BIOQUIMICA LABORATORIO(1)

7/23/2019 BIOQUIMICA LABORATORIO(1)

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UNIVERSIDAD DE CUNDINAMARCA

Extensin FacatativaFACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

PROGRAMA DE INGENIERA AMBIENTALPRACTICAS DE LABORATORIO DE BIOQUMICA

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PRACTICA 1

Bioseguridad

Introduccin

Las normas de bioseguridad son un conjunto de medidas preventivas destinadas aproteger la salud y seguridad de las personas que realizan actividades en el laboratoriofrente a riesgos procedentes del manejo de agentes biolgicos, fsicos o qumicos.

Objetivos

Identificar mtodos y tcnicas para la observacin cuantitativa de poblacionesmicrobianas

Aplicar criterios disciplinares para la intervencin segura en ambientes delaboratorio

Normas de Bioseguridad

En el laboratorio de Microbiologa todas las reas deben estardebidamente marcadas con la seal de riesgo biolgico y su nivel decontencin. Se deben utilizar siempre elementos de barrera apropiadossegn las necesidades: blusa blanca limpia y en buen estado, guantes,tapabocas, gorro y gafas protectoras.

No se debe pipetear con la boca. El pipetear lquidos con la boca es una prcticainadecuada y altamente riesgosa. Deben utilizarse pipetas mecnicas para evitarcualquier riesgo de contaminacin oral. Todas las pipetas deben tener tapones dealgodn para reducir la contaminacin de los dispositivos de pipeteo. Las pipetascontaminadas deben sumergirse en un recipiente irrompible con hipoclorito de sodio al5% a 5000 ppm durante 18 24 horas.

En la zona de trabajo del laboratorio no se debe comer, beber, fumar, guardar alimentosni aplicar cosmticos. No se deben llevar a la boca lpices, etiquetas o cualquier otro

material utilizado en el laboratorio. Para evitar esto acostumbre el uso de tapabocas. Sedebe mantener el laboratorio limpio y aseado.

Una vez concluida la prctica, se debe organizar el laboratorio, desinfectando lasuperficie de trabajo con hipoclorito de sodio a 500 ppm o alcohol y dejando tanto elmaterial como el equipo utilizado limpio y en el lugar adecuado. Se deben lavar lasmanos despus de haber manipulado material infeccioso, as como al abandonar ellaboratorio.


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Todos los materiales, muestras y cultivos contaminados se deben descontaminar antesde eliminarlos o de limpiarlos para su reutilizacin. Se deben introducir en bolsas de

plstico de cierre hermtico con cdigo de color, para esterilizar en autoclave o incinerarfuera del laboratorio.

Slo se debe permitir el paso a la zona de trabajo del laboratorio a las personasautorizadas. Durante el trabajo se mantendrn cerradas las puertas del laboratorio.Todo el personal debe poner especial cuidado en evitar el contacto de la piel conmateriales potencialmente infecciosos. Con este fin deben usarse guantes cuando semanipulen muestras o cultivos que contengan posibles patgenos. Los guantes debenser desechados antes de salir del rea de trabajo. J ams se debe salir de la misma conlos guantes puestos, ni con ellos se debe coger el telfono.

Si un cultivo lquido se voltea o salpica, se debe cubrir el rea con hipoclorito de sodio a10.000 ppm y avisar al instructor. Posteriormente se debe enjuagar las manos conjabn y agua.

Marque y rotule adecuadamente las lminas, cajas y tubos con las siembras realizadas.Estos deben llevar claramente escrito en un lugar visible, el nombre o identificacin delgrupo de trabajo, el ensayo o experiencia realizada, el medio de cultivo, la temperaturade incubacin y la fecha.

A la terminacin de cada prctica es indispensable que organice adecuadamente lascajas o tubos por incubar y los entregue segn instrucciones.

Es importante conocer los agentes, sustancias y productos peligrosos que existen en ellaboratorio. de igual manera el manejo de cada uno de los equipos existentes en ellaboratorio.

El transporte de las muestras dentro o entre laboratorios se debe realizar de tal maneraque, en caso de cada, no se produzcan salpicaduras. Lo recomendable es hacerlo encajas hermticas o neveras transportables. Estas cajas o neveras deben ser rgidas yresistentes a los golpes, contar con materiales absorbentes en su interior y de fcildesinfeccin. Se deben etiquetar o identificar de forma oportuna y no deben serutilizadas para otros fines. Bajo ningn concepto se pueden transportar las muestras amano.

En la nevera no deben almacenarse cultivos de microorganismos patgenos porinhalacin en recipientes que no estn convenientemente cerrados. No debenalmacenarse reactivos que contengan compuestos voltiles inflamables (ter etlico, por

ejemplo) en neveras que no posean un sistema de proteccin antideflagracin.Los productos inflamables (gases, alcohol, ter, etc.) deben mantenerse alejados de lasllamas de los mecheros. Si hay que calentar tubos de ensayo con estos productos, sehar al bao Mara, nunca directamente a la llama. Si se manejan mecheros de gas sedebe tener mucho cuidado de cerrar las llaves de paso al apagar la llama.

Nivel de Contencin


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Al hablar de contencin, se hace referencia a las medidas de seguridad (protocolos ymtodos) que se deben tener en cuenta en el laboratorio al manejar materiales o

agentes biolgicos (determinadas bacterias, hongos, virus, Rickettsias, Chlamidias,parsitos, productos recombinantes, alrgenos, cultivos de clulas humanas y animalesy los agentes infecciosos potenciales que contengan estas clulas, viroides, priones)potencialmente infecciosos, con el fin de eliminar o reducir el riesgo que estos podranocasionar tanto a las personas que estn expuestas a ellos como al medio ambiente.

Para el manejo de agentes biolgicos existen cuatro niveles de contencin o protocolosa seguir segn el nivel de riesgo de infeccin, y la funcin del laboratorio.

Nivel 1. Es el nivel bsico en el cual los agentes biolgicos no causan enfermedades enlos seres humanos, pero se deben tener precauciones en el manejo de estos agentespara evitar la contaminacin del medio ambiente. Este nivel hace referencia a los

laboratorios para prcticas estudiantiles y deben seguir protocolos para el diseo,construccin de laboratorios y equipos. En este nivel es importante tener cuidado conlas personas inmunodeprimidas debido a que microorganismos no causantes deenfermedades en personas sanas, pueden convertirse en patgenos al sermanipulados por personas inmunodeprimidas.

Nivel 2. Este nivel hace referencia a agentes biolgicos de riesgo moderado quepueden causar enfermedades en las personas que los manipulan si no siguen losprotocolos de seguridad. Generalmente aplica en laboratorios clnicos y diagnsticos, yalgunos laboratorios de enseanza donde se manipulan sangre, fluidos corporales(lquido cefalorraqudeo, secrecin vaginal), tejidos o clulas humanas. Lacontaminacin puede ser ocasionada por cortes accidentales, por salpicaduras oingestin del material contaminante, motivo por el cual ha de tenerse extremo cuidadocon agujas o instrumentos contaminados. El uso de tapabocas, guantes, el cuidado enel manejo de objetos corto punzantes, entre otros, son medidas de prevencin tiles.Entre las posibles enfermedades ocasionadas en este nivel estn las causadas porvirus como son. el sida, la hepatitis y la toxoplasmosis.

