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Debido a la inmunogenicidad y al polimorfismo de sus antígenos, el sistema Rh es el más complejo de los sistemas de grupos sanguíneos,

Después del ABO, es el sistema más importante.

Los genes codifican 2 proteinas Rh distintas, el antígeno D y los antígenos C ó c así como E ó e.

sistema Rh

50 antígenos

D ó RH1

C/c y E/e

Introducción Constitución química: proteica

N° en la clasificación de la ISBT: 004

Nombre del sistema Rh

Símbolo del sistema RH (RH D y RH CcEe)

Nombre de los genes: RHD, RHCE

RHD (CD240D): localizado en 1p34-36.2

RHCE (CD240CE): localizado en 1p34-36.2

57 antígenos (Rh 1 a Rh 57) de los cuales 7 son obsoletos

RH: se penso en LW

Complicación mas severa: EHRN

Presencia de antigeno D: Rh+ (positivo)

(Vancouver report. Vox Sang 2003; 84: 244-247)

1939: Levine y Stetson: atribuyen causa de EHRN a Acs. contra los GR

1940: Landsteiner y Wiener: producen por inmunización de conejos con GR de Macacus Rhesus, Acs. que aglutinan 85% de GR humanos.

Levine y Katzin : Ac similares en el suero de parturientas. Wiener y Peters: idem en sueros de personas que recibieron ABO compatible

Factor Rh Mono Rhesus.

Clasificación según Aglutinación:

85% Rh positivo

15% Rh negativo

Rh negativo y transfusiones.(AntiRh)

El factor Rh se transmite como un gen dominante simple y de acuerdo a la característica mendeliana.

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1941-1943: se observan otros Ac en politransfundidos

1943: Race: descubre dos Acs. C y c (Fisher-Race)

1945: Mourant descubre un Ac. que reacciona con el anti-Rh. Los alelos fueron denominados E y e

1960: Levine y Col. descubren la Ig anti-D

Nomenclaturas del sistema Fisher-Race: Terminología DCE

Wiener: Terminología Rh-Hr

Rosenfield y col.: Terminología alfanumérica

Tippett: teoría Genética

Nomenclatura ISBT Número : 004

Nombre : Rh

Símbolo : RH

Genes : RHD, RHCE 004001 Ag D

004002 Ag C

004003 Ag E

004004 Ag c

004005 Ag e

Reseña HistóricaFISHER-RACE WIENER

Tres pares de genes alelos cuyos loci están relacionados

Cada persona hereda 2 haplotipos idénticos (homocigoto) ó diferentes (heterocigoto)

La combinación en pares produce 36 genotipos

Muy aplicable para las reacciones serológicas

Ags: D, Cc, Ee

Alelos múltiples situados en un

solo Locus

Los 2 primeros genes: Rh y rh

(el 1° capaz de producir el Ag.

Rh0 )

Gen: r,r”, R1, R2, R0

Un Aglutinógeno: factores

Ags: Rho, rh’, rh’’

Teoría de Fisher y Race, Teoría Inglesa o de los 3 pares de genes ligados (DCE)

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Fisher-Race

Antígeno del sistema era producido por 3 locis, que portan 3 genes alelos estrechamente relacionados: Dd, Cc, Ee

Produce 8 diferentes haplotipos

Muy aplicable para las reacciones serológicas

DCE

dce

Frecuencia de Antígenos Rh (USA)

Gen %

D 85

d 15

C 70

E 30

c 80

e 98

Fenotipo de Fisher y Race del sistema Rh (USA)

Frecuencia (%)

Combinación del Gen

Blancos Negros Indios americanos

Asiáticos

DCe 42 17 44 70

dce 37 26 11 3

DcE 14 11 34 21

Dce 4 44 2 3

dCe 2 2 2 2

dcE 1 0 6 0

DCE 0 0 6 1

dCE 0 0 0 0

Teoría de Wiener, (Rr,hr)teoría americana o del gen multiple alelomórfico

Wiener Un solo locus que poseía un

Aglutinógeno con 3 sitios antigénicas

Gen: R1, R2, r, R0

Un aglutinóngeno: factores

Ags: Rh0, rh’, rh”

