Méd. Vet. Mariela Ibar. FCV - UNLP.

Bs As. Argentina. Email: mibar@fcv.unlp.edu.ar

Contenidos

1) Importancia de Salmonella en la Salud Pública y en la sanidad animal.

2) Marcha bacteriológica. Ej.: Salmonella spp.

3) Serotipificación de Salmonella spp.: nociones generales.

Salmonella es una de las causas más importantes de las enfermedades transmitidas por alimentos (ETAS).

La salmonelosis es una zoonosis de distribución mundial.

Se transmite a los humanos a través del consumo de alimentos contaminados de origen animal, vegetal y el agua contaminada. Y también por el contacto directo con animales de compañía enfermos o asintomáticos ej.: perros, gatos, lagartos, serpientes y tortugas.

Produce cuadros de gastroenteritis aguda y Fiebre Tifoidea/Paratifoidea.

Los más afectados son los lactantes, niños (≤5 años), ancianos e inmunocomprometidos.

La época del año de mayor incidencia es en primavera-verano.

Su importancia es mayor en áreas con condiciones de saneamiento e higiene poco adecuados.

Los cuadros de salmonelosis varían según la especie animal, la serovariedad de Salmonella, el órgano afectado y la edad del animal.

En los animales Salmonella puede causar cuadros de enteritis, enfermedad sistémica y /o abortos.

Especie animal Serovariedades Enfermedad/ Cuadro clínico

Porcinos Cholerasuis Salmonelosis: Fiebre, diarrea amarillenta, signosrespiratorios y nerviosos y cianosis.

Aves 1) Pullorum

2) Gallinarum

1) Pullorosis (afecta a pollitos < 3 semanas) Somnolencia, debilidad, pérdida del apetito, heces blancas, boqueo.

2) Tifus aviar (afecta a jóvenes y adultos)Adultos: Inapetencia, decaimiento, somnolencia, diarrea verde, o verde-amarillenta. Aves jóvenes: similar a pullosis.

Bovinos Dublin Salmonelosis: Diarrea, septicemia, artritis.Abortos.

Ovinosy equinos

AbortusovisAbortusequi

Salmonelosis: DiarreaAbortos.

Todas las especies TyphimuriumEnteritidis

Salmonelosis: Diarrea y septicemia.

Grupos s/punto de vista epidemiológico

Ejemplos

GRUPO 1:Afectan tanto al hombre como a los animales.

S. TyphimuriumS. Enteritidis

GRUPO 2:Sólo afectan a los humanos.

S. TyphiS. Paratyphi A S. Paratyphi C

GRUPO 3:Afectan a una especie animal en particular.

S. Abortusovis

S. DublinS. Abortusequi

S. Cholerasuis

S. Gallinarum

S. Pullorum

Clasificación de las serovariedades de Salmonella

según el tipo de infección. 1) INFECCIÓN SISTÉMICA GRAVE:

Afectan a individuos inmunológicamente y fisiológicamente normales.La transmisión es fecal – oral.Ejemplos: Hombre: S. Typhi y Paratyphi A y C (Fiebre tifoidea). Aves: S. Gallinarum. Cerdos: S. Choleraesuis.

2) INFECCIÓN SISTÉMICA CON FOCO EN EL TRACTO REPRODUCTIVO:Afectan principalmente a animales preñados (mamíferos) o en puesta (las aves).Producen abortos, retraso del crecimiento y enteritis en animales muy jóvenes.Transmisión trasuterina y/o transovárica y fecal – oral. Ejemplos: Ganado bovino: S. Dublín. Ganado ovino: S. Abortusovis,. Caballos: S. Abortusequi y Aves: S. Pullorum .

3) INFECCIÓN ENTÉRICA O SUBCLÍNICA: Representan a la gran mayoría de las serovariedades.Son incapaces de producir infecciones sistémicas en condiciones normales en animales sanos adultos.Son capaces de causar enteritis aguda o infecciones subclínicas.

En el año 2000 la OMS (Organización Mundial de la Salud), junto con el CDC(Centers for Disease Control and Prevention) y el Instituto Danés de Veterinaria,inician el “Programa World Health Organization (WHO) Global SalmonellaSurveillance”.

Este programa organiza una red global de Laboratorios e Instituciones involucradasen la vigilancia de Salmonella y de otros patógenos asociados a las EnfermedadesTransmitidas por Alimentos (ETA).