Nivel 3. Es el nivel relacionado con estudios clnicos, diagnstico, de enseanza einvestigacin donde se manipulan agentes biolgicos que no son autctonos y puedentransmitirse por va respiratoria originando enfermedades graves como es el caso de latuberculosis causada, por la bacteria Mycobacterium tuberculosis. Este nivel exige unmayor y estricto grado de cumplimiento en las medidas de seguridad como colocacin

de la seal de riesgo biolgico, acceso restringido al personal, instalaciones conventilacin que eviten la liberacin de aerosoles infecciosos a otras zonas, tratamientodel aire mediante filtros. En este nivel se pone especial nfasis en evitar laautoinoculacin.

Nivel 4. Es el nivel de mayor riesgo de contaminacin, para el que no existe ningntratamiento clnico. Razn por la cual el diseo de la construccin y el equipo deseguridad debern estar en un lugar totalmente aislado, con sistemas de ventilacin y


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manejo de desechos que impidan la salida de los agentes contaminantes. Ejemplos deagentes contaminantes en este nivel seran Ebola y otros virus que producen fiebre

hemorrgica.

Cuestionario desarrollo en el laboratorio

1. Que es bioseguridad?

2. Cules seran para usted las normas bsicas de bioseguridad en el laboratorio demicrobiologa?

3. Cmo puede usted evitar en el laboratorio daos a su salud?

4. Mencione las clases de esterilizacin, cuales son los agentes de esterilizacin conms uso en el laboratorio; en que consiste cada uno de ellos y para qu materiales se

utilizan.


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PRACTICA 2

DETERMINACION DE pH Y ACIDEZ DE PRODUCTOS

1. OBJETIVO

Determinar el pH de diferentes sustanc ias

Determinar el contenido de acidez de diferentes sustancias

Identificar la relacin existente entre pH y Acidez

2. FUNDAMENTO TERICO

La teora de Brnsted-Lowry define los cidos como las sustancias que donan iones

hidronios, H30+ (protones) y las bases como las sustancias que reciben iones hidronios. De

esta manera, solo existe el cido, si la base est presente y viceversa.

La ecuac in general se puede escribir as:

HA + H20 H30+ + A-

cido I Base II cido II Base I

En esta ecuacin A- es la base conjugada de HA. Por otro lado H30+ es el cido conjugado

de H20.

Los cidos y bases se clasifican en fuertes y dbiles. Los cidos y bases fuertes son aquellas

sustancias que se disocian (ionizan) totalmente. Para los cidos fuertes, la concentracin

de iones hidronios es muy grande.

Los cidos y bases dbiles son las sustancias que en soluciones acuosas se disoc ian (ionizan)

parcialmente. Para los cidos dbiles la concentracin de iones hidronios (H30+) es muy

pequea.


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Un cido de Brnsted-Lowry donar iones hidronios (H30+) a cualquier base cuyo cido

conjugado sea ms dbil que el cido donante.

Se define el pH como el logaritmo decimal negativo de la concentracin de los iones

hidronios.

pH = - log [H30+]

Las soluciones acuosas de cidos tienen un pH < 7 y las soluciones bsicas un pH > 7 y las

soluciones neutras pH = 7

Un indicador cido-bsico es un cido dbil que cambia de color cuando pierde iones

hidronios. Por ejemplo, la fenolftalena, que es un indicador que cambia de incolora (en

medio cido) a rosado intenso (en medio bsico).

Fenolftaleina + 0H- Feolftalena- + H20

Incoloro Rosado

En una solucin neutra las dos formas de la fenolftalena incolora y rosada se encuentran

en equilibrio y predomina la incolora.

Para medir el valor exacto del pH de una solucin o producto, se utiliza un pH-metro.

Tambin utiliza para indicar la caracterstica de c ido de una sustancia el contenido o

porcentaje de acidez. Mediante una determinacin, generalmente gravimtrica, se

determinan los equivalentes de cido que se encuentran presentes en la sustancia. Ya que

las sustancias tienen en general ms de un cido haciendo parte de su composicin, se

refiere el contenido de acidez en trminos de que se encuentra e mayor proporcin.

3. BSQUEDA DE INFORMACIN

Los estudiantes debern ampliar el fundamento terico presentado en esta gua y si es el

caso, completarlo. Especficamente consultar formas de determinar acidez y pesos

equivalentes de los cidos ctrico y lctico que se requerirn para los clculos al finalizar la

prctica.


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4. MATERIALES Y REACTIVOS

- Beakers o vasos de prec ipitado de 50 y 100 m

- Erlenmeyers

- Embudo de vidrio

- Potencimetro (opcional)/ papel para determinar pH

- Balanza analtica Balanza de precisin

- Frasco lavador

- Agitador

- Papel de filtro

- Bureta de 25 50 ml

- Pipetas de 10 ml

- Un pipeteador o pera de caucho

- Agua destilada

- Hidrxido de sodio 0.1 N

- Fenolftalena en solucin alcohlica 1%

- Materiales adicionales: Naranja o limn, jugos (preferiblemente diferentes sabores), leche,

un trozo de carne o hgado crudo, una muestra de orina, agua (potable y de charco),

leche de magnesia, vinagre

5. PROCEDIMIENTO

A.DETEMINACIN DE pH

En el caso de la papa, la naranja y el limn, se precisa obtener su extracto o jugo para

realizar la determinacin. Pselos, por separado y tritrelos o lcuelos con un 100 150 ml de

agua destilada, agite y filtre a travs de papel de filtro. Tome el filtrado e introduzca en l el

electrodo del potencimetro o en su defecto la tira de papel indicador universal de pH.

Determine de esta forma el pH de todos filtrados y/o lquidos dispuestos parra esta prctica.

Cuando la inicial se encuentra en estado lquido, la determinacin se puede hacer

directamente.

*Se sugiere verificar que el pH del agua destilada sea 7.0 para evitar que su acidez influya

sobre el resultado correspondiente a la muestra.

Tome todos los datos necesarios, escriba sus resultados.


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B. DETERINACION DE ACIDEZ

Tome en un vaso de precipitado pequeo 10 ml del filtrado obtenido de los productos

slidos que ha llevado a la prctica; en el caso de sustancias lquidas con densidad similar

a la del agua, toma 10 ml del lquido y en caso de sustancias lquidas con densidad

diferente a la del agua, tome un vaso de precipitado, pselo, tome la respectiva tara y

dispense dentro del mismo 10 g de muestra. Adicione unas tres gotas de solucin de

fenolftalena, agite y con ayuda de la bureta dispense la solucin de NaOH lentamente y

sin detener la agitacin hasta que observe la aparicin de una c loracin ligeramente rosa.

Repita el mismo procedimiento para cada una de las muestras. Tome nota de los

volmenes de solucin de soda gastados en cada caso.

