1.ANGEL L SALAMAN PHD

2. TEMARIO Introduccion Definiciones Grupos de Riesgo Seguridad en el laboratorio Gabinetes de Flujo Laminar 3. INTRODUCCIN El estudio de las bacterias, virus, parsitos, hongos y otros agentes infecciosos que pueden ser patgenos para el hombre, los animales u otras formas de vida comporta riesgos que varan segn el agente infeccioso y los procedimientos utilizados. 4. INTRODUCCIN Las normas de Seguridad Biolgica pretenden reducir a un nivel aceptable el riesgo inherente a la manipulacin de material peligroso y son muy rigurosas para los agentes ms peligrosos y menos exigentes para los que causan problemas de menor entidad. Deben ser consideradas como compromisos destinados a conseguir que las personas que trabajan con agentes infecciosos en el Laboratorio de Microbiologa estn expuestas al mnimo riesgo posible. 5. INTRODUCCIN Por otra parte, el personal del Laboratorio de Microbiologa est expuesto a riesgos no biolgicos (qumicos, fsicos, elctricos, etc.) comunes a otros laboratorios. La actitud y el modo de proceder de aquellos que trabajan en el Laboratorio de Microbiologa determinan su propia seguridad, as como la de sus compaeros y la de la colectividad. El equipo y el diseo del Laboratorio de Microbiologa contribuyen a esta seguridad. 6. INTRODUCCIN Los estudiantes deben responsabilizarse de su propia seguridad y de la de sus compaeros una vez las normas de seguridad han sido establecidas, aprobadas, escritas y asumidas. 7. SEGURIDAD DEL LABORATORIO DE MICROBIOLOGA 1. Deben existir normas escritas sobre seguridad incluyendo programas de inspeccin y monitorizacin y normas de adiestramiento para trabajar de forma segura. 2. Los estudiantes que estn expuestos a compuestos peligrosos deben formar parte de programas apropiados de reconocimiento mdico. 8. DEFINICIONES Agentes biolgicos Microorganismos, con inclusin de los genticamente modificados, cultivos celulares y endoparsitos humanos susceptibles de originar cualquier tipo de infeccin, alergia o toxicidad. Microorganismo Toda entidad microbiolgica, celular o no, capaz de reproducirse o de transferir material gentico. Cultivo celular El resultado del crecimiento in vitro de clulas obtenidas de organismos multicelulares. 9. DEFINICIONES Dao Es la consecuencia producida por un peligro sobre la calidad de vida individual o colectiva de las personas. Riesgo Probabilidad de que ante un determinado peligro se produzca un cierto dao, pudiendo por ello cuantificarse. Desinfeccin Eliminacin de agentes infecciosos que estn fuera del organismo por medio de la exposicin directa a agentes qumicos o fsicos. 10. DEFINICIONES Contaminacin Presencia de un agente infeccioso en la superficie del organismo; tambin en vestimenta, ropa de cama, juguetes, instrumentos quirrgicos, apsitos u otros objetos inanimados o substancias, incluyendo el agua y los alimentos. Esterilizacin Destruccin de todas las formas de vida por calor, radiacin, gas o tratamiento qumico. 11. DEFINICIONES Limpieza Eliminacin, mediante fregado y lavado con agua caliente, jabn o un detergente adecuado, o por el empleo de una aspiradora, de agentes infecciosos y substancias orgnicas de superficies en las cuales stos pueden encontrar condiciones adecuadas para sobrevivir o multiplicarse. 12. CLASIFICACIN DE LOS LABORATORIOS POR GRUPOS BIOLGICOS DE RIESGO Grupo 1. Aqul que resulta poco probable que cause una enfermedad en el hombre. Grupo 2. Aqul que puede causar una enfermedad en el hombre y puede suponer un peligro para los estudiantes, siendo poco probable que se propague a la colectividad y existiendo generalmente profilaxis o tratamiento eficaz. 13. Grupo 3. Aqul que puede causar una enfermedad grave en el hombre y presenta un serio peligro para los estudiantes, con riesgo de que se propague a la colectividad y existiendo frente a l generalmente profilaxis o tratamiento eficaz. Grupo 4. Aqul que causando una enfermedad grave en el hombre supone un serio peligro para los estudiantes, con muchas probabilidades de que se propague a la colectividad y sin que exista generalmente frente a l profilaxis o tratamiento eficaz. CLASIFICACIN DE LOS LABORATORIOS POR GRUPOS BIOLGICOS DE RIESGO 14. NIVELES DE CONTENCIN La Seguridad Biolgica se fundamenta en tres elementos: 1. Las tcnicas de laboratorio, 2. El equipo de seguridad (o barreras primarias) y 3. El diseo de la instalacin (o barreras secundarias). 