Determinacion de Cocos Pirogenos

7/23/2019 Determinacion de Cocos Pirogenos

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DETERMINACION DE COCOS PIROGENOS

1. INTRODUCCIÓN.- Los cocos gram positivos excluyendo las

enterobacterias, son los microorganismos más frecuentemente

aislados de muestras de pacientes y se han involucrado como

agentes importantes en procesos de enfermedades infecciosas

desde el año 1836. e encuentran ampliamente distribuidos en la

naturale!a y forman parte de la "ora microbiana normal de la piel

y las mucosas del hombre y de animales. Las infecciones en el

hombre se producen por contacto directo con individuos infectados

o portadores sanos, o por penetraci#n a trav$s de piel y mucosas

mediante ob%etos corto pun!antes por heridas, trauma o

procedimientos &uir'rgicos o por la acci#n de toxinas producidas

por cepas de algunas especies.

taphylococcus Los esta(lococos son c$lulas esf$ricas gram

positivas dispuestas en grupos seme%antes a racimos de uvas en

medios s#lidos o en pares, cadenas o t$tradas, en medios l)&uidos.

*recen bien en medios simples y de acuerdo a la especie producen

diferentes pigmentos+ blanco, amarillo y dorado y algunas de ellas

producen beta hem#lisis. on catalasa positiva, inm#viles, no

esporulados, con raras excepciones, no encapsulados y son

aerobios o anaerobios facultativos.

treptococcus Los estreptococos son c$lulas esf$ricas u ovaladas

gram positivas dispuestas en pares o cadenas cortas o largas. on

más exigentes &ue los esta(lococos, no crecen en medios simples,

por el contrario re&uieren de factores de crecimiento como la



sangre y sus derivados. roducen diferentes tipos de hem#lisis,

caracter)stica &ue permite clasi(carlos en beta hemol)ticos, alfa

hemol)ticos o no hemol)ticos. -o forman pigmentos, son catalasa

negativa, inm#viles, no esporulados, con formaci#n de cápsula

variable. on aerobios y anaerobios facultativos.

nterococcus Los enterococos clasi(cados anteriormente como

una especie de estreptococos, son c$lulas esf$ricas gram positivas

dispuestas en pares o cadenas cortas. /l igual &ue los

estreptococos, re&uieren de factores de crecimiento como la

sangre y sus derivados. on capaces de desarrollarse en medios

&ue contienen altas concentraciones de -a*l 06.2 y de bilis0452. ueden producir hem#lisis de tipo alfa, beta o ser no

hemol)ticos. -o forman pigmentos, son catalasa negativa,

inm#viles, no esporulados, con formaci#n de cápsula variable. on

aerobios y anaerobios facultativos.

2. OBJETIVOS

Objetivo Gener!.

• roporcionar al estudiante el conocimiento cient)(co y las

habilidades prácticas de los m$todos y t$cnicas utili!ados en

7icrobiolog)a *linica para el aislamiento e identi(caci#n de las

principales especies de cocos pirogenos &ue afectan al hombre..

Objetivo" e"#e$%&$o".

• stablecer la diferencia entre g$neros de cocos gram positivos



• studiar las caracter)sticas macrosc#picas, microsc#picas y

cambios producidos en el medio de diferentes especies de cocos

gram positivos

• *onocer algunas de las pruebas bio&u)micas de laboratorio

utili!adas para la identi(caci#n de especies de cocos gram

positivos

• denti(car especies de taphylococcus, treptococcus y

nterococcus

• studiar el caso cl)nico y aislar e identi(car el agente etiol#gico, a

partir de la muestra asignada de cada paciente.

3. MARCO TEORICO

. *atalasa+ la catalasa es una en!ima &ue descompone el per#xido de

hidr#geno 09:;: en ox)geno y agua. l per#xido de hidr#geno se forma

como uno de los productos (nales del metabolismo oxidativo o aer#bico

de los hidratos de carbono. i se de%a acumular, el per#xido de

hidr#geno es letal para las c$lulas bacterianas.

:9:;: :9:; < ;: 0burbu%as de gas

La prueba de la catalasa, llevada a cabo en portaob%etos o en

tubos, es muy com'nmente utili!ada para diferenciar estreptococos

0negativos de esta(lococos 0positivos.

