Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

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Universidad de La Salle Universidad de La Salle Ciencia Unisalle Ciencia Unisalle Zootecnia Facultad de Ciencias Agropecuarias 2010 Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella Pullorum en Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella Pullorum en pollo de engorde de la línea Ross 308 pollo de engorde de la línea Ross 308 Jose Andersson Piñeros Gordillo Universidad de La Salle, Bogotá Manuel Arturo Rodriguez Vasquez Universidad de La Salle, Bogotá Follow this and additional works at: https://ciencia.lasalle.edu.co/zootecnia Part of the Poultry or Avian Science Commons Citación recomendada Citación recomendada Piñeros Gordillo, J. A., & Rodriguez Vasquez, M. A. (2010). Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella Pullorum en pollo de engorde de la línea Ross 308. Retrieved from https://ciencia.lasalle.edu.co/zootecnia/145 This Trabajo de grado - Pregrado is brought to you for free and open access by the Facultad de Ciencias Agropecuarias at Ciencia Unisalle. It has been accepted for inclusion in Zootecnia by an authorized administrator of Ciencia Unisalle. For more information, please contact [email protected].

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Universidad de La Salle Universidad de La Salle

Ciencia Unisalle Ciencia Unisalle

Zootecnia Facultad de Ciencias Agropecuarias

2010

Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella Pullorum en Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella Pullorum en

pollo de engorde de la línea Ross 308 pollo de engorde de la línea Ross 308

Jose Andersson Piñeros Gordillo Universidad de La Salle, Bogotá

Manuel Arturo Rodriguez Vasquez Universidad de La Salle, Bogotá

Follow this and additional works at: https://ciencia.lasalle.edu.co/zootecnia

Part of the Poultry or Avian Science Commons

Citación recomendada Citación recomendada Piñeros Gordillo, J. A., & Rodriguez Vasquez, M. A. (2010). Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella Pullorum en pollo de engorde de la línea Ross 308. Retrieved from https://ciencia.lasalle.edu.co/zootecnia/145

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IDENTIFICACIÒN DE Salmonella Gallinarum y Salmonella Pullorum EN POLLO DE

ENGORDE DE LA LINEA ROSS 308

JOSE ANDERSSON PIÑEROS GORDILLO

MANUEL ARTURO RODRIGUEZ VASQUEZ

UNIVERSIDAD DE LA SALLE

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

PROGRAMA DE ZOOTECNIA

2010

Page 3: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

IDENTIFICACION DE Salmonella Gallinarum y Salmonella Pullorum EN POLLO DE

ENGORDE DE LA LINEA ROSS 308

JOSE ANDERSSON PIÑEROS GORDILLO

MANUEL ARTURO RODRIGUEZ VASQUEZ

Trabajo de grado presentado para optar el tìtulo de Zootecnista

Director

JAVIER EDUARDO GÓMEZ

Médico veterinario ULS.

UNIVERSIDAD DE LA SALLE

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

PROGRAMA DE ZOOTECNIA

BOGOTA D.C

2010

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DIRECTIVAS

HERMANO CARLOS GABRIEL GÒMEZ RESTREPO F.S.C RECTOR HERMANO FABIO CORONADO PADILLA F.S.C VICERRECTOR ACADEMICO HERMANO CARLOS ALBERTO PABÒN MENESES F.S.C VICERRECTOR DE PROMOCIÒN Y DESARROLLO HUMANO HERMANO MANUEL CANCELADO JIMENEZ F.S.C VICERRECTOR DE INVESTIGACIÒN Y TRASFERENCIA DOCTOR EDUARDO ANGEL REYES VICERRECTOR ADMINISTRATIVO DOCTORA PATRICIA INES ORTIZ VALENCIA SECRETARIA GENERAL DOCTOR LUIS CARLOS VILLAMIL JIMENEZ DECANO FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS DOCTOR JOS LECONTE SECRETARIO ACADEMICO FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS DOCTOR RAFAEL IGNACIO PAREJA MEJIA DIRECTOR DEL PROGRAMA DE ZOOTECNIA DOCTOR ALEJANDRO TOBON GONZALEZ ASISTENTE ACADEMICO

Page 5: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

APROBACION

_______________________________________ DOCTOR RAFAEL IGNACIO PAREJA MEJIA DIRECTOR DEL PROGRAMA ______________________________________ DOCTOR ALEJANDRO TOBON GONZALEZ ASISTENTE ACADEMICO ______________________________________ DOCTOR JAVIER GÒMEZ DIRECTOR DEL TRABAJO DE GRADO ______________________________________ DOCTORA RUTH RODRIGUEZ ANDRADE JURADO ______________________________________ DOCTOR GUILLERMO GÒMEZ JURADO JURADO

Page 6: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

AGRADECIMIENTOS A Dios por permitirnos terminar nuestra carrera. A nuestros padres por su apoyo, por su confianza y ayuda durante toda la carrera. A nuestro director de tesis, Doctor Javier Eduardo Gómez, por sus conocimientos y la asesoría brindada para el desarrollo de este proyecto. A la Universidad de la Salle por el apoyo brindado para que este proyecto se realizara. A Rosario Santos, por su ayuda y colaboración incondicional durante las pruebas de laboratorio requeridas para este proyecto.

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DEDICATORIA A Dios por su ayuda espiritual.

A nuestros padres por su paciencia confianza y ayuda brindada a lo largo de

nuestra vida.

A todos nuestros amigos que estuvieron con nosotros en toda nuestra carrera.

Jose Andersson Piñeros Gordillo

Manuel Arturo Rodriguez Vasquez

Page 8: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

1

IDENTIFICACION DE Salmonella Gallinarum Y Salmonella Pullorum EN

POLLO DE ENGORDE DE LA LINEA ROSS 308

RESUMEN

La avicultura de nuestro país ha venido sufriendo un problema de gran relevancia,

consistente en la aparición de una enfermedad denominada científicamente como

salmonelosis, la cual origina problemas patológicos que ocasionan principalmente

alteraciones en los parámetros zootécnicos de las aves, situación que constituye

perdidas enormes en las empresas avícolas.

En la década de los ochenta se produjo un aumento en los casos de salmonelosis

humana trasmitida por los alimentos. La principal fuente fueron los productos avícolas.

Esto creo una gran desconfianza para los consumidores, provocando que no

compraran estos productos por prevención. También generó dificultades a los

avicultores nacionales para competir en los mercados externos. Debido a todo esto las

empresas avícolas disminuyeron sus utilidades. Lo anterior se debe a que no existen

investigaciones de salmonelosis en granja en donde se disponga de datos o

información necesaria para la implementación de estrategias, reglamentación y control

adecuado de salmonelosis aviar en las granjas de Colombia.

El principal objetivo de esta investigación fue el aislamiento, identificación y

serotipificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella Pullorum en pollos de engorde

de la línea Ross 308, por medio de hisopados cloacales en una granja del sector

avícola con una población de 36.000 aves, divididos en 4 lotes cada uno de 9.000

aves. Por cada lote se tomaron 20 hisopados cloacales al final de las semanas 1, 2, 3

de vida. En total se tomaron 240 hisopos cloacales equivalente a 4800 aves

representando el 10% de la población total. Para la identificación de las bacterias se

llevo a cabo en el laboratorio de control de calidad de la Universidad de La Sallé sede

norte por medio de pruebas bioquímicas y el sistema de identificación BBL Crystal. Los

Page 9: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

2

resultados obtenidos se analizaron por medio de estadística descriptiva mostrando la

presencia de Salmonella Spp en un 80,42 %, Proteus Spp 11,67%, Enterobacter

Cloacae 5.83%, Klebsiela Spp 2,08 % y la ausencia de Salmonella Gallinarum y

Salmonella Pullorum en estas aves.

PALABRAS CLAVES: Aislamiento, Identificación, Salmonella, Pollos.

Page 10: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

3

ABSTRAC

The poultry industry of our country has been facing a problem of great importance,

namely the emergence of a disease known scientifically as salmonella, which causes

problems mainly caused pathological changes in the zootechnical parameters of birds,

presenting huge losses in the poultry companies.

In the eighties there was an increase in human salmonellosis cases of foodborne. The

main source was poultry products. This created a great distrust for consumers, causing

them not to buy these products for prevention. It also generates difficulties for domestic

poultry farmers to compete in foreign markets. Because of all this poultry companies

decreased their profits. This is because there is no salmonella in farm research where

data are available or information necessary for the implementation of strategies, proper

regulation and control of avian salmonellosis on farms in Colombia.

The main objective of this research was the isolation, identification and serotyping of

Salmonella Gallinarum and Salmonella Pullorum in broilers of the Ross 308 line,

through cloacal swabs on a farm where the poultry sector has a population of 36,000

birds divided into 4 lots each of 9,000 birds. For each batch took 20 cloacal swabs at

the end of weeks 1, 2, 3 living. A total of 240 cloacal swabs were taken equivalent to

4,800 birds representing 10% of the total population. For the isolation and identification

of bacteria was carried out in the quality control laboratory of the University of La Salle

north headquarters through biochemical tests and BBL Crystal Identification System.

The results were analyzed using descriptive statistics showing the presence of

Salmonella Spp in 80,42 %,, Proteus Spp 11,67%, Enterobacter Cloacae5.83%,

Klebsiella Spp 2,08 % and the absence of Salmonella Pullorum and Salmonella

Gallinarum in birds.

KEY WORDS: Isolation, Identification, Salmonella, Chickens.

Page 11: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

4

TABLA DE CONTENIDO

RESUMEN .................................................................................................................... 1

ABSTRAC ..................................................................................................................... 3

1. INTRODUCCIÒN ................................................................................................. 10

2. OBJETIVOS ........................................................................................................ 12

2.1 OBJETIVO GENERAL ....................................................................................... 12

2.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS ............................................................................. 12

3. MARCO TEÒRICO .............................................................................................. 13

3.1 GENERALIDADES DE LA AVICULTURA EN COLOMBIA ................................ 13

3.2 POLLO DE ENGORDE LINEA ROSS 308 ........................................................ 14

3.2.1 Parámetros Zootécnicos ................................................................................. 15

3.3 ENFERMEDADES BACTERIANAS EN LA AVICULTURA ................................ 15

3.4 GENERALIDADES DE LAS BACTERIAS ......................................................... 15

3.4.1 Clasificación De Las Bacterias ....................................................................... 16

3.5 GENERALIDADES DE LA SALMONELA .......................................................... 17

3.5.1 Estructura Antígena ........................................................................................ 19

3.5.2 Salmonella Gallinarum ................................................................................... 21

3.5.3 Salmonella Pullorum ....................................................................................... 21

3.6 SALMONELOSIS .............................................................................................. 22

3.6.1 Resistencia A Antibióticos .............................................................................. 23

3.6.2 Transmisión en el Hombre .............................................................................. 24

3.6.3 Programas De Control .................................................................................... 24

3.6.4 Diagnóstico .................................................................................................... 24