Calcule los miliequivalentes de soda presentes en cada uno de los volmenes utilizados.

miliequivalentes = vol (ml) * 0.1

Determine ahora la acidez par cada una de las muestras, considerando que el cido

presente en cada muestra sea el cido ctrico o el cido lctico, segn sea el caso.

Indique la acidez de cada producto en % p/p

6. TABLAS DE DATOS

MUESTRAS valor de

pH

peso de

la muestra

volumen

de

NaOH 0.1 N

miliequivalent

es

% de Acidez

Muestra No

1

Muestra No

2

7. PARA EL ANLISIS DE LA PRCTICACompare y analice los datos obtenidos.

- Hay diferencia entre los valores de pH obtenidos de un producto a otro?

- Cual es el pH normal de estos productos?

- Que indica el pH en cuanto a calidad y/o funcionalidad de los productos?


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- Por qu en algunos casos se indica la acidez como % de cido lctico y en otros como

acido ctrico?

- Se pueden comparar los datos obtenidos para la ac idez? Por que?

- Cuales son su apreciaciones generales respecto a la prctica? J ustifique


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PRACTICA 3

SOLUCIONES BUFFER

1. OBJETIVO

Verificar el comportamiento de las soluciones buffer o tampn

2. FUNDAMENTO TEORICO

a. Acidos y Bases. El entendimiento de los conceptos de c ido y base es esencial para

la comprensin del comportamiento bioqumico de las molculas orgnicas. Las

macromolculas poseen caractersticas fisicoqumicas que son muy importantes en

la homeostasis. Por ejemplo, las cargas elctricas son importantes en la catlisis

enzimtica, as como en la estabilidad de protenas y c idos nucleicos.

En general se define un cido como un donador de protones y una base como un

aceptor de protones.

b. Constante de disociacin. En sistemas cerrados todas las reacciones son reversibles y

en la naturaleza muchas de ellas lo son. Los productos formados por los reactantes

reaccionan para dar nuevamente origen a los reactantes originales incluso cuando

estos estn formando ms productos. Luego de cierto tiempo la reaccin directa e

inversa ocurrirn a la misma tasa. Cuando esto ocurre se dice que la reaccin ha

alcanzado el equilibrio, que se define como Keq.

Un donador de protones y su aceptor correspondiente conforman un par

conjugado cido-base. El cido actico, un donador de protones y el anin

acetato, su aceptor de protones correspondiente, constituyen por ejemplo, un para

conjugado relacionado por la siguiente reaccin:

CH3COOH ===== H++ CH3 COO -

Cada cido tiene un tendencia caracterstica para perder sus protones en solucin

acuosa. Cuanto ms fuerte el cido, mayor la tendencia a perder su protn. La

tendencia de cualquier cido (HA) a perder su protn y formar su base conjugada (A-)

est definida por la constante de disoc iacin Ka para la reaccin reversible:

HA ===== H++ A-


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Keq = [[H+] [A-]] / [HA] = Ka

La constante de equilibrio para las reacciones de ionizacin se llama constante de

disociacin y se designa como Ka.

c. Tampones, Buffers o Amortiguadores. El buen funcionamiento de los sistemas

biolgicos requiere de un control estricto del pH. Las enzimas son bastante sensibles

a los cambios de pH, tienen una actividad mxima a un pH caracterstico llamado

ptimo fuera del cual su actividad se ve afectada notoriamente. Por tal razn, los

organismos tiene un control de pH muy estricto y efec tivo. La regulacin del pH del

suero (pH srico) es necesaria para la supervivencia, el organismo mantiene estevalor de pH entre 7,4 +/- 0,4. valores de pH fuera de este rango son perjudiciales

para el organismo.

Un tampn es una solucin que ante la adicin de cantidades pequeas de H+o de

OH- se resiste a cambios dramticos de pH. Los tampones comunes estn formados

por dos sustancias: un cido y su base conjugada.

Si tomamos el logaritmo de la constante de disociacin escrita ms arriba Ka

Log ka = log [H+] + log [A-] log [HA]Reordenando log [H+] = log Ka log [A-] + log [HA]

Multiplicando por 1 -log [H+] = -log Ka + log [A-] log [HA]

De donde pH = pKa + log [A-] / [HA]

Que en su forma general es pH= pKa + log (aceptor de protones /donador)

Esta es la ecuacin de Henderson-Hasselbach y permite calcular la relacin molar

entre una sal y un cido que forman parte de un tampn para un pH y pK

determinados.

Una solucin buffer o tampn puede consistir en un c ido dbil y su sal (pH 1-7) o un

base dbil y su sal (pH 7 14) dependiendo del pH deseado para la solucin buffer.

La clave para comprender la accin de un buffer es recordar que un c ido dbil o


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base dbil, slo est disociada en una proporcin muy pequea mientras que las

sales estn completamente disociadas. La combinacin resultante del cido dbil y

su sal completamente disociada resulta en la solucin tampn con el cido

mayormente en su forma molecular, una gran proporcin del in comn de la sal y

una pequea proporcin del in H+. Podemos ignorar la gran proporcin del in

positivo de la sal.

d. Curvas de titulac in revelan el pKa de los cidos dbiles. La titulacin se usa para

determinar la cantidad de un cido en una solucin dada. Un volumen medido de

un cido es titulado con una solucin de una base fuerte de concentracin

conocida. La base es adicionada en pequeos incrementos hasta que el cido es

consumido (neutralizado) comprobando esto con un indicador o pH-metro. La

concentracin original del cido puede ser calculada a partir del volumen y

concentrac in de la base usada.

2. MATERIALES Y REACTIVOS

3 Beakers de 100 ml

papel indicador de pH

pipetas

solucin tampn

3. PROCEDIMIENTO

Tomar 100 ml de solucin tampn fosfato 0.02 M pH 7,5.

Medir el pH y separar la solucin en dos beakers de 50 ml. Preparar otros dos beakers con

50 ml de agua cada uno.

En el beaker 1:

a. agregar 0.5 ml de solucin de HCL 0,1 N a la solucin tampn. Medir nuevamente

el pH

b. medir el pH de 50 ml de agua destilada. Agregar 0,5 ml de solucin de HCl y medir

nuevamente el pH.

En e l beaker 2:


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c. agregar 0.5 ml de solucin de NaOH 0,1 N a la solucin tampn. Medir

nuevamente el pH

d. medir el pH de 50 ml de agua destilada. Agregar 0,5 ml de solucin de NaOH y

medir nuevamente el pH.

En los beakers que contienen la solucin tampn seguir agregando segn corresponda

volmenes de solucin de HCl o NaOH, mezclar y medir el pH. Repetir 10 veces

4. INFORME

Anote las lecturas realizadas en el pHmetro o con papel indicador

Cmo reaccionaron las soluciones tampn al adicionar solucin de cido o base? Como

cambi el pH?

Cambi el pH del agua al aadir HCl o NaOH?

Se comporta la solucin tampn de la misma manera que el agua frente a las adiciones de

soluciones?

Grafique la respuesta del buffer ante la adicin de diferentes cantidades de cido o base.