R1 R2

Nomenclatura Según WienerGen Aglutinógeno Factores

Rho (D)

Rh’(C)

R’ Rh1 Rh” (E)

Rh1 Ce)

hr’(c)

r rh hr”(e)

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Terminología Rh-Hr de Wiener

Factores

sanguíneos

Designación

corta

Antígenos

Fisher-

RaceGen Aglutinógeno

Rh0 Rh0 Rh0hr’hr’’ R0 Dce

Rh1 Rh1 Rh0rh’hr’’ R1 DCe

Rh2 Rh2 Rh0hr’rh’’ R2 DcE

Rhz Rhz Rh0rh’rh’’ Rz DCE

rh rh hr’hr’’ r dce

rh’ rh’ rh’hr’’ r’ dCe

rh’’ rh’’ hr’rh’’ r’’ dcE

rhy rhy rh’rh’’ ry dCE

DCe DcE dce Dce dcE dCe DCE dCE

Anti - D + + - + - - + -

Anti - C + - - - - + + +

Anti - E - + - - + - + +

Anti - c - + + + + - - -

Anti - e + - + + - + - -

Frecuencia

AntisuerosHaplotipos y Antigenos

Haplotipos y Antigenos de Fisher-Race

Frecuentes Raros

Tipo Frecuencia

DCe/Dce

dce/DCe

D+ C+ E- c- e+ DCe/DCe 19.94% DCe/dCe

DcE/Dce

dcE/Dce

D+ C- E+ c+ e- DcE/DcE 0.95% DcE/dcE

Dce/dcE

dCe/DcE

DCE/dce

DCE/Dce

Dce/dCE

D- C- E- c+ e+ dce/dce 15.40% ---

D+ C- E- c+ e+ Dce/dce 2.32% Dce/Dce

D- C+ E- c+ e+ dCe/dce 0.95% ---

Fenotipos y Genotipos de Fisher-Race

D+ C+ E+ c+ e+ DCe/DcE 12.87%

D+ C+ E- c+ e+ DCe/dce 34.39%

D+ C- E+ c+ e+ DcE/dce 12.24%

FenotiposGenotipos probables Genotipos

Posibles

Gen Antígeno Factores sanguineos

r rh hr' , hr''

r' rh' rh' , hr''

r'' rh'' rh'' , hr'

ry rhy rh' , rh''

R0Rh0 Rh0 , hr' , hr''

R1Rh1 Rh0 , rh' , hr''

R2Rh2 Rh0 , hr' , rh''

RzRhz Rh0 , rh' , rh''

Genes de Wiener y sus Productos

Terminología Rh-Hr de Wiener

Factores

sanguíneos

Designación

corta

Antígenos

Fisher-RaceGen Aglutinógeno

Rh0 Rh0 Rh0hr’hr’’ R0 Dce

Rh1 Rh1 Rh0rh’hr’’ R1 DCe

Rh2 Rh2 Rh0hr’rh’’ R2 DcE

Rhz Rhz Rh0rh’rh’’ Rz DCE

rh rh hr’hr’’ r dce

rh’ rh’ rh’hr’’ r’ dCe

rh’’ rh’’ hr’rh’’ r’’ dcE

rhy rhy rh’rh’’ ry dCE

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D Rho

C rh'

E rh''

c hr'

e hr''

Los Antigenos DCE y los Factores

sanguineos de WienerDCe R1

DcE R2

Dce R0

DCE Rz

dce r

dCe r'

dcE r''

dCE ry

Los Haplotipos DCE y los Genes de

Wiener

Antígenos Fenotipo Cantidad %

DCe R1R1 3964 20.87

DcE R2R2 2869 15.1

DCEce R1R2 6186 32.56

DCce R1r 2544 13.39

DcEe R2r 2036 10.72

DCEe R1RZ 502 2.64

Dce R0r 275 1.448

DCcE R2RZ 152 0.8

DCE RZRZ 15 0.079

ce rr 379 1.995

Cce r’r 51 0.268

cEe r”r 21 0.111

CEce r’r” 4 0.02

CE ry 0 0

0.0220.87

15.1

32.56

13.39

10.72

10.72

1.995

0.268

0.111

????

