Antibiograma

• Antibiograma: son métodos in Vitro que determinan la susceptibilidad de los microorganismos a una variedad de agentes antimicrobianos, bajo condiciones de laboratorio específica y estandarizada.

SENSIBLE RESISTENTE

ANTIBIOGRAMA

Establecer planes terapéuticos individuales

Elaborar programas orientados

al uso racional de AB´S

OBJETIVOS

MÉTODOS - ANTIBIOGRAMAMÉTODOS

CUANTITATIVO

(Método de dilución)

CUALITATIVO

(Método de difusión en agar)

La sensibilidad de un ATB está dada por:

CIM(Concentración

Inhibitoria Mínima)

CBM(Concentración

Bactericida Mínima)

Interpretación del Antibiograma–La interpretación de los resultados obtenidos permite

clasificar a los microorganismos en categorías clínicas: sensibles, intermedios o resistentes. C.I.M: concentración mínima inhibitoria representa la mínima cantidad de antimicrobiano capaz de inhibir el crecimiento de un microorganismo.

C.M.B: concentración mínima bactericida concentración mínima que mata el microorganismo.

Utilidad de Antibiograma

• Terapia Antimicrobiana dirigida• Conocer el fenotipo de

sensibilidad de un microorganismo.

• Perfil epidemiológico institucional• Seguimiento y análisis de brotes

Interpretación1. Identificación del microorganismo (a nivel

de especie)2. Análisis de fenotipo: susceptibilidad /

Resistencia1. Grupos (familias) de agentes

antimicrobianos2. Indicadores de resistencia a los

antimicrobianos3. Definir Fenotipo

1. Fenotipos comunes2. Fenotipos inusuales3. Fenotipos "Imposibles”

4. Deducir mecanismos bioquímicos de resistencia

5. Importancia clínica de la resistencia inferirse

6. Redefinir Categorías de identificación clínica

MÉTODO DE DILUCION

• Consiste en determinar el crecimiento de una bacteria en presencia de concentraciones decrecientes de un mismo antibiótico.

• Se observa el crecimiento de los microorganismos mediante la aparición de turbidez

Técnica de referencia en la mayoría de los estudios clínicos de susceptibilidad a antimicrobianos.Entrega un resultado cuantitativo, ya que permite determinar la concentración inhibitoria mínima (CIM).Se puede realizar en medio líquido (dilución en caldo) o en medio sólido (dilución en agar).Método complejo y de alto costo.

Dilución seriada en caldo

Lectura del CIM

CIM

Antibiograma por dilución…

Método de Difusiòn en Disco (Baeur-Kirby)

• Es el mas difundido.• Prueba la inhibición o resistencia de los microorganismos,

enfrentándolos con los medicamentos que se encuentran impregnados en pequeños discos.

Es el método más usado…

Es práctico y sencillo de realizar e implementar…

Permite analizar un gran número de antibióticos al mismo tiempo y bajo las mismas condiciones…

Entrega un resultado cualitativo… (bacteria sensible o resistente)

Antibiograma por difusión…

“(Técnica de Kirby-Bauer)”

Resistente(No hay halo de

inhibición)

Análisis de varios antibióticos en

un mismo ensayo

Sensible(Presencia de halos

de inhibición)

Antibiograma por difusión…

“(Técnica de Kirby-Bauer)”

Medio de cultivo utilizadoMueller Hinton• Su reproducibilidad aceptable. • Baja concentración de

inhibidores, condición crítica para evaluar sulfonamidas, trimetoprim y tetraciclina.

• El crecimiento satisfactorio de patógenos no exigentes.

• Existir ya gran experiencia en estudios de susceptibilidad.

Factores que influyen en el Agar

pH: El rango de pH va de 7,2 a 7,4. variación de cationes divalentes: Ca y Mg: Afectan los halos de inhibición para aminoglucósidos

y tetraciclinas en Pseudomonas aeruginosa. Profundidad del Agar: La profundidad recomendada de

la capa de agar es de 3 a 5 mm.

pH del medio de cultivo: algunos antibióticos son activos a pH ácido (nitrofurantoína) y otros lo son a pH alcalino (aminoglucósidos).

