de ligeros golpecitos 3. Anota tus observaciones y tu interpretacin en la tabla de registroPARTE B. HIDRLISIS BSICA 1. Pesa aproximadamente un gramo de urea en un vaso de precipitado de 30 ml 2. Agrega una pequea cantidad de NaOH slido 3. Adhiere una tira de papel indicador de pH a un vidrio de reloj por medio de agua 4. Tapa el vaso de precipitado con un vidrio de reloj 5. Calienta cuidadosamente el vaso de precipitado 6. Anota tus observaciones y tu interpretacin en la tabla de registro CON ENZIMA NATIVA 1. Muele unos granos de la semilla (cualquier semilla) en un mortero 2. Aade a un tubo de ensayo 2 ml de la solucin del sustrato 3. Con la punta de una esptula, agrega una pequea cantidad de la semilla molida 4. Agrega una gota de indicador 5. Anota tus observaciones y tu interpretacin en la tabla de registro CON ENZIMA COMERCIAL (testigo positivo) 1. Aade a un tubo de ensayo 2 ml de la solucin del sustrato 2. Con la punta de una esptula, agrega una pequea cantidad de la enzima comercial 3. Agrega una gota de indicador 4. Anota tus observaciones y tu interpretacin en la tabla de registro

PARTE C DESNATURALIZACIN POR CALOR 1. Calienta un tubo de ensayo que contenga 2 ml de solucin de la enzima 2. Agrega 2ml de solucin de sustrato 3. Agrega una gota de indicador 4. Anota tus observaciones y tu interpretacin en la tabla de registro CON ACETONA 1. En un tubo de ensayo coloca 1 ml de suspensin de enzima 2. Aade 2 ml de acetona 3. Anota tus observaciones 4. Agrega 2 ml de solucin de sustrato y un gota de indicador 5. Anota tus observaciones y tu interpretacin en la tabla de registro CON PERHIDROL 1. En un tubo de ensayo coloca 1 ml de suspensin de enzima 2. Aade 2 ml de perhidrol 3. Anota tus observaciones 4. Agrega 2 ml de solucin de sustrato y un gota de indicador 5. Anota tus observaciones y tu interpretacin en la tabla de registro PARTE D ESPECIFICIDAD POR SUSTRATO 1. Realiza una reaccin de tiourea con ureasa 2. En otro tubo de ensayo agrega 2 ml de solucin de tiourea 3. Adele 1 ml de solucin de ureasa y 1 gota del indicador 4. Anota tus observaciones y tu interpretacin en la tabla de registro

PARTE D INHIBICIN POR SUSTRATO Efecta una hidrlisis de urea al 30% con ureasa: 1. En un tubo de ensayo coloca 2 ml de solucin de urea al 30% 2. Adele 1 ml de solucin de ureasa y 1 gota del indicador 3. Compara con el control positivo 4. Anota tus observaciones y tu interpretacin en la tabla de registro COMPETITIVA 1. En un tubo de ensayo coloca 2 ml de solucin de urea al 2% 2. Agrgale 2 ml de solucin de tiourea, 1 ml de solucin de ureasa y 1 gota de indicador 3. Anota tus observaciones y tu interpretacin en la tabla de registro

PARTE A Testigo negativo

PRUEBA

HOJA DE REGISTRO ENZIMAS OBSERVACIN (tipo de reaccin: positiva o negativa)

INTERPRETACIN

Efecto del calor sobre el sustrato Bsica

B Hidrlisis

Con enzima nativa Con enzima comercial (testigo positivo) Por calor

CDesnatura lizacin

Con acetona Con perhidrol

A Hidrlisis

Con enzima comercial (testigo positivo)

B Especificidad

Con tiourea Por concentracin de sustrato competitiva (entre sustratos)

C inhibicin