3.7 MÉTODOS PARA EL AISLAMIENTO DE SALMONELLA SPP ......................... 25

3.7.1 Preenriquecimiento en medio no selectivo ..................................................... 25

3.7.2 Medios de enriquecimiento selectivo ........................................................... 26

3.7.3 Medios de cultivo selectivos ........................................................................... 27

3.7.4 Medios de cultivo diferenciales ....................................................................... 27

3.7.4.1 Agar Xilosa Lisina Desoxicolato (XLD) ........................................................ 28

Page 12: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

5

3.7.4.2. Agar Bismuto Sulfito ................................................................................... 29

3.8 PRUEBAS BIOQUÍMICAS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE SALMONELLA ..... 29

3.8.1 Prueba De Indol ............................................................................................. 29

3.8.2 Prueba de catalasa......................................................................................... 30

3.8.3 Prueba oxidasa .............................................................................................. 30

3.8.4 Prueba De Movilidad ...................................................................................... 30

3.9 SISTEMA DE IDENTIFICACIÓN BBL CRYSTAL® ........................................... 31

3.10. SEROTIPIFICACIÒN ...................................................................................... 32

3.10.1 Esquema De Kauffmann White..................................................................... 33

4. MATERIALES Y METODOS ................................................................................... 35

4.1 UBICACIÓN DEL PROYECTO .......................................................................... 35

4.2 UNIVERSO Y MUESTRA .................................................................................. 35

4.3 CARACTERIZACIÓN DE LAS GRANJAS ......................................................... 36

4.4. TÉCNICAS Y PROCEDIMIENTOS UTILIZADOS PARA LA RECOLECCIÓN DE

LA INFORMACIÓN ................................................................................................. 37

4.4.1 Método para la recolección de muestras de Salmonella Gallinarum y

Salmonella Pullorum ............................................................................................... 37

4.4.2 Aislamiento e identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella Pullorum.

................................................................................................................................ 39

4.5 DISEÑO EXPERIMENTAL ................................................................................ 47

4. RESULTADOS Y DISCUSIÓN ............................................................................ 48

4.1 Resultados presencia / ausencia de Salmonella Spp ........................................ 48

4.2 Resultado pruebas bioquímicas ........................................................................ 49

4.3 Presencia de Salmonella Spp y otras especies ................................................. 51

4.4 Resultado muestras por lote .............................................................................. 52

4.5 Resultados semanales ...................................................................................... 53

6. CONCLUSIONES ................................................................................................ 54

7. RECOMENDACIÓNES ........................................................................................ 55

REFERENCIAS .......................................................................................................... 57

ANEXOS ..................................................................................................................... 60

Page 13: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

6

TABLAS

1. Parámetros Zootécnicos Pollo De Engorde ..................................................... 15

2. Tipos de formas bacterianas ........................................................................... 16

3. Pruebas bioquímicas para la identificación de S. Gallinarum y S. Pullorum .... 18

4. Resultados pruebas bioquímicas ………………………………………………….50

Page 14: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

7

FIGURAS

1. Pollo Ross 308 ............................................................................................... 14

2. Pared celular Gram negativas – Gram positivas .............................................. 17

3. Salmonella Spp. .............................................................................................. 19

4. Estructura antígena Salmonella Spp. .............................................................. 20

5. Prueba BBL Crystal ® ..................................................................................... 32

6. Muestreo con hisopo cloacal ........................................................................... 37

7. Tubos identificados para el muestreo .............................................................. 38

8. Tubos muestreados e identificados ................................................................. 38

9. Caldo Tetrationato ........................................................................................... 39

10. Siembra en caldo Tetrationato ........................................................................ 40

11. Muestras descartadas ..................................................................................... 41

12. Colonias Salmonella Spp. ............................................................................... 41

13. Prueba catalasa y oxidasa .............................................................................. 42

14. Medio SIM ....................................................................................................... 43

15. Muestras con Producción de H2S y movilidad +. ............................................. 43

16. Siembra en Agar triptiasa soya........................................................................ 44

17. Siembra en BBL Crystal. ®.............................................................................. 44

18. Esquema proceso de identificación de Salmonella Spp. en laboratorio ........... 46

Page 15: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

8

GRAFICAS

1. Presencia / Ausencia de Salmonella Spp. ....................................................... 48

2. Porcentaje de aislamiento de Salmonella Spp y otras especies ...................... 51

3. Resultados muestras por lote. ......................................................................... 52

4. Resultados muestras semanales ..................................................................... 53

Page 16: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

9

ANEXOS

1. Principales enfermedades de control oficial en Colombia. .............................. 62

2. Esquema de kauffmann white ......................................................................... 63

3. Registro de seguimiento de muestra ............................................................... 64

4. Estadística descriptiva presencia Salmonella Spp. por lotes y por semana…..75

Page 17: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

10

1. INTRODUCCIÒN

En el mundo a través del tiempo ha aumentado cada vez más el interés por la

inocuidad de los alimentos en sus diferentes campos de producción. En Latinoamérica

y en Colombia se han establecido documentos legislativos los cuales están

encaminadas a la exigencia de la inocuidad de los alimentos en las diferentes etapas

de producción encaminada siempre a la evolución de la agroindustria. La carne, uno

de los productos más consumidos y base de la canasta familiar Colombiana, es uno de

los productos más importantes por sus características nutricionales y es uno de los

objetivos principales de control y vigilancia por estar considerado como de mayor

riesgo para la salud pública, según el Decreto 3075 de 1997. (MINISTERIO DE LA

PROTECCION SOCIAL, 1997)

En Colombia la avicultura constituye uno sectores más dinámico dentro de las

actividades pecuarias encaminadas a la producción de carne en las últimas tres

décadas seguido por la producción de carne bovina y la porcicultura.

La producción de pollo de engorde en Colombia es una de las principales actividades

pecuarias ya que es de gran importancia para la alimentación de los colombianos, sin

embargo las enfermedades trasmitidas por estos animales constituyen un aspecto de

especial interés para las entidades gubernamentales que apelan a la prevención de

éstas mediante exigencia de la implementación de sistemas de calidad como el Plan

de Análisis de Peligros y Puntos Críticos de Control (HACCP), que garanticen la

inocuidad de los productos. (DE LAS MERCEDES OSORIO ROJAS, 2009)

Dentro de estas enfermedades de control oficial encontramos la Salmonelosis la cual

es una enfermedad zoonotica, la cual afecta a la salud pública y produce grandes

pérdidas económicas a nivel productivo por mortalidad, pérdida de peso y una

disminución en la producción. Esta enfermedad es producida por bacterias

denominadas Salmonelas, en las cuales se han identificado más de 2300 serotipos.

Dentro de ellas encontramos las S. Gallinarum y S. Pullorum, las cuales son de gran

importancia a nivel gubernamental ya que pueden afectar la salud pública de los

colombianos y el comercio con los demás países del mundo. (CALNEK B. W., 2000)

Page 18: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

11

Actualmente en la producción avícola de nuestro país, encontramos que hay

deficiencia de información actualizada sobre la incidencia de la salmonelosis en las

granjas de pollo de engorde que impiden facilitar las políticas de reglamentación y

control de zoonosis en el país.

El presente estudio busca aislar e identificar la presencia/ausencia de S. Gallinarum y

S. Pullorum en pollo de engorde de la línea ROSS 308, por medio de pruebas

bioquímicas y el sistema de identificación BBL Cristal para entérico no fermentadores

con el fin de proporcionar información que ayude a facilitar las políticas de

reglamentación y control de zoonosis en el país.

Este estudio hace parte de un Macro proyecto que está realizando la Universidad de

La Salle y el Ministerio de Agricultura y desarrollo rural, lo cual hace que todos los

datos obtenidos no sean totalmente expuestos ya que algunos de estos datos son

catalogados como confidenciales para el proyecto.

Page 19: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

12

2. OBJETIVOS

2.1 OBJETIVO GENERAL

Identificación y serotipificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella Pullorum en

pollo de engorde de la línea Ross 308.

2.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS

Implementar el manual para la toma de muestras de Salmonella Gallinarum y

Salmonella Pullorum en pollos de engorde

Aislar la Salmonella Gallinarum y Salmonella Pullorum en pollos de engorde de

la línea Ross 308, por medio de muestras de Hisopos cloacales.

Identificar la presencia Salmonella Gallinarum y Salmonella Pullorum por medio

de pruebas bioquímicas.

Tipificar Salmonella Gallinarum y Salmonella Pullorum en pollos de engorde.

Page 20: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

13

3. MARCO TEÒRICO

3.1 GENERALIDADES DE LA AVICULTURA EN COLOMBIA

En Colombia la avicultura se constituye en el sector más dinámico dentro de las

actividades pecuarias en las tres últimas décadas. La producción de carne bovina se

incrementó a una tasa anual del 1,4%. La porcicultura al 2,1% y la avicultura en 11,6

% para carne de pollo y 7,5% en producción de huevo. (FENAVI, 2009)

La producción de pollo de engorde en Colombia es una de las principales

producciones pecuarias ya que es de gran importancia para la alimentación de los

colombianos. Según FENAVI (Federación Nacional de Avicultores de Colombia) el

consumo per capital en los últimos años ha aumentado significativamente pasando de

20.1 kg/año en el 2006 a 23.7 kg/año en el 2009. Con respecto las demás cadenas

pecuarias el pollo se ubica en el primer lugar de consumo frente a la carne de ganado

bovino con 18 kg/año y la carne de cerdo con 4.4 kg/año. (FENAVI, 2009)

La actividad pecuaria del pollo de engorde solo se ha destinado al consumo interno ya

que la cantidad de carne de pollo (1.010.659 Ton. para el año 2008), solo abarca el

consumo de la población colombiana. (FENAVI, 2009) Solo se han registrado para la

cadena avícola exportaciones hacia Venezuela en lo que corresponde a huevo fértil y

a pollito de un día. (MORA, 2008) Las cantidades de aves encastadas para el 2008

entre hembras y machos corresponden a 607.175.424, (577.745.031 machos y

29.430.393 hembras) lo cual es de gran significancia en generación de empleo en el

país (FENAVI, 2009)

Page 21: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

14

3.2 POLLO DE ENGORDE LINEA ROSS 308

El pollo Ross 308 es un pollo con características robustas especialmente en la

pechuga y patas, lo cual lo hace ver de forma redondeada. Se caracteriza por tener

una excelente velocidad de crecimiento, una magnifica conversión de peso y una

buena resistencia a enfermedades. (Figura 1) (GUTIERREZ, DISNEY, & JOSE, 2007)

FIGURA 1. Pollo Ross 308

FUENTE: (AVIAGEN, 2009)

Esta línea ingreso al país en 1997 ya que se encontraba como una de las líneas

genéticas más importantes en el mudo en lo que conlleva a la producción de pollo de

engorde especialmente para la producción de pollos Broiler (pollo de asadero, 1900

gr). (TELLES, 2008)

Page 22: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

15

3.2.1 Parámetros Zootécnicos

Según los objetivos de rendimiento del manual Ross 308 se presentan los siguientes

parámetros teniendo en cuenta una producción normal de pollo Broiler a una edad de

35 en un lote de aves mixtos. (Tabla 1) (AVIAGEN CORPOREITED, 2007):

TABLA 1. Parámetros Zootécnicos Pollo De Engorde

EDAD (DÍAS) 35

PESO CORPORAL (GR) 2021

GANANCIA DIARIA (GR) 89

CONSUMO DIARIO (GR) 183

CONSUMO ACUMULADO (GR) 3248

CONVERSIÓN 1.6

PESO INICIAL (GR) 42

FUENTE: (AVIAGEN CORPOREITED, 2007)

3.3 ENFERMEDADES BACTERIANAS EN LA AVICULTURA

Según el documento 3468 del COMPES indican en materia de sanidad aviar, existen

tres enfermedades de control oficial: Influenza Aviar, enfermedad de Newcastle y

Salmonelosis aviar. (Anexo 1.)