*oagulasa+ la coagulasa es una en!ima prote)ca de composici#n

&u)mica desconocida, con actividad seme%ante a la protrombina, capa!

de transformar el (brin#geno en (brina, provocando la formaci#n de un



coagulo visible en un sistema anal)tico adecuado. n el laboratorio, la

prueba de la coagulasa se utili!a más com'nmente para diferenciar al .

aureus 0coagulasa positivo de otros esta(lococos y micrococos.

La coagulasa se halla en : formas, =libre> y =(%a>, cada una de

las cuales posee diferentes propiedades &ue re&uieren el uso de t$cnicas

separadas+

*oagulasa libre 0prueba en tubos+ la coagulasa libre es una

sustancia seme%ante a la trombina, &ue se haya presente en los (ltrados

de cultivos. *uando una suspensi#n de bacterias productoras de

coagulasa se me!clan en partes iguales con una pe&ueña cantidad de

plasma en un tubo de ensayo, se forma un coagulo visible como

consecuencia de la utili!aci#n de los factores de la coagulaci#n del

plasma de manera similar a cuando se añade trombina.

?acitracina+ Las pruebas presuntivas en la identi(caci#n delb9@/ 0streptococo beta hemol)tico del grupo / se basan en la

susceptibilidad e inhibici#n del crecimiento en una placa de agar sangre,

y &ue tienen la mayor parte 0A2 de las cepas al ponerlas en contacto

con discos &ue contienen dosis ba%as 05.54B de bacitracina.

;pto&uina+ se usa el disco de opto&uina para diferenciar entre

. pneumoniae 0sensibles y otras especies de estreptococos a

hemol)ticos 0resistentes. La sensibilidad a la opto&uina es una medida

de la fragilidad de la membrana celular bacteriana. La opto&uina, &ue es

el clorhidrato de etilhidrocupre)na.

'. MATERIA(ES ) METODOS.-



'.* MATERIA(ES

@uardapolvo

@uantes

@orro

?arbi%o

/sas de siembra desechables =;;>

ortaob%etos

*a%as etri

7echero

*ubreob%etos

apel madera

7atra!

7icroscopio

Cubos de ensayo

@radilla

Deringa

/gua destilada

'.2 METODOS

thaphylococcus. Eiagn#stico de Laboratorio

Las colonias de esta(lococo son fáciles de reconocer, relativamente

son grandes

Cienen de : a 3 mm o más, dependiendo de la edad del cultivo. Las

colonias son



*irculares, convexas, de super(cie lisa, bordes enteros, cremosas,

blancas o

/marillas o doradas. ara iniciar la identi(caci#n además de las

caracter)sticas de

crecimiento tanto en medio l)&uido como s#lido y la coloraci#n de

@ram, se utili!a la

prueba de la catalasa &ue permite diferenciarlos del g$nero

estreptococo, el cual

carece de esta en!ima. ara identi(car especies se utili!an diferentes

pruebas dentro

de las cuales están las siguientes.

PRUEBAS BIO+U,MICAS

*/C/L//

rincipio

La catalasa es una en!ima &ue descompone el per#xido de hidr#geno

09:;: en

agua y ox)geno seg'n la siguiente reacci#n+

:9:;: :9:; < ;: 0burbu%as de gas

La prueba catalasa se usa con frecuencia, para diferenciar miembros

de la familia

7icrococcaceae de miembros de la familia treptococcaceae.

7ateriales

F *olonia aislada 07edio de cultivo sembrado e incubado



F er#xido de hidr#geno al 32

rocedimiento

1. *on un palillo de madera, transferir parte del centro de una colonia

a la

super(cie de un portaob%etos.

:. /gregar una gota de per#xido de hidr#geno al 32 y observar la

formaci#n de

efervescencia o burbu%as.

Gesultados

F ositiva+ Bna prueba positiva esta dada por la aparici#n rápida y

sostenida de

burbu%as o efervescencia.

F -egativa+ Bnas pocas burbu%as pe&ueñas despu$s de :5 a 35

segundos se

considera un resultado negativo.

F Halsas ositivas+ Los eritrocitos poseen catalasa, por lo cual debe

tenerse

cuidado de no tomar eritrocitos del agar sangre %unto con el material

de la

colonia.