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PRCTICA 4

GLCIDOS - CARBOHIDRATOS

1. OBJETIVO

Estudiar y comparar algunas propiedades de los azcares.


Los carbohidratos, llamados tambin hidratos de carbono o glcidos, son un grupo

numeroso y diverso de sustancias compuestas principalmente de carbono, hidrgeno y

oxgeno y son los aldehdos y cetonas polihidroxilados. Los carbohidratos se forman en las

plantas por efecto de fotosntesis a partir de agua y el bixido de carbono bajo efecto de

la radiacin ultravioleta y catalizado por la clorofila:

6CO2 + 6H2O + luz UV ----------------- C6H12O6 + 6O2.

En el organismo humano los carbohidratos constituyen una fuente de energa, cuando son

sometidos al proceso de digestin.

Segn la posibilidad de desdoblamiento, los carbohidratos se clasifican en hidrolizables

(oligosacridos y polisacridos) y no hidrolizables (monosacridos). Segn los grupos

funcionales que poseen, los monosacridos pueden ser aldosas (los que tienen la funcin

aldehdo) y cetosas (los que tienen funcin cetona). Segn el nmero de tomos de

carbono que contienen, los monosacridos se clasifican en triosas, tetrosas, pentosas,

hexosas, etc.

GLUCOSA:

La glucosa o dextrosa es el monosacrido ms importante. Su estructura corresponde al

hexopentol-al y se trata de una aldosa:

O=CH - CH(OH) - CH(OH) - CH(OH) - CH(OH) - CH2OH.


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La glucosa se encuentra en composicin de muchas frutas, principalmente la uva. Es un

elemento de fcil digestin y provee energa inmediata. En medicina se emplea en forma

intravenosa, cuando el pac iente necesita una fuente de energa disponible rpidamente.

FRUCTOSA:

La fructosa es una cetohexosa que se encuentra en algunos frutos y en la miel de abejas.

Se obtiene junto con la glucosa en la hidrlisis de la sacarosa. Su frmula es:

CH2OH - CO - CH(OH) - CH(OH) - CH(OH) - CH2OH.

SACAROSA

La sacarosa o azcar de mesa es el disacrido ms importante por su uso como

edulcorante. Est formada por el enlace glicosido de las molculas de glucosa y fructosa.

ALMIDON

El almidn es un polisacrido formado por la polimerizacin tipo condensacin de un

elevado nmero de molculas de glucosa y su peso molecular sobrepasa de 300 000.

El almidn constituye la reserva de energa ms importante en las plantas, encontrndose

en los frutos, tubrculos, races, trigo, maz, etc. Al tratarse con agua caliente, el almidn

puede separarse en una fraccin soluble, llamada amilosa (20%) y una fraccin insoluble,

llamada amilopectina (80%). La amilosa se reconoce por la coloracin azul intensa que

toma en contacto con la solucin de yodo, mientras que la amilopectina da una

coloracin rojiza.

Bajo el efecto de los cidos y de las enzimas, que actan en la digestin, el almidn se

hidroliza en dextrinas (polisacridos de menor peso molecular), desdoblndose finalmente

el estado de glucosa, por lo que el almidn constituye una importante fuente de energa.

3. PROCEDIMIENTO

MATERIALES

- Gradilla con 4-5 tubos

- 2 vasos de precipitacin


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- Capsula de porcelana

- Varilla

- Espatula

- Probeta de 25 o 50 ml

- Glucosa

- Almidn soluble

- Miel de abeja

- Azcar comn

- Reactivo de Fehling

- HCl concentrado

- Lugol

- Solucin saturada de carbonato de sodio

MONOSACARIDOS

Solubilidad en agua: Coloque una pequea cantidad de glucosa en un tubo de ensayo

conteniendo 1 ml de agua destilada, y agite. Anote sus observaciones.

Prueba de Fehling: En un tubo de ensayo mezcle 10 gotas de solucin A con 10 gotas de

solucin B del reactivo de Fehling. A esta mezcla agregue 10 gotas de la solucin de

glucosa del ensayo anterior. Caliente la mezcla a bao-mara. Anote sus observac iones.

DISACRIDOS Y MEZCLAS DE MONOSACRIDOS

MIEL

Prueba de Fehling: Disuelva 5 gotas de miel de abeja en 1 ml de agua destilada. Agregue

esta solucin a una mezcla de soluciones A y B del reactivo de Fehling (10/10 gotas de

cada una) y caliente a bao-mara. Anote sus observaciones.

SACAROSA

Prueba de Fehling: Disuelva una pequea cantidad de azcar comn en 1 ml de agua

destilada, agite y ensaye con el reactivo de Fehling, como en caso anterior. Anote sus

observaciones.


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INVERSION DE SAC AROSA (HIDROLISIS)

Disuelva en 1 ml de agua destilada una pequea cantidad de azcar comn, agite yagregue dos gotas del cido clorhdrico concentrado. Caliente a bao-mara por unos 10

minutos y neutralice con una solucin saturada de carbonato de sodio, hasta que ya no se

formen ms las burbujas de bixido de carbono. Ensaye con el reactivo de Fehling como

en casos anteriores. Anote sus observaciones.

Explique la diferencia de las propiedades de la miel y del azcar comn.

ALMIDON (polisacridos)

Solubilidad: En un vaso de precipitados ponga 25 ml de agua destilada y caliente aebullicin. Aparte, en un tubo de ensayo mezcle aproximadamente 0.25 g de almidn y

unas gotas de agua destilada fra hasta formar una pasta. Vierta la pasta al agua

hirviendo, agitando con la varilla de vidrio. Anote sus observaciones.

Prueba de yodo: En un tubo de ensayo ponga unas 10 gotas de la solucin preparada de

almidn y adale unas gotas de solucin de lugol (yodo). Anote las observac iones.

Ensayo de Fehling.: En un tubo mezcle 10 gotas de solucin A del reactivo de Fehling con10 gotas de la solucin B. A esta mezcla adicione 10 gotas de la solucin de almidn.

Caliente a bao-mara. Anote las observaciones.

Transformacin del almidn en dextrina: Con la ayuda de una esptula coloque una

pequea cantidad de almidn en una cpsula de porcelana, caliente lenta y suavemente

mientras agita con una varilla de vidrio para no quemar el almidn. Cuando el almidn

adquiera un color caf, contine calentando 1-2 minutos ms y enfre. Con la esptula

pase una pequea cantidad del residuo a un tubo de prueba, aada 2 ml de agua

destilada, agite y agregue 2-3 gotas de solucin de yodo (lugol). Anote sus observaciones.

Ensayo De Fehling: Tome otro poco del residuo de la cpsula y disulvalo en 2 ml de agua

destilada en un tubo de ensayo. Realice la prueba de Fehling, como en casos anteriores.

Anote sus observaciones.


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HIDROLISIS DE ALMIDON

En un tubo de ensayo coloque 1 ml de la solucin de almidn, aada 5 gotas del cidoclorhdrico concentrado. Caliente a bao-mara durante unos 15 minutos. Enfra y

neutralice con la solucin de carbonato de sodio hasta que ya no se desprendan ms

burbujas de bixido de carbono.. Efecte la prueba de Fehling, como lo hizo en ensayos

anteriores.