Componentes del medio de cultivo: pueden antagonizar al antibiótico (extracto de levadura antagoniza a sulfonamidas).Estabilidad del medicamento: algunos antibióticos se inactivan a la temperatura de cultivo (clortetraciclina, en menor grado penicilina)Tamaño del inóculo: si hay muchas bacterias, la susceptibilidad es menor y pueden aparecer mutantes resistentes.

Tiempo de incubación: si es muy breve los m.o. no mueren; si es muy largo, pueden aparecer mutantes resistentes o inactivarse el medicamento.

Factores que afectan la actividad antibacteriana “in vitro”…

PREPARACIÓN DEL INÓCULO Y ESTANDARIZACIÓN DE LA SUSPENSIÓN

• En ambos métodos, la turbidez de la suspensión debe ser

estandarizada al estándar 0,5 de McFarland (que corresponde a

aproximadamente 1,5 X 10 -8 CFU/ml).

PREPARACIÓN DEL INÓCULO

Suspensión directa de las colonias

Fase logarítmica de crecimiento

Preparación del Inóculo

Se prepara el inóculo con ajuste a la turbidez McFarland 0,5 que corresponde aun diámetro de1.5 x10 UFC/ML, directo en caldo de colonias frescas en agar no selectivo.

SUSPENSIÓN DIRECTA DE LAS COLONIAS

• Se trabaja con cultivos jóvenes.

• En esta técnica se estandariza el inóculo al mismo tiempo que se

prepara la suspensión.

3 A 5 COLONIAS SS ó CALDO COMÚN

AJUSTAR TURBIDEZ0,5 ESCALA DE McFARLAND

ESTABILIZAR 15 MIN.

FASE LOGARÍTMICA DE CRECIMIENTO

• Se usa para la mayoría de microorganismos de rápido crecimiento.

3 A 5 COLONIAS SS ó CALDO COMÚN

INCUBACIÓN A 35 0 C 2-6 HORAS

AJUSTAR TURBIDEZ0,5 ESCALA DE McFARLAND

Inoculación de la placa

• Con un hisopo estéril en tres direcciones inocule toda la placa (giros de 60°).

Aplicación de sensidiscos

separación: los discos deben de estar separados24 mm (del centro de un sensidisco al otro más cercano).

Cantidad: 12 unidades en placas de 150mm y 5 unidades en placas se 100mm.

MÉTODO AUTOMÁTICO

Medición de los halos

Se usa una regla y se mide el diámetro del halo de inhibición partiendo de desde donde está el disco de antibiótico hasta donde se inhibió el crecimiento.

La longitud obtenida después se compararán con estándares que nos dirán si el medicamento será efectivo o no en el tratamiento.

Lectura e interpretación de los resultados

Categorías de interpretaron:

Sensible: El microorganismo presenta un gran área de inhibición causada por el fármaco. 95% éxito

Intermedio: Se presenta un halo de inhibición mas reducido.

Resistente: Presenta muy poco o casi nada de halo.

Antibiótico Resistente Intermedia Susceptible

Ampicilina ≤ 13 14 - 16 ≥ 17

Amikacina ≤ 14 15 – 16 ≥ 17

Sulfisoxasol ≤ 12 13 - 16 ≥ 17

Gentamicina ≤ 12 13 – 14 ≥ 15

Cloranfenicol ≤ 12 13 - 17 ≥ 18

Ceftriaxona ≤ 12 14 – 20 ≥ 21

Ciprofloxacina

≤ 15 16 - 20 ≥ 21

Tetraciclina ≤ 14 15 - 18 ≥ 19

AcidoNalidixico

≤ 13 14 – 18 ≥ 19

Estrptomicina ≤ 11 12 – 14 ≥ 15

anamicina ≤ 13 14 - 17 ≥ 18

Trimetroprim/Sulfametoxas

ol≤ 10 11 – 15 ≥ 16

• Método de E-test: Consiste en aplicar sobre un medio de cultivo, donde se encuentra el microorganismo a ensayar, tiras plásticas que llevan incluidas un gradiente de concentración de un determinado ATB. Luego se incuba adecuadamente y se observa la formación de una elipse de inhibición de crecimiento.

Método Automatizado:

Este método se basa en micro diluciones sobre micro tubos. El crecimiento bacteriano se va a observar por la turbidez o fluorescencia de los micro tubos.

Es útil para examinar una gran cantidad de muestras

bibliografia

• Guia de suceptibilidad antimicrobiana de laboratorio de microbiologia-HNCH.