*;/@BL//

rincipio



La coagulasa es una prote)na de composici#n &u)mica desconocida,

&ue tiene

actividad similar a la protombina, capa! de convertir el (brin#geno en

(brina, lo &ue

da como resultado la formaci#n de un coágulo visible en los sistemas

apropiados. e

utili!a para identi(car taphylococcus aureus de otras especies. La

coagulasa se

presenta en dos formas, ligada y libre y para determinarlas se utili!a

dos

procedimientos+ en lámina y en tuboI si la prueba en lámina da

positiva, no hay

necesidad de hacer la prueba en tubo.

rueba en lámina 0*oagulasa ligada

7ateriales

F *epa en estudio

F Lámina

F lasma de cone%o

rocedimiento

F *olocar 1 gota de plasma sobre la lámina

F /gregar la colonia en estudio

F 7e!clar

Gesultados



F ositivo+ La presencia de aglutinaci#n o formaci#n de grumos

F -egativo+ -o se observa aglutinaci#n, permanece emulsionada la

colonia

rueba en tubo 0*oagulasa libre

7ateriales

F *epa en estudio

F Cubo de ensayo con 5. ml de plasma de sangre de carnero

rocedimiento

F /gregar la colonia en estudio al tubo de ensayo

F ncubar a 3J* por 4 horasI si no se ha formado el coágulo,

reincubar por :4

horas a temperatura ambiente

Gesultados

F ositivo+ La formaci#n de un coágulo

F -egativo+ -o se observa formaci#n de coagulo, permanece l)&uido el

plasma

treptococcus

Las colonias de estreptococos son variables, dependiendo de la

especieI ara iniciar la identi(caci#n además de las caracter)sticas de

crecimiento

tanto en medio l)&uido como s#lido y la coloraci#n de @ram, se utili!a

la prueba de la



catalasa &ue permite diferenciarlos del g$nero esta(lococo, el cual

produce esta

en!ima. ara identi(car especies se utili!an diferentes pruebas dentro

de las cuales

están las siguientes.

ruebas ?io&u)micas

?/*CG/*-/

rincipio

treptococcus pyogenes es sensible a ba%as concentraciones 05.54B

de

?acitracina.

7ateriales

F *epa en estudio

F /gar sangre

F Eiscos de ?acitracina

rocedimiento+

F embrar la colonia masivamente en cuadr)cula sobre una placa de

agar sangre

F *olocar un disco de ?acitracina y presionar suavemente

F ncubar a 3J* por :4 horas

Gesultados

F ensible+ La aparici#n de cual&uier halo de inhibici#n alrededor del

disco



F Gesistente+ *recimiento alrededor del disco

*/7

rincipio

e basa en &ue treptococcus agalactiae produce un factor llamado

*/7 0factor

de monofosfato de adenina c)clica &ue aumenta la !ona de hem#lisis

producida por

algunas cepas de taphylococcus aureus productoras de K lisina.

7ateriales

F *epa en estudio

F /gar sangre

F *epa de taphylococcus aureus K lisina positivo

rocedimiento+

F embrar sobre la palca de agar una estr)a de esta(lococo K lisina

positivo

F erpendicular al esta(lococo, hacer una estr)a con la colonia en

estudio

F ncubar a 3J* por :4 horas

Gesultados

F ositivo+ resencia de una !ona de hem#lisis en forma de "echa

F -egativo+ /usencia de la hem#lisis en "echa

. PROCEDIMIENTO



-ota+ e utili!an tres medios de cultivo para el esputo &ue son+ agar

7acconey, agar sangre y caldo de tioglicolato. n la práctica haremos

con agar sangre y caldo de tioglicolato

a. iembra en agar sangre 0para identi(caci#n de bacterias gramFnegativas y gramFpositivas+

acamos el agar sangre de la refrigeradora y esperamos a &ue

ad&uiera la temperatura ambiente

ncendemos el mechero de bunsen, colocamos las asas y las

muestras de esputo cerca del mismo

Comamos un cotonete de algod#n est$ril y tomamos un poco de

muestra de esputo en una lado del agar, luego tomamos el asa lo

estereli!amos en el mechero y luego de enfriar lo pasamos por el agar,

%usto en el sitio por donde paso el cotonete, estriamos en tres

direcciones alrededor de la ca%a

Capamos el agar y colocamos en la incubadora alrededor de 3JF

3MJ* y de%amos por :4 a 48 horas en la misma

Bna ve! transcurrido el tiempo de incubaci#n se reali!a la lectura

de la siembra y la interpretaci#n de la misma

b.iembra en caldo de tioglicolato

*on el cotonete de algod#n &ue se tom# la muestra de esputo y se

sembr# en agar sangre, introducir un poco de la misma en el caldo e

incubar de 3N a 3MN* durante 48 horas.

