Post on 13-Jan-2017
Los cromosomas mitóticos humanos consisten predominantemente de fibras nucleosomas
plegadas irregularmente sin la estructura de la cromatina de 30 nm (Teoría fractal)
Villaseñor Corona Anaestudiante Médico Cirujano y Partero
prácticas Instituto de Investigación en Ciencias Biomédicas. Biología Molecular
Generalidades
El DNA no puede empaquetarse directamente en la estructura general de la cromatina
La subunidad fundamental de la cromatina es el nucleosoma
Lewin's Genes XI Jocelyn E. Krebs, Stephen T. Kilpatrick, Elliott S. ... ( 25 de febrero de 2013)
niveles de empaquetamiento
>primer nivel: nucleosoma>segundo nivel: fibra de 30 nm>tercer nivel: empaquetado de la propia fibra de 30nm
Lewin's Genes XI Jocelyn E. Krebs, Stephen T. Kilpatrick, Elliott S. ... ( 25 de febrero de 2013)
Empaquetamiento de la cromatina
-cadena continua de nucleosomas
-representa el nivel menos compactado
-ambiente iónico bajo
Lewin's Genes XI Jocelyn E. Krebs, Stephen T. Kilpatrick, Elliott S. ... ( 25 de febrero de 2013)
Empaquetamiento de la cromatina
- se visualiza en condiciones ionicas altas- estructura enroscada-Aproximadamente 6 nucleosomas por cada vuelta-Constitutiva tanto en interfase y cromosomas mitóticos-forma de solenoide donde nucleosomas tienen forma helicoidal
Lewin's Genes XI Jocelyn E. Krebs, Stephen T. Kilpatrick, Elliott S. ... ( 25 de febrero de 2013)
ControversialMucha información apoya la estructura de 30 nm Estudios con Cryo-Em demuestran que las fibras de 30 nm existen pero en un solo pequeño grupo altamente especializado de células*estudios con Cryo-EM*estudios con SAXS
>cromosomas mitóticos HeLa>cromosomas mitóticos de los eritrocitos nucleados de las gallinas (control +)
Yoshinori Nishino, M. E. (22 de Agosto de 2012). Human mitotic chromosomes consist predominantly of irregularly folded nucleosome fibres without a 30‐nm chromatin structure .
Método.
>fueron aislados en una solución salina fisiológica>las muestras fueron puestas en un vidrio de cuarzo con capilaridad>se expusieron a rayos X por un segundo>se grabaron los patrones de dispersión
-varias exposiciones a los rayos X no cambiaron los patrones de dispersión
Yoshinori Nishino, M. E. (22 de Agosto de 2012). Human mitotic chromosomes consist predominantly of irregularly folded nucleosome fibres without a 30‐nm chromatin structure .
Análisis eritrocitos nucleados
con SAXS:-pico alto en 30 nm-2 prominentes en 11nm y 6nm
con cryo-EM:-pico de 30 nm
Yoshinori Nishino, M. E. (22 de Agosto de 2012). Human mitotic chromosomes consist predominantly of irregularly folded nucleosome fibres without a 30‐nm chromatin structure .
Análisis HeLa
>Estudio por Langmore y Paulson (1983)-reportó picos en 30, 11 y 6 nm-utilizando SAXS-6nm igual, 11 nm descendente
Yoshinori Nishino, M. E. (22 de Agosto de 2012). Human mitotic chromosomes consist predominantly of irregularly folded nucleosome fibres without a 30‐nm chromatin structure .
¿Qué significan los picos 30, 11 y 6 nm?
> de las posiciones de los nucleosomas
6 nm: posición en su cara plana.11 nm: posición borde a borde
Yoshinori Nishino, M. E. (22 de Agosto de 2012). Human mitotic chromosomes consist predominantly of irregularly folded nucleosome fibres without a 30‐nm chromatin structure .
La fibra de 30nm
>En un estudio anterior no encontraron evidencia de la fibra de 30nm en cromosomas mitóticos
>aislaron cromosomas por el procedimiento de Langmore y Paulson
>se examinaron los cromosomas aislados con cryo-EM
Yoshinori Nishino, M. E. (22 de Agosto de 2012). Human mitotic chromosomes consist predominantly of irregularly folded nucleosome fibres without a 30‐nm chromatin structure .
La fibra de 30nm se origina por agregaciones ribosomales
>se encontraron gránulos adheridos a la superficie del cromosoma
La fibra de 30nm se origina por agregaciones ribosomales
Se utilizó otra técnica llamada Power Spectra, donde las regiones del cromosoma fueron selectivamente analizadas
Yoshinori Nishino, M. E. (22 de Agosto de 2012). Human mitotic chromosomes consist predominantly of irregularly folded nucleosome fibres without a 30‐nm chromatin structure .
La fibra de 30nm se origina por agregaciones ribosomales
>se lavaron con buffer isotónico (poliamina y EDTA)>luego fue resuspendida en el buffer original de aislamiento y esto eliminó la mayoría de los agregados ribosomales, el pico de 30 nm desapareció
Entonces qué forma tiene?
>desarrollaron un nuevo instrumento para el SAXS y utilizaron látex como control porque producía un patrón regular de 50-1000 nm
>se dieron cuenta que había una relación entre la dispersión y el vector de dispersión (eran proporcionales) r=-3.12
Sugieren que la organización del cromosoma mitótico envuelve acomodos irregulares de fibras de nucleosomas
la explicación podría ser la condensina
forma un eje en el cromosoma y da un soporte a las fibras del nucleosoma globalmente alrededor del centro del cromosoma
forman lazos que son hábiles de interactuar unos con otros y son suficientes para formar una cuerda porque se repelen por sus fuerzas entrópicas