3.4 GENERALIDADES DE LAS BACTERIAS

Las bacterias son generalmente unicelulares las cuales hacen parte del grupo de los

protistas inferiores. Estas presentan una estructura menos compleja que la de las

células de los organismos superiores. Son células procariotas (su núcleo está formado

por único cromosoma y carecen de membrana nuclear). (AVIAGEN, 2009)

Las bacterias tienen diferentes tipos de morfología como: cocos (esféricos), bacilos

(bastón), espirilos (espiras). (Tabla 2.). Estos distintos tipos de morfología celulares

Page 23: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

16

deben de haberse originados por mecanismos evolutivos, a saber, por selección y

estabilización adaptiva frente a las distintas presiones ambientales presentes en

diferentes nichos ecológicos. (AVIAGEN, 2009)

TABLA 2.Tipos de formas bacterianas

Forma Aspecto

Cocos Células más o menos esféricas

Bacilos En forma de bastón, alargados, que a su vez pueden tener

varios aspectos:

Cilíndricos

Fusiformes

En forma de masa, etc.

Espirilos Atendiendo a los tipos de extremos, estos pueden ser:

Redondeados (lo más frecuente)

Cuadrados

Biselados

Afilados

Vibrios Forma de espiral, con una o más de una vuelta de hélice.

Otros tipos de

formas

Proyectada su imagen sobre el plano tienen forma de coma.

Filamentos, ramificados o no.

Anillos casi cerrados

Formas con prolongaciones.

FUENTE: (LANES, 1998)

3.4.1 Clasificación De Las Bacterias

Aparte de la clasificación morfológica también se basa en gran medida en

características tales como forma, capacidad de formar esporas, métodos de

producción de energía (glucolisis en las anaerobias, respiración celular en las

aerobias) y la reacción a la tinción de Gram. (Figura 2). (AVIAGEN, 2009)

Page 24: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

17

FIGURA 2. Pared celular Gram negativas – Gram positivas

FUENTE: (BIOLOGYCORNER, 2009)

3.5 GENERALIDADES DE LA SALMONELA

El género Salmonella recibe su nombre gracias al microbiólogo Daniel Elmer Salmon

(1850-1914). Este género de bacterias es de gran importancia a nivel de salud pública

ya que la Salmonella puede habitar tanto en animales como en humanos.

Las diversas especies de Salmonelas se trasmiten por contacto con animales

enfermos como animales portadores sanos, aunque por lo general la enfermedad

producida tiene un origen alimentario debido a la ingesta de alimentos contaminados,

teniendo en cuenta que la materia fecal es una de las principales fuentes de

contaminación a nivel ambiental.

La Salmonela corresponde a bacterias Gram negativas que pertenecen a la familia

Enterobacteriaceas y están compuestas por una sola especie denominada Salmonella

Entérica. (Figura 3) Generalmente son móviles por flagelos a excepción de S.

Gallinarum y S. Pullorum, las cuales causan tifoidea aviar y pullorosis

respectivamente. Podemos encontrar aerobias y anaerobias facultativas y tienen un

Page 25: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

18

amplio rango de temperatura de crecimiento destacando que la mejor temperatura de

crecimiento es de 37⁰C y pueden desarrollarse en un pH entre 4 y 9.Son ubicuas en la

naturaleza, son sensibles a la pasteurización, se inactivan a 64⁰C por un minuto (la S.

Gallinarum es inactivada a 60⁰C por 10 minutos). (CALNEK B. W., 2000) La gran

mayoría de estas bacterias se encuentran en el intestino animal lo cual nos indica que

se diseminan fácilmente en el ambiente.

Estas bacterias son incapaces de fermentar lactosa o sacarosa pero si fermentan

glucosa con producción de acido y gas. Según su metabolismo estas bacterias para

ser identificadas deben tener los siguientes resultados bioquímicamente. Cabe

mencionar que la S. Gallinarum y S. Pullorum son inmóviles y no producen H2S (Tabla

3.)

TABLA 3. Pruebas bioquímicas para la identificación de S. Gallinarum y S. Pullorum

PRUEBA

BIOQUIMICA

RESULTADO

Oxidasa -

Catalasa +

Indol -

H2S -

Movilidad -

FUENTE: Adaptación (TERRAGNO, CAFFER, & BRUNA, 2003)

Page 26: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

19

FIGURA 3. Salmonella Spp.

FUENTE: (MENDEZ, 2007)

3.5.1 Estructura Antígena

En la Salmonela encontramos dos clases de antígenos principales el antígeno

somático O y antígeno flagelar H. el antígeno O lo encontramos en la pared de la

bacteria y está conformada por polisacáridos. Estos antígenos son resistentes y

termoestables a ácidos diluidos y alcohol el antígeno H se encuentra formado por

proteína flagelina el cual como su nombre lo dice esta referenciado a la presencia del

flagelo en la bacteria. (Figura 4)

Page 27: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

20

FIGURA 4. Estructura antígena Salmonella Spp.

Existen otros antígenos como el K y el VI que están presente en algunas especies esto

debido a algunos genes específicos.

Para identificar el antígeno “O” se hace con números arábigos y dada la participación

de fracciones somáticas en algunas Salmonelas, se organizan en grupos cuyos

miembros comparten uno o más antígenos somáticos.

El antígeno flagelar es difásico (La primera fase inespecífica, se identifica con letras

minúsculas, y la segunda fase especifica, con números arábigos).

En lo que corresponde en la estructura antígena de la estructura antígena de la S.

Gallinarum solamente contiene antígenos somáticos “o” la formula antígena de esta

Salmonella es de 9 – 12 al igual que la S. Gallinarum. Sin en embargo la fracción 12

esta subdividida en 122 y 123 y según la predominancia de estas fracciones tenemos

los tipos variantes, estándar o intermedios. La S. Pullorum estándar posee dominancia

en la fracción 123 mientras que en la variante domina la fracción 122 y en las

intermedias ambas fracciones se encuentran sin dominancia todo esto basado en el

esquema de Kauffmann White. (MACFADDIN J. , 2000)

ANTIGENO “H”

ANTIGENO

“O”

ANTIGENO “VI”

Page 28: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

21

3.5.2 Salmonella Gallinarum

Es un bacilo corto y grueso sin flagelos no forma esporas ni cápsulas, se tiñe con

colorantes ordinarios es Gram negativo, puede aislarse fácilmente de la sangre e

hígado. Es aerobio y anaerobio facultativo y su temperatura óptima para el crecimiento

es los 37 grados centígrados. Posee antígenos O1,9 y 12 similar al grupo D de la

clasificación de las Salmonelas. (SENASICA, 2008)

Los signos incluyen mortalidad repentina o esporádica, apatía, diarrea verde o amarilla

(acompañada de la adhesión de las plumas cercanas al ano), pérdida de apetito,

incremento de sed y una apariencia pálida de la cresta y carúncula (INSPECCION DE

SALUD ANIMALY VEGETAL DE USDA DE TEXAS, 2003).

3.5.3 Salmonella Pullorum

Es un germen Gram negativo, no posee flagelos, aerobio y anaerobio facultativo,

puede aislarse de la sangre, hígado y bazo de aves infectadas. Este germen produce

colonias lisas, brillantes opalescentes y de bordes continuos en cultivos de Agar EMB.

Su temperatura óptima para crecimiento es de 37 grados centígrados con un PH de 7.

Los signos clínicos principalmente son la falta de apetito, una disminución en el peso,

alta mortalidad y la presencia de diarrea denominada diarrea bacilar blanca. (BWD,

por sus siglas en ingles.) (INSPECCION DE SALUD ANIMALY VEGETAL DE USDA DE

TEXAS, 2003)

Bioquímicamente una completa diferenciación de la S. Pullorum y S. Gallinarum puede

darse por la descarboxilación de la ornitina, la cual es positiva para la S. Pullorum.

(SENASICA, 2008).

Page 29: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

22

3.6 SALMONELOSIS

Es una enfermedad de gran importancia económica, ya que produce grandes pérdidas

por mortalidad, pérdida de peso y una disminución en la producción. Es producida por

bacterias denominadas Salmonelas. Las cuales pertenecen a la familia de las

enterobacterias las cuales son Gram negativas. Se han identificado más de 2300

serotipos. En las cuales se encuentran como únicas inmóviles las S. Gallinarum y S.

Pullorum. Estas bacterias son sensibles a la a pasterización y se inactivan a 64°c por

un minuto a excepción de la S. Gallinarum, es inactivada a 60°c por 10 minutos.

(CALNEK B. , 2000)

Algunos tipos de Salmonela son altamente específicos las especies como lo es el caso

de S. Thyphy en donde el hombre es el único que se considera como hospedador de

este serotipo. En el caso de S. Gallinarum y S. Pullorum, las aves y los pájaros son los

mayores hospedadores para estos dos serotipos. (SHIVAPRASAD, 2000)

Las enfermedades causadas por la S. Gallinarum y S. Pullorum son denominadas

como tifosis aviar y pullorosis respectivamente. Se caracterizan por ser septicémicas y

afectan principalmente a pollos y pavos refiriéndose a aves para consumo humano ya

que como se menciono anteriormente puede darse en general en las aves.

Los signos clínicos que más presentan estas enfermedades son anorexia, diarrea,

deshidratación, decaimiento y elevada mortalidad. Las lesiones macroscópicas y

microscópicas comprenden hepatitis, tiflitis, onfalitis, miocarditis, ventriculitis,

neumonía, sinovitis, peritonitis y oftamilitis. Las aves maduras pueden presentar

ooforitis, salpingitis, peritonitis y perihepatitis.

Por otra parte a nivel reproductivo, la Salmonela produce infección transovaricamente

el cual provoca contaminación en los huevos y continuamente a los pollitos, dando a

conocer que esta enfermedad entre los mecanismos de transmisión como uno de los

más importantes para el proceso productivo. (VELASQUEZ, 1999)

Page 30: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

23

3.6.1 Resistencia A Antibióticos

Durante varios años las cepas de Salmonela han desarrollado resistencia a varios

antibióticos. Los cual dificulta su control. Por otra parte el manejo indebido de

antibióticos ha generado que estas bacterias sean resistentes a los antibióticos.

Según la Organización Mundial de la Salud OMS (1997) el uso indebido de antibióticos

en la producción animal intensiva incide para que la resistencia bacteriana se haya

incrementado a un ritmo alarmante y es factible para que continué aumentando a

proporciones mayores si no se realiza un debido control de antibióticos o agentes

antimicrobianos.

