TEMA:

UROCULTIVO

UNIVERSIDAD TECNICADE MANABI

GRUPO # 1

El Urocultivo se utiliza para diagnosticar bacteriuria, la orina constituye un método excelente para cultivar la mayor parte de microorganismos que infectan el aparato urinario.La combinación de piuria con bacteriuria considerable sugiere la presencia de una infección urinaria

La etiología de las infecciones urinarias varía relativamente

según se hayan adquirido extra o intra

hospitalariamente

En primer caso, son casi siempre

monomicrobianas, y en el segundo

acostumbran a ser polimicrobianas.

Dentro de ellos bacilos Gram negativos predomina la E. coli, seguido de proteus mirabilis, y con menor frecuencia klebsiella

pneumoniae, pseudomona aeruginosa y el resto Enterobacteriaceae.

Entre los cocos Gram positivos destacan

estreptococcus faecalis sobre estaphilococcus, que se presentan en la misma

proporción plasma coagulasa positivo que

negativo.

Las bacterias que se encuentran en la parte baja de la uretra y

pueden contaminar la orina sin producir por lo general

infecciones, pertenecen a los géneros lactobacilos, Bacillus, y

corynebacterium.

Otros microorganismos que también se hallan en la orina, sobre todo de mujeres y que

proceden de vagina son trichomonas, la gardnerella

vaginalis, y neisseria gonorrhoeae.

•BACTERIURIA

SIGNIFICATIVA

•Se refiere a la cantidad de bacterias que hay que encontrar en una orina para considerar que esta infectada.

•Los limites aceptados en los estudios de la parte media de micción manital de niños y adultos son los siguientes:

•Recuentos inferiores de 10.000 U.F.C/ ml: se considera probable contaminación

•Entre 10.000 y 100.000 U.F.C/ml es dudoso y se debe repetir el estudio

•Mayor a 100.000 U.F.C / ml se considera infección.

Normas básicas generales:

Las muestras deben venir acompañadas de su respectiva hoja de pedido donde deben llenarse todos los datos solicitados por el laboratorio:

Nombre y Apellido completo

Nº de Historia Clínica edad sexo servicio y cama tipo de muestra: catéter,

suprapúbica, etc. recibió antibióticos en los

últimos 7 días, si es así anotar nombre del ATB y dosis

control o sospecha de algún germen anterior

OBTENCION DE LA MUESTRA

En la mujer: consiste en apartarlos labios uretrales y lavar cuidadosamente la vulva con una esponja empapada en una solución jabonosa no bactericida. La operación se debe repetir 3 veces, y se eliminan los restos de lavado con una esponja seca. La micción se efectúa manteniendo los labios separados desechando la primera porción y recogiendo la central en un recipiente estéril.

En el hombre: se retira el prepucio, y se lava el glande con una esponja empapada en solución no bactericida, durante 3 veces consecutivas, después se seca con una gasa estéril y se recoge la parte intermedia de la micción en un recipiente estéril.

En niños: Se lava la región genital con una esponja empapada en detergente no bactericida, repitiendo la acción 3 veces y secándolo con una gasa estéril. Se le sostiene boca a bajo, frotándole los músculos para espinales los cuales estimulan sus deseos de orinar (reflejo de Pérez). Si o resulta se Colca una bolsa estéril, sobre los genitales del niño esperando que la orina fluya espontáneamente.

En recién nacidos, en nilos, y en pacientes con dificultades para orinar se recurre a la toma de muestras por punción suprapubica, que debe efectuarla un especialista. No es recomendable extraer la orina por sondaje o catéter, ya que fácilmente se puede provocar una infección.

En recién nacidos, en niños y en pacientes con dificultades para orinar, se recurre a la toma de muestras por punción suprapúbica, que debe efectuarla un especialista.

A menos que sea necesario, no es recomendable extraer la orina por sondaje o catéter, ya que fácilmente se puede provocar una infección.

ASPIRACIONES SUPRAPÚBICAS

Las aspiraciones suprapúbicas están reservadas casi con exclusividad para neonatos, niños pequeños y en ocasiones para adultos con sospechas clínicas de infección de las vías urinarias, en las cuales las muestras por captura limpia han fallado para establecer un diagnóstico.

