MD. Galo García Ordóñez.

CATEDRA DE MICROBIOLOGÍA.

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

DE IDENTIFICACIÓ

N DE LAS ENTEROBACTE

RIAS

* Identificar los diferentes tipos de pruebas bioquímicas de reconocimiento de Enterobacterias.

* Determinar los fundamentos de cada prueba.

* Realizar una correcta lectura e interpretación de lo que se observa.

OBJETIVOS:

ENTEROBACTE

RIAS

* Clasificación de Murray: - Bacilos Gram Neg. - Fermentación de Lactosa: FRL, FLL, NFL. * Saprófitos: E. coli.* Patógenos: Salmonellas y Shigellas.* + 25 grupos y 110 especies.

FAMILIA ENTEROBACTEREACE

AE.

Características Específicas:* Mayoría móviles: flagelos perítricos.* Fermentación de glucosa: ácido y gas o

solo ácido.* Oxidasa –* Reducen Nitratos a Nitritos.* Catalasa +

FAMILIA ENTEROBACTEREACE

AE.

CULTIVOS:

*Medios de Cultivo.*Agar de MacConkey:

*Medio diferencial.*Peptona: nutrientes*Lactosa: E. coli (FRL) – diferencial.*Sales biliares y Cristal violeta: restringe Gram Positivo

*Medios de Cultivo.*Peptona: nitrógeno y carbono para las

Lac -.*Lactosa :fuente de carbono para las Lac +.*Sales biliares :inhibe Gram +.*Cloruro sódico : mantener la tonicidad* Rojo neutro : indicador *Cristal violeta :la selectividad del* medio.*Agar-agar : da consistencia

*Medios de Cultivo.*Agar de MacConkey:

* Cultivo: - FRL: 18- 24hs a 37°C. - FLL: 36- 48hs a 37°C. *Lac +: ácidos derivados de la fermentación: rosáceo *Lac -: el medio se basificará por uso de la peptona : amarillo.

Colonias lactosa (-): incoloras (= no hay fermentación de la Lactosa). Salmonella, Shigella, Pseudomonas

Colonias lactosa (+): rosa/rojo ladrillo rodeadas de un halo de sales biliares precipitadas. E. coli (rosa/roja), E. aerogenes (rosa y mucosa)

*EMB:Las cepas que utilizan la lactosa = centro oscuro con periferia azulada o rosada, las que no lo hacen son incoloras. Escherichia coli.( FRL) presentan un característico brillo metálico verdoso.

Pruebas Bioquímicas Sirven para:

*Identificación de características metabólicas.*Identificación de movimiento.*Identificación de enzimas.*Identificación de productos del metabolismo.

PRUEBAS BIOQUIMICA

S.Kligler

Hierro Agar

Simmons Citrato Agar

Medio de Urea

SIMLISINA

RM VP

MIO

Kligler Hierro AgarFUNDAMENTO:*Diferencia fermentación (rojo de fenol: pH)*Glucosa: botón*Lactosa: pico de flauta

*Producción de H2S*Tiosulfato de sodio, citrato de hierro y amonio*Produce sulfuro de hierro : NEGRO

*Producción de GAS*Incubar durante 24 horas a 37°C

L

g gGG H2S H2S

L LL

Simmons Citrato AgarFUNDAMENTO:

*Bacterias: citrato permeasa.*Contiene: citrato de sodio y fosfato de amonio como fuentes de carbono y de nitrógeno respectivamente y azul de bromotimol como indicador de pH.

LECTURA:*Positivo: Azul (pH alcalino).*Negativo Verde

*Incuba a 37°C por 48 horas

Medio de Urea*Medio Nutritivo contiene Urea (H2N-CO-NH2)  *Indicador pH el rojo de fenol.*Identifica la hidrólisis de la urea (Ureasa).*LECTURA:*Positivo: rosado (medio alcalino)*Negativo: amarillo

*Incubar a 37°C hasta por 72 horas

SIM:*Sulfuro de Hidrógeno*Indol*Producen triptofanasa:convierte el Trp en indol*Reactivo de Kovacs o de Erlich: dimetilaminobenzaldehído.* Movilidad (turbidez).

*Incubar por 18-24 horas a 35-37 °C

M

MIO*Movilidad*Indol*Ornitina*Presencia de ornitina descarboxilasa.*Indicador: púrpura de bromocresol : - medio alcalino: púrpura. - medio ácido:amarillo.

*Incubar por 18-24 horas a 35-37 °C

+ -

RM VP Medio:*Rojo de metilo*Glucosa productos finales ácidos (ácido láctico, ácido acético, ácido fórmico)* Indicador de pH: producción Ac: vía de fermentación Ac-mixta.

*Voges Proskauer:*Vía Fermentación Glucosa: Butanodiol: Acetoína: diacetilo: rojo.*Incubación en aerobiosis, a 35-37°C por 3 días

Lisina.*Descarboxilación de lisina:* Descarboxilasas: diferenciación de enterobacterias.* aa pierden el grupo carboxilo convierten en aminas.* Indicador: púrpura del bromocresol: vira a violeta,

* Se debe realizar una correcta lectura e interpretación de las pruebas para poder precisar cual es el agente causal más probable.

* Cada bacteria tiene características de identificación propias y también otras comunes que las hacen únicas.

CONCLUSIONES:

BIBLIOGRAFÍA:• Madigan M.T., Martinko J.M. y

Parker J. (2004) Brock: Biología de los• Microorganismos – 10ma Edición –

ISBN:84-205-3679-2 Prescott L.M., Harley J.P. y Klein D.A. (2003) Microbiología – 4ta Edición – ISBN:84-486-0261-7.• http://edicion-micro.usal.es/web/

identificacion/AyudaPruebas.html

GRACIAS

POR SU

ATEN

CIÓN.