“Evaluación de aceites esenciales para el control de ascosferosis en colmenas de

abejas melíferas”

Albo G.

Producción Animal I. Facultad de Ciencias Agrarias y Forestales. UNLP. La Plata, ARGENTINA.

albo.graciela@yahoo.com.ar

La cría yesificada es una micosis invasiva de las abejas melíferas (A. mellifera, L.), que afecta el estadío larval.

El agente causal es el hongo Ascosphaera apis (Maassen ex Claussen) Olive & Spiltoir (1955).

Síntomas de la enfermedad

Estructuras reproductivas de A. apis

Esporocistos Ascoscistos

Ascosporas

Importancia de la enfermedad

Cría Yesificada

Buscar alternativas Buscar alternativas de manejo integradode manejo integrado

Esporas

Argentina 1º-2º exportador mundial de miel

Las esporas infectan larvas sanas

80 % colmenas Apic. migratoria

Reduce la producción de miel

12 % de infección no se detecta.

Menor eficiencia polinizadora

Rara vez mata una colmena

ControlControl

OBJETIVO Evaluar y comparar la actividad in

vitro de las esencias de Laurus nobilis, Calamintha officinalis y Lippia alba

sobre Ascosphaera apis, y sus potenciales efectos tóxicos en los estadíos adulto y larval de Apis

mellifera L.

• Laurel (Laurus nobilis L., Fam. Lauraceae).• Calaminta (Calamintha officinalis Moench., Fam.

Lamiaceae).

• Salvia morada (Lippia alba Mill., Fam. Verbenaceae).

1.- PRUEBAS DE SENSIBILIDAD in vitro

Método de difusión en agar Medio de cultivo: MY20 Incubación: 28 ºC Concentraciones de las esencias: 50, 100, 200, 400,

800 y 1600 ppm Mediciones del crecimiento del hongo: 24, 48 y 72 h

Selección de los aislamientos.

Siembra Preparación del Inóculo: alícuotas de 7 mm diámetro

Medición del crecimiento del hongo a 24, 48 y 72 h

Incubación a 28 °C Siembra del inóculo en medio de cultivo + esencia + disolvente PG 2,5 %

Sensibilidad in vitro de L. nobilis

13,71 12,368,79 8,61 8,50 7,00

25,7124,00

16,86 17,29 15,29

7,40

39,3638,79

29,43

21,64

7,07

28,54

50 100 200 400 800 1600

Concentraciones de la esencia (ppm)

Cre

cim

ien

to d

e A

. ap

is (

mm

)

72 horas

48 horas

24 horas

Figuras 1: Determinación de la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) de la esencia de L. nobilis frente a A. apis

Sensibilidad in vitro de L. alba

11,07 10,71 9,00 7,75 7,00 7,00

22,7120,57

17,6414,57

7,20 7,00

37,64

31,3631,00

27,57

7,45 7,00

50 100 200 400 800 1600

Concentraciones de la esencia (ppm)

Cre

cim

ien

to d

e A

. ap

is (

mm

)

72 horas

48 horas

24 horas

Figura 2: Determinación de la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) de la esencia de L. alba frente a A. apis

Figura 3: Determinación de la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) de la esencia de C. officinalis frente a A. apis

Sensibilidad in vitro de C. officinalis

11,79 11,647,96 7,25 7,00 7,00

22,07 22,36

13,3910,86 8,86 7,00

36,43 36,57

27,00

24,57

7,07 7,00

50 100 200 400 800 1600

Concentraciones de la esencia (ppm)

Cre

cim

ien

to d

e A

. ap

is (

mm

)

72 horas

48 horas

24 horas

RESULTADOS

• El perfil de sensibilidad de los aislamientos estudiados no mostró diferencias significativas.

CMI a las 72 h de contacto del hongo con las esencias:

L. nobilis: 1600 ppmC. officinalis: 800 ppmL. alba: 800 ppm

DOSIS LETAL MEDIA (DL50) DE LAS ESENCIAS EN ABEJA ADULTA

Dosis: Esencias: 0.25, 0.50, 1, 2, 4, y 8 μg de p.a./abeja; dimetoato: 0,02; 0,04; 0,08; 0,16; 0,32 y 0,64 µg p.a./abeja

Controles: tóxico: dimetoato; atóxico: sacarosa al 50 %.