Transporte de la muestra

La orina es un buen medio de cultivo que permite la multiplicación de los microorganismos incrementando el recuento bacteriano, por lo que las muestras deben procesarse antes de 2 horas de obtenidas. Si ello no es factible, las muestras deben refrigerarse a 4°C. Una muestra puede mantenerse refrigerada, sin que se altere el recuento bacteriano, durante 24 horas.

Los preservantes que inhiben la multiplicación bacteriana no han resultado mejores que la refrigeración, son de alto costo y tienen el inconveniente de interferir con algunas determinaciones de la tira reactiva de orina.

Metodos para la obtención de muestras

Se considera una etapa crucial en el procesamiento de los urocultivos ya que la posibilidad de contaminación con bacterias de la flora comensal de piel, periné y uretra distal, es muy alta e induce a la generación de resultados falsamente positivos. La Sociedad Americana de Microbiología considera aceptable un porcentaje de contaminación en las muestras de orina no superior a 5%.

Se describen al menos 5 métodos para la obtención de orina a cultivar, los que se muestran en la Figura 1.

MATERIALES

MEDIOS

Las bacterias para su desarrollo requieren de sustancias nutritivas cuyos componentes básicos deben satisfacer las mínimas exigencias nutricionales y condiciones de atmósfera (aerobiosis, anaerobiosis, microaerofília), pH y temperatura óptima para su crecimiento in vitro.

La elección de los medios de cultivo se realiza en función a la localización de las infecciones y las bacterias a investigar. Los errores cometidos durante este paso del ciclo de procedimientos pueden invalidar la lectura e interpretación de los cultivos.

Los medios usados son:− Placas con agar sangre de carnero

(AS) − Placas con agar Mc Conkey (McC) Otros medios: para hongos si es

necesario Agar Sabouraud

Asa calibrada: asas de de platino o descartable , se pueden usar las siguientes medidas:0.001 ml ( 1ul) para detectar colonias mayores de 1000 UFC/ml0.01 ml (10ul) para detectar colonias entre 100 – 1000 UFC/ml

ETAPA ANALITICAI.- MICROSCOPIA Y OTROS METODOS DIRECTOS

Tinción de Gram y Examen directo de la muestra

Es un método rápido, económico, sensible y

específico para detectar bacteriuria. Para determinar

el tipo y conteo de bacterias y células en la orina. Se

recomienda realizarlo como respaldo frente a

discordancias o hallazgos especiales

Debe aplicarse a la muestra recién agitada sin centrifugar, con el mismo asa de 1µl (o de 10 µl) empleado en la siembra del urocultivo, depositando este volumen en un portaobjetos; pueden colocarse hasta 10 muestras por lámina. Estas se tiñen y pueden ser observadas cuando existen discordancias entre el urocultivo y el examen directo.

La presencia de una bacteria/campo de inmersión tiene buena correlación con > 100.000 UFC/ml en ~ 85% de los casos.

La presencia de muchas células epiteliales y morfotipos microbianos diferentes sugieren contaminación

Cultivo microbiológico

La metodología de la inoculación de la muestra en medios de cultivo o siembra microbiológica depende de la forma de obtención de la muestra:

• Para orinas de segunda micción, recolector y catéter a permanencia, las muestras deben sembrarse con asa de 1 µl en placas de un medio enriquecido como Agar Sangre y algún medio selectivo-diferencial: Agar Mac Conkey. El desarrollo de una colonia en el cultivo debe multiplicarse por 1000.

• Para orinas obtenidas por cateterización vesical, las muestras pueden sembrarse con asa de 10µ (1 colonia = 100 ufc/ml) y 1 µl (1 colonia = 1000 ufc/ml).

• Para orinas obtenidas por punción vesical, se recomienda la siembra en agar sangre más un medio selectivo-diferencial para bacilos Gram negativos o siembra directa de 100 µl (1 colonia = 10 ufc/ml).

INOCULACIÓN Usar el asa calibrada, flamear,

dejar enfriar, mantener en posición vertical introducir solo el aro debajo del nivel de la orina previa mezcla de la orina sin centrifugar.

Estriar en la placas de cultivo de la siguiente manera:

Estriar de arriba hacia el centro de la placa y estriar la orina en una serie de pasos de ángulo de 90º a través del inóculo (solo para el método de 0.001 ml).

Otra forma es dejar la muestra con el asa en el primer cuadrante y estriar en V, luego proceder con los otros cuatro cuadrantes siguientes.

