PRESENTADO POR:

Angie Loza Calderón Fanny Sucaticona Vilca Anaís Illanes Quispe Liseth Alvarez Valdez

DOCENTE:

Juan José Pauro Roque

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL ALTIPLANO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

TECNOLOGÍA ENZIMÁTICA

ÍNDICE GENERAL

RESUMEN...........................................................................................................................................5

ABSTRACT.........................................................................................................................................5

I. INTRODUCCIÓN....................................................................................................................6

II. MATERIALES Y MÉTODOS................................................................................................7

2.1 MATERIALES...................................................................................................................7

2.1.1 De laboratorio.............................................................................................................7

2.1.2 De campo....................................................................................................................7

2.1.3 De escritorio...............................................................................................................7

- Lapicero.............................................................................................................................7

- Cuaderno de apuntes..........................................................................................................7

- Regla..................................................................................................................................7

- Lápiz..................................................................................................................................7

2.2 MÈTODOLOGÍA..............................................................................................................7

III. RESULTADOS......................................................................................................................10

IV. DISCUSIÓN...........................................................................................................................11

V. CONCLUSIONES..................................................................................................................12

VI. RECOMENDACIONES........................................................................................................12

VII. REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA.......................................................................................12

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ÍNDICE DE CUADROS

Cuadro 1. Observaciòn de enzimas....................................................................................................7Cuadro 2. Reaccion de Michaeles Menten.........................................................................................7

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ÌNDICE DE FIGURAS

Figura 1. Mediciòn de la vista............................................................................................................8

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RESUMENSe analizó la producción enzimática de microorganismos del suelo aislados en agar maíz utilizando el lugol como como indicador de la presencia de amilasas. Como fuente de almidón se utilizó la maicena disuelta en agar agar para observarse luego del cultivo por puntos el crecimiento de colonias que por medio de la formación de una halo alrededor evidenciaba la presencia de microorganismos degradadores de amilasas.

Palabras clave:

ABSTRACTKey words:

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I. INTRODUCCIÓN

El alimento es parte del ecosistema microbiano y es uno de los factores más importantes que determinan la comunidad que se desarrolla sobre él (1). Dentro del sustrato, los carbohidratos desempeñan un papel determinante (2). La modificación del sustrato también implica cambiar la naturaleza de los nutrientes que utilizan los microorganismos. En el engranaje del metabolismo celular, los microorganismos liberan al medio parte de su batería enzimática para utilizar los sustratos disponibles (3). Entre las exoenzimas que se liberan se encuentran las amilasas (4).Estas desempeñan un papel fundamental en la utilización del almidón como fuente energética (5).

Las enzimas son proteínas que actúan como aceleradores de las reacciones químicas, de síntesis y degradación de compuestos, éstas se encuentran en todos los seres vivos y son piezas esenciales en su funcionamiento. Desde hace unas décadas se dispone de enzimas relativamente puras extraídas industrialmente de bacterias, hongos, plantas y animales, con una gran variedad de actividades (6).Las amilasas son enzimas que catalizan las reacciones hidrolíticas del almidón, dando origen a diversos productos que poseen una gran relevancia para algunas operaciones y procesos industriales. Las amilasas son comúnmente halladas en animales y plantas; sin embargo, para fines industriales, las más utilizadas son aquellas de origen bacteriano o fúngico. Las amilasas poseen una gran importancia en la producción de alimentos y de biocombustibles. También presentan gran utilidad en la industria textil. Se han utilizados amilasas para la obtención de jarabes fructosados. La producción de dichas enzimas se ha hecho a partir de Bacillus sp .Por lo aún se siguen buscando microorganismos específicos que reporten mejores rendimientos para optimizar los procesos industriales (7)

La flora microbiana en el suelo, puede tener su origen en el suelo, aire, agua, en el medio ambiente del almacén o en la fase de manipulación y elaboración. Los microorganismos presentes en la harina de maíz son relativamente escasos, pero una vez que ha sido hidratada se crean condiciones de actividad acuosa favorables para el crecimiento de bacterias, mohos y levaduras. Esto determina un proceso más complejo para obtener energía, el cual está definido por los microorganismos amilolíticos. (8). Por lo tanto los objetivos de la presente investigación fueron: Aislar e identificar microorganismos productores de amilasas a partir de una muestra de tierra húmeda en Agar papa, y evaluar la capacidad degradadora de almidón a través de la formación de los halos generados por efecto de las amilasas que poseen estos microrganismos.

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II. MATERIALES Y MÉTODOS

II.1 MATERIALES

II.1.1 De laboratorio- Incubadora

- Balanza

- Estufa

- Caldo nutritivo

- Agua destilada

- Placas Petri

- Mechero

- Tubos de ensayo

- Asa de siembra

- Autoclave II.1.2 De campo

- Muestra de tierra

- Extracto de papa

- Extracto de maízII.1.3 De escritorio

- Lapicero

- Cuaderno de apuntes

- Regla

- Lápiz

II.2 MÈTODOLOGÍA

1. Se utilizó almidón extraído de 400g de papa, rebanados y cocidos en 20ml de agua destilada.

2. Se pesó 0,56g/L de agar agar.

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Figura 1. Pesado de agar agar.

