Antibiograma Bacterio práctica

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Los antibiogramas o antibioticograma, son métodos de laboratorio que estudian la sensibilidad de un microorganismo a la acción de los ANTIBIOTICOS. El término sensible es muy usado como sinónimo de susceptible. Susceptible significa que un microorganismo es inhibido o muerto en las pruebas in vitro por una concentración del antibiótico accesible en la sangre, cuando ese mismo antibiótico se utiliza in vivo.


Un "ANTIBIOGRAMA" consiste en poner en contacto al germen que hemos cultivado con distintos antibióticos para ver cual de ellos es el que mejor va como tratamiento.


-Medir la sensibilidad de una cepa -Medir la sensibilidad de una cepa bacteriana que se sospecha que es bacteriana que se sospecha que es la responsable de una infección.la responsable de una infección.

-Seguir la evolución de las -Seguir la evolución de las resistencias bacterianas.resistencias bacterianas.

OBJETIVOS:OBJETIVOS:


¿CUANDO DEBEMOS SOLICITAR UN ANTIBIOGRAMA?

A) El microorganismo aislado, causante de la patología, no es uniforme en su comportamiento frente a los antibióticos usuales; es decir, cuando la bacteria es de un tipo frecuentemente resistente a los antimicrobianos. Ejemplo: bacilos Gram (-), Mycobacterium tuberculosis.

B) En infecciones microbianas graves que comprometen seriamente la salud del paciente; es decir, cuando es probable que el proceso infeccioso sea mortal, a menos que sea tratado en forma específica, por ejemplo: endocarditis, absceso cerebral, septicemias, osteomielitis.

C) Si se desconoce la susceptibilidad del microorganismo aislado a los antibióticos de uso frecuente.


¿TIPOS DE ANTIBIOGRAMA?¿TIPOS DE ANTIBIOGRAMA? Según las necesidades respiratorias de los Según las necesidades respiratorias de los

microorganismos se pueden realizar dos tipos de microorganismos se pueden realizar dos tipos de estudios, como son: estudios, como son: el antibiograma para gérmenes el antibiograma para gérmenes aeróbicos y el antibiograma para gérmenes anaerobios.aeróbicos y el antibiograma para gérmenes anaerobios.

El antibiograma para gérmenes aeróbicos son los únicos El antibiograma para gérmenes aeróbicos son los únicos que se realizan en forma sistemática en muchos que se realizan en forma sistemática en muchos laboratorios.laboratorios.

El antibiograma es una prueba que se utiliza para medir El antibiograma es una prueba que se utiliza para medir

la susceptibilidad de los microorganismos en presencia la susceptibilidad de los microorganismos en presencia de sustancias antibióticas. Esta capacidad puede ser de sustancias antibióticas. Esta capacidad puede ser estimada ya sea, por el método de dilución o de estimada ya sea, por el método de dilución o de difusión.difusión.


REQUISITOS QUE DEBE REUNIR UN ANTIBIOGRAMA:

Debe ser de amplio espectro nutritivo, para que permita el crecimiento de la mayoría de microorganismos.

Debe tener un pH estable (7,2 - 7,4) y no sufrir oscilaciones por acción de los microorganismos sobre los componentes del medio; la acidez favorece la actividad de beta-lactámicos, tetraciclina, y novobiocina; y la alcalinidad la de los aminoglucósidos y macrólidos.

-No debe contener inhibidores de antimicrobianos como son peptonas, sales de Ca++ y Mg++, o cualquier otro antagonista por competencia.


Las pruebas de susceptibilidad pueden clasificarse en:

PRUEBAS CUANTITATIVAS (DILUCION)

PRUEBAS CUALITATIVAS (DIFUSION)


La Dilución en agar La Dilución en agar es considerado el método de es considerado el método de referencia. en este método, las placas contienen, una referencia. en este método, las placas contienen, una determinada concentración de un antibiótico y son determinada concentración de un antibiótico y son inoculadas con el microorganismo en estudio y luego inoculadas con el microorganismo en estudio y luego incubadas por 16 a 18 horas. Después de la incubadas por 16 a 18 horas. Después de la incubación, se examina si el organismo crece o no en incubación, se examina si el organismo crece o no en cada una de las placas, con lo cual se determina la cada una de las placas, con lo cual se determina la concentración inhibitoria mínima (CIM) para el concentración inhibitoria mínima (CIM) para el antibiótico. antibiótico.

MIC (Concentración Mínima Inhibitoria).-MIC (Concentración Mínima Inhibitoria).- Es la Es la concentración más baja que inhibe el desarrollo de las concentración más baja que inhibe el desarrollo de las bacterias después de la incubación nocturna. El valor bacterias después de la incubación nocturna. El valor MIC es entonces comparado con las concentraciones MIC es entonces comparado con las concentraciones conocidas de la droga obtenidas del suero del conocidas de la droga obtenidas del suero del paciente o de los fluidos orgánicos del mismo, para en paciente o de los fluidos orgánicos del mismo, para en esta forma sentar la respuesta clínica probable.esta forma sentar la respuesta clínica probable.


