REPORTE FINAL.doc

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INTEGRANTES: JUAN PABLO LEÓN HERRERA 201213715 KARLA NOEMI AJA VELASQUEZ 201213729 DULCE GUADALUPE UMAÑA REYES 201213770 UNIVERSIDAD SAN CARLOS DE GUATEMALA Facultad de Odontología Bioquímica Lic. Julio Turcios Segundo “A” Dìa de laboratorio: 29 de Abril 2014 Fecha de entrega de Reporte: 2 de CROMATOGRAFIA

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La cromatografa es una tcnica que permite separar, aislar e identificar los componentes de una mezcla de compuestos qumicos. La muestra es distribuida entre dos fases, una estacionaria y otra mvil, de tal forma que cada uno de los componentes de la mezcla es selectivamente retenido por la fase estacionaria. La separacin se lleva a efecto en una columna tubular rellena de un slido poroso finalmente dividido, el cual puede actuar como fase estacionaria propiamente dicha o como soporte de una fase estacionaria lquida. Tambin se puede efectuar utilizando como fase estacionaria papel de filtro o un slido finalmente dividido colocado en forma de capa fina sobre una placa de vidrio. De la combinacin de los distintos tipos de fases estacionarias y mviles, se pueden obtener varios tipos de Cromatografa. Estos tipos de cromatografa se basan en los mismos principios fundamentales, y se conocen respectivamente como cromatografa en columna, en papel y de capa fina.La cromatografa en papel es un proceso muy utilizado en los laboratorios para realizar unos anlisis cualitativos ya que pese a no ser una tcnica muy potente no requiere de ningn tipo de equipamiento. La fase estacionaria est constituida simplemente por una tira de papel filtro. La muestra se deposita en un extremo colocando pequeas gotas de la solucin y evaporando el disolvente. Luego el disolvente empleado como fase mvil se hace ascender por polaridad. En la cromatografa en columna, la fase mvil puede ser un lquido o un gas, y segn el caso se denomina respectivamente Cromatografa lquida y Cromatografa de gases, en este caso la cromatografa empleada fue la lquida. La Fase mvil fluye a travs del relleno de la columna, arrastrando los componentes de la mezcla, que son selectivamente retenidos por la fase estacionaria. El flujo de la fase mvil se mantiene constante a travs de todo el proceso y de esta manera se logra que cada componente de la mezcla sea eluido de la columna como un compuesto puro, disuelto en la fase mvil, a esta tcnica se le llama Cromatografa de elucin..Objetivos

Comprender que la cromatografa es un mtodo fsico que separa una mezcla de solutos basadas en desplazamientos.

Observar, comprender y poder interpretar, cmo se da la separacin de diferentes colores por medio de las tcnicas de cromatografa.

Conocer y aplicar la tcnica de cromatografa en capa fina, sus caractersticas y los factores que en ella intervienen.

Aprender a calcular valores de Rf de las sustancias. (aminocidos). Identificar aminocidos con Cromatografa en papel y determinar los tipos y cantidades de colores en colorantes con la Cromatografa lquida. Basndose en los resultados se determina que estas dos tcnicas son eficientes para estos procedimientos.HiptesisLa cromatografa en papel revela los componentes ms afines tanto a compuestos polares como apolares, quedando las ms polares cerca de donde se puso la muestra y las no polares lejos de donde se puso la muestra. Los colores en la cromatografa en columna, aparecern de acuerdo al peso de cada color, los colores clidos tendrn una reaccin ms pronta debido a su bajo peso y al volumen que stos tenan en la mezcla del colorante.

La cromatografa es una tcnica de separacin de sustancias que se basa en las diferentes velocidades con que son arrastradas cada una de ellas a travs de un medio poroso por un disolvente en movimiento; clasificndose en cromatografa de papel y columna, siendo esta una tcnica que se utiliza para el mtodo analtico en el cual se puede cualificar si estn presentes o no los colorantes y as mismo ver la capacidad de separacin de cada uno. Mediante la cromatografa en papel se realiz la preparacin de una fase mvil (mezcla de n-butanol, cido actico y agua) y una fase estacionaria donde se realiz la siembra de la muestra de distintos aminocidos con una diferencia de sus Rf.

CROMATOGRAFA EN PAPELSe observ que la cistena se alej 3.3 del punto de donde se sembr la muestra y su matiz era ms suave. (Morado claro) .

cido glutmico, tuvo un desplazamiento 3.3 igual al de cistena pero mayor, su tonalidad era ms oscura. (Morado)

La Glutamina tuvo un desplazamiento de 3.2 menor al de la cistena y al cido glutmico, presentando su tonalidad ms oscura (morado intenso).