3. Se pesó 1,05g/L de agar agar y se diluyó en 20 ml de agua destilada.

Figura 2. Disolución de agar.

4. Se lo llevaron a la autoclave todos los materiales que serán utilizados para el cultivo.

Figura 3. Materiales listos para la esterilización en autoclave.

5. Se procedió con la disolución de tierra 1g por 10 ml de agua destilada.

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Figura 4. Dilución de la muestra de suelo.

6. Una vez esterilizados los materiales en la autoclave, se procedió a verter el agar papa en placas Petri.

Figura 5. Vertido de agar papa en placas Petri.

7. Ya gelificado el agar papa en las placas Petri, se empezó con la respectiva siembra utilizando para ello una placa control y otras dos para el cultivo.

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Figura 7. Cultivo de muestra de suelo en agar maíz.

III. RESULTADOS

En la evaluación del crecimiento de las bacterias degradadoras del almidón se obtuvo los siguientes resultados:

En la evaluación de las bacterias del suelo sembradas en un medio de cultivo de agar papa después de ser incubadas a 37°C durante una semana, se observó la capacidad hidrolítica sobre el almidón. Esta se determinó empleando una solución de yodo (lugol), que fue vertida sobre las placas, demostrándose así la presencia de la enzima amilasa por la formación de halos claros que no se coloreaban con este reactivo, esto claramente nos indicaba que estas bacterias si presentaban la capacidad de degradar el almidón. Esta capacidad también se evidenció con la comparación con la placa control, la cual contenía agar papa mas no la siembra con microorganismos del suelo y presentaba una coloración completa con el lugol debido a su carencia de estos microorgaismos (Figura …).

En la figura N° … se puede observar la formación de halo producido sobre el agar papa, el cual indica que estas bacterias presentan enzimas amilasas degradadoras de almidón.

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Figura 1. A. Placa control sin presencia de halos. B y C. Los círculos rojos muestran la formación de halos por degradación de almidón, se evidencian de color claro alrededor de

las colonias bacterianas.IV. DISCUSIÓN

En esta práctica se determinó que si existen bacterias con la capacidad de producir enzimas amilasas, según Peñate no todas las bacterias sintetizan enzimas.

Los microorganismos requieren de ciertos y específicos nutrientes para la producción de enzimas y estas desempeñan un papel fundamental en la utilización del almidón como fuente energética y nutricional para estos microorganismos. (5)

Bacillus subtilis es un microorganismo productor de amilasas a partir de almidones de papa, yuca y arroz. (9)

Se realizaron estudios sobre el rendimiento de la actividad de amilasa de Thermoactinomyces thalpophillus encontrando actividad en sustratos agrícolas como arroz, yuca, cebada, sorgo, papa y gelatinizado de papa. (10)

V. CONCLUSIONESAislar e identificar microorganismos productores de amilasas a partir de una muestra de tierra húmeda en Agar papa, y evidenciar la capacidad degradadora de almidón a través de la formación de los halos generados por efecto de las amilasas que poseen estos microrganismos.

- Se observó el crecimiento de microorganismos productores de amilasas en Agar papa.

- No se logró identificar a estos microorganismos productores de amilasas.

- Se logró evidenciar la capacidad degradadora de almidón por microorganismos del suelo por medio de la formación de halos alrededor de las colonias bacterianas.

VI. RECOMENDACIONES- Para el proceso de cultivo es necesario cerciorarse de que los medios de cultivo no hayan

sobrepasado su fecha de vencimiento.

VII. REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA

1. Ecology of Bateria. Hungate, R.E. 1962, The Bacteria The Physiology of Growth, pág. Vol. IV. Chapter 3. p. 95.

2. Volatile Fatty Acid Production in Quantitative Aspects of Ruminant Digestion and Metabolism. France, J. & Siddons, R.C. 1993, pág. p. 107.

3. Las biotecnologías: desafíos y promesas. Sasson, A. 1984, pág. p. 191.

4. An overview of the microbial á-amylase family. Reddy, N.S., Nimmagadda, A. & Sambasiva, K.R.S. 2004., pág. 182.

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5. Advances in microbial amylases. Pandey, A., Nigam, P., Soccol, C.R., Soccol, V.T., Singh, D. & Mohan, R. 2000. 2000, pág. 31:135.

6. Peñate, M. Producción de enzimas a partir de microorganismos. enzimamicro. [En línea] 2008. http://enzimamicro.blogspot.com/.

7. CASTRO, C., y otros, y otros. Obtención de amilasas fúngicas a partir de Aspergillus sp. aislado de semillas de lentejas. . [En línea] 2008. http://www.utadeo.edu.co/es.

8. Microbiología Moderna de los Alimentos. Jay. 2000.

9. R. Grebeshoba, L. Prieto, S. Miranda, N. Moreno, D. Flechas. Biosíntesis de amilasa estracelular a partir de cepas de Bacillus subtilis. Colombia : s.n.

10. Okolo, col. 1993.

11. Vargas, S. Selección y evaluación de bacterias del género Bacillus productoras de amilasas en cultivo sumergido. UNMSM. Lima - Perù : s.n., 2012. pág. 157, Tesis de licenciatura.

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