En los años 90 se identifico una cepa S. Typhimurium la cual es resistente a un amplio

rango de antibióticos en donde se encuentra la ampicilina, estreptomicina, tetraciclina

dando origen a la nomenclatura S. Typhimurium R-type ACSSUT esta cepa se ha

encontrado en muestras de trabajadores de granjas, algunos mamíferos, aves y

mascotas domesticas. (OMS, 1997)

la resistencia a los antibióticos por Salmonelas procedente de las aves y de los

humanos muestra que todas las cepas presentaron una sensibilidad del 100% ante el

antibiótico Imipenen, mientras que el mayor porcentaje de resistencia la presento el

antibiótico sulfametasol – trimetoprim y el antibiótico Gentamicina. Por otra parte se

observa que la resistencia de antibióticos se presenta más en las cepas obtenidas en

humanos que de cepas aviares. (VELASQUEZ, 1999)

Page 31: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

24

3.6.2 Transmisión en el Hombre

La principal ruta de infección en el hombre es por la ingestión de alimentos y agua

contaminada, en los alimentos principalmente de origen animal como carne de res,

cerdo, aves, huevos y leche, sin dejar atrás las frutas y vegetales. (OMS, 1997)

Esta contaminación en los alimentos se puede dar por la manipulación indebida de los

procesos de producción, distribución y preparación. Además otros orígenes de

infección por Salmonella Spp, es la transmisión de persona a persona y el contacto

con animales o mascotas.

3.6.3 Programas De Control

El control de salmonelosis es muy complejo, para esto se debe reducir el riesgo de

contaminación en los procesos de producción, transporte y preparación partiendo de

una excelente bioseguridad de los procesos en granjas como también en plantas de

beneficio y vehículos que trasportan los alimentos.

Además se debe evaluar constantemente los puntos críticos que son importante para

la inocuidad de los alimentos de origen animal, que conlleven hacia una producción

limpia de residuos que brindan confianza y seguridad a los consumidores.

En último lugar se debe concientizar a los consumidores al buen manejo de los

alimentos y de los animales dentro de los hogares y así evitar posibles

contaminaciones que afecten la salud y bienestar de las personas.

3.6.4 Diagnóstico

Actualmente existen diferentes métodos para diagnósticos diferentes que pueden

realizarse para la identificación de Salmonella Spp. la mayoría de los estudios

realizados, demuestran que el cultivo microbiológico es la prueba más comúnmente

implementada para la identificación de la bacteria a partir de tejidos y excrementos. El

método apropiado debe tener una alta sensibilidad y especificidad y ser al mismo

Page 32: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

25

tiempo simple, rápido y económico. Actualmente no existe ningún método que cumpla

con todos los criterios y ninguno es óptimo para todas las condiciones, dado que

pueden presentarse alteraciones en los medios de cultivo y algunas pruebas

bioquímicas; por lo tanto es aconsejable apoyarse también en los nuevos métodos de

diagnóstico que están innovando para el aislamiento de Salmonella Spp. Mediante el

uso de pruebas serológicas y moleculares como ELISA y PCR respectivamente; esta

última tiene la capacidad de detectar un pequeño número de organismos del género

Salmonella (102 a 104). Estos métodos arrojan resultados favorables y confiables en

menos tiempo, pero tienen la desventaja de ser costosos. (TERRAGNO, CAFFER, &

BRUNA, 2003)

Ante la sospecha de salmonelosis, el material que debe remitirse al laboratorio debe

ser variado. Se enviará en caso de infección intestinal, muestra de heces. En

enfermedad sistémica, se recoge una muestra de sangre para realizar un cultivo

estándar. (STANCHI, 2007)

3.7 MÉTODOS PARA EL AISLAMIENTO DE SALMONELLA SPP

Según Luna (1991) clasifica los métodos para el aislamiento de la bacteria, en tres

etapas sucesivas las cuales son: Enriquecimiento No Selectivo, Enriquecimiento

Selectivo, Siembra en Placa con medios sólidos selectivos y diferenciales.

Posteriormente se lleva a cabo el estudio de las características Bioquímicas de las

colonias sospechosas en los medios adecuados para su identificación y finalmente el

Análisis Antigénico.

3.7.1 Preenriquecimiento en medio no selectivo

Se utiliza cuando la muestra en estudio ha sufrido un proceso de desecación o

irradiación, cuando ha estado congelada por mucho tiempo o si el pH del medio es

muy bajo, este tratamiento puede determinar que las bacterias presentes en la

Page 33: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

26

muestra se encuentren en un estado semi latente y tiene como finalidad la

revitalización de los microorganismos afectados por las diferentes condiciones de

tratamientos industriales o de almacenamiento, permitiendo que las células

bacterianas comiencen el proceso de multiplicación normal sin estar expuestas a

sustancias inhibidoras o selectivas que puedan llegar a ser tóxicas para estas

bacterias (debilitadas), sustancias que si están presentes en los medios selectivos de

enriquecimiento. Se realiza en caldo peptonado bufferado al 0,1%, para incrementar la

recuperación de especies de Salmonelas deterioradas por técnicas de elaboración,

preservación, preservantes, presión osmótica alta, cambios bruscos de pH. (LUNA,

1991.)

3.7.2 Medios de enriquecimiento selectivo

Se realiza en caldos de enriquecimiento, los cuales estimulan el crecimiento de formas

compatibles con Salmonella Spp, e inhiben el desarrollo de bacterias intestinales y

coliformes. Entre los caldos mayormente usados para el enriquecimiento selectivo de

Salmonella Spp. Se encuentra el caldo Tetrationato el cual Es utilizado como un medio

de enriquecimiento selectivo para especies de Salmonella Spp, Que pueden estar

presentes en pequeñas cantidades y que compiten con otras bacterias de la flora

intestinal. (LABORATORIOS MCD, 2008)

Este medio que junto con el tiosulfato excedente, inhibe de igual forma coliformes y

otras bacterias acompañantes, sin alterar las bacterias reductoras de Tetrationato

como Salmonella Spp. y Proteus Spp. Adicionalmente, las sales biliares que contiene

inhiben considerablemente a todos los microorganismos de presencia obligatoria en el

intestino. (PALUMBO, 1999)

Mueller demostró la efectividad del Caldo Tetrationato para el enriquecimiento de

bacilos tifoídico y paratifoídicos y la inhibición de coliformes. En una modificación del

medio de Mueller, Kauffma incrementó el número de aislamientos positivos de

Page 34: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

27

Salmonella Spp. La base de Caldo Tetrationato está especificada en los Métodos

Estándar para las pruebas de Salmonella Spp. (LABORATORIOS MCD, 2008)

3.7.3 Medios de cultivo selectivos

Son aquellos que permiten seleccionar ciertos microorganismos deteniendo el

desarrollo de otros; esto se logra con el agregado de sustancias inhibidoras como

antibióticos, ciertos colorantes y sales biliares. Entre la gran variedad de medios

selectivos encontramos el Agar MaCconkey el cual permite detectar con rapidez los

microorganismos no fermentadores de lactosa como Salmonella Spp y Shigella Spp el

agente inhibidor de este medio son las sales biliares. (STANCHI, 2007)

Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fácil desarrollo,

aerobios y anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias que utilizan, lactosa

en muestras clínicas, de agua y alimentos. Las peptonas, aportan los nutrientes

necesarios para el desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono

fermentable, la mezcla de sales biliares y el cristal violeta son los agentes selectivos

que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora Gram positiva. Los microorganismos

no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras. (LABORATORIOS BRITANIA,

2009)

3.7.4 Medios de cultivo diferenciales

Son aquellos que permiten diferenciar bioquímicamente las bacterias por su actividad

metabólica. Poseen un sustrato, sobre el cual actúa o no la bacteria y esa actividad se

revela por variación del pH del medio o por alguna actividad enzimática que modifica

su aspecto. En el proceso de recuperación de Salmonella Spp los aislamientos

sospechosos por ser No fermentadores de lactosa en el Medio Selectivo, son

sembrados en medios diferenciales que permiten la observación de colonias

Page 35: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

28

características y propias de la bacteria (STANCHI, 2007). Los medios más reconocidos

para el aislamiento de Salmonella Spp. Son:

3.7.4.1 Agar Xilosa Lisina Desoxicolato (XLD)

El Agar XLD (por sus siglas Xilosa, Lisina, Desoxicolato) es utilizado para el

aislamiento y diferenciación de bacilos entéricos Gram negativos, especialmente del

género Shigella y Providencia. (LABORATORIOS MCD, 2009)

El efecto inhibidor de este medio de cultivo es débil. El desoxicolato genera la

inhibición de bacterias coliformes y permite la dispersión de cepas de Proteus que

puede llegar a confundirse con las colonias producidas por Salmonela.

Adicionalmente, la diferenciación entre Salmonella Spp. y Shigella Spp. Se da porque

la primera produce fermentación de Xilosa, descarboxilación de Lisina y genera ácido

sulfhídrico. (HURTADO, 2001.)

Este medio presenta la ventaja de facilitar el crecimiento de gérmenes exigentes ya

que otros medios contienen inhibidores excesivamente tóxicos. Las bacterias que

descarboxilan la lisina, se reconocen por la presencia de un color rojo- purpúreo,

debido al aumento del pH alrededor de sus colonias. (MURRAY & SHEA., 2004) Varias

de estas reacciones pueden presentarse simultáneamente o sucesivamente, lo que

puede dar lugar a diversos matices de color del indicador de pH, ó a un viraje de

amarillo a rojo en el transcurso de una incubación más prolongada. Las colonias de

Salmonella Spp. Se observan con pigmentación rosa o roja, algunas veces

transparentes con o sin centro negro o completamente negras. Las colonias

sospechosas de Shigella Spp. son transparentes y del mismo color que el medio de

cultivo. Este género bacteriano al no fermentar la xilosa, la lactosa ni la sacarosa, no

da lugar a que vire a amarillo, el rojo fenol; como tampoco decarboxilan la lisina, no se

produce color rojo púrpura alrededor de las colonias, al no haberse producido

cadaverina. (MURRAY & SHEA., 2004)

Page 36: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

29

3.7.4.2. Agar Bismuto Sulfito

Es un medio diferencial y selectivo, usado para el aislamiento e identificación de

Salmonela entérica Serovar Typhi y otras bacterias entéricas. El medio contiene

peptona y tejidos animales, extracto de carne, glucosa, sulfato férrico y sulfito bismuto

que actúa como inhibidor de la mayoría de organismos comensales. Las colonias

típicas de Salmonella Spp. Pueden ser café, gris o negras con o sin brillo metálico,

generalmente el medio circundante (halo) es café que posteriormente se torna negro;

algunas cepas producen colonias verdes sin la formación del halo oscuro. (MURRAY &

SHEA., 2004)

3.8 PRUEBAS BIOQUÍMICAS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE

SALMONELLA

En la identificación bioquímica para diagnostico de Salmonella Spp. Se utilizan

diferentes métodos los cuales son muy efectivos. Entre ellos se encuentran:

3.8.1 Prueba De Indol

Esta prueba consiste en verificar si la bacteria a analizar es capaz de desdoblar el

Indol de la molécula de triptófano ya que el Indol es una molécula resultado de la

degradación del triptófano. Las bacterias contiene triptofanasa las cuales tienen la

función de desdoblar e hidrolizar el triptófano produciendo acido pirúvico, amoniaco e

Indol.

La prueba consiste en la formación de un complejo rojo cuando el Indol reacciona con

el grupo aldehído del Dimetilaminobenzaldehido. Por lo cual se utiliza reactivo de

Kovacs para realizar este procedimiento. Para la identificación de Salmonella Spp con

respecto a esta prueba no hay producción de Indol ya que estas bacterias no tienen la

capacidad de producir Indol. (MACFADDIN J. , 2000)

Page 37: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

30

3.8.2 Prueba de catalasa

Esta prueba consiste en la identificación de la enzima catalasa en los

microorganismos, las cuales desdoblan el peróxido de hidrogeno en oxigeno y agua.

