Vectores de ADN recombinante

Eduardo Puentes

Fredy Garcia

Juan E. Salazar

¿ QUE SON LOS VECTORES DE CLONACIÓN ?

• Son pequeñas moléculastransportadoras, que tienencapacidad para transferir yreplicar fragmentos de ADN.

TIPOS DE VECTORES

• Existen varios tipos de vectores declonación, que dependen de la célulahuésped, el tamaño de los insertos quepueden transportar y en característicascomo el número de copias que producen,el número y tipo de genes marcadoresque contienen.

PLASMIDOS

• Fueron los primeros vectores que sedesarrollaron.

• Estos vectores proceden de moléculas deADN de doble cadena que se encuentrande manera natural y que se replicanautónomamente dentro de las célulasbacterianas.

pUC 18

• Es pequeño, de modo que puede transportar fragmentos deADN relativamente grandes (de unos 10.000 pares de bases).

• Tiene un origen de replicación y puede producir hasta 500copias de los fragmentos de ADN insertado por célula.

• Se ha modificado para que presente muchas secuencias dereconocimiento para enzimas de restricción que se hanagrupado en una región denominada polylinker

• Permite la identificación sencilla de los plásmidosrecombinantes, ya que contiene un fragmento del genbacteriano lacZ que produce colonias de color azul. Si seinserta un fragmento de ADN en el polylinker, se inactiva estegen, y da lugar a colonias de color blanco.

BACTERIOFAGO LAMBDAPara clonar ADN utilizando este vector• Se purifica el ADN del fago• Se corta con una enzima de restricción, tanto el ADN

del fago como el fragmento ADN de interes.• Se unen con una ADN ligasa.• Los vectores lambda recombinantes se empaquetan in

vitro.• Se introducen en células huesped bacterianas.• Dentro de las bacterias, los vectores se replican

formando muchas copias del fago infectivo, llevandotodas el fragmento de ADN de interés.

• Los vectores fágicos pueden transportar fragmentos dehasta 20 kb

COSMIDOS

• son vectores hibridos utilizandopartes del cromosoma de lambday de plásmidos. Los cósmidospueden transportar casi 50 kb deADN insertado.

CROMOSOMAS ARTIFICIALES DE LEVADURA

• Los YAC tiene telómeros en sus extremos, unorigen de replicación y un centrómero. Estoscomponentes están unidos a genesmarcadores de selección y a un grupo deenzimas de restricción para insertar ADNexógeno.

• Estos cromosomas artificiales de levadurapermiten clonar grandes trozos de ADN, de100 a 1000 kb.

CROMOSOMA ARTIFICIAL BACTERIANO

• Basado en el plásmido de fertilidad debacterias.

• El factor F es un plásmido que se replicaindependientemente y que transfiereinformación genética durante laconjugación bacteriana.

• Los BAC pueden transportar insertos dehasta 300 kb.

FAMEGIDOS

• Es un plásmido y al que se le incorporo elorigen de replicación de un fagofilamentoso (fagos de ácidodesoxirribonucleico monocatenario), Deeste modo mantiene todas las utilidadesde los plásmidos pero además tiene lacapacidad de producir ADNmonocatenario.