UNIVERSIDAD PRIVADA DE TACNA Escuela Profesional de Ingeniera Ambiental - Microbiologa

RECONOCIMIENTO Y DESCRIPCIN DE MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS DE LABORATORIO DE MICROBIOLOGA

1. INTRODUCCIN

Es necesario que antes de comenzar cualquier trabajo experimental, el alumno conozca el material que se utiliza. Cada uno de los materiales tiene una funcin y su uso debe ser acorde con la tarea a realizar. La utilizacin inadecuada de este material da lugar a errores en las experiencias realizadas y aumenta el riesgo en el laboratorio. En el laboratorio y en las prcticas es esencial la utilizacin de instrumentos para el manejo de los qumicos y dems aparatos contenidos en l. Hay una serie de instrumentos desde el termmetro que sirve para medir la temperatura hasta el cilindro graduado el cual lo empleamos para los volmenes de un qumico. Es por eso necesario el reconocimiento de estos, cual y como es su uso, por eso muy importante reconocerlos.Todos realizan una accin especfica de acuerdo a la situacin en que nos encontremos. Muchas personas lo haya difciles de manejar, solo al ver su forma y estado de delicadez. Eso es errneo son fciles dependiendo del buen manejo y cuidado con que los toquen. Los tubos de ensayos son los mas utilizados desde servir un lquido bien sea toxico o indefenso para su observacin hasta para hervir o calentar una sustancia soluble.

2. OBJETIVOS

Reconocer los materiales, reactivos y equipos de Laboratorio Describir el uso de los equipos y materiales Dar a conocer las normas de seguridad de Laboratorio

3. FUNDAMENTO TERICO

Es muy importante que los materiales y equipos de uso comn en el laboratorio se identifiquen por su nombre correcto y uso especifico que tiene cada uno, pero mas importante es saber manejarlo correctamente en el momento oportuno, teniendo en cuenta los cuidados y normas especiales para el uso de aquellos que as lo requieran.

Los instrumentos y tiles de laboratorio estn constituidos de materiales diversos y se clasifican de la siguiente maneraLos materiales de laboratorio se clasifican de la siguiente forma VOLUMTRICO: Dentro de este grupo se encuentran lo materiales de vidrio calibrados a una temperatura dada, permite medir volmenes exactos de sustancias (matraces, pipetas, buretas, probetas graduadas).El instrumental de vidrio usado para realizar investigaciones o reacciones qumicas debe ser fabricado con materiales resistentes a la accin de los agentes qumicos.

1. MATRAZ: El matraz es uninstrumento de laboratorioel cual se usa como recipiente de cristal donde se mezclan las soluciones qumicas, generalmente de forma esfrica y con un cuello recto y estrecho, que se usa para contener lquidos; se usa en los laboratorios. (fig. 01) Matraz de Erlenmeyer:es un frasco transparente de forma cnica con una abertura en el extremo angosto, generalmente prolongado con un cuello cilndrico, suele incluir algunas marcas.Por su forma es til para realizar mezclas por agitacin y para la evaporacin controlada de lquidos; adems, su abertura estrecha permite la utilizacin de tapones. Elmatraz de Erlenmeyerno se suele utilizar para la medicin de lquidos ya que sus medidas son imprecisas.

2. PROBETA: La probetaes uninstrumento de laboratoriovolumtrico, estese usa para medir volmenesconsiderables y para depositar lquidos. (fig. 02)

3. PIPETA: La pipetaes uninstrumento de laboratorioel cual sirve para medir o transvasar cantidades pequeas de liquido de un recipiente a otro. (fig. 03)

4. PIPETA AUTOMTICA: Las pipetas automticas son dispositivos que se caracterizan por carecer de depsito y se utilizan principalmente para medir otransvasar pequeos volmenes de lquido de un recipiente a otro con gran exactitud. (fig. 04)