15. NIVELES DE CONTENCIN El trmino "contencin" se emplea para describir los mtodos que hacen seguro el manejo de materiales infecciosos en el laboratorio. El propsito de la contencin es reducir al mnimo la exposicin del personal de los laboratorios, otras personas y el entorno a agentes potencialmente peligrosos 16. Nivel de contencin 1 Es el nivel de seguridad requerido para los agentes que no producen enfermedad en el ser humano sano y de susceptibilidad conocida y estable a los agentes antimicrobianos. Es el utilizado habitualmente en los laboratorios de prcticas de universidades o centros docentes donde se emplean cepas no patgenas (E. coli K12, Saccharomyces cerevisiae, etc.). Ejemplos tpicos son todos los microorganismos que se utilizan en la industria de la alimentacin para la elaboracin de quesos, cerveza, embutidos, etc. 17. Nivel de contencin 2 Es el obligado para agentes del grupo 2 como algunos que, perteneciendo a la propia flora habitual del hombre, son capaces de originar patologa infecciosa humana de gravedad moderada o limitada. Deben ser manipulados por personal especializado (tcnicos de laboratorio, especialistas en Microbiologa) y son los que con ms frecuencia se estudian en el Laboratorio de Microbiologa Clnica: estafilococos, Salmonella, etc 18. Nivel de contencin 3 El mayor y ms frecuente peligro que entraan stos es la infeccin adquirida a travs de aerosoles y por fluidos biolgicos. Por ello, las principales medidas a tomar en este caso son la correcta manipulacin y la utilizacin de cabinas de seguridad. En los Laboratorios de Microbiologa Clnica los ejemplos ms tpicos de este tipo de microorganismos son M. tuberculosis, Brucella, Coxiella burneti, etc. Slo pueden ser procesados por personal cualificado y en una zona con la infraestructura apropiada para el Grupo 3, es decir, con aire acondicionado independiente, sin recirculacin de aire, con gradiente de presin, cabinas de bioseguridad, etc. 19. Nivel de contencin 4 Nivel requerido cuando se procesa con certeza o se sospecha un agente especialmente patgeno e infectocontagioso, extico o no, que produce alta mortalidad y para el que no existe tratamiento y/o es poco fiable. Normalmente son microorganismos de dosis infectiva baja y alta contagiosidad. Este nivel tambin puede utilizarse para trabajar con animales de experimentacin infectados por microorganismos del Grupo 4. 20. Nivel de contencin 4 Ejemplos de este nivel son los arenavirus como el que produce la fiebre de Lassa y el virus Machupo, virus Ebola, etc. Adems, deben incluirse en este nivel de contencin los microorganismos propios del grupo 3 que adquieran propiedades patgenas que los eleven al grupo 4. Un ejemplo sera Mycobacterium bovis multirresistente que puede causar fallecimiento por fracaso teraputico 21. Tcnicas de laboratorio. El elemento ms importante para contener los riesgos biolgicos es el seguimiento estricto de las prcticas y tcnicas estndar microbiolgicas. Como parte de estas prcticas est el desarrollo o adopcin por parte de cada laboratorio de un manual de operaciones en el que se identifiquen los riesgos que pueda sufrir el personal y que especifique los procedimientos que puedan minimizar esos riesgos 22. Equipo de Seguridad Se incluyen en este apartado tanto dispositivos o aparatos que garantizan la seguridad (por ejemplo, las cabinas de seguridad biolgica), como las prendas de proteccin personal (guantes, mascarillas, batas, calzado...). 