1

DIAGNÓSTICO

?Clínico

?Directo=Etiológico=Morfológico

?Indirecto

Coprológico

Coprocultivos

Hemático

Genitourinarios

Biopsias

Inmunodiagnóstico

Genético

Precipitación

Aglutinación

Complemento

Anticuerpos marcados

Principales parasitosis diagnosticadas coprologicamenteHelmintos (huevos)

2

Principales parasitosis diagnosticadas coprologicamenteProtozoos (trofozoitos de amebas)

Principales parasitosis diagnosticadas coprologicamenteProtozoos (quistes)

3

Principales parasitosis diagnosticadas coprologicamenteProtozoos (flagelados)

Principales parásitos notificados al Sistema de Información Microbiológica (SIM)

Total anual

2002 2001 2000 1999

Anisakis 3 5 1 2

Ascaris lumbricoides 64 37 37 10

Blastocystis hominis 409 378 308 213

Chilomastix mesnili 4 2 1 1

Cryptosporidium sp 121 88 54 97

Cyclospora cayetanensis 30 0 1 0

Echinococcus granulosus 5 10 38 29

Entamoeba coli 20 37 32 31

Entamoeba histolytica 33 15 3 6

Entamoeba sp 5 2 0 3

Enterobius vermicularis 262 197 243 232

Fasciola hepatica 0 2 1 2

Giardia lamblia 730 561 508 523

Leishmania donovani 2 3 4 1

Leishmania sp 24 26 16 7

Plasmodium falciparum 120 114 100 84

Plasmodium malariae 2 8 3 2

Plasmodium ovale 8 7 10 3

Plasmodium sp 3 10 18 16

Plasmodium vivax 23 38 29 22

Schistosoma haematobium 2 1 0 1

Schistosoma mansoni 0 2 1 0

Taenia saginata 39 29 19 19

Taenia sp 1 39 29 47

Toxocara canis 37 1 4 1

Toxoplasma gondii 78 58 61 45

Trichomonas vaginalis 198 168 164 165

Trichuris trichiura 86 72 35 11

Otros 146 122 92 88

Número de laboratorios

declarantes 35 35 36 37

4

Artefactos o pseudoparásitos-I

HuevoTrichuris

Polen

PolenPolen

MacrófagosEritrocitosCel. sanguíneas

Cristal Charcot-Leyden

Pelo vegetalCélula vegetal

Polen

Espiral vegetal

Levaduras

Huevos insectos

Cuerpos grasos

Parásito vegetal

Artefactos o pseudoparásitos-II

5

TOMA DE MUESTRAS

?Recomendaciones al paciente

?Número de muestras

?Cantidad

?Recipientes y seguridad

?Examen y consistencia de las heces

CONSERVACIÓN DE LAS HECES-I

?Fijador de Schaudinn

HgCl2, etanol, glicerina y acéticoQuistes y trofozoitosTincionesNo concentración

?Alcohol polivinilico

Schaudinn+PVAQuistes y trofozoitos (óptimo)TincionesConcentraciónLaborioso

?SAF

Acetato sódico, acético y formolConserva la mayoría de las formas parasitariasConcentraciónNo HgPreparación fácil y vida media muy alta

6

?Formol

5% (quistes) y 10% (huevos helmintos)No valido para trofozoitosConcentraciónNo tinciónPreparación sencilla

?MYFMertiolato, yodo y formol¿Permite concentración?Preserva y tiñe

?Azida sódicaConserva casi todas las formasMuy tóxica

CONSERVACIÓN DE LAS HECES-II

EXAMEN MACROSCÓPICO

?Consistencia de las heces

?Presencia de mucus y sangre

?Formas parasitarias macroscópicas

FormesSemiformesBlandasLíquidas

LimpiezaMontaje

7

EXAMEN MICROSCÓPICO DIRECTO

?Heces muco-sanguinolentas (rápido o fijar en PVA)

?Líquidas o semilíquidas (pocas horas)

?Formes o semiformes (hasta 24h)

?¿Cómo realizarlo?Toma de muestraTinción opcionalObservación

Heces

Soluciónfisiológica

Cubreobjetos

Métodos de observación

Frotis fecal para tinción permanente

Toma de muestra

Aplicación de lamuestra

Extensión de lamuestra

8

EXAMEN MICROSCÓPICO PREVIA CONCENTRACIÓN

?Operaciones previas

?Métodos

HomogeneizarRestos voluminososRestos pesados

Físicos SedimentaciónFlotación

Físico-químicos (difásicos)

Efectividad del diagnostico en función delmétodo seleccionado

Homogeneización Eliminación restosvoluminosos

Eliminación restospesados

Operaciones previas

9

MÉTODOS DE SEDIMENTACIÓN-I

?Faust e Ingalls

?Jahnes y Hodges

1. Agua glicerinada2. Tamizar3. Sedimentar (1h)4. Decantar sobrenadante5. Repetir el proceso dos veces (45 y 30 min)6. Observar sedimento