5. PISETA: Es unfrasco lavador, cuya funcin bsica es delimpieza (fig. 05)

6. ACEITE DE INMERSION: La funcin del aceite de inmersin es restringir el movimiento de la muestra, adems de evitar el rozamiento entre el cubre objetos y el objetivo, generalmente se lo utiliza cuando vamos a observar con el objetivo 100x. Otra funcin del aceite de inmersin es evitar que la luz se desve; al contrario lo que se pretende es que la luz llegue concentrada hacia la muestra.(fig. 06)

7. GRADILLA: Una gradilla es una herramienta utilizada para dar soporte a los tubos de ensayos o tubos de muestras. Normalmente es utilizado para sostener y almacenar este material. Este se encuentra hecho de madera, plstico o metal. (fig. 07)

CALENTAMIENTO O SOSTN: Son aquellos que sirven para realizar mezclas o reacciones y que adems pueden ser sometidos a calentamiento (vaso de precipitado, erlenmeyer, cristalizador, vidrio de reloj, baln, tubo de ensayo).

1. VASO DE PRECIPITADO: El vaso de precipitado es unmaterial de laboratorioque se utiliza para contener lquidos o sustancias, para as poder disolverlas, calentarlas, enfriarlas, etc. Se pueden encontrar vasos precipitados de diferentes volmenes (desde 1ml hasta varios litros), el vaso de precipitado suele usarse en operaciones de laboratorio donde no se necesite la medida exacta del volumen del lquido. (fig. 08)

2. TUBOS DE ENSAYO: Eltubo de ensayoes uno de los principalesinstrumentos de laboratorioya que este se usa en cualquier procedimiento, como la preparacin de soluciones o la toma de muestras que luego sern depositadas en este. (fig. 07)

3. PLACAS DE PETRI: Es utilizado para poder observar diferentes tipos de muestras tanto biolgicas como qumicas, las cuales se encuentran encerradas dentro de la placa o para el cultivo de bacterias y otras especies relacionadas. (fig. 09)

4. AGAR : Unaplaca de agares unaplaca de Petrique contiene unmedio de cultivo(comnmenteagarms nutrientes) usada en microbiologa para cultivar microorganismos o pequeas plantas

5. MECHERO BUNSEN: Es un instrumento utilizado en laboratorios cientficos para calentar o esterilizar muestras oreactivos qumicos. Una de las fuentes de calor ms sencillas del laboratorio y es utilizado para obtener temperaturas no muy elevadas. (fig. 10)

6. COCINILLA ELECTRICA: Sirve para calentar sin llama, evitando la combustin espontanea de compuestos gaseosos inflamables. (fig. 11)

EQUIPOS DE MEDICIN: Es un instrumento que se usa para comparar magnitudes fsicas mediante un proceso de medicin. Como unidades de medida se utilizan objetos y sucesos previamente establecidos como estndares o patrones y de la medicin resulta un nmero que es la relacin entre el objeto de estudio y la unidad de referencia. Los instrumentos de medicin son el medio por el que se hace esta conversin. Ejs: balanza, pHmetro, termmetro.

EQUIPOS ESPECIALES: Equipos auxiliares para el trabajo de laboratorio. Ejs: centrfuga, estufa, bao termosttico, etc.

1. AUTOCLAVE: Es un sistema cerrado donde se forma vapor de agua que se somete a una presin elevada, una atmsfera, lo que hace que el agua alcance una temperatura de 121C causando la desnaturalizacin de enzimas lo que conlleva a la muerte de los microorganismos y la destruccin de las esporas. Habitualmente, se esteriliza a 121C durante 20 minutos. (fig. 12)

2. INCUBADORA: LaIncubadora es un equipo con funciones especficas que permite controlar, segn su diseo, temperatura y humedad para crear un ambiente adecuado apto para la reproduccin y desarrollo de organismos vivos. Algunas de las aplicaciones mas comunes son los cultivos microbiolgicos, microlgicos y virales, entre otros.