Generalmente todos los microorganismos poseen esta enzima.

2H2O2 2H2O+O2

Para la identificación en laboratorio se deposita una muestra del microorganismo a

analizar en un portaobjetos y se agrega una gota de peróxido de hidrogeno. A los

pocos segundos se observa la reacción de con la presencia de gran cantidad de

burbujas por un determinado tiempo. (WHEELIS, STANIE, & INGRAHAM, 1996)

3.8.3 Prueba oxidasa

La prueba de oxidasa consiste en la detección de la enzima oxidasa del indofenol, la

cual se descubre por su reacción con dimetil o tetrametil p-fenilendiamina. Se utiliza

como reactivó recién preparado al 1 por 100 de agua de α-naftol, para la prueba se

manipula una muestra de la bacteria a analizar en un portaobjetos o en papel filtro

empapado con el reactivo. La prueba es positiva si aparece una mancha de color

purpura o negro. (CARPHIER, 1996)

3.8.4 Prueba De Movilidad

Esta prueba consiste en determinar si un organismo es móvil o inmóvil. Se realiza en

un medio de cultivo semisólido (SIM), al mismo también es evaluada la producción de

indol y de ácido sulfhídrico que es producida por los microorganismos. La movilidad de

las bacterias es consecuencia de la presencia de flagelos que se encuentran

principalmente entre los bacilos, aunque algunas formas de cocos son móviles. Las

bacterias móviles producirán un enturbiamiento homogéneo del medio debido a la

Page 38: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

31

distribución aleatoria de los microorganismos. Por el contrario las bacterias inmóviles

permanecerán en la misma picadura donde se sembraron (MacFADDIN, 2000).

La mayoría de las Salmonelas son móviles a excepción de S. pullorum y S. gallinarum,

huéspedes específicas de aves, responsables además de las enfermedades

Pulorosis y Tifoidea aviar respectivamente (HERRERA, INFANTE, LEÓN, & DE

NOGUERA, 1991) .

3.9 SISTEMA DE IDENTIFICACIÓN BBL CRYSTAL®

El sistema de identificación BBL Crystal (ID) de bacterias entéricas no fermentadoras

(E/NF) sirve para la identificación de bacterias aerobias Gram-negativas que

pertenecen a la familia Enterobacteriaceae así como también de los bacilos Gram-

negativos fermentadores y no fermentadores de glucosa aislados con más frecuencia.

El sistema BBL Crystal es un método miniaturizado de identificación. Muchos de los

análisis utilizados son modificaciones de los métodos clásicos. Estos incluyen test para

la fermentación, oxidación, degradación e hidrólisis de diversos sustratos. Además

contienen sustratos unidos a un cromógeno para detectar las enzimas que utilizan los

microbios para metabolizar los diferentes sustratos.

El kit BBL Crystal E/NF ID está compuesto (I) las tapas de BBL Crystal E/NF, (II) las

bases del BBL Crystal, (III) los tubos del fluido y (If) de inoculo para organismos

entéricos/heces BBL Crystal ID. El panel contiene 30 sustratos deshidratados en las

puntas de los dientes. La base tiene 30 pocillos de reacción. El inoculo del análisis

está preparado con el fluido de inoculo y se utiliza para llenar los 30 pocillos de la

base. Cuando se alinea la tapa con la base y se cierra en su lugar el inoculo del

análisis rehidrata los sustratos secos e inicia las reacciones del análisis.

Después de un periodo de incubación, se examinan los pocillos para observar cambios

de color. Los cambios de color se producen como resultado de actividades

metabólicas de los microorganismos. El patrón resultante de las 30 reacciones se

Page 39: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

32

convierte en número de perfil de 10 dígitos que se utilizan como base para la

identificación. Los patrones de la reacción bioquímica y enzimática de los 30 sustratos

BBL Crystal E/NF con una amplia variedad de microorganismos son almacenados en

la base de datos de BBL Crysta E/NF ID. (Anexo 3) La identificación se deriva de un

análisis comparativo del patrón de redacción del aislado del análisis con aquellos que

existen en la base de datos. (Figura 5)

FIGURA 5. Prueba BBL Crystal ®

3.10. SEROTIPIFICACIÒN

La serotipificación constituye un importante complemento de la identificación

bioquímica y desde el punto de vista epidemiológico permite determinar la prevalencia

de una serovariedad en distintas zonas geográficas, como así también es de utilidad

para el estudio de brotes y para conocer la fuente de infección y las vías de

transmisión. La base de la serotipificación para todas las enterobacterias es similar: se

pone en evidencia la presencia de antígenos somática, flagelares y capsulares. En el

caso de, las serovariedades surgen como consecuencia de una asociación particular

de factores antigénicos somáticos O y flagelares H. (CAFERR & TERRAGNO, 2001)

Page 40: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

33

La Salmonella Spp. Está serotipificada de acuerdo a sus antígenos somáticos de

superficie (LPS, antígenos O), antígenos flagelares (proteínas, antígenos H) y

antígeno capsular (Vi) (TERRAGNO & CAFFER, 2003). Los antígenos se identifican con

anticuerpos monovalentes y polivalentes disponibles comercialmente, mediante

pruebas de aglutinación en lámina. Para identificar los antígenos O, se hace una

prueba con antisueros contra los grupos del O1 (A) al O67, luego se prueba el

antisuero Vi para antígeno capsular, y por último se incluyen los antisueros contra los

antígenos flagelares H (CUBILLOS, 2009).

En el género existe un solo tipo capsular, el tipo Vi (de virulencia), aunque la mayoría

de las Salmonelas no producen cápsula (CUBILLOS, 2009). La constitución antigénica

de la fracción polisacarídica del lipopolisacarido (LPS) define en gran parte la especie;

así mismo, la clase y el número de azúcares junto con los enlaces existentes entre los

mismos, definen los determinantes antigénicos que contienen los antígenos O de un

determinado aislamiento; dichos antígenos O, junto con los determinantes antigénicos

existentes en la superficie de los flagelos (antígenos H), que poseen la mayoría de las

Salmonelas, contribuyen, desde el punto de vista serológico, a definir como especie un

determinado aislamiento. Este esquema de clasificación se le denomina de

Kauffmann-White (CUBILLOS, 2009).

3.10.1 Esquema De Kauffmann White

Sobre la base de los componentes antigénicos somáticos O y flagelares H se ha

establecido lo que se denomina el Esquema de Kauffmann-White, que agrupa a todas

las serovariedades conocidas (CAFERR & TERRAGNO, 2001). (Anexo 2).

Esta comprende 3 columnas:

Page 41: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

34

Primera columna: Indica el nombre de la serovariedad, si la misma pertenece a S.

entérica sub especie. Entérica (I) ó las siglas S. II, S. IIIa, S. IIIb, S. IV, S. V, S. VI;

indicando que la serovariedad considerada pertenece a la subespecie II ó III a, etc.

Segunda columna: Antígenos somáticos (O). Los números indican el ó los factores

del antígeno O y se escriben, separados por una coma. Las serovariedades son

agrupadas en grupos somáticos, cada uno de ellos caracterizado por un factor O

mayor. Así se determínalos grupos A, B, C, etc. Por ej. el grupo O:2 (A) está integrado

por S. Paratyphi A (1,2,12:a:-) entre otras, el grupo O:4 (B) por S. Typhimurium

(1,4,5,12:i:1,2); S. Agona (1,4,12:f,g,s:- ); S. Saintpaul (1,4,5,12:e,h:1,2), entre otras. El

Esquema de Kauffmann-White presenta 67 grupos O, desde el grupo A hasta el Z y

luego continúa con números, desde el O: 51 hasta el O: 67

Tercera y cuarta columna: Antígenos flagelares (H). Se indican los factores de las

fases 1 y 2, del antígeno H, respectivamente. Para la fase 1 los factores se denominan

con letras minúsculas, seguidas algunas veces por un número que figura como

subíndice y para la fase 2 se emplean en general números arábigos, aunque también

se utilizan letras minúsculas. Un signo (negativo) indica que la fase considerada está

ausente y por lo tanto la serovariedad es monofásica. Los símbolos para los factores

somáticos determinados por conversión fágica están subrayados (por ej. 1, 2,12)

Los factores O o H entre corchetes, no subrayados, pueden estar presentes o

ausentes sin relación con la conversión fágica. Por ej. Factor [5] del grupo O: 4 (B).

Cuando los factores H están entre corchetes significa que ellos se encuentran

excepcionalmente en cepas salvajes. (CAFERR & TERRAGNO, 2001)

Page 42: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

35

4. MATERIALES Y METODOS

4.1 UBICACIÓN DEL PROYECTO

El trabajo de investigación se desarrolló en una granja correspondiente a una empresa

del sector avícola especializada en la producción, levante y engorde de pollo de la

línea Ross 308. La cual se encuentra localizada en el municipio de San Francisco de

Sales (Cundinamarca) con una altitud 1520 m.s.n.m. y una temperatura promedio de

20°C.

En cuanto el análisis de muestras se realizó en el laboratorio de control de calidad de

la Universidad de La Sallé, sede Norte, ubicado en la ciudad de Bogotá en donde se

realizaron todos los procesos de aislamiento e identificación de Salmonella Spp.

4.2 UNIVERSO Y MUESTRA

Para este estudio se manejo una granja de una empresa del sector avícola la cual

cuenta con 4 lotes diferentes (83, 84, 85, 86) y una capacidad promedio de 36.000

aves de la línea Ross 308, cada lote con una población de 9000 aves, dividida

equitativamente entre machos y hembras. Por cada lote se tomaron 20 hisopados

cloacales al final de las semanas 1, 2, 3 de vida, para un total de 80 hisopados por

semana. Cada hisopo correspondiente a 20 animales para un total de 1600 animales

por semana.

En total se tomaron 240 hisopos cloacales equivalente a 4800 aves representando el

10% de la población total. Las aves para este muestreo fueron tomadas

completamente al azar con el fin de que toda la población tuviera la posibilidad de ser

escogidas.

Page 43: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

36

4.3 CARACTERIZACIÓN DE LAS GRANJAS

Las granjas visitadas en donde se realizó el muestreo cumplían con todas la normas

de bioseguridad que estableció la resolución 3283 del instituto Colombiano

Agropecuario (ICA), las cuales presentan:

Cuenta con un cerco perimetral en buen estado que restringe el libre acceso de

personas, vehículos y animales.

Dispone de una zona limpia para desinfección de todo personal que ingrese a

la granja y objetos ajenos que ingresen.

La granja posee arco de desinfección para vehículos.

Disponen de registros de todo personal o vehículos que ingresen o salgan de la

granja.

Manipulan registros indicando cada protocolo que recomienda el ICA para la

desinfección de los galpones.

Cuentan con registros para manejo de mortalidad de las aves.

Disponen de Pediluvios en la entrada de cada galpón para lavado y

desinfección de botas.

La granja posee en cada galpón una bodega con respectivas estibas para el

almacenamiento del concentrado.

La granja presenta una bodega general para almacenar desinfectantes y

drogas.

Los galpones en general disponen de una excelente infraestructura.

Los operarios portan una dotación adecuada para las labores que se realizan

en la granja.

