FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIASINGENIERÍA AGROINDUSTRIAL

TECNICAS DE ASEPCIA Y UBICUIDAD MICROBIANA Garces Arlex, Moreno Viviana

1. METODOLOGIA

Durante las prácticas de laboratorio correspondientes al área de microbiología, es necesario cumplir con las normas de seguridad personal, y verificar que los materiales de uso estén completamente esterilizados, limpios y secos para que no se presente una alteración en los resultados que vamos a obtener.

Durante el desarrollo de esta práctica, se procedió a la explicación de la guía, para una correcta realización del laboratorio por parte de la profesora; para ello se tomaron diferentes muestras tanto corporales, como físicas que se encontraban a nuestro alrededor, para proceder a realizar un cultivo de unidades formadoras de colonia (UFC). Para tales casos se emplearon los isopos los cuales eran previamente introducidos en las diferentes muestras, para luego ser llevados a las cajas de Petri y depositar las colonias ahí. Se rotularon las cajas de Petri se sellaron y se incubaron a una temperatura determinada por un lapso de 24 a 48 horas, necesario para el crecimiento colonial.

2. OBJETIVOS

-demostrar la ubicuidad de microorganismos a partir diferentes fuentes utilizando técnicas de cultivos.

3. TABLAS DE DATOS

Tabla 1. Control microbiano en el cuerpo humano

Área Observada

Contenido de UFC

Observaciones Comparación con la Literatura Imagen

Manos antes de

lavar

Más de 300 UFC

Se observó que la muestra ha tenido un crecimiento microbiano prolongado durante las 24 horas seguidas después de haber realizado la práctica de laboratorio, la forma de las bacterias presentes son circulares con variaciones en sus tamaños, además ha ocupado toda la superficie de la caja de Petri. Esto sucede ya que las manos examinadas estaban expuestas a una carga microbiana elevada.

La flora de las manos principalmente está constituida por Staphylococos coagulasa negativos, corynebacterium spp y anaerobios tales como: Propinobacterium spp, y rara vez causan infecciones a no ser que la piel sea violentada por algún dispositivo invasivo. La transferencia de microorganismos a través de las manos han sido identificada como un factor importante en la aparición de brotes de Staphylococcus aureus resistentes a la meticilina (MRSA), bacterias gram negativas multirresistentes, tales como Acinetobacter spp y Enterococos resistentes a la vancomicina.

Manos después de

lavar

58 UFC

Durante esta prueba, las manos como factor a evaluar fueron sometidas a un lavado con el fin de minimizar la carga microbiana; se pudo observar que las UFC minimizaron su número, es decir, se pudieron cuantificar. Sus formas fueron circulares y se dispersaron por toda la caja de Petri.

La flora transitoria de las manos por su parte, comienza a colonizar las capas superficiales de la piel y son menos adherentes, ésta es fácilmente eliminada por el lavado de manos y puede ser transferida por contacto directo entre las manos con la piel o el medio ambiente inanimado como las superficies de trabajo o la comida. Otras por el contrario son eliminadas hasta un 99.9% con jabones antibacteriales.

Mucosas Más de 300 UFC

Se determinó que para esta prueba las bacterias presentes en las mucosas nasales crecieron muy juntas, pero a su vez se pueden distinguir unas de otras. Su coloración tiende a ser amarillenta, presentan varias formas la más sobresaliente son la circular, seguida de las ovaladas y algunas largas. Estas UFC solo se esparcieron por la parte céntrica de la caja de Petri, no ocuparon todo el espacio dado.