Sin flamear el asa estriar atravesándola línea del inoculo en el sentido de las flechas.

Incubación Una vez sembradas las placas deben incubarse durante 24 horas a

35 - 37° C. Incube 48 horas.

Examinación del medio de cultivo

Al momento de informar los urocultivos, se recomienda revisar el resultado del sedimento para que ambos informes sean concordantes.

Es necesario definir qué se entiende por sedimento sugerente de ITU para poder evaluar las discordancias entre el sedimento y el urocultivo:

Piocitos: > 10 /ul ó > de 5-6 por campo de 40x

Leucocitos: > 10 /ul ó > de 5-6 por campo de 40x

Bacterias: Regular o abundante cantidad La presencia de células descamativas y/o

mucus en una paciente mujer, sugiere que la muestra está contaminada con secreción vaginal.

UROCULTIVO POSITIVO

Recuento de colonias de acuerdo al asa calibrada usada, multiplicar según la dilución. 0.001 mL 1 colonia = 1000 UFC/ml0.01 mL 1 colonia = 100 UFC/ml

Cuando las colonias son tan numerosas para el recuento, tener en cuenta que el máximo de una asa de 0.001 es > 10⁵ UFC/ml y el máximo para el asa de 0.01 es >10⁴ UFC/ml.

Placas de agar McConkey y de agar CLED, donde ha crecido un Escherichia Coli en cultivo puro, con un

recuento superior a 100.000 UFC/ml. (cultivo sembrado con asa calibrada de 1/1000).

ETAPA POST-ANALITICA REPORTE DE RESULTADOS

a) Reporte de la Tinción Gram: resultados de bacterias y células.

b) Cultivos Negativos, Reportar: de acuerdo al asa calibrada utilizada.

Negativo dil 1/100UFC/ml o Negativo dil 1/1000 UFC/ml. por 24 o 48 horas.

c) Cultivos positivos, reportar:

Si solo se observa flora microbiota de piel o urogenital: 10000 UFC/ml microbiota urogenital normal.

Reportar el recuento de colonias de cada patógeno separadamente seguido por la identificación presuntiva o definitiva con la susceptibilidad

Cuando se observa inhibición por antimicrobianos, reportar: Se detectó inhibidor antimicrobiano con su recuento respectivo.

Notificar al clínico posibles hallazgos inusuales (Ejm: Salmonella tiphy o Burkholderia pseudomallei).

Tabla 1. Interpretación microbiológica del

urocultivo y conducta recomendada Recuento de

colonias (UFC/ml)

Condición clínica

o método de recolección

Sedimento urinario

Microorganismo aislado

Interpretación/ Conducta

recomendable

0 - Independiente del resultado

- Urocultivo negativo

Cualquier recuento

Punción suprapúbica

Independiente del resultado

Cualquier microorganismo

Identificación y estudio de

susceptibilidad

1.000 Cateterización transitoria

Independiente del resultado

< 2 especies uropatógenas

Idem

> 10.000 Segunda micción en paciente

especial*

Independiente del resultado

< 2 especies uropatógenas

Idem

> 10.000 Orina por catéter

permanente

Patológico < 2 especies uropatógenas

Idem

> 10.000 Segunda micción

Patológico < 2 especies uropatógenas

Idem

Recuento de colonias (UFC/ml)

Condición clínica o método de recolección

Sedimento urinario

Microorganismo aislado

Interpretación/Conducta recomendable

> 100.000 Segunda micción Patológico 2 uropatógenos + otra bacteria con recuento 10 veces menos

Identificación y susceptibilidad sólo de los uropatógenos

> 100.000 Segunda micción Sin antecedente del sedimento

< 2 especies uropatógenas

Identificación y estudio de susceptibilidad

> 100.000 --- --- > 3 microorganismos, sin predominio de alguno

Polimicrobismo. Solicite nueva muestra

TIPOS DE COLONIAS DE ALGUNAS BACTERIAS

STAPHILOCOCCUS: Convexa, de borde entero de dos a tres mm, cremosa, amarillenta.

ESTREPTOCOCCUS: Convexa o pulvinada, traslucida, butirosa

PROTEUS: Plana, gris, que se despliega como una delgada pelicula sobre la superficie del agar, olor a chocolate quemado.

MICROORGANISMOS MÁS FRECUENTES AISLADOS EN UROCULTIVOS