Pruebas de identificación de Enterobacterias

Curso de Microbiología – Area III

Facultad de Veterinaria – UdelarIntegrantes: Ignacio

FagundezFederico García

EnterobacteriasEntendemos por enterobacterias a las que pertenecen a clasificación de Gram (–)Se encuentran frecuentemente en el tracto intestinal de animales superiores. No forman esporas, y son anaerobias facultativas.

Con excepción de los géneros Salmonella, Shigella y Yersinia (patógenas profesionales), provocan invasión en el cuerpo en los lugares normalmente estériles.

Casi todos los MO son oportunistas.

Clasificación de las mismas• Gram -• Anaerobias• Móviles o Inmóviles• Fermentan lactosa• Presencia o ausencia de capsula• No forman esporas

Providencia Citrobacter

Shigella EnterobacterSalmonella Escherichia coliSerratia KlebsiellaYersinia Morganella

Proteus

1 – Cultivo Puro a partir de mi muestra

2 – Observación macroscópica y microscópica

3 – Pruebas Bioquímicas:Pruebas Primarias

Pruebas Secundaria

Pruebas de Identificación

Mac Conkey: Agar selectivo y diferencial para el aislamiento de Enterobacterias. Contiene: sales biliares y cristal violeta inhibe Gram + Lactosa + indicador rojo neutro Lactosa +

Latosa -

SS (Salmonella-Shigella): Medio selectivo y diferencial para aislamiento de Enterobacterias, especialmente Shigella y Salmonella.

Selectividad:Sales biliares y verde brillantes: Inhiben Gram (+)

ColiformesProteus spp

Diferencialidad:Fermentación de Lactosa y formación de ácido sulfhídrico a partir de tiosulfato de sodio

Pruebas Primarias:•Oxidasa•Catalasa•Caldo Tioglicolato•Movilidad•Presencia de esporas

Pruebas Secundarias:•IMViC•TSI•Coagulasa•Urea

IMViCIndol:Determina la presencia de la enzima triptofanasa

Reactivo de Kovacs

Rojo Metilo:Detecta la capacidad de fermentar, y por lo tanto la formación de Ácido.

Indicador de pH: Rojo Metilo(indica acidez)

Voges-Proskauer:Detecta la fermentación con formación de Acetoína.

VP (+) = AcetoínaVP (-) = Sin Acetoína

Citrato:Determina la utilización del citrato como única fuente de carbono y energía.

Indicador de pH:Azul de bromotimol (detecta alcalinidad)

+-

TSI (Triple azúcar de hierro)Es uno de los medios de cultivo más empleados para la diferenciación de enterobacterias según:•Fermenten o no glucosa.•Fermenten o no lactosa o sacarosa.•Produzcan o no ácido sulfhídrico.•Produzcan o no gas.

Ejemplos de enterobacteriasSalmonellaEscherichia ColiShigella

• Bacilo Gram (-) • Anaerobio facultativo • Móvil por flagelos peritricos (que rodean su

cuerpo) • No forma esporas• Capaz de fermentar la glucosa y la lactosa• Se encuentra en tracto gastrointestinal tanto de

humanos como animales superiores.

E. COLI

E. COLI

SALMONELLA• Bacilo Gram (-) • Anaerobio facultativo • Móvil por flagelos peritricos (que rodean su

cuerpo) • No desarrollan cápsula, ni esporas• Capaz de fermentar la glucosa, pero NO lactosa• No producen ureasa

SALMONELLA

SHIGELLA• Gram (-) • Anaerobio facultativo • Inmóviles• No desarrollan esporas• Capaz

de fermentar la glucosa, pero NO lactosa

SHIGELLA

IMViC: +/-/-/-TSI: +/-/-/-

PCR (Reacción en cadena de la

polimerasa)• La PCR ofrece alta sensibilidad y alta especificidad.• Logra un diagnostico rápido y preciso.• Su objetivo principal es la multiplicación in Vitro de uno o

varios segmentos de ADN, por acción una enzima ADN polimerasa (ADN dependiente termoestable).

Conclusión• Podemos concluir que, a través de los medios

de cultivo, las técnicas bioquímicas y los estudios moleculares llegamos a la identificación completa de Escherichia Coli, Salmonella y Shigella.

Bibliografía

• Brock – B. de los MO. Medigan, M; Martinko, J; Parker, J.

Décima edición.

• Microbiología. Prescott, Harley, Klein. Quinta edición