????

0.02

CLASIFICACIÓN NUMÉRICA DE ROSENFIELD 1962

Nomenclatura numérica: Rh1, Rh2,Rh3,Rh4

Ideal para el sistema de informática

No tiene ninguna implicación genética

Único objetivo: clasificar antígenos, anticuerpos y genes Rh,

denota la presencia o ausencia de los antígenos, un signo menos precede al antígeno ausente

El fenotipo se expresa colocando el signo (--) antes del

numero correspondiente al antígeno ausente. (ej: Rh-1,Rh-2

etc.)

D:1, C:2, E:3, c:4, e:5

Rh comunes para las tres nomenclaturasGenotipo %

Wiener Fisher-Race Rosenfield Aprox en blancos

Genotipos

Comunes

R1r DCe/dce Rh:1,2,-3,4,5 33

R1R1 DCe/DCe Rh:1,2,-3,-4,5 18

rr dce/dce Rh:-1,-2,-3,4,5 15

R1R2 DCe/DcE Rh:1,2,3,4,5 11

R2r DcE/dce Rh:1,-2,3,4,5 9

R2R2 DcE/DcE Rh:1,-2,3,4,-5 2

Genotipos

Raros

r’r dCe/dce Rh:-1,2,-3,4,5 1

r’r’ dCe/dCe Rh:-1,2,-3,-4,5 0.01

r’’r’ dcE/dce Rh:-1,-2,3,4,5 1

r’’r’’ dcE/dcE Rh:-1,-2,3,4,-5 0.03

R0r Dce/dce Rh:1,-2,-3,4,5 2

R0R0 Dce/Dce Rh:1,-2,-3,4,5 0.1

ryr dCE/dce Rh:-1,2,3,4,5 Raro

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Fin década de los '80: Análisis de Genética Molecular: mRNAde una proteína del sistema Rh - cDNA sonda - Análisis de Southern Blotting en ADN de leucocitos de individuos Dccee y de individuos dccee.:

2 loci (2 genes): D, CcEe

Homología entre los 2 genes

Polimorfismo Rh+/Rh- debido a presencia / ausencia del gen D

Estudios comparados con primates: gen original CcEe; el D surge por duplicación.

Procesamiento alternativo ARN transcrito: posibilidad de aparición de mensajeros distintos para los antígenos C, c, E, e

Teoría Genética 1986: Tippet: 2 Genes estructurales

Gen RHD: presente o ausente

Gen RHCE: expresan 6 Proteínas

Análisis molecular: demuestran 2 genes Rh altamente

homólogos

Variantes RH, surgen procesos de mutación, desigual

crossing over, conversión gen, modifican proteínas e

interacción con otras.

Codifican 8 haplotipos: Dce, dce, DCe, dCe, DcE, dcE, DCE, and dCE, conocidos en la forma corta como R0, r, R1, r', R2, r”, Rz, y ry

TEORIAS DE LA HERENCIA

D, C, E, c, e

Ag

3 Gen

FISHER

Factores

Rh1, Rh2, Rho

Ag

1 Gen

WIENER

Prot.D, Prot CcEe

RHD, RHCE

2 gen

TIPPET

SISTEMA RH

ANTIGENOS DEL SISTEMA RH

Ag Públicos: Rh1, 2 ,3, 4, 5.. 6 (frecuente)

Ag Privados: solo en algunas personas

Rh8: Cw: mutación Gen C; menos del 2%

Mutaciones en menos del 1%

Rh 13, 14: Parte Ag D

Rh 25: Sistema LW

Existe el gen RHAG que codifica la Glicoproteína asociada al Rh (RhAG).

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Los procedimiento usados en el mapeo e

identificación de los Ag. de los GR son los

siguientes:

Inmunoprecipitación por Acs monoclonales

Solubilización de la MP por detergente do-decil-

sulfato de sodio

Electroforesis en gel de poliacrilamida

Resecado de gel y sometido a auto-radiografía

Radioinmunoensayo competitivo etc.