23. Diseo y construccin de la instalacin La magnitud de las barreras secundarias depender del tipo de agente infeccioso que se manipule en el laboratorio. Dentro de ellas se incluyen la separacin de las zonas donde tiene acceso el pblico, la disponibilidad de sistemas de descontaminacin (autoclaves), el filtrado del aire de salida al exterior, el flujo de aire direccional, etc. 24. MEDIDAS DE SEGURIDAD GENERALES El acceso al laboratorio estar limitado al personal autorizado. No deben entrar en el mismo familiares ni amigos. El personal del laboratorio debe implicarse en el cumplimiento de las normas de seguridad. Todas las reas estarn debidamente marcadas con la seal de riesgo biolgico y su nivel de contencin. Las puertas y ventanas deben permanecer cerradas para mantener la adecuada contencin biolgica. 25. Todas las superficies de trabajo se limpiarn y desinfectarn diariamente y siempre que se produzca un derrame. Los residuos y muestras peligrosas que van a ser incinerados fuera del laboratorio deben ser transportados en contenedores cerrados, resistentes e impermeables siguiendo las normas especficas para cada tipo de residuo. MEDIDAS DE SEGURIDAD GENERALES 26. El laboratorio debe permanecer limpio y ordenado y no es aconsejable utilizar los pasillos como almacn. Todo el personal debe poner especial cuidado en evitar el contacto de la piel con materiales potencialmente infecciosos. Con este fin deben usarse guantes cuando se manipulen muestras o cultivos que contengan posibles patgenos. Los guantes siempre sern desechados antes de salir del rea de trabajo. Jams se saldr de la misma con los guantes puestos, ni con ellos se coger el telfono, se tocarn los volantes, etc. MEDIDAS DE SEGURIDAD GENERALES 27. MEDIDAS DE SEGURIDAD GENERALES Tras quitarse los guantes, se realizar un lavado de manos. Se usarn gafas protectoras y mascarillas faciales si existe riesgo de salpicaduras y/o aerosoles. Se pondr extremo cuidado en minimizar el riesgo de autoinoculacin y de generacin de aerosoles. Los derrames y accidentes deben ser informados inmediatamente al Profesor y al Tecnico del Laboratorio. 28. Est rigurosamente prohibido pipetear con la boca. Se realizar pipeteo automtico con material adecuado y cada trabajador ser instruido para manejarlo debidamente. En la zona de trabajo no debe colocarse material de escritorio ni libros ya que el papel contaminado es de muy difcil esterilizacin. No debern usarse lentes de contacto. MEDIDAS DE SEGURIDAD GENERALES 29. HIGIENE El personal con el cabello largo debe llevarlo recogido. Comer, beber, fumar y aplicarse cosmticos esta formalmente prohibido en el rea de trabajo del laboratorio, as como el almacenamiento de comida o bebida. El personal debe lavarse las manos frecuentemente durante las actividades rutinarias, tras acabar la jornada laboral y siempre antes de abandonar el laboratorio (almorzar). Se usar un jabn antisptico y el secado se realizar con papel. 30. GABINETES DE FLUJO LAMINAR Cuando se trabaja con productos o microorganismos peligrosos adems, es necesario proteger al operador y al medio ambiente. Para lograrlo disponemos de GABINETES DE FLUJO LAMINAR que nos permiten proteger el producto que se elabora y de GABINETES DE SEGURIDAD BIOLGICA que nos permiten proteger el producto, el personal y el medio ambiente. La seleccin del equipo depender del material con el cual se trabaje. 31. HEPA Las gabinetes de flujo laminar proporcionan un rea delimitada por superficies fciles de limpiar y desinfectar con un flujo de aire filtrado a travs de prefiltros, que retienen las partculas ms grandes que estn presentes en el aire, y por filtros HEPA (High Efficiency Particulate Air), que son filtros de alta eficiencia capaces de retener partculas 0,3 m con una eficiencia mnima del 99,97%. 32. HEPA Cuando todo el aire que entra a la zona de trabajo es filtrado a travs de los filtros HEPA se produce un flujo unidireccional, ya que el aire se mueve a travs del rea de trabajo con una velocidad uniforme a lo largo de lneas paralelas logrando un barrido o eliminacin de las partculas presentes en el mismo. Anteriormente este movimiento se llamaba laminar, por esa azn los equipos se denominaron gabinetes de flujo laminar, nombre que se sigue utilizando. 