?Baroody y Most

1. Agua glicerinada o alcoholizada2. Tamizar3. Sedimentar 30 s4. Centrifugar sobrenadante (1500rpm, 1-2 min)5. Resuspender y centrifugar de nuevo6. Repetir el ultimo proceso hasta clarificar7. Observar sedimento

?Van Someren(Modificado por Gregoire)

1. Tween-80 al1%2. Tamizar3. Llenar tubo con pinza abierta (2 m aprox)4. Sedimentar (20 min)5. Cerrar pinza y abrir llave6. Observar

MÉTODOS DE SEDIMENTACIÓN-II

10

MÉTODOS DE FLOTACIÓN-I

?Fulleborn (salmuera)

1. Homogeneizar2. Reposar 45 min3. Observar capa superior

?Willis (salmuera)1. Homogeneizar2. Llenar tubo Borrel hasta formar menisco3. Cubreobjetos sobre menisco4. Reposar 15 min5. Observar

Toma de muestra en un método basado en la flotación

Capas obtenidas- flotación

?Faust (sulfato de zinc)

1. Homogeneizar en agua2. Tamizar y recoger tamizado en tubo3. Centrifugar 1500 rpm, 5 min4. Decantar y repetir hasta clarificar5. Resuspender sedimento en SO4Zn6. Centrifugar 1500 rpm, 2min7. Observar

?Faust simplificado

1. Homogeneizar directamente en SO4Zn2. Tamizar3. Seguir pasos 6 y 7.

MÉTODOS DE FLOTACIÓN-II

11

?Janeckso y Urbanyi

1. Homogeneizar (Biyoduro-yoduro)2. Tamizar3. Centrifugar 2500 rpm, 3min4. Observar

?Sheather

1. Homogeneizar en sacarosa2. Centrifugar 500 g, 5 min3. Observar

MÉTODOS DE FLOTACIÓN-III

MÉTODOS DIFASICOS-I

?Rivas1. Homogeneizar (ácido acético 5%)2. Tamizar3. Tubo ensayo (tamizado+eter)4. Emulsionar5. Centrifugar 1500rpm, 1min6. Observar sedimento

?Ritchie1. Homogeneizar (solución salina)2. Tamizar3. Centrifugar 1500rpm, 1min4. Decantar, resuspender y repetir hasta clarificar5. Resuspender en formol 10% y añadir eter6. Emulsionar7. Centrifugar 1500rpm, 2min8. Observar sedimento

Capas obtenidas

12

?Ritchie simple

1. Homogeneizar en formol 10%2. Tamizar3. Tubo ensayo (tamizado+eter)4. Emulsionar5. Centrifugar 1500rpm, 2min6. Observar sedimento

?Bailenger 1. Homogeneizar (aceto-acetico)2. Sedimentar 60 s3. Tamizar el sobrenadante4. Tubo ensayo (tamizado+eter)5. Emulsionar6. Centrifugar 1500rpm, 1min7. Observar sedimento

MÉTODOS DIFASICOS-II

1. Homogeneizar en MYF2. Tamizar3. Tubo ensayo (tamizado+eter)4. Emulsión estable5. Centrifugar 1500rpm, 1min6. Observar sedimento

1. Homogeneizar (TCA+formol)2. Tamizar y sedimentar 1min3. Ampolla decantación (tamizado+eter)4. Emulsionar y reposar 2min5. Tomar el liquido claro del fondo6. Centrifugar 1500rpm, 1min7. Resuspender en solución densa (NaBr)8. Centrifugar 1500rpm, 1min9. Observar película superficial

?Blagg y col.

?Thebauld

MÉTODOS DIFASICOS-III

13

1. Homogeneizar (sulfato sodico)2. Añadir gota de Triton3. Tamizar4. Tubo ensayo (tamizado+eter)5. Emulsionar6. Centrifugar 1500rpm, 1min7. Observar sedimento

?Faust e Ingalls

MÉTODOS DIFASICOS-IV

PARASEP (método comercial patentado)

14

PARASEP (método comercial patentado)

METODOS ESPECIALES COPROLOGICOS-IDiagnóstico de Enterobius vermicularis

?Técnica de Markey (torunda vaselinada)

?Técnica de Graham (cinta adhesiva)

Modalidad 1 Modalidad 2

15

METODOS ESPECIALES COPROLOGICOS-IIMétodos migratorios (Strongyloides stercoralis)

?Metodo de Baermann y Brugg?Metodo de Baermann y Lee

?Metodo de la placa de agar (S. stercoralis)

METODOS COPROLOGICOS CUANTITAVIVOS-I

?Útiles para pocas especies?Intensidad / encuesta epidemiológica?Orientación tratamiento?Seguimiento eficacia

?Metodo de Kato-Katz

16

METODOS COPROLOGICOS CUANTITAVIVOS-II

?Método de Stoll 1. 4g heces + Erlenmeyer2. 60ml NaOH 0.1M3. 10 bolas vidrio4. Homogeneizar5. 0.15ml en porta + cubre6. Huevos contados x 100 = huevos/g

?Método de Cadwell1. 4g heces + Erlenmeyer2. 4ml antiformina, mezclar y reposar 1h3. Solución sacarosa hasta 40ml4. Tomar 0.1ml en porta + cubre5. Huevos contados x 100 = huevos/g