GENETICA MOLECULAR DEL SISTEMA RH

Proteína dependiente de fosfolípidos y grupos

sulfidrilos

Proteína Glicosilada no fosforilada

Proteína D: Ac Palmitico se fija tio-ester a grupos

sulfihidrilo (cysteina)

Se identificó y secuenció 417 aa del Gen Rh

Le Van Kim clonó el gen RHD y RHCE

36 aa difieren por substituciones

Se inicia N-terminal methionina: RNAm

Polipéptido Rh: 12 veces atraviesan la bicapa lipídica de la MP.

Hay 6 dominios extracelulares

Diferencia entre RHD y RHCE tan solo 44 pares de bases

Diferencia entre C y c 4 aa

Diferencia entre E y e 1 aa

Función en la membrana: desconocida

Deficiencia de fenotipo Rh: GR morfológica y funcionalmente anormales

Incremento de permeabilidad de cationes

Anormal organización de fosfolipidos, movíl.

Asociación GP, cambios transporte MC, transferencia cationes a través MC.

Asimetría es mantenida en parte, > fuerza

fluidos por fosfatidil-serina y etanolamina

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RH D

RHSC. RD

FY

CROMKN

Palmitate

TrysinLys 42, 43 Gly

Serina

103226

Alanina

D

NH2 (1) Tripsina COOH (417)

152169170172

223

233238

C-285

350

353354

Bromel / PapainaGly 353, 354 Ala

16

C-12

60

68

121

127128

C-195

183 198

201

245

263

267

306

311.

314

C-115

C-116 323325

327

329

330331

396

GENES y

PROTEINAS RH D

Número estimado de Antígenos Dpor G.R.

Fenotipo Sitios de D por célula (rango)

DCe/dce 9,900 – 14,600

DcE/dce 14,000 – 16,000

Dce/dce 12,000 – 20,000

DCe/DCe 14,500 – 19,300

DCe/DcE 23,000 – 31,000

DcE/DcE 15,800 – 33,300

D-- / D-- 110,000 – 202,000

Número de Ag c, e y E por célula(Hughes-Jones et al. 1971):

c: células cc, 70 000–85 000; Células cC, 37 000– 53 000;

células dce/dce 31,500; DcE/DcE, 24,000,

e: células ee, 18 200–24 000; Células eE, 13 400– 14 500;

células Dce/DCw, 20,000

E: 450–25 600, dependiendo de la fuente de anti-E y del fenotipo del GR. Células DcE/DcE, 27,500; en células DcE/dce 17,900

El ANTÍGENO D

Es el mas inmunógeno e importante

80% de Rh (-) si reciben Rh (+): Anti-D

Expresión del Ag D: variable de acuerdo a etnias

Variantes del antígenos D:

Antígeno D débil

Antígenos D parciales

Antígenos D deprimidos por efecto de posición “TRANS”

ANTIGENO D: TERMINOS

Ag D: normal

D Débil : cantidad reducida, calidad normal: Du

D Parcial: Cantidad normal, < epítopos normal

D Parcial Débil: menor cantidad D Parcial

Elevado D: incremento cantidad

ANTÍGENO D DEBILGenéricamente designado Du (Stratton )Expresión debilitada de D que reacciona de manera variable con diferentes antisueros comerciales (Du alto grado y bajo grado)No es detectado por técnicas de aglutinación directa (no por IgMsí por IgG con TCI) se detecta con el tratamiento enzimático de los GR ó con el test de Coombs indirecto.Detectado por técnicas enzimáticas ó por TCILos GR D débiles son hematíes D positivos con un número menor de lugares antigénicos en su membrana, deben ser consideradas como POSITIVOS (1,990)Los reactivos modernos (Ac monoclonales) detectan la mayoría de Ag D débilesProducen aloinmunización por transfusión ó feto maternaCualitativamente no es diferente. Menor número de sitios antigénicos