3. HORNO: Elhorno de laboratorioes un tipo dehornocomnmente usado para deshidratar reactivos delaboratorioo secar instrumentos. El horno aumenta su temperatura gradualmente conforme pase el tiempo as como tambin sea su programacin, cuando la temperatura sea la ptima y se estabilice, el trmico mantendr la temperatura; si esta desciende volver a activar las resistencias para obtener la temperatura programada. (fig. 13)

4. MICROSCOPIO: Unmicroscopiocomo sabemos es un instrumento que se utiliza para ver objetos que son demasiado pequeos para ser distinguidos por el ojo. La ciencia de investigacin de objetos pequeos utilizando este instrumento se llamamicroscopa. As pues Microscpico significa invisible al ojo humano a no ser con la ayuda de un microscopio. (fig. 14)

5. MEDIOS DE CULTIVO: Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es elMedio de Cultivoy el crecimiento de los microorganismos es elCultivo. Se han preparado ms de 10.000 medios de cultivo diferentes. Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presin de oxgeno adecuadas, as como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante. La mayora de las bacterias patgenas requieren nutrientes complejos similares en composicin a los lquidos orgnicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios de cultivo es una infusin de extractos de carne y Peptona a la que se aadirn otros ingredientes. (fig. 15)

4. TECNICAS FUNDAMENTALES DE LABORATORIO:

1. ORDEN Y USO DE LOS REACTIVOS

Cuando varias personas deban hacer uso de los mismos reactivos, cada cual debe ir al lugar del mismo con su vaso para tomar la cantidad necesaria. No llevar los reactivos a la mesada. Los productos qumicamente puros o para anlisis, extrados del envase en cantidades excesivas, no deben volverse a poner en el frasco original y tampoco deben ser manejados con los dedos. Al sacar un lquido para pasar a otro envase cuide que los rtulos estn hacia arriba, de ese modo, si chorrea no se perjudican las etiquetas.

2. MANEJO DEL TUBO DE ENSAYO

No use tubos de ensayo que tengan rotura cerca del borde, el calor somete al vidrio a tensiones y el tubo bajo la accin de la pinza puede romperse fcilmente. Tome el tubo a uno o dos cm por debajo del borde con la pinza de madera y comience calentando suavemente. Ponga el tubo por encima de la llama sin tocarla agitndola ligeramente. Mantenga siempre el tubo con la boca apuntando en direccin contraria a la de su cuerpo o al de cualquier otra persona que trabaje cerca. Una vez que el lquido se calienta el tubo puede ubicarse dentro de la llama, a corta distancia del fondo, y nunca por encima del nivel del lquido contenido. Si el tubo contiene materiales granulados o en polvo, el calentamiento debe ser ms lento an.

3. MATERIAL DE VIDRIO

El material de vidrio se debe dejar limpio y en lo posible seco luego de cada clase. Cuando la suciedad es reciente, es ms fcil removerla. Muchas veces agua y detergente y las escobillas adecuadas son suficientes para una limpieza correcta. En otras ocasiones puede utilizarse solucin de hidrxido de sodio como desengrasante. Si esto no fuese suficiente y se desconociera la naturaleza de la suciedad, se puede ensayar el uso de cido clorhdrico, ntrico y sulfrico diluido. Cualquiera sea el sistema que se utilice se debe enjuagar muy bien el material de vidrio con agua corriente varias veces y finalmente con agua destilada.

4. MANEJO DE REACTIVOS:

SLIDOS: se toman con esptulas adecuadas, limpias y secas, para transferirlos a tubos o a cualquier otro tipo de recipiente. LQUIDOS: En general, un lquido se vierte directamente de un recipiente a otro. Para evitar salpicaduras, se apoya una varilla de vidrio sobre el pico del recipiente de forma que el lquido fluya por la varilla y se recoja en el otro recipiente. Para un recipiente que tiene una abertura pequea, debe utilizarse un embudo de vidrio seco y limpio. Despus de terminar de verter el reactivo de la botella limpiar el lquido que pueda haberse cado por el exterior, lavndola y secndola con un pao. Esto tiene especial importancia cuando se utilizan reactivos corrosivos o venenosos que puedan causar serias quemaduras o heridas. Si las cantidades son pequeas y el volumen debe ser medido la forma adecuada de operar es transferir un poco de lquido a un vaso limpio y seco, luego de all extraer lo necesario con una pipeta. La pipeta a utilizar debe estar limpia y absolutamente seca por dentro y por fuera. El exceso de lquido no debe devolverse al frasco original.