Page 44: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

37

4.4. TÉCNICAS Y PROCEDIMIENTOS UTILIZADOS PARA LA

RECOLECCIÓN DE LA INFORMACIÓN

4.4.1 Método para la recolección de muestras de Salmonella Gallinarum y

Salmonella Pullorum

Para la toma de muestras se implemento el manual de toma de muestras en las

explotaciones avícolas, para diagnóstico de Salmonella Spp Procedimiento

Operacional Estandarizado (POE). (VENEGAS, SANCHEZ, GOMEZ, & SANTOS, 2009)

Se utilizaron hisopos cloacales estériles, (Figura 6.) los cuales después de ser

utilizados en el muestreo de las aves, fueron inmediatamente a insertados en tubos

con agua peptonada, que fueron rotulados e identificados previamente. (Figura 7) En

seguida estos tubos fueron empacados en neveras de icopor y sellados con el fin de

mantenerlos refrigerados e identificados cada uno con el respectivo lote. (Figura 8)

FIGURA 6. Muestreo con hisopo cloacal

Page 45: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

38

FIGURA 7. Tubos identificados para el muestreo

FIGURA 8. Tubos muestreados e identificados

Page 46: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

39

4.4.2 Aislamiento e identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella

Pullorum.

Para el aislamiento e identificación las muestras fueron trasladadas al laboratorio de

control de calidad de la Universidad de La Sallé en un tiempo aproximado de 2 horas,

en donde se sometieron a incubación a una temperatura de 37°C por un tiempo de 12

horas.

Pasadas las 12 horas se procedió a agitar los tubos y posteriormente a retirar los

hisopos. Inmediatamente se tomo 1ml de cada tubo y se sembró en tubos que

contenian, 9ml de caldo Tetrationato con solución yodo – yoduro. (Figura 9) estos

fueron incubados a una temperatura de 37°C en un lapso de 12 a 24 horas. (Figura 10)

FIGURA 9. Caldo Tetrationato

Page 47: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

40

FIGURA 10. Siembra en caldo Tetrationato

Transcurridas las 12 a 24 horas se realizó la toma de muestra de cada unos de los

tubos anteriormente mencionados, con un asa estéril para posteriormente ser

sembrados por la técnica de agotamiento en cajas de petri en el medio de cultivo XLD,

los cuales se llevaron a incubadora por un lapso de 12 a 24 horas a una temperatura

de 37°C. De estas cajas incubadas, se comenzó a dar lectura macroscópica a las

muestras, con el fin de identificar las posibles colonias de Salmonella Spp. (Colonias

trasparentes con centro negro, colonias totalmente negras y colonias de color rosa)

Además descartar las cajas que no presentaron crecimiento de la bacteria. (Figura 11 y

12)

Page 48: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

41

FIGURA 11. Muestras descartadas

FIGURA 12. Colonias Salmonella Spp.

A todo estos procedimientos se les realizo un seguimiento escrito con el fin de tener

documentado todos los procesos y resultados. (Anexo 3)

Page 49: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

42

De las colonias identificadas como posibles Salmonellas Spp. se tomaron muestras

con asas redondas para posteriormente ser puestas en láminas portaobjetos para

realizarse las pruebas de catalasa y oxidasa (Figura 13). Otras muestras para ser

sembradas en medios de cultivo Sim, que fueron incubados a una temperatura de

37°C durante un tiempo de 12 horas. Con el fin de realizar respectivamente la prueba

de Indol, producción H2S y movilidad las cuales son necesarias para la identificación

bioquímica S. Gallinarum y S. Pullorum. (Figura 14).

FIGURA 13. Prueba catalasa y oxidasa

Page 50: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

43

FIGURA 14. Medio SIM

Trascurrido el tiempo de incubación se efectuó la lectura a cada uno de los medios

sembrados con el fin de comparar estos resultados, con resultados de la literatura

consultada que muestran cómo deben ser para que sean confirmados como S.

Gallinarum y S. Pullorum. (Tabla 3) (Figura 15)

FIGURA 15. Muestras con Producción de H2S y movilidad +.

Page 51: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

44

Realizadas esta pruebas bioquímicas necesarias para la identificación S. Gallinarum y

S. Pullorum, Se sembraron las muestras en Agar tripticasa soya las cuales fueron

incubadas a 37°C por un lapso de 12 a 24 horas. (Figura 16)

FIGURA 16. Siembra en Agar triptiasa soya

Pasadas las 24 horas, se realizó la identificación bioquímica con el kit de diagnóstico

rápido para la identificación de microorganismos entéricos no fermentadores BBL

Crystal ®. Realizando el montaje y la lectura como lo indica el fabricante. (Figura 17).

FIGURA 17. Siembra en BBL Crystal. ®

Page 52: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

45

Finalmente se analizaron los datos obtenidos de los procedimientos anteriormente

mencionados para así poder determinar si era necesario realizar las pruebas de

serotipificación en las muestras identificadas como Salmonella Spp y así identificar su

serovariedad. (Figura 18)

Page 53: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

46

Figura 18. Esquema proceso de identificación de Salmonella Spp. En laboratorio

Toma de muestra

SI

Siembra en medio XLD

Transporte laboratorio

Incubación muestras 12 horas,

37°c

Retiro incubadora y Retiro del hisopo

Siembra en caldo Tetrationato

12 a 24 horas, 37°c

Incubación tubos

Retiro incubadora

Incubación cajas

Retiro incubadora

Crecimiento

bacteria

No

Siembra agar tripticasa soya

Retiro incubadora

Incubación cajas

12 a 24 horas, 37

12 a 24 horas, 37

Esterilización y

Desecho muestras

BBL Crystal E/NF

Serotipificación

Pruebas:

Catalasa,

oxidada,

indol,

movilidad

yH2S.

Page 54: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

47

4.5 DISEÑO EXPERIMENTAL

Para la toma de muestras se hizo una selección completamente al azar hasta

completar el número de aves totales por muestreo. El cual se le realizo a 4 lotes de

pollo de engorde de la línea Ross 308, en donde se tomaron 20 muestras por lote.

(Cada muestra corresponde a un grupo de 20 aves), durante 3 semanas para un total

de muestras 240 correspondiente a ,4800 aves muestreadas. (4X20X3)

Para el análisis de datos se utilizo estadística descriptiva, los cuales se representaron

con tablas, gráficos circulares entre otros.

Page 55: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

48

4. RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Los siguientes resultados surgen de la implementación del manual para toma de

muestras de S. Gallinarum y S. Pullorum en pollo de engorde y de la evaluación de los

datos obtenidos en el Laboratorio de control de calidad de la Universidad de la Salle,

en donde se tuvo en cuenta como indicadores la presencia / ausencia de salmonella

Spp, análisis de datos de las pruebas bioquímicas necesarias para la identificación de

S. Gallinarum y S. Pullorum (catalasa, oxidasa, indol, producción de H2S, movilidad) y

la presencia de salmonella Spp y de otras especies, por lotes y por semanas. El

proceso de toma de muestras y análisis de laboratorio tuvo una duración de 2 meses.

4.1 Resultados presencia / ausencia de Salmonella Spp

GRAFICA 1. Presencia / Ausencia de Salmonella Spp.

PRESENCIA 80,42%

AUSENCIA, 19,58%

Page 56: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

49

De las 240 muestras analizadas en 193 muestras fueron aisladas e identificadas como

colonias típicas de Salmonella Spp (con pigmentación rosa o roja, algunas veces

transparentes con o sin centro negro o completamente negras), Que representan el

80,42 %. El restante equivalente 19,58 % (47 muestras) fueron identificadas como

colonias no típicas para Salmonellas Spp (Colonias de color blanco, diferentes formas,

con cambios en el aspecto del medio a color amarillo).

De el número total de muestras aisladas como sospechosas para Salmonella Spp. la

totalidad fueron identificadas por medio del kit de diagnostico rápido BBL Crystal para

entéricos no fermentadores como Salmonella Spp con un nivel de confianza promedio

de 0.9879. Estudios realizados por (RUANO, 1996), mostraron un aislamiento total de

30 cepas de Salmonella Spp. en pollitos de 8 días de nacidos en granjas avícolas, de

muestras de materia fecal, saco vitelino, hígado y ciego. Lo cual evidencia la presencia

de Salmonella Spp en pollos de engorde en granja, además de la poca información de

aislamiento de Salmonela por medio de hisopados cloacales.

4.2 Resultado pruebas bioquímicas

Tabla 4 Resultado pruebas bioquímicas

Prueba Muestras

positivas

Muestras

negativas

S. Gallinarum y

S. Pullorum

Indol 0 193 -

Catalasa 193 0 +

Oxidasa 0 193 -

Producción H2S 193 0 -

Movilidad 193 0 -

En cuanto a las 193 muestras identificadas como Salmonella Spp. (80.42 %), se

analizaron los datos registrados en el formato de seguimiento de muestras necesarias

para la identificación de S. Gallinarum y S. Pullorum mostrando que la totalidad de las

muestras identificadas como Salmonella Spp no pertenecen a las serovariedades

Page 57: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

50

Gallinarum y Pullorum si no a otras serovariedades imposibilitando así la realización

de la serotipificación.(Anexo 3) Según investigaciones realizadas por (BERCHIERI &

asociados, 1999) determinaron que la presencia de S. Gallinarum y S. Pullorum

dependen de la susceptibilidad de la línea de las aves, para este caso la línea Ross

308 como lo mencionamos anteriormente es un animal que presenta una buena

resistencia a enfermedades lo cual es una de las principales características de la línea.

Por otra parte concluyeron que no es fácil identificar S. Gallinarum y S. Pullorum en

ausencia de signos clínicos característicos de las enfermedades causadas por estas

bacterias, en este caso las aves encontradas en la granja no presentaban ningún

signo clínico producido por estas dos bacterias lo cual comprueba lo mencionado

anteriormente.

Por otra parte en un estudio realizado (CUBILLOS, 2009) la S. Gallinarum y S. Pullorum

es una bacteria que no posee flagelos lo cual nos indica que es inmóvil. También estas

serovariedades no producen H2S gracias que en su metabolismo no reduce el hierro

presente en el medio. Por consiguiente no se realizo la prueba de serotipificación.

Page 58: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

51

4.3 Presencia de Salmonella Spp y otras especies

GRAFICA 2. Porcentaje de aislamiento de Salmonella Spp y otras especies

De las colonias identificadas como colonias no típicas para Salmonella Spp (19.58 %),

el 11,67% equivalente a 28 muestras, fueron identificadas como Proteus Spp, con un

nivel de confianza promedio de 0.9678. El 5.83% correspondiente a 14 muestras

fueron identificas como Enterobacter Cloacae, con un nivel confianza promedio 0.9870

y 2,08 % correspondiente a 5 muestras fueron identificadas como Klebsiella Spp con

un nivel de confianza 0.9029.

80,42%,

11,67%

5,83% 2,08%

Sallmonella Proteus sp Enterobacter cloacae Klebsiella sp

Page 59: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

52

4.4 Resultado muestras por lote

GRAFICA 3. Resultados muestras por lote.

