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ENTEROBACTERIAS

P.Q.C. MIGUEL ANGEL ORTIZ GIL.

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• Las Enterobacteriaceae habitan en:

– Distribuidas en suelo,– agua,– alimentos.– Flora normal del intestino de humanos yanimales.

Características Generales:

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• MORFOLÓGICAS Y TINTORIALES– Bacilos o cocobacilos cortos gram

negativos,– no esporulados,– mótiles (flagelos perítricos) o no,– capsulados o no,– pilis.

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• BIOQUÍMICAS– Anaerobios facultativos,– catalasa positiva, (excepto Shigella

dysenteriae Tipo 1)– oxidasa negativa,– fermentan la glucosa,– reducen nitratos a nitritos.

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Reacción de catalasa

• Esta prueba detecta la presencia decitocromooxidasas

• La prueba se hace con peróxido dehidrógeno (H2O2) al 3% sobre unportaobjetos. La producción inmediata yabundante de burbujas indica la conversióndel H202 en agua y oxígeno gaseoso.

• La prueba de la catalasa debe realizarse apartir de un medio que no contenga sangreporque los eritrocitos pueden producir unareacción de catalasa débil.

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Prueba de la catalasa

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Reacción decitocromo oxidasa

Los citocromo sonhemoproteinas que contienenhierro y actuan como últimoeslabón de la cadena de larespiración aerobia ;transfireren electrones deHidrógeno al Oxígeno, con laformación de agua.El sistema citocromo seencuentra presente enmicroorganismos aerobios,microaerofílicos y en algunosanaerobios facultativos, peronunca en anaerobiosestrictos.

Dimetil-p-fenilendiamina al 1%

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• Los modos de transmisión a los sereshumanos son:

– Infecciones Nosocomiales• ( E. coli)

– Ingesta de alimentos o agua.• Salmonella,• Shigella,• Yersinia enterocolitica.

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Enterobacteriaceae

Patógenosoportunistas.

Patógenosevidentes.

Citrobacter.

Enterobacter.

Klebsiella.

Proteus.

Serratia

•Salmonella tiphy – (fiebretifoidea.)

•Shigella – (Disentería).

•Y. Pestis (peste negro).

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MEDIOS DE CULTIVO

1. Medios no selectivos: agar sangre

2. Medios selectivos-diferenciales: agar McConkey, agar EMB, SS agar,agar XLD.

McConkey: colonias rosadas (fermentan lactosa) y colonias transparentes(no fermentan lactosa).

Agar EMB: colonias azules (fermentan lactosa) y colonias transparentes(no fermentan lactosa).

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Mac Conkey

• Gram positivas ven inhibido - sales biliares ycristal violeta.

• Fermenten la lactosa liberarán productos ácidosque producirán un cambio de pH que sedetectará gracias al rojo neutro.

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Aspectos de las colonias.

• En agar sangre y agar chocolate lascolonias son:– Grandes.– Gris.– Lisas.

• Klebsiella o Enterobacter.– Mucoides – (polisacáridos).

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• E. Coli – ( Beta hemolítica).

P. mirabilis.• Motilidad. P. penneri.

P. Vulgaris.

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PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN

1. Pruebas bioquímicas

2. Pruebas serológicas

3. Pruebas de biología molecular

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• Estudia el metabolismo de la bacteria

• Estudio basado en la determinación de lapresencia o ausencia de diferentes enzimascodificadas por el material genético delcromosoma bacteriano

• Se detecta a través de medios de cultivoespeciales

Pruebas bioquímicas

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Los medios de cultivo generalmenteestán formados por:

• El sustrato sobre los cuales actúan lasenzimas

• Un indicador que puede detectar ladisminución del sustrato o la presencia deun producto metabólico especifico

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La medición de las diferentes característicasmetabólicas de un microorganismo permitenidentificar la especie

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Metabolismo fermentativo

• Mide la capacidad del microorganismopara utilizar los hidratos de carbono

• Microorganismo actúa sobre loscarbohidratos y acidifica el medio

• El indicador presente vira

Pruebas bioquímicas

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PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN BIOQUÍMICAS

Prueba TSI (triple azúcar hierro)

Contiene lactosa 10 g, sacarosa 10 g y glucosa 1 g.

Resultados:Superficie inclinada/fondo:

- ácida/ácida: Bacterias fermentadoras de lactosa: E. coli, Klebsiella,Citrobacter, Enterobacter, etc

- alcalina/ácida: Bacterias no fermentadoras de lactosa. Salmonella (H2S+),Shigella (H2S -), Yersinia.

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TSI

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TSI

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CITRATO DE SIMMONS

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• Mide la capacidad de un organismo parautilizar el citrato como única fuente decarbono

• Citrato compuesto orgánico constituye unode los metabolitos del ciclo de Klebs

• Las bacterias al utilizar citrato extraennitrógeno de la sal de amonio conproducción de amoniaco que hace vire elindicador

CITRATO DE SIMMONS

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• Para esta prueba se utiliza el agar de citrato deSimmons que contiene citrato de sodio y azul detimol como indicador.