33. Flujo Laminar Dependiendo de la ubicacin del filtro HEPA existen en el mercado DOS tipos de gabinetes de flujo laminar: 1. Las de flujo horizontal, son aquellas en las que el filtro HEPA est colocado en la parte posterior de la campana, por lo que el flujo de aire unidireccional se mueve a travs de lneas paralelas horizontales, es decir desde la parte posterior del equipo hacia el operador. 34. Flujo Laminar Este tipo de equipo no puede utilizarse para trabajar con productos peligrosos, por ejemplo ciertos antibiticos y quimioterpicos, ya que durante la manipulacin se pueden generar aerosoles que el flujo de aire llevar hasta el operador. Las gabinestes de flujo vertical, son aquellas en las que el filtro HEPA est colocado en la parte superior de la campana, por lo que el flujo de aire unidireccional se mueve a travs de lneas paralelas verticales. Tienen una pantalla protectora transparente que cubre la parte frontal superior de lamisma. En este caso, aunque hay mayor proteccin que con la anterior, no se recomienda para productos peligrosos, ya que el aire contaminado sale al ambiente de trabajo. 35. GABINETES DE SEGURIDAD BIOLGICA En los casos que se necesita trabajar con ciertos microorganismos, productos citotxicos o que causen reacciones alrgicas, se deben utilizar gabinetes de seguridad biolgica que son similares en diseo a las gabinetes de flujo laminar vertical, pero que tienen en la salida de aire los mismos filtros HEPA que retienen los contaminantes, logrndose de esta manera la proteccin del producto, el operador y el medio ambiente. 36. CONSIDERACIONES GENERALES PARA TRABAJAR EN gabinetes DE FLUJO LAMINAR Y EN GABINETES DE SEGURIDAD BIOLGICA Estos equipos deben estar colocados en cuartos, libres de corrientes de aire, y de acceso restringido. Usualmente hay un vestuario previo donde el personal se coloca la bata y dems prendas. El personal que va a trabajar en la campana debe llevar ropa limpia. Se recomiendan batas manga larga con puos cerrados, gorros y cubrezapatos. Dependiendo de la tarea a realizar se puede requerir el uso de guantes (sin talco). En otros casos se exige el uso de uniformes especiales estriles. El flujo de aire unidireccional puede perturbarse por corrientes de aire provocadas por movimientos bruscos realizados en su interior, por caminar rpidamente frente a ella o por equipos que puedan producirlas, por lo cual se recomienda no introducir y sacar las manos durante la realizacin del trabajo y moverlas lentamente en su interior. 37. Al trabajar en una gabinete de flujo laminar o en un gabinete de seguridad biolgica se debe: Hacer una lista de todos los materiales que se requerirn para realizar el trabajo. Desinfectar la superficie de trabajo utilizando un pao humedecido con alcohol al 70% comenzando desde la parte posterior hacia afuera, repitiendo el proceso con movimientos solapados. Colocar todos los materiales en el orden en que sern utilizados. Encender la campana o gabinete por lo menos 30 minutos antes de comenzar a trabajar. Antes de ingresar al rea donde se encuentra la campana o gabinete, lavar las manos y antebrazos con un jabn que posea actividad antimicrobiana. Secarlas con paos que liberen un bajo nmero de partculas. 38. Cont. Realizar las manipulaciones en la parte central del equipo, sin tapar las rejillas laterales. Retirar todos los materiales del equipo al terminar el trabajo, desinfectar con alcohol al 70% de la manera indicada anteriormente. Dejar encendida la campana por lo menos 15 minutos para que puedan eliminarse de la zona de trabajo los posibles contaminantes. Es importante recordar que cuando se trabaja en estos equipos no se puede comer, beber, fumar o masticar chicle. 39. REFERENCIAS Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. CDC/NIH. U.S. Department of Health and Human Services, Public Health Service (4 ed.). Washington; 1999. Mahon, Conni and Manuselis, George. Textbook of Diagnostic Microbiology. Second edition. USA: W.B. Saunders Company; 2000. Organizacin Mundial de la Salud. Manual de Bioseguridad en el Laboratorio. Ginebra: OMS; 2005