APLICACIONES DE:“REACCION EN CADENA DE LA

POLIMERASA”

Paulina Campos Gómez

Huella digital genética

• Es una técnica forense que permite identificar a una persona comparando su DNA con el de una muestra obtenida, por ejemplo, de la escena de un crimen. Como la muestra puede ser muy escasa, la PCR permite aumentar la cantidad de DNA amplificando ciertos segmentos polimórficos (variables en la población), para luego separarlos mediante electroforesis, lo que se conoce como DNA fingerprint o huella digital.

HUELLA DIGITAL

Test de Paternidad

• Amplificando por PCR fragmentos polimórficos de DNA de la madre, del niño y de él o los presuntos padres, y separándolo mediante electroforesis, se puede visualizar una serie de segmentos que tiene el niño, que debe compartir con la madre y padre biológicos.

Detección de Enfermedades Hereditarias

• Cada gen en estudio puede ser amplificado fácilmente por PCR, con los partidores adecuados, y luego ser secuenciado, para así determinar si un individuo porta alguna mutación que explica la presencia de una enfermedad o su aparición en el futuro, la que puede ser heredada a sus hijos.

Comparación de la expresión génica

• Al introducir una modificación en la PCR clásica se puede estimar la cantidad de mRNA de un gen determinado en ciertas condiciones experimentales. Al extraer el RNA total de una célula y con el uso de la transcriptasa inversa, se puede producir un DNA complementario (cDNA) de todos los mRNA o de alguno en particular. Con este cDNA se puede hacer una PCR para amplificarlo y facilitar su cuantificación. Esto se conoce como RT-PCR y permite estimar cuanto se expresa uno o varios genes en una célula en una condición de cultivo determinada.

COMPARACION DE LA EXPRESION GENICA

*Imágenes editadas digitalmente

Clonamiento de Genes

• La PCR es habitualmente usada para amplificar un determinado gen o un mRNA (representado por un cDNA), que puede introducirse en un vector y luego en un organismo, que al duplicarse también duplicará el gen que nos interesa. Así podemos tener una cantidad suficiente de un gen o cDNA, por ejemplo, para secuenciarlo o producir a gran escala la proteína que este gen codifica.

Mutagénesis

• Con variaciones en la secuencia de los partidores, se puede producir un segmento de DNA que presente diferencia en una o mas bases respecto al DNA original. Así se puede alterar una proteína para estudiar o anular su función. Esta mutación puede ser en un sitio determinado de un gen (sitio dirigida) o en un lugar al azar de un gen o genoma.

Análisis de DNA antiguo

• Con la PCR se puede analizar DNA que tiene miles de años de antigüedad, lo que ha permitido estudiar muestras obtenidas desde momias y de restos de animales extintos, como algunos ejemplos.

Genotipificacion de polimorfismos

• Mediante el uso de la PCR se puede determinar el genotipo de un individuo para un polimorfismo dado, como un microsatélite o un SNP (single nucleotide polymorphism). En este último caso necesitamos dos partidores para un mismo extremo del segmento, los cuales varían en sólo una base en el extremo 3', lo que generará una amplificación alelo-específica, de acuerdo al alelo del SNP que tenga el individuo en estudio. Estos polimorfismos son muy útiles para estudios poblacionales y para relacionar un gen o una región cromosómica con una enfermedad, ya sea mediante estudios de asociación o ligamiento.