Midió la mortalidad de abejas adultas a las 24, 48 y 72 h.

La DL50 se calculó con el Programa PROBIT.

DL50 de las esencias en abeja adulta

  24 h 48 h 72 h

L. nobilis 257,67 264,66 261,87

C.officinalis 520.611,30 119.231,55 35.760,16

L. alba 26.192,48 41.659,38 18.640,24

Dimetoato 0,327 0,231 0,202

Referencias: >100 µg p.a./abeja: virtualmente no tóxica; entre 10 y 100 µg p.a./abeja: levemente tóxico; entre 1 y 10 p.a./abeja : moderadamente tóxico; < 1 µg p.a./abeja: altamente tóxico.

Todas las esencias en estudio fueron “VIRTUALMENTE NO TOXICAS”.

L. nobilis presentá niveles mayores de DL50 y podría resultar tóxico a dosis mayores.

Composición del Candy:37,5 g Azúcar impalpable12,5 g Glucosa-Dosis de las esencias: 800 mg de L. alba y C. officinalis1600 mg de L. nobilisSe realizan 4 inspecciones semanales al día 0, 7, 14 y 21 de evaluación 180

celdas con cría abierta

ENSAYO DE TOXICIDAD LARVAL in vivo

• Se encontraron diferencias altamente significativas entre tratamientos (p = 000,16)

• El Test de Tukey diferenció dos grupos, por un lado la esencia de C. officinalis y Testigo con 13 y 7 % de mortalidad, respectivamente. Por el otro, L. nobilis y L. alba con 21 y 31 % de mortalidad respectivamente.

Tabla 2. Resultado del Test de Tukey.

Existen diferencias altamente

significativas entre tratamientos ( ≤ 0,001)

  Testigo L. alba L. nobilis C. officinalis

         

Testigo 0 36,5 15,4 7,6

L. alba -36,5 0 -21,1 -28,9

L. nobilis -15,4 21,1 0 -7,8

C. officinalis -7,6 28,9 7,8 0

L. alba;

31,03% L. nobilis ;

22,36%

C. officinalis;

12,60% Testigo; 6,30%

0,00%

10,00%

20,00%

30,00%

40,00%

Porc

enta

je d

e m

orta

lidad

Esencias

Toxicidad larval a campo

L. alba

L. nobilis

C. officinalis

Testigo

14 %

% de mortalidad normal

C. Officinalis resultó la

única esencia ATOXICA para

larvas

C ONS UMO D E C AND IE S C ON E S E NC IAS E N C OL ME NAS

0

9 8,310,8

0 0,5

7,812,6

02,8

0,2

5,6

0

7

18,5

50

0 2,1

45,650

-10

0

10

20

30

40

50

60

0 1 2 3 4 5

Inspecciones (0, 7, 14 y 21 días)

L . nobilis

C . c itratus

L . alba

C . offic inalis

Tes tigo

CONCLUSION

• La esencia de C. officinalis es promisoria para su uso en el control de A. apis en colonias de A. mellifera, L.

• Posee efecto fungistático sobre A. apis, es atóxico para los estadios larval y adulto de la abeja melífera y es consumido por la colonia en su totalidad.

• Restaría determinar los componentes principales de la esencia.

POTENCIAL ACTIVIDAD INHIBITORIA DE DIFERENTES DISOLVENTES DE LAS

ESENCIAS

Disolventes• Tween 80 1 %• DMSO (Dimetilsulfóxido)• Alcohol 70º• Propilenglicol 2,5 % (PG 2,5 %)• Agua 30 aislamientos de A. apis de diferentes orígenes

geográficos (Córdoba, Buenos Aires, La Pampa, Neuquén y Chile)

Resultados• Se observaron diferencias significativas entre

tratamientos (p = 0,03).• No se observaron diferencias significativas con

alcohol 70º, PG 2,5 %, agua y Tween 80.• El análisis de LSD mostró que DMSO se diferenció

estadísticamente del resto de los disolventes.

ConclusiónEl “DMSO” no debería ser usado como disolvente ya que presenta inhibición per se. Sin embargo, es el disolvente que disuelve en forma más eficiente a las esencias. Por ello, se deberían profundizar los estudios para determinar su posible efecto sinérgico con otro disolvente, que permita reducir su concentración y por lo tanto su efecto inhibidor.