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ANTIGENO D D DEBIL : Du

ALTO GRADO

Detectados algunos anti.D

BAJO GRADO

Hereditario

No detectado Anti-D IgM y si por IgG-AGH

Obsoleto Du,> Negros

0.3 a 1.7% Londres

D DEBIL POR EFECTO

TRANS DE C

Alto grado Du

Fenotipo D y C

Envuelve complejo dCe

Hereditario

Delección

Detectados por elusión

Complejos dCe/D débil

D

C

e

d

ce

C en posición CIS

con respecto de D

D

c

e

d

Ce

C en posisición TRANS

con respecto de D

D deprimido

ANTIGENO PARCIAL D El Ag D contiene numerosos epítopos.

Los GR de algunos individuos D+ no expresan algunos de esos epítopos.

Si reciben GR D+, pueden formar Ac contra los epítopos D que les faltan.

Considerar RhD+ como donantes y RhD- como receptores.

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D PARCIAL Personas D(+) con Anti-D

Falta parte Mosaico D

Forman alo anti-D: contra epitopes faltantes

Presentes en GR Rh+, ausentes en Rh-

Salmon-Tippet: D parcial o Ag. D débil

Wiener: Rho Mosaico

RhA, RhB, RhC, RhD ,Du

Categorías D Parcial Tippet y Sanger: dividieron en VI Categorías (1,970)

Interacciones con Anti-D

Adicionó Categoría VII y I obsoleto

En 198O potentes Anti-D monoclonal contra 9 epitopos

(29 Acs)

18 Acs contra ep 6/7

Actualmente: Variantes de D parcial 30 epitopes ( por

estudios serológicos y biología molecular)

Categoría VI: epi3,4,9

Característica: falta de 1 ó más epD

epD 6/7 son mas inmunógenos

epD presentes en todas excepto en Categoria DVI

Categoria III a Y III c: tienen los 30 epitopes

Un anti D es una respuesta policlonal

epD1 epD2 epD3 epD4 epD5 epD6 epD7 epD8 epD9

II + + + - + + + + -

III a + + + + + + + + +

III c + + + + + + + + +

IV a ( Goa ) - - - + + + + + -

IV b - - - - + + + + -

V a ( Dw ) - + + + - + + + +

VI - - + + - - - - +

VII ( Tar ) + + + + + + + - +

DFR - - + + - - - - +

CategoriaEpitopes Presentes

Categorias de Antigenos D Parciales

POSITIVOS NEGATIVOS CAT. D PARCIALES

25 5 II

30 0 III a - IIIc

29 1 III b

20 10 IV a

19 11 IV b

22 8 V a

6 24 VI

27 3 VII

D parciales - 30 epítopos

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D VI

Epitopes D6 y D7 no presentes en DVI

Donantes: CONSIDERARLOS D+

Receptores: CONSIDERARLOS RH -

Tipificación de donantes: ANTI-D (DVI)

PACIENTES: NO NECESARIO

Antígeno D ParcialANTIGENO D DEPRIMIDO POR EFECTO DE

POSICION “TRANS” DEL ANTIGENO C

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Rh(D) –Normal Rh(D) – Fraco Rh(D) – parcial Rh(D) –parcial fraco

Normal Normal Variante Variante

Normal Reduzido Normal Reduzido

Legenda: Epítopo Antígeno

ALO ANTI-D (HUMANOS) Son IgG (IgM) (IgA)

IgG1, IgG3 (IgG4)

NO activan C’ sérico

Anti D, C, E, c, etc..

Mixturas

ANTI-D MONOCLONALES Hibridomas ratón

Hibridomas humanos

Contra 9 epitopos

Monoclonal y mezcla monoclonal: Suero

Rh

Minino 2 sueros Monoclonales

GENES y PROTEINAS RH CE

SC. RD

CROMKN

RH CE

RH

FY

Palmitate

TripsinaLys 42, 43 Gly

C/c (Ser/Pro)

103 226

E/e (Pro/Ala) CE

NH2 (1)Triysin ?

COOH (417)

.