El WHO Global Salmonella-Surveillance tiene como objetivo reducir las ETA a travésde la estandarización de los sistemas de vigilancia de las ETA y la capacitación de loslaboratorios nacionales y regionales para la generación de respuestas oportunas.

Según la OMS, se han informado numerosos brotes de salmonelosis por décadas, perodentro de los últimos 25 años la enfermedad se ha incrementado en incidencia enmuchos continentes.

El “Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas” (INEI)-ANLIS “Dr. Carlos G. Malbrán” nuclea como “Laboratorio de Referencia Nacional de Salud”.

El Servicio de Enterobacterias del INEI recibe aislamientos de Salmonella derivados por los laboratorios participantes de la “Red Nacional de Diarreas y Patógenos Bacterianos de Transmisión Alimentaria” y del “Programa de Unidades Centinelas de Diarrea”, como también de aislamientos de origen animal y de alimentos.

Diario El Día: 24 de mayo de 2008.

“Detectan hamburguesas con Salmonella”

La Administración Nacional de Medicamentos, Alimentos y Tecnología Médica (ANMAT) dispuso el retiro preventivo del mercado de un lote de medallones de carne vacuna en las que se detectó la presencia de Salmonella.

De acuerdo con el organismo, se trata de los "medallones de carne vacuna con soja congeladas de la marca "Chef Burger“.

La decisión fue tomada luego de un análisis realizado por el Instituto Nacional de Alimentos (INAL), organismo dependiente de la ANMAT, en el que se detectó la presencia de Salmonella spp en 10 grs.

Sábado 17, Octubre 2009

La leche en polvo incautada tenía SalmonellaDespués de cuatro análisis de laboratorio, la ANMAT confirmó que la leche en polvo incautada por el juez Norberto Oyarbide está contaminada con Salmonella. Es una bacteria que causa serios trastornos gastrointestinales y puede ser mortal.

La leche -marca Neocate- es medicada en niños con problemas metabólicos. Se fabrica en la empresa británica SHS International, una subsidiaria de Danone. "No es apta para el consumo humano: es altamente peligrosa y pone en riesgo la salud de muchos chicos", dijo Oyarbide.

Los 1.940 kilos de leche habían sido secuestrados el jueves por la Policía en un depósito de la firma Abin, en Boedo. La orden la dio Oyarbide, advertido por e-mails de un instituto de Colombia. Ahora, prohibió su comercialización en el país y los niños que la tomaron deberán hacer consultas médicas.

Son bacilos gram-negativos. Miden de 0,7-1,5 µm de ancho x 2-5 µm de largo. Móviles (flagelos perítricos). Excepto S. Gallinarum y S.

Pullorum que son inmóviles. No forman esporas. La pared celular posee el antígeno (Ag) somático “O”. Los flagelos representan el Ag flagelar “H”. Algunas salmonelas poseen cápsula. Ag capsular “K” (llamado

Ag Vi en Salmonella) (acción antifagocítica). Se encuentra en S. Typhi, S. Paratyphi C y en algunas cepas de S. Dublin.

Bacterias Gram negativas: tienen 3 capas principales: 1) Capa interna: Membrana citoplasmática. (75°A)2) Capa media: Pared celular (20-30 °A) 3) Capa externa: Membrana externa. (60-180 °A)

La pared celular esta constituida por: 1) Capa de peptidoglucano, mucopéptido o mureína. 2) Lipoproteínas

Membrana externa esta compuesta por:

LPS (Lipopolisacáridos): -LÍPIDO A: (endotoxina)-CORE CENTRAL. (Polisacárido) -ANTÍGENO “O”: polisacárido, termoestable, tipo-específico, se encuentra

en todas las especies de Salmonella.

Por afuera de la pared está la cápsula (*), y hacia el interior de la pared la membrana citoplasmática.

El género Salmonella pertenece a la familiaEnterobacteriaceae, es una bacteria zoonotica yubicuitaria que produce la salmonelosis, enfermedad dedistribución mundial que afecta a los humanos y a losanimales de sangre caliente y fría.