Es el sitio típico de predominio de los estafilococos, fundamentalmente S. Aureus y S. Epidermidis. Ocasionalmente también podemos encontrar Streptococcus pyogenes y S. Pneumoniae, así como especies no patógenas de Neisseria, pero siempre tomando a todas ellas como como flora no residente sino ocasional o contaminante; entre otras tenemos:

Staphilococcus (estafilococos) Aureus (20% de la población) Epidermidis Micrococcus Streptococcus (estreptococos) Difteroides

Boca Más de 300 UFC

En este experimento, se notó que las UFC fueron muy pocas. Las causas posibles para este resultado obtenido fueron que la boca examinada estaba libre de microorganismos causantes de diferentes efectos bucales, las formas son circulas y de coloración blanco marfil. Aunque observando minuciosamente se pueden apreciar diminutos puntos en toda la caja de Petri, los cuales no se pudieron estimar ya que el tamaño fue muy diminuto y solo se percibía un leve color

La cavidad oral es uno de los hábitats microbianos más complejos y heterogéneos del cuerpo. La superficie de los dientes y los surcos gingivales contienen un gran número de bacterias anaeróbicas; la placa es una película de células bacterianas, que se anclan en una matriz de polisacáridos secretada por los microorganismos. Cuando los dientes no se limpian con regularidad, la placa se puede acumular rápidamente y la actividad de ciertas bacterias, especialmente de Estreptococos mutans, puede dar lugar a la destrucción dental (caries).Estreptococos del grupo viridans:

Mitis

Boca Mas de 300 UFC

blanco – transparente Mutans (relación con caries) Sanguis

Otros Estreptococos no viridans : Bacteroides Fusobacterium Actinomices Trichomonas tenax

Cuero Cabelludo

8 UFC

Durante el análisis sobre el cuero cabelludo se cuantificaron pocos UFC, esto se debe a que la superficie analizada estaba limpia, libre de grasa o caspa, se logró estimar su colorido y forma, por lo general estas son circulares y ovaladas blancas.

Las infecciones por hongos en el cabello se producen por un tipo llamado dermatofitos, que se producen en la zona de la epidermis debido a la presencia de a queratina, también en el pelo y las uñas. Los dermatofitos son un grupo de hongos taxonómicamente relacionados, que tiene capacidad para invadir el tejido queratinizado del hombre y animales, y producir una infección llamada dermatofitosis, o conocida comúnmente como tiña.

Tabla 2. Control microbiano en superficies

Área Observad

a

Contenido de UFC

Observaciones comparación con la Literatura Imagen

Aire 11 UFC

Se dejó incubar el cultivo durante 24 Hrs donde se encuentra el su punto máximo de vida de los microorganismos, las unidades formadoras de colonias poseen una forma circular de coloración blanca, otras con transparencia en los bordes, aunque otras existen UFC de forma circular la cual presenta una coloración blancuzca con coloración más clara en forma concéntrica.

El aire es un medio de transporte de microorganismos como esporas, virus, bacterias y hongos. Estos pueden causar enfermedades de tipo respiratorio, sistemáticas y alérgicas. El periodo de vida los microorganismos depende de la naturaleza de estos.Generalmente, los microorganismos presentes en el aire son los pilobolus, sarcoscypha y sphaerobolus, bacilus, clostridium, actinomicetos, corynebacterium, micrococcus, taphylococus( Gram+), alcaligenes(Gram-), flavobacterius, entre otros.Debido a la forma de las UFC se puede decir que posiblemente en el cultivo analizado se encontraban los micrococus como también las esporas aspergillus.

Celular sucio

Más de 300 UFC

Se pretende realizar el conteo de UFC en un celular, para esto se toma el área del celular la cual fue de 142 x72.5 cm con el fin de determinar la cantidad de UFC en el área calculada. Obteniendo que las UFC poseen una coloración blanca sin embargo existen, otras colonias cuya coloración es más oscura casi amarilla.

Al ser un objeto manipulado con las manos podemos inferir que la cantidad microbiana es elevada debido a que esta en constante contacto con la flora bacteriana de las manos teniendo en su superficie microorganismos Staphylococos coagulasa negativos, corynebacterium spp como también Propinobacterium spp (anaerobios). E incluso al ser manipulado durante mucho tiempo y no se limpia con regularidad este posiblemente puede tener microorganismos patógenos provocando enfermedades y bacterias como el E.coli. si se limpia con una solución desinfectante este instrumento electrónico la carga microbiana debe disminuir.