Prueba de yodo: Tome 1 ml de almidn hidrolizado y aada unas gotas de lugol (yodo).

Compare el resultado con el ensayo del almidn no hidrolizado

6. PARA EL ANALISIS DE LA PRCTICA

o Aparte del in cprico, qu otros iones pueden ser reducidos por la solucin de

glucosa?

o Qu nombre qumico tiene el azcar comn?

o Cul es la diferencia entre la miel de abeja y el azcar comn? Cmo se puede

demostrar esta diferencia?

Explique, en qu consiste la hidrlisis del almidn.


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PRACTICA 5

LIPIDOS

1. OBJETIVO:

Comprobar la solubilidad de los lpidos en diversos solventes.

Ensayar las reacciones de saponificacin y la solubilidad de sales metlicas de cidos

grasos en agua dura.

Ensayar las reacciones de identificacin de colesterol.


Los lpidos representan una serie de sustancias insolubles en agua, que se encuentran en las

clulas animales y vegetales y se pueden extraer con los solventes poco polares como ter,

hexano o cloroformo.

Los lpidos son los esterides, los terpenos. Las ceras y las grasas.

GRASAS

Las grasas son productos de esterificacin de cidos carboxlicos de cadena larga (cidos

grasos) saturados e insaturados y el glicerol. A las grasas tambin se les llama glicridos. Las

grasas lquidas se llaman aceites y son generalmente de origen vegetal.

Cuando las grasas se exponen al calor y al aire, stas se oxidan y se descomponen en

aldehdos, cetonas y cidos grasos de bajo peso molecular. El proceso de rancidez se debe a

la ruptura de las cadenas insaturadas de los cidos superiores que se rompen formando

compuestos menores.

Las uniones de ster en las grasas son dbiles y se destruyen fcilmente por accin de agua y

soluciones cidas y bsicas. La hidrlisis acuosa regenera los cidos grasos y glicerol. En la

digestin de grasas esta reaccin sucede bajo accin de las sustancias llamadas enzimas,

especficamente, estearasas.

La hidrlisis de las grasas con los lcalis se llama saponificacin y da, como producto principal,

sal metlica, llamada jabn.


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CERAS

Las ceras son steres de cidos grasos de cadena larga y alcoholes primarios de cadena

larga.

FOSFOLIPIDOS

Los fosfolpidos son steres mixtos del glicerol en los que un grupo hidroxlico est esterificado

con el c ido fosfrico y otros dos con los cidos grasos.

ESFINGOLIPIDOS:

Son derivados del aminoglicerol, similares a los fosfolpidos en su estructura. Intervienen en la

conformacin del sistema nervioso.

ESTEROIDES

Los esterides se encuentran en las plantas y animales y su estructura anular de 17 tomos de

carbono (cuatro anillos) se conoce como ciclo-pentano-perhidro-fenantreno.

El esteide ms comn es el colesterol. Se encuentra en la mdula y en forma de los clculos

en la vescula biliar. Un adulto tiene como promedio, unos 250 mg de colesterol. El colesterol

tiene una reaccin muy peculiar frente al cido sulfrico, por lo que ste se utiliza para su

identificacin.

3. PROCEDIMIENTO

MATERIALES

o Gradilla con 5 tubos

o Dos vasos

o Varilla

o Pinza para tubos

o Colesterol

o Solucines de MgCl2, CaC l2,

o Aceite vegetal


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o Etanol

o Acetona

o Cloroformo

o Benceno

o Solucin de NaOH 25%

o Acido sulfrico concentrado

o Solucin saturada de NaCl

o Fenolftalena

o FeCl3

Ensayos de solubilidad.

En 5 tubos limpios y secos coloque 0.5 ml de aceite y agregue a cada tubo 2 ml de los

siguientes solventes: AGUA, ETANOL, ACETONA, CLOROFORMO y benceno, respectivamente.

Agite fuertemente y observe el efecto del solvente en cada uno de los tubos. Anote el

resultado en la siguiente tabla:

SOLVENTE SOLUBILIDAD DE ACEITE

AGUA

ETANOL

ACETONA

CLOROFORMO

BENCENO

Saponificacin.

En un vaso pese 10 gramos de aceite (o cualquier tipo de grasa) y aada 5 ml de una

solucin al 25% de NaOH.Caliente a bao-mara agitando con varilla, durante unos 20 minutos.

Aada 10 ml ms de solucin de NaOH y 5 ml de etanol y contine el calentamiento hasta la

obtencin de un masa pastosa.

Terminado el calentamiento, enfre un poco el vaso y agregue 50 ml de solucin saturada de

NaC l para precipitar el jabn y separar el glicerol.


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La reaccin, es:

CH2-O-CO-R CH2-OH

| |

CH-O-CO-R +3 NaOH - CH-OH + 3R-COONa| | jabn

CH2-O-CO-R CH2-OH

Ensayos del comportamiento del jabn en agua dura:

Con el jabn obtenido prepare una solucin acuosa. Coloque 5 ml de la solucin jabonosa

en 3 tubos de ensayo y aada a cada uno 3 ml de las soluciones de: MgCl2, CaC l2 y FeCl3.


Escriba las ecuaciones de las reacciones que pudieran tener lugar en estos ensayos.

Identificacin del colesterol (reaccin de Salkowsky):

En un tubo de ensayo limpio y seco coloque unos 2 mg (0.002 g) de colesterol. Aada 2 ml

de cloroformo para solubilizar, luego, con sumo cuidado, agregue 1 ml de cido sulfrico

concentrado y observe la aparicin del anillo rojo en la interfase.

5. PARA EL ANALISIS DE LA PRACTICA

Aprovechando sus conocimientos en Biologa Celular y revisando las fuentes bibliogrficas,

describa en forma muy sinttica la importancia de las grasas, ceras, fosfolpidos,

esfingolpidos y esteroles.


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PRACTICA 6

PROTEINAS

1. OBJETIVO

Efectuar ensayos fsicos y qumicos carac tersticos de una protena.


Las protenas son las sustancias que conforman los tejidos de los organismos vivientes:

los msculos, la piel, las uas, los cabellos, la sangre, leche, huevos, plumas, la sangre,

etc. (NOTA: La presencia del exceso de protena (albmina) en la orina es,

usualmente, una indicacin del funcionamiento anormal de los riones.)

Son sustancias de estructura compleja que llegan a tener pesos moleculares

superiores a 300000,000 y su estructura se basa en la unin de unos 20 aminocidos

formando largas cadenas peptdicas.

