PRACTICA N 7: METODOS CUANTITATIVOS PARA EL DIAGNOSTICO DE ENTEROPARASITOS TECNICA DE STOLL HAUSHER Colocar en un frasco de stoll (frasco de vidrio al que se le marca a 56 ml y 60 ml) con 10perlas de vidrio.

Agregar una solucin de soda hasta la marca que indica 56 ml.

Llenar las heces hasta la marca de 60 ml. Tapar el frasco y agitar vigorosamente durante un minuto.

Tomar 0.15 ml y tomar un factor: Numero de huevos/g = n0 de huevos contados x Factor x 100

1: Para muestras slidas. 2: Para muestras semislidas. 3: Para muestras liquidas.

Numero de huevos de Ascaris lumbricoides/g =

Numero de huevos de Giardia lamblia/g =

TECNICA DE KATO MIURA Fue desarrollada en Japn por Kato y Miura (1954). Es adecuada para examen de heces en gran escala para todo tipo de huevos de helmintos, pero no para larvas ni protozoarios. El nico material especial que se requiere es celofn humedecible de mediano espesor (40-50 micra), cortado en tiras de 22X30mm y mantenidas durante 24 horas o ms en una mezcla de 100 partes de glicerol, 100 partes de agua y 1 parte de solucin salina acuosa de verde malaquita al 3%. La tcnica de Kato-Katz es la utilizada habitualmente para diagnosticar la infestacin por Schistosoma mansoni. Pesar 50 mg de heces sobre una lamina porta objetos. Cubrir la muestra con un cuadrado de celofn transparente el cual fue previamente sumergido por lo menos 24 horas en la solucin de Kato. Presionar para que las heces se extiendan.

Numero de huevos/g = n0 de huevos contados x Factor x 20

Numero de huevos de Entamoeba coli/g =

Numero de huevos de Giardia lamblia/g =

Numero de huevos de Ascaris lumbricoides /g =

Numero de huevos de Hymenolepis nana/g =

Numero de huevos de Blastocystis hominis /g =

Numero de huevos de Trichuris trichiura/g =

TECNICA DE MAC. MASTER MODIFICADO La tcnica McMaster es usada para demostrar y contabilizar huevos de helmintos en muestras fecales. Es el mtodo ms ampliamente utilizado para este propsito. Si bien proporciona una valiosa ayuda diagnstica, se requiere de cuidado con la interpretacin de los datos obtenidos, debido a que tanto los resultados cualitativos como cuantitativos pueden ser influenciados por toda una variedad de factores. La tcnica McMaster utiliza cmaras de conteo que posibilitan el examen microscpico de un volumen conocido de suspensin fecal (2 x 0.15 ml). Por lo tanto, si se usan un peso de heces y un volumen de lquido de flotacin conocidos para preparar la suspensin, entonces el nmero de huevos por gramo de heces (h.p.g.) puede ser calculado. Las cantidades son elegidas de tal manera que la cuenta de huevos fecales puede ser fcilmente derivado al multiplicar el nmero de huevos dentro de las reas marcadas por un simple factor de conversin. La cmara de McMaster tiene dos componentes, cada uno marcado con una rejilla sobre la superficie superior. Cuando la cmara es llenada con una suspensin de heces en fluido de flotacin,

muchos de los detritos se irn al fondo mientras los huevos flotan hacia la superficie, en donde pueden ser fcilmente vistos y los que estn dentro del la rejilla pueden ser contados. Cuando se interpretan los resultados de McMaster, se debe recordar que una variedad de factores puede influir en la ocurrencia, reconocimiento y nmero de huevos de helmintos hallados en una muestra fecal. En particular, el nmero de huevos no es necesariamente indicativo del nmero de gusanos presentes. Las razones para esto incluyen: Los huevo son producidos solamente por gusanos hembras, adultas, frtiles (o hermafroditas) y por tanto, podrn estar ausentes en infecciones con parsitos inmaduros a de un solo sexo La produccin diaria de huevos por hembras frtiles est influenciada por factores fisiolgicos del hospedero tales como estrs o lactacin (incremento) o inmunidad (decremento) La quimioterapia tambin puede afectar la produccin de huevos e.g. corticosteroides (incremento) o dosis sub-letales de antihelmnticos (decremento) Algunos alimentos y piensos pueden tener un efecto similar e.g. forrajes ricos en taninos (decremento) La concentracin de huevos (por gramo de heces) est influenciada por el volumen diario de heces producido por el hospedero, la tasa de pasaje de la ingesta a travs del intestino, y la distribucin de los huevos en la masa fecal Algunos tipos de huevos son ms pesados que otros y podran no flotar bien en soluciones de baja gravedad especfica (e.g. Fasciola) Algunos huevos de diferentes especies son indistinguibles (particularmente trichostronglidos y stronglidos). Esto complica la interpretacin clnica debido a que algunas especies (e.g. Haemonchus) producen muchos ms huevos por da que otras (e.g. Ostertagia).

Numero de huevos de Ascaris lumbricoides/g =

Numero de huevos de Giardia lamblia/g =Qu otras tcnicas de recuento parasitarias se utilizan para el diagnostico? Indicar el material y equipo a requerir.

Ejemplo: Determinacin de parsitos amastigotes en Cmara de Neubauer Conteo en cmara de Neubauer para determinar la concentracin de Trichomonas vaginalis.