5. LECTURA DE VOLMENES

La superficie libre de los lquidos es horizontal, sin embargo se curva, generalmente hacia arriba, en contacto con las paredes del recipiente que los contiene formando un menisco (meni, del griego luna) cncavo, como en el agua. Las lecturas se deben realizar en la parte inferior del menisco colocando el ojo al nivel del mismo para evitar errores de paralaje. Cuando el menisco es convexo (caso del mercurio sobre vidrio) la lectura debe hacerse por la parte superior.

6. MEDICIN CON PIPETA

Las pipetas deben llenarse con una perita de goma o propipeta, para evitar accidentes ocasionados al subir el lquido por encima del aforo superior. Nunca succionar con la boca. Nunca dejar colocada la propipeta en la pipeta despus de utilizarla, ni dejar las pipetas dentro de los frascos. Retirarlas al terminar de usarlas. En las pipetas suele quedar volumen pequeo de lquido en su punta, esa porcin es constante y en la graduacin de la misma ya ha sido calculada; no se debe sacudir ni mucho menos soplar para eliminar ese exceso. No apoyar las pipetas en la mesada debe colocarlas en un soporte. Para medir con pipetas seguir las siguientes indicaciones: Observar atentamente la pipeta ubicando el volumen mximo y mnimo. Introducir la pipeta en el recipiente con el lquido, colocar la perita o propipeta. Extraer el aire, presionando A en la propipeta (parte superior de la misma) Succionar el lquido (presionando S en la propipeta o presionando la perita de goma), cuidando que sobrepase levemente la escala graduada. En caso de usar perita de goma, retirar la misma y tapar inmediatamente con el dedo ndice la pipeta. Sostener verticalmente la pipeta y dejar fluir el lquido excedente hasta llegar a la marca cero, presionando E en la propipeta o levantando levemente el dedo de la pipeta. Deje caer parte del lquido leyendo sobre la escala graduada el nuevo volumen

7. MEDICIN CON PROBETA

Se utiliza para la medicin de volmenes mayores de lquido, efectuando las lecturas considerando al igual que para la lectura con pipeta la tangente del menisco indicada en la figura precedente.

8. MEDIOS DE CULTIVO

A. LISINA HIERRO AGAR : Medio de cultivo utilizado para diferenciar microorganismos, especialmente Salmonella spp., basado en la decarboxilacin / desaminacin de la lisina y en la produccin de cido sulfhdrico.