Los aminocidos son los cidos carboxlicos que poseen, adems, una funcin amina,

generalmente en posicin alfa con respecto al grupo carboxlico (alfa-aminocidos),

pero tambin hay beta-aminocidos. Por ejemplo:

H2N - CH2- COOH (alfa-aminocido)

H2N - CH2- CH2- COOH (beta-aminocido)

Los aminocidos se pueden polimerizar mediante la reaccin de condensacin entre

los grupos amina de un aminocido y grupo carboxlico, de otro, formando entre ellos

una unin llamada enlace peptdico: -CO-NH-:

H2N - CH2- COOH + H2N - CH2- COOH


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H2N - CH2- CO - NH - CH2- COOH + H2OLas protenas no se pueden analizar con exactitud debido a su complejidad, pero se

ha desarrollado una serie de ensayos caractersticos muy sensibles que proporcionan

valiosa informacin sobre su estructura y propiedades.

3. PROCEDIMIENTO

MATERIALES

o Gradilla con tubos

o Vaso de 250 ml

o Embudo

o Gasa y algodn

o Probeta

o Termmetro

o Pinzas para tubos

o Vaso de 600 ml

o Albmina de huevo

o Reactivo de Milln

o NaOH al 20% y al 10%

o Solucin de NaC l al 1% (suero)

o Solucin de CuSO4 al 1%

o Solucin de Pb(CH3COO)2al 10%

o Acido ntrico concentrado

o Agua destilada

o Solucin de K4[Fe(CN)6] al 10%

o

Alcohol etlico comercialo Solucin de ninhidrina al 0.1%

o Hidrxido de amonio 6M

o Solucin de AgNO3 al 1%

ENSAYOS DE SOLUBILIDAD


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A los 4 tubos de ensayo coloque aproximadamente 1 ml de clara de huevo

(albmina).

A cada tubo adale respec tivamente 5 ml de:

agua fra

agua caliente

solucin de NaCl (suero)

solucin de NaOH al 20%

Resuma sus observaciones en la siguiente tabla:

SOLVENTE SOLUBILIDADMUY BUENA

SOLUBILIDADPARCIAL

INSOLUBLE PRECIPITA

AGUA FRIA

AGUA CALIENTE

SOLUCION

DE NaCl

SOLUCION

NaOH 20%

PREPARAC ION DE LA SOLUCION DE ALBUMINA

Vace en el matraz aforado la clara de huevo sobrante de la primera parte. Adicione

aproximadamente 1/2 de litro de agua destilada , tape l el matraz aforado y agite

fuertemente.

Arme un equipo de filtracin utilizando como filtro una gasa medicinal con una capa

de algodn en medio y filtre la solucin preparada a un vaso grande.

ENSAYOS DE COLORACION

Reaccin de biuret:

A 1 ml de la solucin de albmina adale 1 ml de la solucin de NaOH al 10% y gota

a gota la solucin de C uSO4 hasta observar cambios. La formacin de una coloracin

violeta denota la presencia del enlace peptdico -CO-NH-, ya que los grupos imina -

NH- del enlace peptdico forman un complejo de coordinacin con el in cprico:


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\ \ /

HN: HN NH

/ / \

2 R - CH R - CH CH - R

\ + Cu+2 - | Cu+2 |CO CO CO

/ \ /

HN: HN NH

/ / \

complejo violeta

Reaccin con ninhidrina:

Coloque 3 ml de la solucin de albmina en un tubo de prueba y agrguele 5 gotas

de la solucin de ninhidrina al 1%. Caliente hasta la ebullicin y enfre. Anote sus

observaciones. La coloracin azul con ninhidrina la producen todos los aminocidos,

excepto prolina e hidroxiprolina que dan color amarillo.

O O O

| | OH | | | |

+ NH2 R ------ N2

OH

| | | | |

O O O-H+

Ensayo xantoprotico:


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Vierta a un tubo de ensayo 2 ml de la solucin de albmina y agregue unas 5 gotas

del c ido ntrico concentrado. Caliente a bao-mara por unos instantes. Deje enfriar.

Luego agregue unas cuantas gotas de hidrxido de amonio NH4OH 6M. La aparicin

de una coloracin amarilla, que se torna de color naranja intenso con la adicin del

hidrxido de amonio denota la presencia de grupos fenilo, que se forman las

nitromodificaciones amarillas.

-[-NH-CH-CO-]- + HNO3 ------------ -[-NH-CH-CO-]-| |

NO2

NO2 amarillo


Ensayo de Milln:

coloque 2 ml de la solucin de albmina a un tubo de prueba y agregue 5 gotas del

reactivo de Milln. Caliente a bao-mara en ebullicin. La aparicin del precipitado

blanco, que se torna rojo posteriormente, indica la presencia de los grupos fenlicos

no sustituidos.

-[-NH-CH-CO-]- + Hg2 (NO3)2 ----- -[-NH-CH-CO-]-| |

OH OHg rojo


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ENSAYOS DE PRECIPITACION

Las protenas por efecto de sales metlicas dan precipitados de proteinatos

metlicos, formados por la parte cida de las protenas.

Las sales neutras hacen precipitar las protenas debido al efecto de la

desnaturalizacin y deshidratacin. Las protenas precipitadas de esta manera,

pueden redisolverse en el solvente original.

En tres tubos de ensayo limpios coloque 3 ml de solucin de albmina y agregue a

cada uno respectivamente, 1 ml de:

solucin de AgNO3 al 5%

solucin de CuSO4

solucin de Pb(CH3COO)2 .

Anote sus observac iones .

DESNATURALIZACION DE PROTEINAS

Efecto de calor:

Coloque 3 ml de la solucin de albmina a un tubo de ensayo y caliente en un vaso

con agua y termmetro . Anote la temperatura a la que comenz coagularse la

albmina.

Efecto de alcohol etlico:

A un tubo de ensayo con unos 3 ml de la solucin de albmina, agrguele 5 ml dealcohol etlico comercial. Anote sus observaciones.

4. PARA EL ANALISIS DE LA PRACTICA

o Qu caractersticas presenta la solucin acuosa de la clara de huevo?

o Por que la solucin preparada de la clara de huevo no se puede filtrar en el


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papel filtro?

o Cul es la protena principal de la clara de huevo?

o Cuando el cido ntrico cae casualmente en la piel, cul de las reacciones

efectuadas se produce?

o De acuerdo a lo realizado en la prctica, explique lo que ocurre al cocinar un

huevo.

o La clara de huevo o la leche se usan a menudo como antdotos en los

envenenamientos con algunos metales pesados. como plomo, mercurio, bario,

etc. En qu fenmeno, de los que realizamos en la prctica, se basa esta

aplicacin?


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PRACTICA 7.

RECONOCIMIENTO DE PRINCIPIOS INMEDIATOS EN LA LECHE

1. OBJETIVO

Se pretende conseguir la comprobacin de forma sencilla la existencia de diversos

principios inmediatos fundamentales como protenas, grasas y azcares en un

alimento bsico como la leche, as como el comportamiento de las protenas lcteas

ante determinados cambios fsicos y qumicos.

2. PROCEDIMIENTO

MATERIALES

o Gradilla con 12 tubos de ensayo.

o - Pinza de madera para sujetar los tubos.

o - Esptula metlica.

o - Embudo.

o - Papel de filtro.

o - Mechero.

o - Vaso de precipitados.

o - Pipeta Pasteur o gotero

o - Pipetas graduadas.

o Leche entera.

o Leche fermentada de forma natural.

o cido clorhdrico puro.

o

c ido clorhdrico: solucin al 50 %.o cido ntrico puro.

o Cloruro sdico: solucin concentrada.

o Hidrxido sdico: solucin al 20 %.

o Reactivo de Benedict o de Fehling.

o Sudan III: solucin alcohlica al 0,5 %.