CLASIFICACIÓN

Nivel taxonómico Nomenclatura Hábitat

Familia: Enterobacteriaceae

Tribu: Salmonelleae

Género: Salmonella

Especies: 1) enterica2) bongori

Subespecies de S. enterica. enterica (I) Hombre y animales de sangre caliente

salamae (II)arizonae (IIIa)diarizonae (IIIb)hountenae (IV)indica (VI)

Animales de sangre fría ymedio ambiente.

Serovariedades (+ 2.400) Typhimurium, Enteritidis, Dublin, Abortusovis, Cholerasuis, Gallinarum.

Se diferencian por estudios de ADN. (Hibridación in situ)

Se diferencian por pruebas bioquímicas

La mayoría de las

serovariedades de Salmonella

(99,8%) aisladas del hombre y de

los animales de sangre caliente

pertenecen a: Salmonella

enterica subespecie enterica (I).

• El género se escribe con mayúscula y en itálica.

• La especie y subespecie se escriben con minúscula y en itálica.

• Las serovariedades se escriben con mayúscula y con letra romana,porque las serovariedades no están incluidas en el Código Internacional de Nomenclatura Bacteriana.

Salmonella enterica enterica Typhimurium.

Género Especie Subespecie Serovariedad

A fines prácticos se expresa el género y la serovariedad ej.: SalmonellaTyphimurium.

S. Typhi

S. Typhimurium S. Enteritidis

S. Dublin

La serotipificación se basa en las diferentes combinaciones de antígenos somáticos O y flagelares H que poseen las

salmonelas.

Las serovariedades se clasifican por medio de la serotipificación

Hay dos tipos de factores somáticos:

Los factores mayores: identifican el grupo antigénico. Ej.: S. Typhimurium (4), S. Enteritidis (9).

Los factores menores: tienen poco o nulo valor discriminativo porque siempre están asociados a otro factor. Ej.: factor 12 siempre está asociado al 2, 4 y 9.

S. Typhimurium: O: 1, 4, 12.

S. Enteritidis: O: 1, 9, 12.

-

Los estructura antigénica somática se denomina con la letra O seguida de números arábigos separados por comas.

Hay más de 60 especificidades o fases antigénicas flagelares.

La mayoría de las serovariedades de Salmonella tienen 2 fases antigénicas flagelares. (difásicas)

Pocas salmonelas tienen 1 especificidad antigénica flagelar. (monofásicas).

Los antígenos flagelares se pueden clasificar en mayores y menores.

2 ejemplos:

1) S. Typhimurium O: 1, 4, 12: i :1,2.

2) S. Enteritidis O: 1, 9, 12: g,m: -

Antígenos O

Antígenos O

Antígenos H

Antígeno H

No tiene segunda

fase

Difásica

Monofásica

Definición

El género Salmonella pertenece a la FamiliaEnterobacteriaceae, es una bacteria ubicuitaria yzoonótica que produce la salmonelosis, enfermedad dedistribución mundial que afecta a los humanos y a losanimales de sangre caliente y fría.

Salmonella: bacteria ubicuitaria y su resistencia en el medio ambiente

Salmonella es una bacteria que se encuentra en el medio ambiente y en instalaciones con malas condiciones de higiene.

Sobrevive en el agua y el suelo.

Resiste la deshidratación, principalmente en heces y el polvo.

¿Cuál es el riesgo de que las aguas tengan

Salmonella?

ALTO RIESGO

Los huevos pueden tener Salmonella en la cáscara o en el interior.

La leche no pasteurizada.

Las carnes mal cocidas.

Sobrevive varios meses en salmuera al 20%.

- Salmonella es sensible al hipoclorito, ácidos y desinfectantes.- No sobreviven por encima de los 75°C. - Sensibilidad a los antimicrobianos:

1) Rumiantes, caballos y cerdos: Ampicilina, cloranfenicol, trimetoprim-sulfadoxina, nitrofurazona.

2) Aves: Sulfas, fosfomicina, gentamicina y tylosina. 3) Humanos: Cloramfenicol, ampicilina, amoxicilina, trimetoprim-

sulfametoxazol, cefalosporinas de 3ra generación (cefotaxima, cefoperazona, ceftriaxona) y fluoroquinolonas (ciprofloxacina y ofloxacina).

Definición

El género Salmonella pertenece a la FamiliaEnterobacteriaceae, es una bacteria ubicuitaria yzoonótica que produce la salmonelosis, enfermedad dedistribución mundial que afecta a los humanos y a losanimales de sangre caliente y fría.