Meson sucio

Mas de 300 UFC

Existen microorganismos que pueden observarse a simple vista, sin embargo la mayoría de ellos requieren de instrumentos especializados. Para medir la carga microbiana se marco un área de 100 cm2 con el fin de medir las UFC observado a las 24 hrs colonias de coloración amarillenta oscura de forma circular, como también colonias blancas de la misma forma e incluso colonias de mayor tamaño de formas irregulares.

El área de laboratorio esta expuesta a la contaminación, esto se debe a que diariamente los instrumentos usados y materias analizadas están en contacto con el medio ambiente, diversas personas y además el aire es un medio de transporte donde se pueden trasladar microorganismos, por ende el control de microorganismos se ve limitado. Existen diversos métodos físicos y químicos que destruyen la mayoría de microorganismos patógenos, pero esporas no se afectan. Sin embargo, la disminución de organismos patogenos se puede lograr a travez de la esterilización ya que se encuentra esteril y con ninguna carga microbiana aunque se debe tener cuidado debido a que puede afectar nuestra salud. los microorganismos presentes en el aire y flora humana son los pilobolus,

sarcoscypha y sphaerobolus, bacilus, clostridium, actinomicetos, corynebacterium, cicrococcus, flavobacterius, entre otros.

Meson limpio con solución de 70% alcohol

4 UFC

Se busca evaluar la efectividad de una solución desinfectante observando su eliminación de microorganismos.Para medir la carga microbiana se marco un área de 100 cm2 con el fin de medir las UFC observado a las 24 hrs colonias de coloración amarillenta oscura de forma circular, como también colonias blancas de formas irregulares.

Los desinfectantes son soluciones cuya función principal es eliminar microorganismos, sin embargo la eficiencia se ve afectada por la resistencia de algunas cepas.Por lo tanto, las UFC que no se eliminaron son aquellas que son resistentes.

Control O UFCEste cultivo se realiza con el fin de verificar que estas no presentan ninguna contaminación y asi poder tener resultados adecuados con la muestra analizada y no generar un falso positivo.

Debido a que es un cultivo estéril, este no presentara ningún tipo de microorganismo ni agente contaminante. Por consiguiente, si no se siembra un cultivo el agar nutritivo debe permanecer constante sin ningún crecimiento microbiano.

4. DISCUSIÓN

Los microorganismos están en infinidad de partes, convivimos a diario con millones de ellos. Por consiguiente en todo lo que tocamos llevamos miles de microrganimos. La flora bacteriana de las manos está constituida por microorganismos como Staphylococcus coagulosa negativos, corybacterium spp los cuales pueden ocasionar enfermedades como la aparición de brotes de Staphylococcus aureus y otros tipos de microorganismos multi-resistentes. Una manera eliminar microorganismos en nuestro cuerpo es incrementar una adecuada asepsia. Sin embargo, el uso de instrumentos anti bacteriales como jabones destruyen microorganismos que benefician a nuestro organismo.

Nuestro organismo posee millones de bacterias tanto en nuestra fosa nasal, bucal y cuero cabelludo por tanto en ellas existen microorganismos que permiten incrementar la defensa de nuestro organismo produciendo anticuerpos. Es posible que estas bacterias Staphilococcus (estafilococos), Aureus (20% de la población), Epidermidis sean estacionarias y están presentes en nuestro organismo por un tiempo corto. Por este motivo las UFC contadas superaban las 300 unidades debido a los factores explicados anteriormente.

Por otro lado, tenemos la cavidad bucal la cual está habitada por microorganismos más complejos. Debido a que en esta área prevalecen colonias de bacterias de tipo anaerobio estas prolongan su vida debido a una inadecuada higiene bucal las bacterias o células bacterianas se adhieren a un nutriente en este caso a matrices de polisacáridos existentes en nuestra cavidad bucal. Entre los microorganismos más comunes son los grupos varidans como mitis, mutans, sanguis, entre otros estreptococus como bacteroides teniendo como resultado un cultivo numeroso con más de 300 UFC de diferentes coloraciones y formas que evidencia la existencia de multiples bacterias.