RH1

D

RH2

C

RH3

E

RH4

C

RH5

e

RH6

f

RH7

Ce

RH8

CW

RH9

CX

RH10

V

RH11

EW

RH12

Gobs. obs. obs. obs.

RH17

Hro

RH18

Hr

RH19

hrS

RH20

VS

RH21

CG

RH22

CE

RH23

DWobs.

obs. RH26

c-like

RH27

cE

RH28

hrH

RH29

Rh total

RH30

Goa

RH31

hrB

RH32

RN

RH33

Har

RH34

HrB

RH35 RH36

Bea

RH37

Evansobs. RH39

J-S

RH40

Tar

RH41

Ce-like

RH42

Ces

RH43

Crawford

RH44

Nou

RH45

Riv

RH46

Sec

RH47

Dav

RH48

JAL

RH49

STEM

RH50

FPTT

RH51

MAR

RH52

BARC

RH53

JAHK

RH54

DAK

RH55

LOCR

RH56

CENR

Sistema Rh (ISBT: 004 - RH)

RH57CEST

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FENOTIPO RhPROTEÍNAS

PRESENTES

PESO

MOLECULAR

NÚMERO DE

AMINOÁCIDOS

Rh(D)

Positivo

Proteína D 32 kD 417

Proteína CcEe 34 kD 417

Rh(D)

NegativoProteína CcEe 34 kD 417

PROTEÍNAS Rh

1

5’

1 1010 1

RHD – RNAm RHCE – RNAm

Proteína RHD Proteína RHCE

(1558 NT)

Genes RHD e RHCE : 1p34.3 - 36.1

(417 AA)

(1558 NT)

(417 AA)

Caixa Rhesus

Caixa Rhesus

1 10

Gene RHD Gene RHCE10

SMP1

5’ 3’ 3’

P N

POSICIÓN DEL AMINOÁCIDO

C c E e

16 Cisteína Triptofano - -

60 Isoleucina Leucina - -

68 Serina Ac. Aspártico - -

103 Serina Prolina - -

226 - - Prolina Alanina

Diferencias estructurales entre (C, c) y (E, e)

ANTÍGENOS POSICIÓN AMINOÁCIDO

C - c 41 Glicina

Cw 41 Arginina

Diferencias Estruturales entre los Antígenos Cw, C, c

Cw: Willis, puede estar presente

independientemente de C y c

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USA Africanos Chinos

JaponesHNERM 2008

Fenotipo % % cantidad

D 82

88%95% >99% 97.5 36 619

d 15 2.5 36 619

C 70 65.2 551

E 30 63.8 2 416

c 80 76 765

e 98 83 80

Distribución de Grupos ABO y Rh Hospital Edgardo Rebagliati 1999

TOTAL %

O- 540 59

A- 254 27.7

B- 104 11.4

AB- 18 1.97

TOTAL %

0+ 25 011 68.3

O- 540 1.47

A+ 7 331 20

A- 254 0.69

B+ 2 893 7.9

B- 104 0.28

AB+ 468 1.28

AB- 18 0.05

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Anticuerpos del sistema Rh1. No ocurren em forma natural, existen ejemplos raros de Anti

RhE y rarisimos de Anti RhD naturales.

2. La mayoría es de clase IgG (principalmente IgG1 e IgG3) y

reactivos a 37ºC.

3. No son fijadores de complemento, mas producen hemólisis

extravascular severa.

4. Estan implicados en reacciones hemolíticas transfusionales y

enfermedad hemolíticas perinatal.

5. Pueden ocurrir como auto-anticuerpos (principalmente anti-

Rhe).

6. Indivíduos com fenótipos RhD-parciales pueden desarrollar

anti-RhD.

7. Raramente detectados en medio salino. Son mejor detectados en pruebas enzimáticas y com AGH (Coombs Indireto).

ANTICUERPOS DEL SISTEMA RH

SIGNIFICATIVO

CLÍNICAMENTE

CLASE DE

ANTICUERPO

RANGO

TÉRMICO EHRN

REACCIONES TRANSFUSIONALES

H. EXTRAVASCULAR H. INTRAVASCULAR

SÍ

4°C

37°C

RARA