Zoonosis: Es una enfermedad que se transmite de losanimales a los humanos.

Zooantroponosis: Si la enfermedad se puedetransmitir de los humanos a los animales.

Recontaminación

de reconstituyentes

alimenticios

Alimentos

contaminados

Desechos

contaminados

Mataderos

contaminados

Animales

infectados

con

Salmonella

Hombre

Hombre

Drogas y

colorantes

Agua contaminada

(río, riego, etc.)

Vegetales

Hombre

Animal

Alimentos de

origen

animal y vegetal

HombreAlimentos

manufacturados

Mamíferos

Aves

Peces

Reptiles

Insectos

Hombre

Hombre

Fuente de infección: - Es el origen a partir del cual se transmite la infección.- Pueden ser alimentos de origen animal, vegetal

contaminados, animales y humanos enfermos o asintomáticos, el suelo, agua u objetos inanimados contaminados.

La principal fuente de infección de Salmonella para el humano son:

ALIMENTOS de ORIGEN ANIMAL Huevos, carne vacuna, pollo, cerdo y leche.

Reservorio de Salmonella:(fuente de infección primaria)

Las aves de corral, el ganado vacuno y los porcinos son el

principal reservorio de Salmonella.

Salmonelosis

Humanos

Cuadro de gastroenteritis aguda

Síndrome de fiebre tifoidea/Paratifoidea

Animales

Cuadros entéricos agudos y crónicos

Cuadros septicémicos

Salmonelosis en humanosSalmonelosis entérica Síndrome de Fiebre

tifoidea/Paratifoidea

• Cuadro de Gastroenteritis aguda.

• Duración: 2 a 3 días.

• Producido por salmonelas no tifoideas.

•(Ej.: S. Typhimurium, S. Enteritidis)

•Síntomas: Dolor de cabeza, dolor

abdominal, diarrea, fiebre.

• Cuadro febril prolongado con

septicemia.

• Duración: 1 a 3 semanas.

•Complicaciones: hemorragias,

perforación intestinal, miocarditis y

meningitis.

•Producido por S. Typhi y S. Paratyphi.

En ancianos, niños ≤5 años e inmunocomprometidos

los cuadros de gastroenteritis producen una importante

deshidratación y tienen riesgo de sufrir infecciones

septicémicas graves por salmonelas no tifoideas, que

pueden llevar a la muerte si no reciben atención

médica.

Las fuentes de infección suelen ser otros animales enfermos o

, pájaros, roedores, insectos, el hombre, el agua o el alimento contaminado y el ambiente de la granja (heces, polvo, equipos, suelos mal desinfectados, etc.).

En general muchos animales son portadores de Salmonellaasintomáticos.

Los animales asintomáticos no presentan signos, esto se debe a que su sistema inmunológico controla la infección.

Salmonella se acantona en los linfonódulos mesentéricos y se elimina intermitentemente al medio ambiente a través de la materia fecal.

Representan una fuente de infección para otros animales y contaminan el medio ambiente.

Los factores estresantes pueden provocar el desarrollo de la enfermedad.

Salmonella ingresa principalmente por vía oral.

Otras puertas de entrada son aerógena, conjuntival.

Se acantona en los linfonódulos mesentéricos.

Se elimina por materia fecal.

Otras vías de transmisión: transplacentaria (Ej.: bovinos), y transovárica (Ej.: Gallinas)

Humanos: -Gastroenteritis: Materia fecal o hisopado rectal.-Síndrome de Fiebre entérica: materia fecal, orina y sangre en el pico

febril.

Animal vivo: Materia fecal (MF).

Animal muerto: -Cerdo: ciego o contenido cecal (CC) y linfonódulos mesentéricos (LN), también

hígado o bazo.-Bovinos: ciego, LN, bilis, hígado y bazo. -Gallina: ciegos, Tarsometatarsiano (S. Gallinarum).-Bovinos, Equinos, ovinos: ciego, CC, LN, Abortos y placenta.

Alimentos: huevos, leche y subproductos lácteos (queso, ricota, etc.), subproductos cárnicos de vacuno, porcino, pollo y alimento concentrado para animales.

Medio ambiente: agua y suelo.

Doble envase (frasco de plástico con tapa a rosca y bolsa de nylon)

Rotuladas: fecha, remitente, especie animal y tipo de muestra.