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Desnaturalizacin o coagulacin de protenas lcteas.

Hacer una serie de cuatro tubos de ensayo y numerarlos. Al tubo n 1 se le aade 2 ml

de leche y 2 ml de HCl puro. Al tubo n 2 se le aade igual cantidad de leche y 2 ml

de una disolucin concentrada de NaCl. Al tubo n 3 aadir 2 ml de leche y 2 ml de

NaOH al 20 %. Al tubo n 4 se le aade 2 ml de leche y despus se le calienta

levemente. Anotar los resultados obtenidos y comparar los diferentes tubos.

Reconocimiento de grasas en la leche.

Colocar 2 ml de leche en un tubo de ensayo, aadir 10 ml de agua y unas gotas de

Sudan III y agitar fuertemente. Observar que se tie todo de rosa. Si aadimos 1 ml de

HCl al 50 % y calentamos pueden aparecer dos o tres fases:

a) Superior, de color rosa, formada por las grasas teidas por el Sudan III, que es un

colorante especfico de grasas.

b) Intermedia, con el agua y ciertos compuestos solubles, como la lactosa y algunas

protenas disueltas (lactoalbmina y lactoglobulina).

c) Inferior, con las protenas coaguladas y prec ipitadas.

Reconocimiento de glcidos en la leche.

Se recoge aparte con una pipeta Pasteur o cuentagotas la fase soluble de la prueba

anterior, se filtra y se aade 1 ml del filtrado a un tubo de ensayo. A este tubo se le

agrega 1 ml del reactivo de Fehling (o de Benedict) y se le calienta durante unos

minutos. Si la prueba es positiva (hay presencia de un glcido reductor, en este caso

la lac tosa) aparecer un precipitado de xido de cobre, de color rojo.

Reconocimiento de protenas en la leche: Prueba xantoproteica.

Recoger con una esptula el precipitado de la leche coagulada (casena), llevarlo a

un trozo de papel de filtro y secarlo. Poner en un tubo de ensayo una pequea


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porcin del precipitado seco, aadir unas gotas de cido ntrico puro y calentar

ligeramente. Anotar los resultados obtenidos.


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PRACTICA 8

ESTUDIOS ENZIMTICOS

1. OBJETIVO

Verificar el funcionamiento y accin de las enzimas

2. PROCEDIMIENTO

Hidrlisis enzimtica del almidn por la saliva: Accin digestiva de la amilasa salivar.

Primero se hace un tubo patrn con 2 ml. de una disolucin de almidn al 2 % y unas

gotas de disolucin de yodo (lugol). Observar el resultado. Despus se calienta

suavemente el tubo hasta que la mezcla pierda el color. Dejar enfriar el tubo bajo el

agua del grifo y esperar unos minutos. Anotar lo sucedido.

Colocar en un segundo tubo 2 ml. de la disolucin de almidn y una cierta cantidad

de saliva, mezclar bien la saliva con la disolucin y calentar muy suavemente duranteunos segundos. Aadir unas gotas de lugol. Anotar los resultados y dar una

explicacin a lo ocurrido.

Reconocimiento de la enzima catalasa en tejidos.

La catalasa se encuentra tanto en tejidos vegetales (patata, zanahoria, lechuga,

etc.) como en tejidos animales (carne, pescado, etc.) produciendo la siguiente

reaccin qumica:

H2O2 (agua oxigenada) ==== H2O + O2 (gaseoso)

Es decir, la enzima descompone el perxido de hidrgeno o agua oxigenada en

agua y oxgeno gaseoso, que se desprender en forma de burbujas en un medio

acuoso.


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Poner en varios tubos de ensayo previamente numerados distintos tejidos (ms o

menos el mismo peso de cada tejido). Aadir 5 ml. de agua oxigenada a cada tubo

y anotar lo que sucede. Explicar lo ocurrido y ordenar los tejidos segn su actividad.

Repetir el proceso anterior, pero hervir antes los tejidos durante diez minutos. Explicar

los resultados obtenidos.

Actividad cataltica de la catalasa.

En un tubo de ensayo se coloca un trozo de hgado (o 1 ml. de extracto de hgado) y

10 ml. de agua oxigenada. Se cierra el tubo con un tapn, que se deja algo flojo para

el escape de los gases producidos en la reaccin, en cuyo centro exista un orificio por

el cual se pueda introducir un termmetro. As, hemos hecho un calormetro.

Se anota la temperatura ambiente, que se toma como temperatura inicial de la

reaccin, y despus se va anotando las variaciones de temperatura que se producen

en el interior del calormetro cada treinta segundos durante un perodo de cinco

minutos. Hacer la grfica de la reaccin y explicar los resultados.


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PRACTICA 9

REACCIONES DE ALDEHIDOS,CETONAS Y ACIDOS CARBOXILICOS

OBJETIVOS

Aplicar en el laboratorio un mtodo de identificacin de aldehdos y cetonas

Aprender a distinguir un aldehdo de una cetona por su comportamiento qumico .

PROCEDIMIENTO:

MATERIALES:

Acetaldehdo, Acetona, Reactivo fehling A y B, 2,4dinitrofenilhidracina, tubos de

ensayo, gradillas, pipetas, peras de seguridad, Agitador de vidrio, mechero, vaso de

precipitado, etanol al 95%, Probeta de 100 ml bicarbonato de sodio.

ALDEHIDOS Y CETONAS

Para la deteccin de la funcin aldehdo o cetona se hace primero un ensayo

general para compuestos carbonilos (2,4 dinitro fenil hidracina). Si ste es positivo,

indica la presencia de un aldehdo o de una cetona.

El paso siguiente es diferenciar entre ambas clases de compuestos, lo cual se hace

con reactivos de fehling , Tollens y Schiff.

Los compuestos carbonilicos (aldehdos y cetonas) pueden reconoc erse por sus

reacciones de adicin nucleofilica, entre ellas las reacciones mas usadas son :

Reaccin con 2,4 dinitro fenil hidracina, Adicin de bisulfito de sodio. Formacin de

semicarbazonas.


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Ensayo con 2,4 dinitro fenil hidracina

El reactivo se prepara disolviendo 3 g de 2,4 dinitrofenil hidracina en 15 ml de cido

sulfrico. Esta se aade con agitacin a 20 ml de agua y 70 ml de etanol al 95%. Se

mezcla fuertemente.

En un tubo de ensayo diferentes, disuelva 2 gotas del compuesto a ensayar

(acetaldehdo o acetona) en 0,5 ml de metanol o etanol al 95 %

En un tubo de ensayo coloque 1 ml de 2-4 dinitrofenilhidracina y adale unas gotas

de la solucin a ensayar ( acetaldehdo o acetona)

Agitar, si no se forma un precipitado inmediatamente deje reposar por 10 minutos. Si

se obtiene un precipitado de color amarillo naranja o amarillo rojizo, la prueba es

positiva para aldehdo y/o cetonas.