En los métodos de dilución en caldo, base de casi todos los métodos utilizados en la actualidad, se colocan concentraciones decrecientes del agente antimicrobiano, generalmente diluciones 1:2, en tubos con un caldo de cultivo que sostendrá el desarrollo del microorganismo. El caldo más comúnmente usado para estas pruebas es el de Mueller-Hinton suplementado con los cationes magnesio y calcio.


Sobre el agar uniformemente sembrado con el Sobre el agar uniformemente sembrado con el organismo de ensayo, se colocan discos de papel organismo de ensayo, se colocan discos de papel filtro impregnado de antibiótico.filtro impregnado de antibiótico.

Por difusión se forma un gradiente de Por difusión se forma un gradiente de concentración del antibiótico desde el disco hacia concentración del antibiótico desde el disco hacia la periferia y el desarrollo de microorganismos es la periferia y el desarrollo de microorganismos es inhibido a cierta distancia del disco cuyo diámetro inhibido a cierta distancia del disco cuyo diámetro está relacionado, entre otros factores, a la mayor está relacionado, entre otros factores, a la mayor susceptibilidad del microorganismosusceptibilidad del microorganismo


•Es el método de difusión en discos, y se lo ha catalogado como un método de referencia en la susceptibilidad antimicrobiana y podrá ser utilizado como una técnica rutinaria en el laboratorio. Este método es apropiado particularmente en pruebas con bacterias de la familia Enterobacteriaceae, pero puede ser también recomendado como un método general para todos los patógenos de crecimiento fácil y rápido, exceptuando los anaerobios estrictos.


Interpretación: En éste método la interpretación de los resultados está basado sobre la relación entre la concentración inhibitoria mínima (MCI) y el diámetro de la zona de inhibición

El sistema más simple comprende solamente dos categorías susceptibles y resistentes, ésta clasificación aunque ofrece muchas ventajas para los propósitos estadísticos epidemiológicos es demasiado inflexible para la utilización del clínico. En el método de Kirby Bauer modificado se reconocen tres categorías de susceptibilidad que son sensible, resistente e intermedio


Cuando se prepara él inoculo a partir de un Cuando se prepara él inoculo a partir de un cultivo primario, se tocan con el asa de cultivo primario, se tocan con el asa de inoculación 4 o 5 colonias bien aisladas y de inoculación 4 o 5 colonias bien aisladas y de apariencia morfológica idéntica. Este apariencia morfológica idéntica. Este crecimiento se transfiere a un tubo con caldo crecimiento se transfiere a un tubo con caldo nutritivo o caldo de Muller Hinton.nutritivo o caldo de Muller Hinton.

Se incuba de 2 a 5 horas en general a una Se incuba de 2 a 5 horas en general a una temperatura de 35°C, luego se hace una temperatura de 35°C, luego se hace una comparación del caldo cultivado con el comparación del caldo cultivado con el nefelómetro, se ajusta la turbidez del caldo nefelómetro, se ajusta la turbidez del caldo diluyéndolo con caldo estéril o solución salina diluyéndolo con caldo estéril o solución salina estéril, este ajuste es necesario para asegurar estéril, este ajuste es necesario para asegurar el desarrollo resultante sea confluente.el desarrollo resultante sea confluente.


--Las cajas son inoculadas mojando la Las cajas son inoculadas mojando la torunda estéril en él inoculo (ésta torunda torunda estéril en él inoculo (ésta torunda debe ser de madera), desechar el exceso debe ser de madera), desechar el exceso de caldo por presión y rotación de la de caldo por presión y rotación de la torunda contra las paredes del tubo.torunda contra las paredes del tubo.

- - Extender entonces él inoculo sobre el Extender entonces él inoculo sobre el agar, debe pasar la torunda 2 a 3 veces agar, debe pasar la torunda 2 a 3 veces sobre la superficie del medio, girando sobre la superficie del medio, girando cada vez la caja 60 grados, para asegurar cada vez la caja 60 grados, para asegurar una siembra uniforme.una siembra uniforme.


-Dejar secar la caja sin sobrepasar los 15 -Dejar secar la caja sin sobrepasar los 15 minutos antes de aplicar los discos.minutos antes de aplicar los discos.

--La caja debe ser colocada en el La caja debe ser colocada en el incubador a 35°C, dentro de los 30 incubador a 35°C, dentro de los 30 minutos posteriores a su preparación.minutos posteriores a su preparación.