Refrigeradas a 4°C.

Se pueden utilizar medios de transporte: Cary-Blair o Stuart (para los hisopados).

Aerobios y anaerobios facultativos.

Crecen en medios de cultivos simples. Ej: Agar tripticasa soya.

Temperatura óptima de crecimiento: 37°C. (También crecen a 42 °C).

Oxidasa negativos.

Catalasa positivos.

Fermentan la glucosa.

No fermentan la lactosa.

Reducen nitrato a nitrito.

Comprende los siguientes pasos:

1) Pre-enriquecimiento.

2) Enriquecimiento.

3) Aislamiento diferencial en medios sólidos selectivos.

4) Aislamiento en medio sólido no selectivo. (cultivo puro).

5) Confirmación bioquímica de las colonias sospechosas.

Objetivo:

Revivificación de las salmonelas lesionadas, incrementar su vitalidad y que adquieran las condiciones fisiológicas adecuadas para su desarrollo.

Medio de cultivo:

Agua peptonada y tamponada o caldo lactosado.

- La peptona y los fosfatos revitalizan el germen.

- El buffer evita que haya cambios bruscos de pH, que perjudican el desarrollo de Salmonella.

Procedimiento:

Se prepara una solución de 1/10.

(25 gr de la muestra en 225 ml de agua peptonada y tamponada.)

Incubar a 37 °C durante 24 hs.

.

En esta etapa se estimula y favorece el crecimiento de Salmonella y se restringe la proliferación de la flora competitiva.

Medio de cultivo: Caldo de tetrationato. - El tetrationato inhibe el crecimiento de coliformes y otras bacterias intestinales.

- La bilis y el yodo estimula el crecimiento de Salmonella e inhibe el de la flora competitiva.

Se coloca 1 ml del caldo de pre-enriquecimiento en 10 ml de caldo de tetrationato. Incubar a 37°C durante 24 hs. (Otros medios: caldo de selenito-cistina, RVS (Caldo RappaportVassiliadis peptona de Soja).

1 ml

Incubar 24 hs

En esta etapa se restringe, aún más, el crecimiento de la flora competitiva y se estimula el de Salmonella.

Los medios sólidos selectivos permiten el aislamiento de las colonias bacterianas con aspecto característico de Salmonella.

Medio de cultivo: Agar entérico Hektoen.

Otros medios de cultivo: Mc Conkey, SS ( Agar Salmonella-Shigella).

Procedimiento: Se colocan dos ansadas del cultivo del caldo de tetrationato y se siembra en una placa de Hektoen, realizando cuatro estrías para obtener colonias aisladas. Incubar a 37°C durante 24 a 48 hs.

Incubar 48 hs

Es un medio ideal para aislar Salmonella, a partir de muestras con flora normal numerosa, ej.: materia fecal.

Componentes del medio:

- Sales biliares: inhiben bacterias gram-positivas y retarda a los coliformes. - Lactosa y peptonas. (Fuente de energía)- Azul de bromotimol (AB) Indicador de pH: . --Vira a pH alcalino. - Fucsina ácida (FA) Colorante: -------------Precipita a pH ácido. (reacciona c/azul de timol

produce color amarillo y rosado cuando baja el pH)- Citrato férrico de amonio.

El AB y la FA sirven para diferenciar las colonias lactosa negativas y positivas. Bacterias lactosa negativas: utilizan las peptonas--alcalinizan el medio. El medio es de color

verde-azulado. (Ej.: Salmonella).Bacterias lactosa positivas: utilizan la lactosa– acidifican el medio. El medio es de color rosado

o salmón. (Por ej.: E. coli). Colonias naranjas o rosa salmon. El citrato férrico sirve para revelar la producción de Sh2. Se observa un ennegrecimiento en la

colonia.

Aspecto de las colonias de Salmonella: Colonias con halo azul-verdoso o transparente y centro negro.

Características: Es un medio selectivo y diferencial.

Selectivo: Contiene sales biliares y cristal violeta que inhibe las bacterias gram-positivas.

La lactosa es el único hidrato de carbono.

El medio tiene un indicador de pH que es el rojo neutro. (pH acido=rojo)

Las bacterias fermentadoras de lactosa producen colonias con distintos tonos de rojo, debido a la conversión del colorante rojo neutro (rojo pH ≤ 6,8) por la producción de ácidos mixtos.