• La única fuente de carbono en este medio es elcitrato.

• Si la reacción es positiva el indicador vira aazul.

• En la reacción negativa los microorganismos nocrecen y el medio conserva su color verde

CITRATO DE SIMMONS

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• El medio también contiene sales deamonio que la bacteria usa comofuentes de nitrógeno

• Fosfato de amonio amoniacoalcalinización del medio

CITRATO DE SIMMONS

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CITRATO DE SIMMONS

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CITRATO DE SIMMONS

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CITRATO DE SIMMONS

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Los medios contienen:

PeptonaExtracto de carneGlucosaAminoácidoPurpura de bromocresol

MEDIO DE LIA

Descarboxilasas de aminoácidos(arginina, lisina, ornitina

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• Los aminóacidos al perder el grupo carboxilose convierten en aminas lo que incrementa elpH del medio y el indicador (púrpura delbromocresol) vira a violeta

R – CH - NH2 - COOH R- CH2 - NH2 + CO2Aminoácido Amina Dióxido de carbono

pH alcalino

Descarboxilasas de aminoácidoslisina, ornitina

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Ejemplo:

Aminoácido amina + dióxido de carbono

Lisina lisina descarboxilasa cadaverina

L- Ornitina Ornitina descarboxilasa Putrescina + CO2

Descarboxilaciòn lisina (LIA y MIO)

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Descarboxilaciòn lisina (LIA)

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Descarboxilaciòn lisina (LIA)

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Prueba que se utiliza para investigar:

Motilidad (M)

Producción de Indol (I)

Descarboxilación Ornitina.

INDOL

MEDIO DE MIO

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INDOL

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Indol

• El indol es uno de los productos dedegradación metabólica del aminoácidotriptofano.

• Las bacterias que poseen la triptofanasa .• La prueba de indol está basada cuando el

indol reacciona con el grupo aldehído delp-dimetilaminobenzaldehído.

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Medio de MIO

(p-dimetilaminobenzaldehído)

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INDOL

Prueba positiva

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INDOL

Prueba negativa

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E. coli

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Escherichia coli.

• Mac Conkey.– Colonias Planas.– Colonias secas.– Colonias Rosadas.

(LF)

• INDOL (+)

k/A Ó A/AK/A

LIATSI

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Escherichia coliClasificación de las cepas productoras de

diarrea1. E. coli enterotoxigénica2. E. coli enteropatógena3. E. coli enterohemorrágica4. E. coli enteroinvasiva5. E. coli enteroagregante

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E. coli

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Klebsiellapneumoniae

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Klebsiella.

• Mac Conkey– LF.– Mucoides. (polisacáridos).

• Indicaciones de laboratorio:– Lysine +– Citrato +– Indol –– +/+ TSI (con gas)– No-motile– Ornithine –

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Klebsiella pneumoniaeCápsula

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Klebsiellapneumoniae

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Proteus

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Proteus.

• Género que contiene varias especies, delas cuales dos tienen importancia médica:– P. mirabais. INDOL (-)– P. vulgaris. INDOL (+)

• Mac Conkey.– NFL.– Swarning.– Olor a podrido.

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Enterobacter

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Enterobacter.

• Mac Conkey.– LF.– Pueden ser Mucoides.MIO:*MOVILIDAD (+)*INDOL: (+) E. agglomeras.*INDOL: (-)E. aerogenas (LIA +),E. cloacae (LIA-).

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Enterobacter

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Shigella

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ShigellaS. dysenteriaeS. flexneriS. sonneiS. boydii

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Shigella• Mac Conkey:

– NLF.• TSI: alcalina/ácida, H2S negativo.

• LIA: K/A o A/A.

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Crecimiento de Shigellaen medio MacConkey

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Salmonella

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SalmonellaClasificación

• S. enteritidis• S. typhimurium• S. typhi• S. paratyphi A• S. paratyphi B (Salmonella schottmuelleri)• S. typhi C (Salmonella hirschfeldii)

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Salmonella enteritidis

• Mac Conkey: NFL.• TSI: alcalina/ácida y H2S +

S. typhimurium.• INDOL (-)

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SALMONELLA SSA

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Salmonella XLD

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Bibliografía:

• MANUAL DE TÉCNICAS EN MICROBIOLOGÍACLÍNICA. M. V. Álvarez, E. Boquet, I. De Fez. AEFA.1990.

• DIAGNÓSTICO Y TRATAMIENTO CLÍNICOS POR ELLABORATORIO. John Bernard Henry, Todd-Sanford-Davidsohn. Tomo I y II. 8ª Edición. Salvat Editores.1988.

• DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO. TEXTO Y ATLASCOLOR. Koneman, Allen, Dowell, Sommers. EditorialMédica Panamericana. 2ª Reimpresión. 1990.