La muestra de orina,tuvo un desplazamiento de 3.8, este fue mayor al hacer la comparacin con las dems muestras y su tonalidad ms clara. (Lila)

Cromatografa en ColumnaLos colores obtenidos en la primer columna fueron reaccionando conforme el tiempo; siendo el primero el color rojo, minutos despus el azul, luego el amarillo y, por ltimo el lila en menor cantidad.

En la muestra con el agua carbonatada color azul, los colores reaccionaron lentamente, obteniendo como nico resultado un color verde menta.

CROMATOGRAFA EN PAPELComo se observ en los resultados de cromatografa, la cistena y el cido glutmico se desplazaron la misma longitud 3.3 cm;la glutamina a una distancia de 3.2cm;la muestra de orina 3.8cm, y una lnea de eluyente de 4.4cm

Esto datos permiten realizar una comparacin de los aminocidos, y obtener los siguientes resultados:

La cmara contena una solucin de n-butanol, cido actico y agua; esta diversidad de compuestos que se encuentran en el eluyente permite que las muestras se desplacen ms hacia el eluyente con el que presentan mayor atraccin; el cido glutmico y la cistena presentan ms afinidad a compuestos polares, por lo que stos tuvieron poco desplazamiento ya que presentaban una mayor atraccin al compuesto polar (agua) el cual se encontraba en la base de la cmara, y esto hacia su desplazamiento ms lento, por esta razn presentaron un Rf: 0.75, este Rf es mayor en comparacin con el otro aminocido (glutamina) y, es menor en comparacin con la muestra de orina que presentaban Rf ms alto.

La glutamina presentaba ms atraccin hacia el compuesto polar (agua) que los aminocidos anteriores porque ste tiene mayor afinidad hacia el compuesto polar y por lo tanto su movimiento es ms lento, obteniendo un Rf: 0.7272, que nos indica que tiene una mayor retencin hacia el agua, en comparacin con la muestra de orina que presenta menos atraccin hacia compuestos polares y por lo tanto tienen un desplazamiento mayor acercndose ms a la lnea final del eluyente. El cido actico es voltil, yel n butanol es un gas, por lo que lo hace de igual forma.La muestra de orina obtuvo un Rf: 0.8636 ya que present una menor retencin hacia compuestos polares con un desplazamiento ms rpido.La ninhidrina es un compuesto que revela aminocidos primarios, a travs del color morado. Y la prolina, aminocido secundario, de color amarillo,

Los resultados de los colores de los tres aminocidos y de la orina se obtuvieron en base a la concentracin de aminocidos y de la ninhidrina.

Por lo tanto se obtuvo los siguientes resultados:

La cistena al estar en una solucin en contacto con agua puede romper sus enlaces de hidrgeno y unirse a otra cistena por medio de un enlace de disulfuro, Creando a la cistina, por esta razn la coloracin en esta muestra fue un poco ms dbil que en la de los aminocidos (glutamato y glutamina) ya que la ninhidrina slo puede revelar aminocidos primarios y la cistina no es uno de ellos , por tal razn hubo menor cantidad de cistena en esta muestra y la coloracin se torn ms dbil.

En la muestra de orina se obtuvo pocos aminocidos porque hubo poca cantidad de protenas y baja concentracin de aminocidos y por lo tanto tuvo una coloracin lila.

Cromatografa en Columna Muestra No.1

Al finalizar de construir la fase estacionaria de la cromatografa en columna, que consta de una jeringa, algodn utilizado como tapn y bicarbonato de sodio humedecido con hexano se pudo apreciar que el hexano pasaba libremente a travs de la fase estacionaria siendo inmiscible con los dems componentes ya que este es un alcano apolar. Despus de agregar el colorante el cual era un compuesto polar, los colores comenzaron a reaccionar al pasar cierto tiempo. Siendo el primero en reaccionar el color rojo, seguido de azul, amarillo y lila; esto fue debido a la concentracin y volumen alto de los colores mezclados en el colorante utilizado. El color acta por gravitacin y extensin de una superficie cromtica. Los tonos fros (azul, verde y violeta) parecen ms livianos y menos sustanciales; los clidos (rojo, amarillo y anaranjado) parecen ms pesados y densos. (5) El mecanismo de separacin de la cromatografa lquido- slido, o de adsorcin, se basa en la competencia que existe entre las molculas de la muestra y las de la fase mvil o disolvente por ocupar los sitios activos en la superficie de un slido. Algunos de los slidos utilizados con ms frecuencia son: almina, gel de slice y bicarbonato de sodio. (6) El material empleado para esta tcnica fue el Bicarbonato de sodio, que acta como un adsorbente para la separacin de mezclas (colorante). (7) El hexano es un lquido incoloro, insoluble en agua, que se emple como eluyente para la fase mvil; debido a que es apolar mantiene as hmedo el adsorbente y un flujo continuo de colorantes a travs de la columna.