ste medio se usa para determinar el efecto del ox)geno sobre el

crecimiento microbiano. Bn tubo con medio semis#lido contiene

tioglicolato para reducir el potencial redox del medio. /s) s#lo hay

ox)geno en la super(cie y no en el resto del tubo.



i el microorganismo es aerobio estricto crecerá en la parte de arriba del

tubo, si es anaerobio estricto no crecerá en la parte más alta del tubo y

si es anaerobio facultativo crecerá por todo el medio.

c. ;bservaci#n de placas coloreadascon coloraci#n gram de muestra de

esputo

7irar al microscopio con el lente de gran aumento 0155 x y con aceite

de inmersi#n, las colonias de ta(lococcus, de treptecoccus, de otras

bacterias y otros elementos pat#genos presentes anotar el color y las

formas &ue presentan.

C$cnica o procedimiento+ denti(caci#n de cocos gram positivos

*atalasa

n una placa portaob%etos añadir 1 o : gotas de per#xido de hidr#geno

al 32 0diluir la soluci#n al 352 con agua destilada, transferir c$lulas

del centro de una colonia bien aislada y me!clar. La rápida aparici#n y

producci#n sostenida de burbu%as de gas o efervescencia indica unareacci#n positiva.

*oagulasa

rueba en tubos 0coagulasa libre+

1.F colocar as$pticamente 5. ml de plasma de cone%o reconstituido en

el fondo de un tubo est$ril.

3.F me!clar por rotaci#n suave del tubo, evitando remover o agitar el

contenido.

4.F colocar el tubo en la incubadora de 4 a :4 horas. ;bservar la

formaci#n de un coagulo visible.



La reacci#n se considera positiva ante cual&uier grado de coagulaci#n

visible dentro del tubo.

rueba de la ?acitracina

e toma un agar sangre y en un lado de la placa se estria con el asa en

forma continua la cepa de estreptococo beta hemol)tico, con una pin!a

est$ril se coloca el disco de bacitracina en el centro del estriado

reali!ado. La placa de agar sangre es incubada a 3F3MN * durante toda

la noche. Los resultados son cualitativos y es positiva para estreptococo

beta hemol)tico del grupo / si se encuentra cual&uier halo de inhibici#n

alrededor del disco.

rueba de la opto&uina

7$todo+ se toma una suspensi#n de colonias puras en caldo

7ueller 9inton o tioglicolato y con un hisopo se estr)a una placa de agar

sangre de carnero al 2. obre la estr)a se coloca el disco de opto&uina.

e incuba con atm#sfera de *;: al 2 0 %arra con vela . durante :4 hs.

a 3N *.

nterpretaci#n+ ensible, cuando hay inhibici#n alrededor del disco. e

considera como punto de corte 16 mm. 0discos de 15 mm o 14 mm

0discos de 6 mm. Gesistente, cuando el crecimiento no es inhibido

alrededor del disco. Los casos de halos intermedios deben resolverse por

acumulaci#n de pruebas a favor o en contra.



.ANE/OS



@G/7 ;CO; @G/7 -@/CO;;xacilina 0ox /mpicilina 0amritromicina 0 *efuroxima 0cxm*lindamicina 0cc /mpicilina < sulbactam 0sam*efoxitin 0fox @entamicina 0gm

ulfas 0sxt -or"oxacina 0nor*ipro"oxacina 0cip -itrofuranto)na 0fmOancomicina 0va ulfas 0sxt

0. BIB(IOGRA1IA.-

http+PPQQQ.higiene.edu.uyPcefaPLibro:55:P*ap2:51A

http+PPQQQ.medicina.unal.edu.coPEepartamentosPmicrobiologia

http+PPQQQ.infomed.sld.cuPcocosPpirogenos

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