Las bacterias no fermentadoras de lactosa producen colonias transparentes.

Aspecto de las colonias de Salmonella: Colonias incoloras.

Salmonella al no fermentar la lactosa no vira el pH del medio y el indicador rojo neutro no cambia de color.

Colonia lactosa negativa

Colonia lactosa positiva

- Es un medio altamente selectivo formulado para inhibir la mayoría de los coliformes y permitir el desarrollo de Salmonella y Shigella.

- Tiene el mismo fundamento que el Agar Mc Conkey.- La lactosa es el único hidrato de carbono y el rojo neutro es el indicador

de pH. - Las altas concentraciones de sales biliares y el citrato de sodio inhiben a

los gram-positivos y a los coliformes.

El agar SS además contiene citrato férrico y tiosulfato de sodio. Las bacterias productoras de sulfuro de hidrógeno (Sh2) se detectan por un precipitado negro.

Aspecto de las colonias de Salmonella: Colonias incoloras, centro negro, medio amarillo.

Bacilos 1 x 3 µm.

Gram negativos.

No esporulados.

Móviles (flagelos perítricos), excepto: S. Gallinarum y S. Pullorum (inmóviles).

No poseen cápsula, excepto S. Typhi, S. Paratyphi y S. Dublin (*). (Antígeno Vi).

Objetivo: Obtener un cultivo puro a partir de 1 colonia de aspecto compatible con

Salmonella para realizar posteriormente las pruebas bioquímicas.

Medio de cultivo: Agar Tripticasa Soya (ATS).

Procedimiento: A partir del cultivo de la placa de Hektoen seleccionar una colonia sospechosa de Salmonella y repicarla en una placa de ATS.

Incubar a 37°C durante 18 a 24 hs.

Aspecto de las colonias de Salmonella en ATS: convezas, bordes netos, blancas (producen pigmento), superficie lisa y brillosas.

Para identificar el género Salmonella spp. se realizan dos pruebas bioquímicas de tamizaje:

1) AGAR TRIPLE AZÚCAR HIERRO (TSI)

2) AGAR LISINA HIERRO (LIA).

TSI LIA

Procedimiento: Sembrar a partir del cultivo puro de la placa de ATS en el tubo del TSI en el

fondo y en la superficie del pico de flauta.

Flamear y recargar el ansa recta, sembrar por picadura en el fondo y por diseminación en la superficie inclinada del tubo de LIA.

Incubar los tubos de TSI a 37°C durante 24 horas y los de agar LIA a 37 °C durante 48 horas.

LIATSI

Fundamento:

En el LIA, hay glucosa (escasa cantidad) y lisina que es la principal fuente de energía. Para

aprovechar la lisina la bacteria necesita tener alguna de las enzimas que la pueden degradar.

Enzimas: La enzima lisina decarboxilasa (Anaerobiosis) o la lisina desaminasa (Aerobiosis).

Condiciones para que se realice la reacción enzimática:

El medio debe tener pH acido, por lo tanto primero tiene que fermentar la glucosa.

Anaerobiosis. (La reacción se produce en el fondo del tubo).

Reacción decarboxilación de la lisina: Lisina-------Cadaverina. (Color púrpura)

Reacción desaminación de la lisina: Lisina-------Acido Cetocarbónico. (color pardo-rojizo).

Componentes del medio LIA:

Contiene lisina y glucosa.

El indicador de pH es el púrpura de bromocresol.

Posibles reacciones en el LIA:

Si la bacteria decarboxila la lisina a cadaverina se alcaliniza el medio y vira a color

violeta.

Si la bacteria no decarboxila la lisina, fermenta la glucosa, acidifica el medio y vira todo el medio al

color amarillo.

Si la bacteria desamina la lisina, se observa el pico de flauta de color pardo-rojizo.

LIA

LIA TSI

LIA:

Lisina: Positivo

• Pico y fondo: Alcalino (K) (púrpura).

• Producción de Sh2.

TSI

Lactosa: Negativo

•Pico: Alcalino (K) (rojo).

•Fondo: Acido (A) (amarilla).

•La producción de Hidrógeno Sulfurado

(Sh2)(negro) oculta el fondo amarillo.

K

KK

A