Muestra No. 2

Se utiliz el mismo procedimiento que en la muestra nmero uno, la diferencia en este caso fue que se evalu una agua carbonatada color azul.

Los colores observados en la columna fueron el color azul del agua carbonatada y por consiguiente un color verde menta. El color azul por ser un color primario no reaccionaron ms colores, solo el verde ligeramente por estar cerca del azul en la gama de colores.

La cromatografa en columna, permite usar una gran cantidad de la sustancias permitiendo la separacin de colores; y la cromatografa en papel permite realizar separaciones mltiples, al mismo tiempo, y someterlas al mismo procedimiento separativo.

El hexano es un compuesto polar que al utilizarlo en la cromatografa en columna, su funcin es eluir las sustancias no polares, mientras que las polares quedan adheridas a la matriz de la columna, es decir al bicarbonato;

Los colores fros reaccionan con ms facilidad que los clidos segn la teoria, no siendo as en nuestro laboratorio, ya que se obtuvo lo contrario debido al peso y volumen utilizado.

La cromatografa en papel se emplea para verificar si en una solucin se encuentran aminocidos, por medio de la ninhidrina la cual identifica a los aminocidos estndares primarios, que son todos los que forman protenas con excepcin de la prolina.

Los aminocidos cistena y el cido glutmico en una cromatografa en papel tienden a quedarse ms cerca del origen de su siembra porque tienen afinidad ms hacia el agua, y stos poseen carga, por lo cual tienden a estar ms cerca de los compuestos polares.

En la Cromatografa en columna se pudo determinar que la aparicin ordenada de cada uno de los colores al agregar los colorantes aparecieron primero los que estn en menor concentracin y despus los de mayor peso, siendo estos los que se encontraban en mayor concentracin en el colorante inicial.

El Bicarbonato de Sodio permiti adsorber los colorantes, por lo que es un buen medio de adsorcin en la tcnica de la Cromatografa en columna. El bicarbonato mantiene el color en la capa externa, ya que solo adsorbe y no se disuelve.

El color verde menta que reaccion en la muestra dos de cromatografa en columna, fue porque el color azul del agua usada como muestra es un color primario y no puede descomponerse en ms colores.

Todos los grupos deberan contar con sus propias soluciones y reactivos, evitando as un desorden en el laboratorio. Mantener los reactivos que son muy voltiles ms alejados del laboratorio, porque algunos compaeros presentaron molestias. Un laboratorio de cromatografa de gases ampliar ms el conocimiento de las tcnicas de cromatografa. Utilizar muestras de aminocidos para identificarlos con la tcnica de cromatografa en columna para poder determinar comparaciones con cromatografa en papel.

Miguel Angel Toledo. (2005). McGraw-Hill Biologa Celular y Molecular. pp 810-814

Thornton, R. (1998). Qumica orgnica. 5ta ed. Mxico. Editorial Pearson .pp 1335-1338Varcarcel M. (1988) Tcnicas Analticas de Separacin. Editorial Reverte Espaa. Pp 677-698

Pickering W. F. (1980) Qumica Analtica Moderna. Editorial Reverte Espaa pp 567-569

(5) Color. Teora del Color, Qu es el color? (En lnea). Consultado el 30 de abril de 2014. Disponible en : http://sapp.uv.mx/univirtual/cursos/AFEL/Intersemestral/IDG/docs/IDG10_1.pdf(6) McNair, H; y Esquivel B. Cromatografa Lquida de Alta Presin. Cromatografa Lquido-Slido. Washington, DC. pp. 7(7) Parker, S. Diccionario McGraw-Hill de Qumica. Trad.McGraw-Hill.pp.21, 107.

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UNIVERSIDAD SAN CARLOS DE GUATEMALA

Facultad de Odontologa

Bioqumica

Lic. Julio Turcios

Segundo A

Da de laboratorio: 29 de Abril 2014

Fecha de entrega de Reporte: 2 de mayo de 2014

INTEGRANTES:

JUAN PABLOLEN HERRERA 201213715

KARLA NOEMI AJA VELASQUEZ 201213729

DULCE GUADALUPE UMAA REYES 201213770

ALAN DAVID GIRON MATAS 201213798

KEVIN OTONIEL CRISTAL GUITZ 201220072

DEBBIE LIQUIDANO FLORES 201224177

CROMATOGRAFIA

Introduccin

Resumen

Resultados

Discusin de Resultados

Conclusiones

Recomendaciones

Referencias

ANEXOS