Con respecto a los lotes, en el lote 83 se identificaron 50 muestras en total como

Salmonella Spp. 5 muestras como Proteus Spp, 2 muestras como Klebsiella Spp y 3

muestras como Enterobacter Cloacae. Para el lote 84 se identificaron 46 muestras en

total como Salmonella Spp. 4 muestras como Proteus Spp, 1 muestras como

Klebsiella Spp y muestras como 9 Enterobacter Cloacae. Para el lote 85 se

identificaron 52 muestras en total como Salmonella Spp. 6 muestras como Proteus

Spp, 1 muestra como Klebsiella Spp y 1 muestra como Enterobacter Cloacae.

Finalmente para el lote 86 se identificaron muestras en total 45 como Salmonella Spp.

13 muestras como Proteus Spp, 1 muestra como Klebsiella Spp y 1 muestra como

Enterobacter Cloacae. Lo cual demuestra que no hay diferencias significativas

(P<0.05) en los lotes con respecto a la presencia de Salmonella Spp.(Anexo 4)

5046

52

45

5 4 6

13

2 1 1 13

9

1 1

0

10

20

30

40

50

60

LOTE 83 LOTE 84 LOTE 85 LOTE 86

Salmonella spp. Proteus spp

Klebsiella spp. Enterobacter cloacae.

Page 60: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

53

4.5 Resultados semanales

GRAFICA 4 Resultados muestras semanales

Por otro lado correspondiente a las semanas muestreadas, en la semana 1 se

identificaron 65 muestras como Salmonellas Spp. 9 muestras como Proteus Spp. 1

muestra como Klebsiella Spp y 5 como Enterobacter Cloacae. Para la segunda

semana se identificaron 65 muestras como salmonellas Spp. 9 muestras como Proteus

Spp. 2 muestra como Klebsiella Spp y 4 como Enterobacter Cloacae. Y finalmente

para la tercera semana se identificaron 63 muestras como salmonellas Spp. 10

muestras como Proteus Spp. 2 muestra como Klebsiella Spp y 5 como Enterobacter

Cloacae. Evidenciado que no hay diferencias significativas con respecto a la presencia

de Salmonella Spp. (P<0.05) en las primeras semanas de vida. (Anexo 4) Además se

comprueba que la edad de las aves no influye en el aumento o disminución de la

prevalencia de S. Gallinarum y S. pullorum. (Grafica 4). En el trabajo realizado por

(BERCHIERI & asociados, 1999) también concluyeron que la presencia de las

enfermedades causadas por salmonelas no depende de la edad de las aves si no de

la resistencia de la línea y de la cantidad de anticuerpos obtenidos horizontalmente.

65 65 63

9 9 10

1 2 25 4 5

0

10

20

30

40

50

60

70

SEMANA 1 SEMANA 2 SEMANA 3

Salmonella spp. Proteus spp

Klebsiella spp Enterobacter cloacae.

Page 61: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

54

6. CONCLUSIONES

Las técnicas sugeridas por el manual para la toma de muestras de S.

Gallinarum y S. Pullorum en granja permiten la correcta ejecución de muestreo

en campo.

Es difícil el aislamiento e identificación de S. Gallinarum y S. Pullorum por

medio de hisopados cloacales en ausencia de signos clínicos característicos de

las enfermedades causadas por estas bacterias.

Con este estudio se comprueba la baja prevalencia de Salmonelosis aviar

causadas por S. Gallinarum y S. Pullorum en pollos de engorde en la línea

Ross 308.

Este estudio es el primer reporte mediante el cual se trata de aislar la S.

Gallinarum y S. Pullorum por medio de Hisopado cloacal en pollo de engorde

de la línea Ross 308 en nuestro país.

Page 62: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

55

7. RECOMENDACIÓNES

Seguir implementando los manuales para la identificación de agentes

patógenos que afecten la producción avícola y las demás producciones

pecuarias, que conlleve a mejorar cada vez más las cadenas productivas.

Identificar S. Gallinarum y S. Pullorum con Hisopado de arrastre de cama,

Hisopado en diferentes partes del galpón e Hisopados en los órganos de las

aves con el fin de obtener más información sobre estas bacterias.

Realizar periódicamente chequeos rutinarios en todas las granjas avícolas con

el fin de controlar la trasmisión, diseminación y obtener información

actualizada de estos agentes bacterianos.

La empresa evaluada implementa un buen manejo de bioseguridad en sus

granjas y en sus procesos que anteceden como son la reproducción del pollito,

incubación y transporte las granjas respectivas. Sin embargo se debe mejorar

cada día más lo programas de bioseguridad para prevenir no solamente la

Salmonelosis si no otras enfermedades que también afecten a la empresas y

también en la salud pública en general.

Se debe concientizar cada vez a los productores (pequeños, mediano y

grandes), que las medidas sanitarias que se toman en la granjas son para

beneficios de ellos en la parte productiva y económica.

Se debe tener claro que todos los procesos de bioseguridad que se realizan en

las granjas no son para la erradicación de las diferentes enfermedades ya que

es muy difícil eliminar todos los agentes patógenos que se encuentran en

nuestro medio, Pero si para establecer un control y evitar trasmisiones que

afecten a la población avícola y lo más importante que afecte la salud pública

de los colombianos.

Page 63: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

56

Efectuar investigaciones complementarias sobre los tipos de salmonellas

aisladas en este trabajo

Page 64: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

57

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Page 67: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

60

ANEXOS

Page 68: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

61

ANEXO 4 Principales enfermedades de control oficial en Colombia.

ENFERMEDAD AGENTE TRASMISION SINTOMAS

INFLUENCIA AVIAR Virus de la familia Orthomyxoviridae El contacto con las heces y el aire contaminado son las vías de contagio.

-Aumento de la secreción nasal con tos, estornudos, pérdida del apetito y hasta sinusitis. -Disminución o suspensión de la producción de huevos y como el virus se reproduce en el tracto intestinal, diarrea y muerte. - Diarrea verdosa. -Cianosis. -Edema de la cabeza, cresta y barba. -Decoloración de las patas

NEWCASTLE Virus RNA de la familia Paramyxoviridae

Contacto directo con las secreciones de las aves infectadas, especialmente las heces -Comida, agua, instrumentos, locales, vestimentas humanas contaminados.

-Jadeo y tos . -Alas caídas, arrastran las patas, cabeza y cuellos torcidos, desplazamientos en círculos, depresión, inapetencia, parálisis completa. -Interrupción parcial o completa de la producción de huevos. -Huevos deformados, de cáscara rugosa y fina y que contienen albúmina acuosa -Diarrea verde acuosa. -Tejidos hinchados en torno a los ojos y el cuello.

SALMONELOSIS AVIAR

Salmonella Pollorum

El contacto con las heces y el aire contaminado son las vías de contagio. -Vía madre e hijo.

Sienten frío, no comen, tienen aspecto somnoliento y muestran pastas fecales blanquesinas alrededor del ano.

Salmonella Gallinarum

El contacto con las heces y el aire contaminado son las vías de contagio. -Vía madre e hijo.

Las aves, se presentan deshidratadas y en la necropsia presentan el hígado tumefacto y manchado de bilis, bazo y riñones agrandados.

Salmonella Typhimurium

El contacto con las heces y el aire contaminado son las vías de contagio. -Vía madre e hijo.

Los animales presentan depresión, poco crecimiento, debilidad, diarrea y deshidratación.

FUENTE: www.oie.int, mundo pecuario, enfermedades de las aves, salmonelosis.

Page 69: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

62

ANEXO 5. Esquema de kauffmann White

ORGANISMO G R U P O A N T Í G E N O ANTIGENO FLAGELAR

SOMÁTICO FASE 1 FASE 2

S. enteritidis ser Berta D₁ 9,12 f, g, t -

ser Enteritidis * D₁ 1,9,12 g, m -

ser Dublin D₁ 1,9,12 g, p -

ser Panama D₁ 1,9,12 l,v 1,5

ser Javiana D₁ 1,9,12 l, z₂₈ 1,5

bioser gallinarum D₁ 9,12 - -

ser Anatum E₁ 3,1 e, h 1,6

ser Meleagridis E₁ 3,1 e, h l, w

ser Give E₁ 3,1 l,v 1,7

ser Newington E₂ 3,15 e, h 1,6

ser Illinois E₃ (3), (15), 34 z10 1,5

ser Senftenberg E₄ 1,3,19 g, s, t -

ser Simsbury E₄ 1,3,19 z₂₇ -

ser Rubislaw F 11 [d], r [d], e, n, x

ser Poona G₁ [1], 13,22,

[36] z 1,6

ser Worthington G₂ 1,13,23 z l, w

ser Cubana G₂ 1,13,23 z₂₉ -

ser Florida H 1,6,14,25 d 1,7

ser Madelia H 1,6,14,25 y 1,7

ser Nottingham * I 16 d e ,n, z₁₅

ser Cerro K 18 z₄, z₂₃ [z₄₅]

ser Siegburg K 6,14,18 z₄, z₂₃ [1,5]

ser Minnesota L 21 b e, n, x

ser Urbana N 30 b e, n, x

FUENTE: Laboratorios DIFCO®

Page 70: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

63

ANEXO 3. Registro de seguimiento de muestra.

PROCESO PODUCTIVO POLLO DE ENGORDE SEMANA 1 FECHA 3 DE NOVIEMBRE 2009

CODIGO PEPTONA 37°C TETATRIONATO

37°C XLD 37°C CATALASA OXIDASA SIM

Tripticasa Soya 37°C

Bioquímicas 37°C

H2S INDOL MOVILIDAD SI NO BBL Crystal

001 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

002 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

003 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

004 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

005 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - -

+ - + X Salmonella Spp.

006 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

007 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

008 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

009 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

010 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

011 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

012 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

013 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

014 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

015 Crecimiento Crecimiento Descartada

016 Crecimiento Crecimiento Descartada

017 Crecimiento Crecimiento Descartada

018 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

019 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

020 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

Jose A. Pineros –

Rosario S.A. –

Manuel. R.

FUENTE: (UNIVERSIDAD DE LA SALLE - MINISTIRERIO DE AGRICULTURA Y DESARROLLO RURAL, 2009)

Page 71: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

64

PROCESO PODUCTIVO POLLO DE ENGORDE SEMANA 1 FECHA 3 DE NOVIEMBRE 2009

CODIGO PEPTONA

37°C TETATRIONATO 37°C XLD 37°C CATALASA OXIDASA SIM

Tripticasa Soya 37°C

Bioquímicas 37°C

H2S INDOL MOVILIDADD SI NO BBL Crystal

021 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

022 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

023 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

024 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

025 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

026 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

027 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

028 Crecimiento Crecimiento Descartada

029 Crecimiento Crecimiento Descartada

030 Crecimiento Crecimiento Descartada

031 Crecimiento Crecimiento Descartada

032 Crecimiento Crecimiento Descartada

033 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

034 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

035 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

036 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

037 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

038 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

039 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

040 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

Jose A. Pineros –

Rosario S.A. –

Manuel. R.