B. MR-VP MEDIO : Medio utilizado para la realizacin del ensayo de Rojo de Metilo y Voges Proskauer.Es particularmente til para la clasificacin de enterobacterias.C. POTATO DEXTROSE AGAR: El ms simple y popular medio de crecimiento del micelio para la mayora de los hongos cultivadosD. TRYPTIC SOY: Son los medios de comunicacin de uso general, que proporciona los nutrientes suficientes para permitir una amplia variedad de microorganismos para crecer. Se utilizan para una amplia gama de aplicaciones, incluyendo el almacenamiento de la cultura, la enumeracin (contando), el aislamiento de cultivos puros, o simplemente la cultura general.E. KLIGLER AGAR: Medio de cultivo frecuentemente usado en microbiologa de alimentos para la diferenciacin de enterobacterias, en base a la fermentacin de glucosa y lactosa, y a la produccin de cido sulfhdrico.F. LACTOSE BROTH: Es un medio fluido para selectivo de pre-enriquecimiento de enterobacterias, as como para E. coli y Salmonella en agua, alimentos y productos farmacuticos.G. MANITOL SALADO AGAR : Medio de cultivo selectivo y diferencial, utilizado para el aislamiento y diferenciacin de estafilococos.Es recomendado para el aislamiento de estafilococos patognicos a partir de muestras clnicas, alimentos, productos cosmticos y otros materiales de importancia sanitaria.Tambin, este medio puede utilizarse para el cultivo de especies halfilas de Vibrio, si no se dispone de medios apropiados (TCBS Medio, Medio Marino, etc.), aunque algunas especies pueden no desarrollar.H. PLATE COUNT AGAR: Es un medio de crecimiento microbiolgica comnmente utilizada para evaluar o para monitorizar "total" o el crecimiento de bacterias viables de una muestra. PCA no es un medio selectivo.I. MAC CONKEY AGAR: Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fcil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias que utilizan o no, lactosa en muestras clnicas, de agua y alimentos. Todas las especies de la familia Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo.J. TSI AGAR: Medio universalmente empleado para la diferenciacin de enterobacterias, en base a la fermentacin de glucosa, lactosa, sacarosa y a la produccin de cido sulfhdrico.K. T.C.B.S CHOLERA AGAR: Un medio de aislamiento selectivo para los vibrios patgenos.L. BUFFERED RAPPAPORT VASSILIADIS BROTH : Un fluido de enriquecimiento selectivo para el aislamiento de Salmonella.M. MUELLER HINTON AGAR : Este medio de cultivo ha sido recomendado universalmente para la prueba de sensibilidad a los antimicrobianos. Adems es til con el agregado de sangre para el cultivo y aislamiento de microorganismos nutricionalmente exigentes.N. BLOOD AGAR BASE: Mejora se utiliza con sangre para el aislamiento y cultivo de una amplia variedad de microorganismos exigentesO. SIMMONS CITRATO AGAR : Medio utilizado para la diferenciacin de enterobacterias, en base a la capacidad de usar citrato como nica fuente de carbono y energa.P. BAIRD PARKER AGAR BASE:Medio de alta especificidad diagnstica, selectivo y diferencial para el aislamiento y recuento de estafilococos coagulasa positiva en alimen- tos y otrosQ. CETRIMIDAAGARBASE: Medio utilizado para el aislamiento selectivo de Pseudomonas aeruginosa y de otras especies del gnero.R. AGAR ENDO: Es un medio de cultivo diferencial y ligeramente selec- tivo utilizado para la deteccin de coliformes y otros microorganis- mos entricos.S. E. C. MEDIO: Medio utilizado para el recuento de coliformes totales, coliformes fecales y Escherichia coli en agua, alimentos y otros materiales.T. VIOLETA ROJO Y BILIS GLUCOSA AGAR : Medio de cultivo utilizado para la deteccin y el recuento de enterobacterias totales, a partir de alimentos.

5. ANEXOS : Del 1 al 15 respectivamente.

MATRAZ PROBETA

MICROPIPETAMIMICROPIPETPIPETA

REACTIVOSAGUA DESTILADA

VASO DE PRECIPITADOTUBOS DE ENSAYO

MECHEROSPLACAS PETRI

AUTOCLAVECOCINILLA

MICROSCOPIO TRINOCULARHORNO

MEDIOS DE CULTIVO6. ANEXOS : MEDIOS DE CULTIVO

7. CONCLUSIONES

Todos los materiales son esenciales y cada uno tiene su propia funcin ya que ayudan a llevar a cabo de manera eficiente investigaciones y experimentos que sean necesarios.

8. RECOMENDACIONES

Tener en cuenta, que el uso de mandil o guarda polvos en el laboratorio, es esencial para poder evitar quemaduras, manchas o alguna otra reaccin en nuestra ropa, ya que este, nos ayuda a protegernos de cualquier suceso que se pueda ocurrir en el momento de la experimentacin. Tener nuestra mesa de trabajo libre de cualquier objeto que pueda daar los materiales de vidrio y/o las muestras. Precaucin al manipular sustancias reactivas que puedan daar o alterar nuestro organismo, siempre guardar la postura, y trabajar con mucha responsabilidad. Todos los materiales son esenciales y cada uno tiene su propia funcin ya que ayudan a llevar a cabo de manera eficiente investigaciones y experimentos que sean necesarios Tomar en cuenta las observaciones descritas por el Ing. de Laboratorio, es esencial, es por eso que debemos prestar atencin, y estar atentos a sus explicaciones

9. BIBLIOGRAFIA http://analisisaproductoscarnicos.blogspot.com/2012/06/practica-numero-1-reconocimiento-del.html. (s.f.).