Practica 1. Antibiograma Submod Iiii Mod III

5/16/2018 Practica 1. Antibiograma Submod Iiii Mod III - slidepdf.com

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PRÁCTICA # 1. ANTIBIOGRAMA

INTRODUCCIÓN

Un antibiograma es una prueba microbiológica de sensibilidad a antibióticos. Las técnicas antibiograma son utilizadas en el laboratorio de microbiología para estudiar la actividad de lantimicrobianos frente a los microorganismos responsables de infecciones. Nos permiten conocerresistencia de los microorganismos estudiados frente a estos agentes, en base a esto microbiólogo puede determinar la concentración mínima necesaria del antibiótico para inhibir(MIC) o inclusive para eliminarlos (CBM).

El antibiograma tiene cuatro utilidades principales:

• La utilidad básica del antibiograma es la instauración de un tratamiento antibiótico correctopaciente. Es necesario conocer si el microorganismo responsable de la infección posee mecanismque le confieran inmunidad frente a algún antibiótico para no incluirlo como terapia.

• En cuanto al tratamiento el antibiograma no sólo es necesario en la instauración, tambiresulta útil en el seguimiento e incluso en la confirmación de tratamientos empíricos. En ocasionesenfermedad infecciosa resulta grave y se comienza el tratamiento antes de conocer los datos

sensibilidad de la cepa. El antibiograma tiene que confirmar, o en su caso corregir el tratamiento.• Otra aplicación de las técnicas de estudio de resistencia es la epidemiología. Es necesadetectar el aumento de los niveles de resistencia en los aislamientos clínicos para tomar medidcorrectoras.

• Por otro lado también puede tener utilidad diagnóstica porque el perfil de resistencia puede algún caso orientar en la identificación bacteriana.

TÉCNICAS PARA REALIZAR LAS PRUEBAS DE SENSIBILIDADSensibilidad por dilución en tubo

Es una técnica turbidimétrica en la cual, se colocan concentraciones decrecientes del agenantimicrobiano hasta obtener las concentraciones apropiadas (0.1 a 128 mg/ml ); generalmenmediante diluciones dobles, en tubos con un caldo de cultivo que sostendrá el desarrollo dmicroorganismo previamente estandarizado al 0.5 del Nefelómetro de MacFarland.El caldo más comúnmente usado para estas pruebas es el de Müeller-Hinton.

Método de Kirby-Bauer

También conocida como técnica de difusión en agar. Permite realizar fácilmente pruebas sensibilidad de un microorganismo frente a múltiples antibióticos a la vez.El microorganismo a investigar se inocula en una o varias placas de agar y sobre su superficie

disponen los discos (sensidiscos o multidiscos) correspondientes a varios antibióticos con uconcentración conocida. Se incuban las placas durante 18 - 24 horas a 37ºC y al cabo de estiempo se estudia el crecimiento en ellas.

A medida que aumenta la distancia desde el disco, disminuye la concentración del antibiótico y sólos patógenos más sensibles resultan dañados. Si el agente inhibe el crecimiento bacteriano forma un halo claro alrededor del disco. El diámetro del halo está dado en función de

M en C. María de la Luz Navarro Montes de Oca PáginaSubmódulo III: Practica y Aplica Análisis Microbiológicos…./ Módulo III: Opera instrumentos y equipos……...Carrera Técnico Laboratorista Químico Clínico CBT Tequixquiac20 de Enero del 2012.



concentración inicial del antibiótico, de su solubilidad y de su tasa de difusión. Por lo anterior no conveniente comparar directamente la eficacia de dos antibióticos diferentes y es necesario recua tablas.

Para un determinado antibiótico, una cepa bacteriana puede ser:1. Sensible, si existe una buena probabilidad de éxito terapéutico en el caso de un tratamient

la dosis habitual.2. Resistente, si la probabilidad de éxito terapéutico es nula o muy reducida.

3. Intermedia, cuando el éxito terapéutico es imprevisible.

Método de E-TEST

Es uno de los métodos más recientes y se trata de una técnica cuantitativa en placa que permobtener una lectura directa de CMI en µg/ml, ya que se emplean tiras plásticas impregnadas concentraciones crecientes de antibiótico indicadas en una escala graduada sobre la propia tira.El microorganismo a investigar se inocula en una placa y sobre ella se deposita la tira del antibiót(o antibióticos) a ensayar. Tras la incubación de 18 - 24 horas a 37ºC se observan las placas y valora la zona de inhibición, de forma elíptica, alrededor de cada tira. La CMI se lee directamenobservando el punto más bajo de la elipse que presente crecimiento.

Métodos automatizadosLa mayoría de estos métodos utilizan sistemas de microdilución en medio líquido sobre microplaccon pocillos en "U" e interpretan el crecimiento bacteriano por medio de un autoanalizad(mediciones por turbidez o fluorescencia) o, en el caso de los sistemas más sencillos, por simplectura óptica a través de un visor invertido de espejo.

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Su manipulación suele ser fácil y rápida, generalmente automatizada o semiautomatizada, lo que convierte en métodos ideales para grandes volúmenes de trabajo. Una de sus grandes limitaciones que sólo ofrecen garantía para investigar microorganismos de crecimiento rápido y que no tengrequerimientos especiales.

CONDICIONES PARA LAS PRUEBAS DE SENSIBILIDAD

Se debe tener cuidado en:a) La densidad del inoculo, el tiempo y la temperatura de incubación, asi como en el medio y

contenido iónico. b) Se deben estandarizar todas las variables antes de trabajar con la muestra a estudiar y d

resultados.

OBJETIVO

• Realizar un antibiograma para un determinado microorganismo mediante el método de KirBauer para determinar la eficacia de cada antibiótico con ayuda de tablas.

MATERIALES:

EQUIPOEstufa bacteriológicaTubo 0.5 del Nefelómetro de MacFarland.

MEDIOS DE CULTIVOCajas de Agar Müeller - HintonTubos con SSF estérilMatraces con SSF estéril

REACTIVOSMutidiscos impregnados con antibióticos combinados (para gram (-) y para gram (+))

OTROSHisopos estériles

Asas bacteriológicasPinzas de disección sin dientes de ratónTablas de sensibilidad a antibióticos

CEPAS BACTERIANASStaphylococcus aureus

Escherichia coli Pseudomonas spp


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