ORIGEN CEPAS Alcohol 70ºTween 80

al 1%Agua

2,5% Propilenglicol

DMSO

GORINA 42 9,0 9,7 9,3 9,2 8,8

GRAL.PAZ 44 9,4 9,5 8,4 9,1 6,9

ABRAMO MACHETTI 96 6,6 7,2 6,5 7,2 5,6

SAAVEDRA 27 8,9 10,5 9,8 9,0 7,3

LABORDE 47 7,1 7,0 7,5 6,9 6,5

PUNTA DE INDIO 76 6,6 8,9 7,7 7,5 5,5

JACINTO ARAOZ 35 7,4 8,3 7,6 7,5 5,8

ALBERTI 95 8,5 7,2 6,7 8,5 6,6

LOS HORNOS 79 9,5 9,9 9,1 10,1 7,1

CHACRAS CHASM. 46 7,5 6,7 9,2 9,1 7,1

GUATRACHE 98 7,3 7,6 8,1 8,2 6,9

JUSTINIANO POSSE 39 5,0 7,5 6,7 8,3 4,9

HUINGANGO 26 5,6 6,9 8,1 6,9 5,3

CHILE 8 6,8 8,5 4,8 7,7 7,1

CHILE 14 6,3 8,0 5,0 7,1 5,6

CHILE 17 8,6 11,7 9,0 10,7 9,2

CHILE 19 7,2 7,1 5,9 6,8 5,3

CHILE 20 8,3 8,2 8,3 8,3 6,3

LAPRIDA 37 7,6 9,2 9,3 9,8 6,3

LAPRIDA 70 6,9 6,7 6,3 7,9 7,1

PIGUE 4 9,5 9,3 9,4 5,1 4,1

BME. BAVIO 87 6,5 6,9 6,8 8,3 6,0

TANDIL 38 5,9 5,4 6,9 5,6 3,7

TANDIL 77 7,2 7,2 7,4 7,2 5,9

25 DE MAYO 25 6,3 6,7 6,7 5,6 3,8

RANELAGH 99 6,3 7,5 7,1 10,0 7,2

MIRAMAR 97 8,3 8,3 8,6 6,5 4,4

MONTE BUEY 75 8,6 9,2 10,1 7,1 4,5

PIGUÉ 52 6,8 8,5 9,3 6,9 4,5

LABORDE 41 7,2 7,5 7,0 5,5 4,0MAX 9,5 11,7 10,1 10,7 9,2MIN 5,0 5,4 4,8 5,1 3,7

Tasa de crecimiento (en mm) con diferentes solventes

Sensibilidad in vitro de los diluyentes

Diluyente CMI

DMSO 150 ppm

Alcohol 70º 250 ppm

Tween 80 500 ppm

Agua 500 ppm

PG 2,5 % 500 ppm

DETERMINAR Y COMPARAR LA ACTIVIDAD in vitro DE Cymbopogon citratus FRENTE A A. apis

USANDO 5 DILUYENTES.

• Concentraciones de C. citratus: 250 y 750 ppm. • Diluyentes: Tween 80, dimetilsulfóxido (DMSO),

propilenglicol 2,5%, agua y alcohol 70. • Control de crecimiento (100%): A. apis + agua.

RESULTADOS

• No se observaron diferencias significativas en la sensibilidad de los aislamientos estudiados.

• Cymbopogon citratus inhibió el crecimiento a las 72 h.

• Con DMSO y Tween 80, hubo diferencias significativas en ambas concentraciones de la esencia evaluada cuando se los comparó con el control de crecimiento.

• Para el PG 2,5% y alcohol 70º las diferencias significativas fueron observadas solo a 750 ppm.

250 PPM C. citratus

750 PPM C. citratus

250 PPM C. citratus

750 PPM C. citratus

250 PPM C. citratus

750 PPM C. citratus

250 PPM C. citratus

750 PPM C. citratus

250 PPM C. citratus

750 PPM C. citratus

MAX 6,3 0,0 5,5 0,0 3,5 0,0 4,3 0,0 2,0 0,0

MIN 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0

MG 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0

Valor de crecimiento de Ascosphaera apis en mm frente a Cymbopagon citratus según el diluyente utilizado

Alcohol 70º Tween 80 (1%) Agua 2,5% propilenglicol DMSO