Ensayo con el reactivo de Fehling.

Para diferenciar aldehdos de cetonas se usa el reactivo de Fehling, el cual consta de

dos soluciones A y B que se mezclan a partes iguales en el momento de usarse, se

dispone asi de un in cprico en medio alcalino que oxida los aldehdos pero no las

cetonas.

Mezcle 1 ml de reactivo A con 1 ml de reactivo B , y adale 10 mg o 0,5 ml del

compuesto a ensayar (acetaldehdo o acetona)


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Coloque el tubo en un bao de agua hirviendo por 3 minutos. Anote sus

observaciones. Un precipitado amarillo naranja de Cu2O es prueba positiva para

aldehdos.

ACIDOS CARBOXILICOS

Ensayo con bicarbonato de sodio

En un tubo de ensayo agregue a unos pocos ml del compuesto a ensayar (cido

actico) bicarbonato de sodio.

Si se obtiene efervescencia es indicativo de que el compuesto es de carcter cido o

una sustancia fcilmente hidrolizable.


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PRACTICA 10, 11 y 12

SINTESIS Y REACCIONES DEL ETANOL

1. OBJETIVO

Aplicar en el laboratorio un mtodo comn de sntesis de alcoholes a partir del uso

de microorganismos.

Verificar la obtencin experimental del etanol realizando las reacciones tpicas de los

alcoholes.

Aprender a identificar un alcohol por su comportamiento qumico en algunos

ensayos.

MATERIALES

PARTE A ( PRIMERA SESIN)

Erlenmeyer de 250 ml con tapn de caucho, Unin de vidrio, Esptula, Vaso de

precipitado de 150 ml, glucosa, 15 g, levadura, fosfato de amonio, solucin de

hidrxido de sodio 10 %.

PARTE B ( SEGUNDA SESIN)

Baln de fondo redondo de 250 ml, con desprendimiento lateral y corcho con hueco,

termmetro, refrigerante con corcho, erlenmeyer de 125 ml, trpode, placa de

cermica, mechero de Bunsen.

PARTE C ( TERCERA SESIN)

Vidrio de reloj, microscopio, mechero de Bunsen, vaso de precipitado de 150 ml, tubo

de ensayo, pipeta pasteur, Etanol 5 ml, sodio slido ( pedazo recin cortado),


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DICROMATO DE POTASIO AL 10 % 3 ML, Acido sulfrico concentrado 5ml, hipoclorito

de sodio 10 % 1ml, Acido actico glacial 1 ml.

PROCEDIMIENTO

PARTE A ( PRIMERA SESION)

Disolver aproximadamente 15 gramos de caa de azcar o glucosa en 50 ml de

agua en un erlenmeyer.

Aada dos medidas de esptula de levadura y 3 gramos de fosfato de amonio (

nutriente).

Tape el erlenmeyer y permita que alcance una temperatura tibia . 30 a 35 C

Observe el erlenmeyer ocasionalmente y cuando la solucin comience a fermentar

coloque el otro extremo de la unin de vidrio dentro de un vaso de precipitado con

solucin de hidrxido de calcio.

Registre sus observaciones

Deje que la solucin fermente hasta la prxima sesin de laboratorio.

PARTE B ( SEGUNDA SESION)

Despus de estos das decante la mayor parte de la solucin fermentada, en un

baln de fondo redondo y arme el aparato de la figura y realice la destilacin simple

de esa solucin:

Asegrese que el agua este circulando por el condensador antes de iniciar el

calentamiento.


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Inicie el calentamiento y la recoleccin del destilado en un erlenmeyer de 125 ml.

Anote la temperatura a la cual destil el compuesto.

Ensaye por ignicin unas gotas de destilado y unas gotas de compuesto son destilar.


Conserve el destilado para la prxima sesin.

PARTE C ( TERCERA SESION)

Coloque unas pocas gotas del etanol en un vidrio de reloj y haga el ensayo de

ignicin con un fsforo.

Vierta aproximadamente 2 ml de etanol en un tubo de ensayo y aada una pequea

pieza de sodio recin cortado del tamao de un grano de arroz ( tenga mucho

cuidado)

Ensaye cualquier gas que se desprenda con un fsforo encendido.

Cuando todo el sodio este disuelto, cuidadosamente, tibie la solucin y coloque unas

pocas gotas sobre el microscopio usando una pipeta Pasteur.

Permita que el etanol se evapore.

Registre todas sus observaciones

Vierta cerca de 2 ml de solucin dicromato de potasio en un tubo de ensayo, aada

cuidadosamente 1 ml de cido sulfrico concentrado , luego a esta solucin aada

2 gotas de etanol y agite el tubo con mucho cuidado.

Caliente con una pequea llama de mechero de Bunsen por unos minutos el tubo de

ensayo y anote los cambios ocurridos.

Intente detectar el olor del vapor desprendido, con sumo cuidado


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Registre sus observac iones.

Preguntas complementarias:

La palabra fermentacin deriva del latin fervere, que significa en ebullicin. De las

observaciones realizadas en la prc tica usted piensa que es correcto este nombre

para este proceso.

Que evidencia puede indicar usted de que la fermentac in es una reaccin qumica.

Investigue y responda las reacciones qumicas que ocurrieron para la conversin de

glucosa a etanol.


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Extensin Facatativa

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

PROGRAMA DE INGENIERA AGRONMICAPRACTICAS DE LABORATORIO DE BIOQUMICA

BIBLIOGRAFA RECOMENDADA

o Amato M, S y Granados P, F. Manual de Laboratorio. Ctedra de Bioqumica.

Universidad Nacional, 1994

o Angulo Ugalde, Y. Bioqumica Manual de Laboratorio. Universidad de Costa Rica.

1999

o Brown, T.L. LeMay, H.E. & Bursten, B.E. Qumica: La ciencia central. Pearson-Prentice

may, sptima edicin. Mxico. 1999

o Budavari, S. The Merck Index: an enciclopedia of chemical drugs and biological.

Guide for safety in the chemical laboratory. Manufacturing Chemists Association.

Whitehouse station, Merck & CO. doceava edicin. New York

o Chang, R. Qumica, editorial McGraw Hill, sptima edicin, Colombia. 2002

o Kaplan, L et al. Clinical Chemistry: theory, analysis and correlation. 2nd edition. CW.

Mosby Company, 1989

o Facultad de Medicina UNAM, Departamento de Bioqumica. Bioqumica y Biologa

Molecular. Objetivos del curso y manual de prcticas de laboratorio. Mc Graw-Hill

Interamericana Editores, Mxico, 2000.o Switzer, R. y L. Garrity. Experimental Biochemistry: Theory and exercises in fundamental

methods. 3rd edition, Freeman and Company, New York 1999

o Skoog, D.A. & West, D.M. Qumica analtica. McGraw Hill. Sptima edicin. Mxico.

2001

BIOQUIMICA LABORATORIO(1)

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