ACTUALIZACION EN RESISTENCIA

BACTERIANA Y NORMAS CLSI 2010

Bases moleculares de la resistencia Bases moleculares de la resistencia a antibia antibi óóticos en bacterias ticos en bacterias

Gram positivas Gram positivas Javier Escobar PJavier Escobar P éérezrezLaboratorio de GenLaboratorio de Gen éética Molecular Bacteriana (LGMB)tica Molecular Bacteriana (LGMB)Universidad El BosqueUniversidad El Bosque

Correo: Correo: labgenmolecular@unbosque.edu.colabgenmolecular@unbosque.edu.cojaviesco21@yahoo.comjaviesco21@yahoo.com

Identificación y determinación susceptibilidad

Confirmación fenotípica

Confirmación genotípica

(identificación y susceptibilidad)

Lab. Clínico hospitales

Lab. Referencia

(bases moleculares)

retroalimentaciretroalimentaci óónn

Proceso de determinación de la

Resistencia Bacteriana

OBJETIVO

Dar a conocer y explicar las bases moleculares de los mecanismos de resistencia a los

principales antibióticos en bacterias Gram positivas.

Proporcionar conocimiento para el entendimiento de los procesos experimentales para la determinación de la resistencia en

bacterias (+)

Staphylococcus spp.

Tomado de: http://info-bashkirbeehoney.com/img/bakteriziditat/Staphylococcus-aureus.jpg

NOCIONES GENERALES:

Envoltura celular bacteriana

Chambers and DeLeo, 2009. nature review microbiology

Resistencia en Staphylocuccus aureus

Resistencia a penicilinas en S. aureus:

Lowy F. J Clin Invest. 2003; 111(9):1265

MSSAMSSA MRSAMRSA

Proteína PBP2a

8 tipos

Resistencia a B-lactámicos en S. aureus:

ATENCIÓN!!!!!!!YA HAY B-LACTÁMICOS

ANTI-MRSA

ceftobiprole

B-lactámicos anti-MRSA:

Tomado de : journals.prous.com/journals/servlet/xmlxsl/pk...

Identificación Molecularde SARM

16smecAnuc

Aislamientos MRSAMSSA-

Amplificación del gen coa (coagulasa)O del gen tuf para SCoN

Recordar: 80% de mecA en SCoN

• Personas hospitalizadas

• SCCmec I-II-III-VIII

• Multirresistencia

• infecciones diversas

• Poca virulencia

Diseminación de SARM-AC

• Personas en la comunidad

• SCCmec IV-V-VI-VII

• Multisensible???

• infecciones SSTI,

neumonia, septicemia.

• MAYOR VIRULENCIAMAYOR VIRULENCIA

SARM-AH SARM-AC

Epidemiologia SARM-AC

DeLeo et al, 2010, seminar DOI:10.1016/S0140-6736(09)61999-1

Identificación Molecularde SARM-AC

lukSF

seo

sek

seqsem

PCR múltiple de enterotoxinas q, k, PVL, o y m

USA CH N H1 H2 C1 C2 C3 H3 H4 C4 C5 C6 H5 C7

0%

20%

40%

60%

80%

100%

ica clfA/B fib fnbA/B eta PVL egc sek seq etb sed y sej

% d

e A

isla

mie

nto

s

SARM-AH n=184 SARM-AC n=86

Factores de virulencia en SARM en Colombia

MP gk(-)ac(-) ST8 ST5 ST8 ST5 ST8 ST5

HinfI CaiI

332pb

249pb

87pb

323pb

557pb

129pb

428pb 390pb

167pb

500pb

400pb

300pb

200pb

100pb

HhaI

Polimorfismo genes constitutivos

Cepas control: ST8: USA300 - ST5:Clon chileno

arcc gmk

CaiI

ST8 ST5

HhaI

ST8 ST5ST8 ST5

HinfI

Resistencia heterogénea y resistencia de “borderline”

MIC =4ug/mL

mecA positivos mecA negativos

Sobreexpresión de B-lactamasa

Mutaciones en PBPs constitutivas

Meticilinasa??

Resistencia a Vancomicina

Introducción de Daptomicina

Enterococcus spp.

Tomado de: funbactvirus.wordpress.com/2009/01/27/

Glicopéptidos

• 1960s introducidos en práctica clínica

• 1980s gran utilización (MRSA)

• Tratamiento de patógenos gram +

• Producidos por diferentes especies de

Actinomycetes

• 200 glicopéptidos: vancomicina y

teicoplanina

Enterococcus spp. resistente a

vancomicina VRE ó GRE

0

5

10

15

20

25

30

1989

1990

1991

1992

1993

1994

1995

1996

1997

1998

1999

2000

% R

esis

tenc

iaPacientes de unidades de atención general

Pacientes de unidades de cuidados intensivos

Fuente: National Nosocomial Infections Surveillance (NNIS) System� Enlace a: NNIS Online at CDC

Síntesis peptidoglicano (PG)

Bases moleculares de la resistencia a glicopeptidos

Enterococcus spp

� Ligasa alternativa que una D-Ala+ D-

Lactato.

� Actividad carboxipeptidasa que clive los

terminales D-Ala-D-Ala.

� Deshidrogenasa para obtener D-lactato a

partir del piruvato.

� Sistema regulador de dos componentes.

Estructura del complejo glicopéptido:

peptidil D-Ala-D-AlaUnión de Vancomicina a su blanco molecular

D-Ala-D-Lactato

Sensible Resistente

Genotipos de resistencia a glicopéptidos

VRE Fenotipos

Identificación Molecularde VRE

E. Faecalis

E. faeciumVan A

Amplificación del gen ddl (ligasas D-ala-D-ala)Genes van A, B, C

Aislamientos

Bases moleculares de la resistencia a glicopéptidos en

Staphylococcus spp

VRSA

Semejante a Enterococcus spp.(adquisición genes van)

VISA

Diferente a Enterococcus spp.

Biosíntesis de pared y rutas metabólicas alteradas

� Aumentado el turnover de pared� Engrosamiento de la pared� Reducido entrecruzamiento del PG Muropépidos no amidados (L-Ala-D-Glu-L-Lys-D-Ala-D-Ala)� Mayor cantidad de PBP2 y PBP2a� Aumentado el pool citoplasmático de monómeros

Resistencia a glicopéptidos VISA

The Journal of Clinical Investigation | May 2003 | Volume 111 | Number 9

Mecanismo de resistencia en VISA: Trampas de afinidad??

The Journal of Clinical Investigation | May 2003 | Volume 111 | Number 9

Sensible

Resistente

Resistencia heterogénea a

vancomicina hVISA

MIC ≥ 8ug/mL

Kim et al, J Clin Microbiol 2000.

Perfiles de análisis poblacional (PAP)

Kim et al, J Clin Microbiol 2000.

Daptomicina (lipopeptido)

Tomado de : journals.prous.com/journals/servlet/xmlxsl/pk...

Modo de acción Daptomicina

Cambio de polaridad de la membrana

+ - + - + + +

+ - + - + + +

Ca2+

Inhibición de procesos básicos celulares

Puede haber resistencia cruzada con Vancomicina

Resistencia inducible a Daptomicina

Friedman et al, AAC, 2006

Alteraciones en los genes Mprf, YycG y RpoA y B

Resistencia a Daptomicina

MUCHAS GRACIASMUCHAS GRACIASMUCHAS GRACIASMUCHAS GRACIAS