--Después de la incubación se mide el Después de la incubación se mide el diámetro de cada zona de inhibición, diámetro de cada zona de inhibición, anotándolo en mm.anotándolo en mm.


Existen diversos factores técnicos que influirán en el tamaño de la zona de inhibición, entre los cuales tenemos:

Densidad del inóculo.

Tiempo de espera para la aplicación de disco

Temperatura de incubación

Tamaño de las cajas, fondo del agar y espacio entre discos

Potencia de los discos de antibióticos


Zona De InhibiciónZona De Inhibición.- .- Se considera así al círculo Se considera así al círculo alrededor del disco en el que hay ausencia total alrededor del disco en el que hay ausencia total de crecimiento bacteriano.de crecimiento bacteriano.

Lectura.-Lectura.- Hay algunas formas de interpretar las Hay algunas formas de interpretar las zonas de inhibición, las más comunes son:zonas de inhibición, las más comunes son:

Usando una reglaUsando una regla; ; en éste caso la zona de en éste caso la zona de inhibición son medidas en mm, y los diámetros inhibición son medidas en mm, y los diámetros son interpretados de acuerdo al antibiótico y su son interpretados de acuerdo al antibiótico y su concentración en mg.concentración en mg.

La tendencia actual; es la de que los técnicos La tendencia actual; es la de que los técnicos hagan interpretaciones binarias es decir, hagan interpretaciones binarias es decir, sensible o resistente, quedando incluida la sensible o resistente, quedando incluida la respuesta intermedia en la resistente.respuesta intermedia en la resistente.


Sensible.-Sensible.- Un microorganismo es llamado sensible a un Un microorganismo es llamado sensible a un antimicrobiano cuando la infección causada por él es antimicrobiano cuando la infección causada por él es probable que responda favorablemente al tratamiento con probable que responda favorablemente al tratamiento con éste agente a las dosis usuales recomendadas.éste agente a las dosis usuales recomendadas.

Intermedia.-Intermedia.- Cuando la infección es probable que responda Cuando la infección es probable que responda favorablemente el tratamiento a dosis inusualmente altas del favorablemente el tratamiento a dosis inusualmente altas del antimicrobiano.antimicrobiano.

Resistente.-Resistente.- Es término que implica la expectativa de que el Es término que implica la expectativa de que el microorganismo no responda a una droga dada, microorganismo no responda a una droga dada, independientemente de la dosis y localización de la infección.independientemente de la dosis y localización de la infección.

La última decisión para usar un antibiótico en particular y la La última decisión para usar un antibiótico en particular y la dosis a ser administrada dependerán no solamente del dosis a ser administrada dependerán no solamente del resultado de la prueba de susceptibilidad, sino también de su resultado de la prueba de susceptibilidad, sino también de su interpretacióninterpretación..


Resistente:Resistente:Sensible:Sensible:

Intermedia:Intermedia:Intermedia:Intermedia:

Sensible:Sensible:

RESISTENTERESISTENTE


MÉTODO DE E-TESTMÉTODO DE E-TEST Es uno de los métodos más Es uno de los métodos más

recientes que se han recientes que se han presentado en el mercado y presentado en el mercado y resulta de una curiosa resulta de una curiosa combinación de características combinación de características de los métodos anteriores. de los métodos anteriores.

Se trata de una técnica Se trata de una técnica cuantitativa en placa que cuantitativa en placa que permite obtener una lectura permite obtener una lectura directa de CMI en µg/ml, ya que directa de CMI en µg/ml, ya que se emplean tiras plásticas se emplean tiras plásticas impregnadas en impregnadas en concentraciones crecientes de concentraciones crecientes de antibiótico indicadas en una antibiótico indicadas en una escala graduada sobre la escala graduada sobre la propia tira. propia tira.

El microorganismo a investigar El microorganismo a investigar se inocula en una placa y se inocula en una placa y sobre ella se deposita la tira sobre ella se deposita la tira del antibiótico (o antibióticos) a del antibiótico (o antibióticos) a ensayarensayar

Tras la incubación de 16-24 Tras la incubación de 16-24 horas a 35ºC se observan las horas a 35ºC se observan las placas y se valora la zona de placas y se valora la zona de inhibición, inhibición, de forma elíptica, de forma elíptica, alrededor de cada tira. alrededor de cada tira.

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MÉTODOS AUTOMATIZADOSMÉTODOS AUTOMATIZADOS Estos novedosos métodos Estos novedosos métodos

utilizan sistemas de micro utilizan sistemas de micro dilución en medio líquido dilución en medio líquido sobre microplacas con sobre microplacas con pocillos en "U“.pocillos en "U“.

Interpretan el crecimiento Interpretan el crecimiento bacteriano en los diferentes bacteriano en los diferentes pocillos por medio de un pocillos por medio de un autoanalizador.autoanalizador.

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