?Método de la cámaraMcMaster

1. 3g heces + Erlenmeyer2. Añadir liquido hasta 45ml3. Homogeneizar4. Llenar cámara5. Huevos contados x 100=huevos/g

DIAGNOSTICO PARASITOS GENITOURINARIOS-I

Schistosoma haematobium

?Sedimentación1. Tomar la orina2. Depositarla en copa sedimentación3. Sedimentación 1-2h4. Centrifugar 2000g, 2min5. Observar sedimento

?Filtración

1. Filtrar la orina y extraer filtro2. Colocarlo en un portaobjetos3. Añadir 1 gota de Lugol4. Contar huevos en 10 ml de orina

Infección leve: 1-49 h/10mlInfección grave: mas de 50 h/10ml

17

Filtración

Toma de orina y filtración Pase de aire

Tinción con Lugol

S. haematobium

DIAGNOSTICO PARASITOS GENITOURINARIOS-II

Microfilarias

?Triple concentración

1. Añadir timerosal al 1% en la orina2. Dejar reposar toda la noche (Baermann)3. Recoger 10-30ml4. Centrifugar 400g, 3-5 min5. Resuspender sedimento en solución salina6. Centrifugar y examinar

?Filtración

Igual que para Schistosoma

Loa loa

Dispositivo Baermann

18

DIAGNOSTICO PARASITOS GENITOURINARIOS-III

Trichomonas vaginalis

?Muestras

1. Exudado vaginal2. Exudado uretral3. Semen4. Orina

?Métodos1. Examen directo:

Diluir con solución salinaCentrifugar si es orina

2. Tinción3. Cultivo

Trichomonasvaginalis

DIAGNOSTICO HEMATICO-I

Parásitos 1. Plasmodium sp2. Babesia sp3. Trypanosoma sp4. Microfilarias5. Leishmania sp

Muestra 1. Sangre2. ¿Cuándo tomarla?

Métodos 1. Examen directo2. Gota gruesa3. Frotis fino4. Previa concentración

Gota gruesa

Frotis fino

19

Plasmodium

Amastigotes

Trypanosoma

Tripomastigotes

20

DIAGNOSTICO HEMATICO-II

Tinciones 1. Giemsa2. Wright

Examen preparaciones 1. Gota gruesa (100 campos; inmersión)2. Frotis (200-300 campos; inmersión)

Recomendaciones 1. Fijar frotis o hemolizar gota gruesaantes de 48h

2. Conservación larga (resina de montaje)

Métodos de concentración 1. Capa opalina=Buffy Coat2. QBC; 3. Knott4. Filtración; 5. Gradiente6. Triple centrifugación7. PHA

DIAGNOSTICO HEMATICO-III

Extensión de la capa opalina (buffycoat)

1. Llenar un capilar de hematocrito (Wintrobe)2. Centrifugar 100g, 30min3. Examinar buffycoatCapas: plasma, células blancas (buffycoat) y eritrocitos

Concentración de Knott

1. Sangre citratada (1ml) +formol 2% (10ml)

2. Centrifugar 500g, 2min3. Observar sedimento

Filtración

1. Sangre citratada (1ml)+agua 10ml2. Agitar (hemolisis) y filtrar (5 micras)3. Pasar 10ml agua destilada4. Pasar aire por el filtro5. Pasar 3ml de metanol6. Retirar filtro, secar y teñir

21

DIAGNOSTICO HEMATICO-IV

Centrifugación en gradiente

1. Ficoll-Hypaque (4ml)+Sangre heparinizada (4ml)2. Centrifugar 400g, 40minCapas: plasma, cel.blancas, parásitos, cel.rojas

Triple centrifugación

1. Centrifugar la sangre heparinizada 300g, 10min2. Recoger sobrenadante y centrifugar 500g, 10min3. Recoger sobrenadante y centrifugar 900g, 10min4. Examinar sedimento

Método fitohemaglutinina (PHA)

1. Sangre heparinizada+PHA (0.1mg/ml final)2. Mezclar suavemente3. Centrifugar 150g, 10min4. Centrifugar sobrenadante 700g, 10min5. Examinar sedimento

Metodo “Quantitative Buffy Coat” (QBC)

22

ANALISIS DE MUESTRAS ESPECIALES

?Esputo

Paragonimus spQuiste hidatidicoAmebosis pulmonarLarvas Ascaris, Ancylostoma, Necator o StrongyloidesCryptosporidium

?Líquido cefalorraquídeoTripanosomiosis africanaMeningoencefalitis amebianaAngiostrongylus cantonensis

?Aspirados

DuodenalesSigmoidoscopiaGastroscopiaAbscesos pulmonares o hepáticosGanglios linfáticos, medula y bazoUlceras cutáneas

CULTIVO DE PARASITOS

?Coprocultivos de helmintos

?Coprocultivos de protozoos

?Inoculación animal

?Xenodiagnóstico

Cultivo fecal entira de papel

Cultivo en placa Petri