FUENTE: (UNIVERSIDAD DE LA SALLE - MINISTIRERIO DE AGRICULTURA Y DESARROLLO RURAL, 2009)

Page 72: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

65

FUENTE: (UNIVERSIDAD DE LA SALLE - MINISTIRERIO DE AGRICULTURA Y DESARROLLO RURAL, 2009)

PROCESO PODUCTIVO POLLO DE ENGORDE SEMANA 1 FECHA 3 DE NOVIEMBRE 2009

CODIGO PEPTONA

37°C TETATRIONATO

37°C XLD 37°C CATALASA OXIDASA SIM

Tripticasa Soya 37°C

Bioquímicas 37°C

H2S INDOL MOVILIDAD SI NO BBL Crystal

041 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

042 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

043 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

044 Crecimiento Crecimiento Descartada

045 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

046 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

047 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

048 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

049 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

050 Crecimiento Crecimiento Descartada .

051 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

052 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

053 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

054 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

055 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

056 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

057 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

058 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

059 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

060 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

Jose A. Pineros –

Rosario S.A. –

Manuel. R.

Page 73: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

66

PROCESO PODUCTIVO POLLO DE ENGORDE SEMANA 1 FECHA 3 DE NOVIEMBRE 2009

CODIGO

PEPTONA 37°C

TETATRIONATO 37°C

XLD 37°C CATALASA OXIDASA SIM Tripticasa

Soya 37°C

Bioquímicas 37°C

H2S INDOL MOVILIDAD SI NO BBL Crystal

061 Crecimiento Crecimiento Descartada

062 Crecimiento Crecimiento Crecimiento

+ - + - + X Salmonella Spp.

063 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

064 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

065 Crecimiento Crecimiento Descartada

066 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

067 Crecimiento Crecimiento Descartada

068 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

069 Crecimiento Crecimiento Descartada

070 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

071 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

072 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

073 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

074 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

075 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

076 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

077 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

078 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

079 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

080 Crecimiento Crecimiento Descartada

Jose A. Pineros –

Rosario S.A. –

Manuel.R.

FUENTE: (UNIVERSIDAD DE LA SALLE - MINISTIRERIO DE AGRICULTURA Y DESARROLLO RURAL, 2009)

Page 74: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

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PROCESO PODUCTIVO POLLO DE ENGORDE SEMANA 2 FECHA 9 DE NOVIEMBRE 2009

CODIGO PEPTONA

37°C TETATRIONATO

37°C XLD 37°C CATALASA OXIDASA SIM

Tripticasa Soya 37°C

Bioquímicas 37°C

H2S INDOL MOVILIDAD SI NO BBL Crystal

001 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

002 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

003 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

004 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

005 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - -

+ - + X Salmonella Spp.

006 Crecimiento Crecimiento Descartada

007 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

008 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

009 Crecimiento Crecimiento Descartada

010 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

011 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

012 Crecimiento Crecimiento Descartada

013 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

014 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

015 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + x Salmonella Spp.

016 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + x Salmonella Spp.

017 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

018 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

019 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

020 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

Jose A. Pineros –

Rosario S.A. –

Manuel. R.

FUENTE: (UNIVERSIDAD DE LA SALLE - MINISTIRERIO DE AGRICULTURA Y DESARROLLO RURAL, 2009)

Page 75: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

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PROCESO PODUCTIVO POLLO DE ENGORDE SEMANA 2 FECHA 9 DE NOVIEMBRE 2009

CODIGO PEPTONA

37°C TETATRIONATO

37°C XLD 37°C CATALASA OXIDASA SIM

Tripticasa Soya 37°C

Bioquímicas 37°C

H2S INDOL MOVILIDAD SI NO BBL Crystal

021 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

022 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

023 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

024 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

025 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

026 Crecimiento Crecimiento Descartada

027 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

028 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

029 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

030 Crecimiento Crecimiento Descartada

031 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

032 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

033 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

034 Crecimiento Crecimiento Descartada .

035 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

036 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

037 Crecimiento Crecimiento Descartada

038 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

039 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

040 Crecimiento Crecimiento Descartada

Jose A. Pineros –

Rosario S.A. –

Manuel. R.

FUENTE: (UNIVERSIDAD DE LA SALLE - MINISTIRERIO DE AGRICULTURA Y DESARROLLO RURAL, 2009)

PROCESO PRODUCTIVO POLLO DE ENGORDE SEMANA 2 FECHA 9 DE NOVIEMBRE 2009

Page 76: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

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CODIGO PEPTONA

37°C TETATRIONATO

37°C XLD 37°C CATALASA OXIDASA SIM

Tripticasa Soya 37°C

Bioquímicas 37°C

H2S INDOL MOVILIDAD SI NO BBL Crystal

041 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

042 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

043 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

044 Crecimiento Crecimiento Crecimiento

+ - + - + x Salmonella Spp.

045 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

046 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

047 Crecimiento Crecimiento Descartada

048 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

049 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

050 Crecimiento Crecimiento Crecimiento

+ - + - + X Salmonella Spp.

051 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

052 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

053 Crecimiento Crecimiento Descartada

054 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

055 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

056 Crecimiento Crecimiento Descartada

057 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

058 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

059 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

060 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

Jose A. Pineros –

Rosario S.A. –

Manuel. R.

FUENTE: (UNIVERSIDAD DE LA SALLE - MINISTIRERIO DE AGRICULTURA Y DESARROLLO RURAL, 2009)

Page 77: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

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PROCESO PRODUCTIVO POLLO DE ENGORDE SEMANA 2 FECHA 9 DE NOVIEMBRE 2009

CODIGO PEPTONA

37°C TETATRIONATO

37°C XLD 37°C CATALASA OXIDASA SIM

Tripticasa Soya 37°C

Bioquímicas 37°C

H2S INDOL MOVILIDAD SI NO BBL Cristal

061 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + x Salmonella Spp.

062 Crecimiento Crecimiento Crecimiento

+ - + - + X Salmonella Spp.

063 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

064 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

065 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

066 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

067 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

068 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

069 Crecimiento Crecimiento Descartada

070 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

071 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

072 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

073 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

074 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

075 Crecimiento Crecimiento Descartada

076 Crecimiento Crecimiento Descartada

077 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

078 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

079 Crecimiento Crecimiento Crecimiento

+ - + - + X Salmonella Spp.

080 Crecimiento Crecimiento Descartada

FUENTE: (UNIVERSIDAD DE LA SALLE - MINISTIRERIO DE AGRICULTURA Y DESARROLLO RURAL, 2009)

Page 78: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

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PROCESO PRODUCTIVO POLLO DE ENGORDE SEMANA 3 FECHA 17 DE NOVIEMBRE 2009

CODIGO PEPTONA

37°C TETATRIONATO

37°C XLD 37°C CATALASA OXIDASA SIM

Tripticasa Soya 37°C

Bioquímicas 37°C

H2S INDOL MOVILIDAD SI NO BBL Crystal

001 Crecimiento Crecimiento Descartada

002 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

003 Crecimiento Crecimiento Descartada

004 Crecimiento Crecimiento Crecimiento

+ - + - + x Salmonella Spp.

005 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

006 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

007 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

008 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

009 Crecimiento Crecimiento Descartada

010 Crecimiento Crecimiento Crecimiento

+ - + - + X Salmonella Spp.

011 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp..

012 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

013 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp..

014 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

015 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

016 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

017 Crecimiento Crecimiento Descartada

018 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

019 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

020 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

Jose A. Pineros –

Rosario S.A. –

Manuel. R.

FUENTE: (UNIVERSIDAD DE LA SALLE - MINISTIRERIO DE AGRICULTURA Y DESARROLLO RURAL, 2009)

Page 79: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

72

PROCESO PODUCTIVO POLLO DE ENGORDE SEMANA 3 FECHA 17 DE NOVIEMBRE 2009

CODIGO PEPTONA

37°C TETATRIONATO

37°C XLD 37°C CATALASA OXIDASA SIM

Tripticasa Soya 37°C

Bioquímicas 37°C

H2S INDOL MOVILIDADD

SI NO BBL Crystal

021 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

022 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

023 Crecimiento Crecimiento Descartada

024 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

025 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

026 Crecimiento Crecimiento Descartada

027 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

028 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

029 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

030 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

031 Crecimiento Crecimiento Descartada

032 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

033 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

034 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

035 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

036 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

037 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

038 Crecimiento Crecimiento Descartada

039 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

040 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

Jose A. Pineros –

Rosario S.A. –

Manuel. R.

FUENTE: (UNIVERSIDAD DE LA SALLE - MINISTIRERIO DE AGRICULTURA Y DESARROLLO RURAL, 2009)

Page 80: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

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PROCESO PODUCTIVO POLLO DE ENGORDE SEMANA 3 FECHA 17 DE NOVIEMBRE 2009

CODIGO PEPTONA

37°C TETATRIONATO

37°C XLD 37°C CATALASA OXIDASA SIM

Tripticasa Soya 37°C

Bioquímicas 37°C

H2S INDOL MOVILIDADD

SI NO BBL Crystal

041 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

042 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

043 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

044 Crecimiento Crecimiento Descartada

045 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

046 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

047 Crecimiento Crecimiento Descartada

048 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

049 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

050 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

051 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

052 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

053 Crecimiento Crecimiento Descartada

054 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

055 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

056 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

057 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

058 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

059 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

060 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

Jose A. Pineros –

Rosario S.A. –

Manuel. R.

FUENTE: (UNIVERSIDAD DE LA SALLE - MINISTIRERIO DE AGRICULTURA Y DESARROLLO RURAL, 2009)

Page 81: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

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PROCESO PODUCTIVO POLLO DE ENGORDE SEMANA 3 FECHA 17 DE NOVIEMBRE 2009

CODIGO PEPTONA

37°C TETATRIONATO

37°C XLD 37°C CATALASA OXIDASA SIM

Tripticasa Soya 37°C

Bioquímicas 37°C

H2S INDOL MOVILIDADD SI NO BBL Crystal

061 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

062 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

063 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

064 Crecimiento Crecimiento Descartada

065 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

066 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

067 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

068 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

069 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

070 Crecimiento Crecimiento Descartada

071 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

072 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

073 Crecimiento Crecimiento Descartada

074 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

075 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

076 Crecimiento Crecimiento Descartada

077 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

078 Crecimiento Crecimiento Crecimiento + - + - + X Salmonella Spp.

079 Crecimiento Crecimiento Descartada

080 Crecimiento Crecimiento Descartada

Jose A. Pineros –

Rosario S.A. –

Manuel. R.

CONFIANZA PROMEDIO 0.9879

FUENTE: (UNIVERSIDAD DE LA SALLE - MINISTIRERIO DE AGRICULTURA Y DESARROLLO RURAL, 2009)

Page 82: Identificación de Salmonella Gallinarum y Salmonella ...

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ANEXO 4. Estadística descriptiva presencia Salmonella Spp. por lotes y por semana.

Muestras Salmonella Spp. Lotes

Muestras Salmonella Spp. Semanas

Media 48,25

Media 64,33333333

Error típico 1,652018967

Error típico 0,666666667

Mediana 48

Mediana 65

Moda

Moda 65

Desviación estándar 3,304037934

Desviación estándar 1,154700538

Varianza de la muestra 10,91666667

Varianza de la muestra 1,333333333

Curtosis -3,869005303

Curtosis Coeficiente de asimetría 0,228727759

Coeficiente de asimetría -1,732050808

Rango 7

Rango 2

Mínimo 45

Mínimo 63

Máximo 52

Máximo 65

Suma 193

Suma 193

Cuenta 4

Cuenta 3

Mayor (1) 52

Mayor (1) 65

Menor(1) 45

Menor(1) 63

Nivel de confianza(95,0%) 5,257461656

Nivel de confianza(95,0%) 2,868435153