Si analizamos el cuero cabelludo se obtuvo una cantidad microbiana alta esto se debe a una posible mal higiene del cuero cabelludo, infecciones que causa que la cantidad microbiana, por ende, la proliferación de microorganismos se ven afectadas por estos factores que hacen que las unidades formadoras de colonias superen las 300 que según la literatura es normal debido a el contacto con varios agentes con carga microbiana.

Por parte, el aire es un medio de transporte de microorganismos como esporas, virus, bacterias y hongos. Estos pueden causar enfermedades de tipo respiratorio, sistemáticas y alérgicas. El periodo de vida los microorganismos depende de la naturaleza de estos.

Los microorganismos presentes en el aire son los pilobolus, sarcoscypha y sphaerobolus, bacilus, clostridium, actinomicetos, corynebacterium, micrococcus, taphylococus( Gram+), alcaligenes(Gram-), flavobacterius, entre otros.Debido a la forma de las UFC se puede decir que posiblemente en el cultivo analizado se encontraban los micrococus como también las esporas aspergillus. Por tal motivo, en el cultivo se ve reflejado las multiples colonias que superan las 300 UFC de diferentes tamaños, forma y coloraciones.

Mientras que, un celular al ser un objeto manipulado con las manos podemos inferir que la cantidad microbiana es elevada debido a que está en constante contacto con la flora bacteriana de las manos teniendo en su superficie Staphylococos coagulasa, corynebacterium.spp como también Propinobacterium spp (anaerobios) y además, ser manipulado durante mucho tiempo y no se limpia con regularidad este posiblemente puede tener microorganismos patógenos provocando enfermedades y bacterias como el E.coli. si se limpia con una solución desinfectante este instrumento electrónico la carga microbiana debe disminuir. Por lo que en el cultivo, en un área de 142 x72.5 cm presenta una flora bacteriana de 300 UFC.

Finalmente, el medio ambiente, diversas personas y además el aire es un medio de transporte donde se pueden trasladar microorganismos contaminando áreas como paredes, mesones por ende el control de microorganismos se ve limitado. Existen diversos métodos físicos y químicos que destruyen la mayoría de microorganismos patógenos. Sin embargo, la disminución de organismos patogenos se puede lograr a travez de la esterilización ya que se encuentra esteril y con ninguna carga microbiana aunque se debe tener cuidado debido a que puede afectar nuestra salud. los microorganismos presentes en el aire y flora humana son los pilobolus, sarcoscypha y sphaerobolus, bacilus, clostridium, actinomicetos, corynebacterium, cicrococcus, flavobacterius, entre otros, es decir, que los cultivos tanto del meson sin limpiar como el meson desinfectado las unidades formadoras disminuyen si se limpia por tanto se reduce de 300 UFC a 4 UFC observando que la eficiencia del desinfectante es considerablemente alta, y la ineficacia se debe a que algunas son resistentes.

Debido a que es un cultivo estéril, este no presentara ningún tipo de microorganismo ni agente contaminante. Por consiguiente, si no se siembra un cultivo el agar nutritivo debe permanecer constante sin ningún crecimiento microbiano.

5. CONCLUSIONES- Se determinó el crecimiento de las UFC en todas las muestras presentes con el fin de identificar algunas cepas

gracias a sus formas y coloración característica.- Se observó que el mayor número de UFC fue obtenido en la muestra de manos sucias, debido a que estas

albergan gran cantidad de flora microbiana debido a la manipulación de diferentes objetos que incrementaan la cantidad microbiana.

- la mayoría de las muestras analizadas presentan una cantidad bacteriana alta, esto se debe al contacto del media ambiente, sin embargo si se usan desinfectantes estos disminuyen por un determinado tiempo pero en un tiempo extenso la el espacio desinfectado vuelve a afectar su carga microbiana.