UROCULTIVO

La infección de vías urinarias (IVU) es una de las infecciones bacterianas más frecuentes en mujeres (recto mas cerca de la uretra y más corta) y su espectro va desde una bacteriuria asintomática a una pielonefritis aguda (PNA).

El Urocultivo debe realizarse cuando hay

signos de infección urinaria.

Insuficiencia renal.

Las infecciones del tracto urinario pueden ser producidas por Las infecciones del tracto urinario pueden ser producidas por

agentes etiológicos especifico y raras veces por una flora mixtaagentes etiológicos especifico y raras veces por una flora mixta. Es muy importante entonces llevar a cabo estudios cuantitativos de bacterias viables en la orina.

Agentes etiológicos

causantes de IVU:

Escherichia coli,

Enterococcus, Klebsiella,

Enterobacter, Proteus

sp., Pseudomonas,

Serratia, Citrobacter y

Streptococcus pyogenes.

Las infecciones de vías urinarias

se desarrollan como consecuencia de infecciones exógena

ó por vía ascendente que por

endógenas o provenientes

de otras partes del organismo, tales como

septicemias o bacteriemias.

FACTORES PREDISPONENTES DE IVU: • Falta de higiene•Vaciamiento incompleto de vejiga durante micción•Cateterismo uretral prolongado• Diabetes• Hipertensión arterial• Inmunosupresión• Uropatía obstructiva• Alteraciones neurogénicas de la vejiga

Escherichia coli

causa el 80% de las IVU

Infección en Infección en

riñón o migrar riñón o migrar

a sangrea sangre

Compromiso Compromiso

de la vida del de la vida del

pacientepaciente

Microorganismos Patógenos

Escherichia coli Uropatógena (UPEC)

Klebsiella pneumoniae Proteus Staphylococcus Serratia maurcescens Pseudomonas aureuginosa Enterococcus faecalis

80-90%

5-10 %

5-10 %

TOMA DE MUESTRA:

La orina normalmente es un líquido estéril, porlo cual es importante

colectarla adecuadamente, ésta puede contaminarse con microorganismos

de la flora normal del periné, la próstata, la uretra o la vagina.

TIPOS DE COLECTA:

• CHORRO MEDIO DE ORINA EMITIDA EXPONTANEAMENTE• CHORRO MEDIO DE ORINA• CATÉTER VESICAL (no de rutina)• POR PUNCIÓN (ASPIRACIÓN) SUPRAPÚBICA DE LA VEJIGA (infantes)• POR CITOSCOPIA• POR SONDAS FLOLEY (no recomendados para cultivos)

• Obtener las muestras en la mañana (1er orina del día)

• No forzar la ingesta de líquidos

• Tres muestras para pacientes asintomáticos.

• Limpieza de las zonas cercanas a la uretra

• Orinar en el frasco estéril provisto por el laboratorio de la siguiente

manera:

•    Descartar el primer chorro en el inodoro y sin que esta se suspenda

se recogen los 20 a 30 ml siguientes “chorro del medio” en el frasco

estéril (teniendo la precaución de destaparlo sólo en el momento de usar

y taparlo rápidamente para evitar que se contamine).

•    Descartar el último chorro en el inodoro.

RECIPIENTE: vidrio, boca ancha, estéril, limpio, sin detergentes o

desinfectantes y con tapón de rosca.

TOMA DE MUESTRA:TOMA DE MUESTRA:

TÉCNICA PARA HOMBRES ADULTOS :

• Lavado de las manos con agua y jabón.

• Retraer completamente el prepucio, que se mantendrá así en todo momento, hasta

que se haya recogido la orina.

• Limpiar el glande con jabón neutro

• Enjuagar con agua destilada

• Orinar en el frasco estéril de la siguiente manera:

•    Descartar el primer chorro en el inodoro.

•    Sin suspender la micción, colectar el “chorro medio” (20 –30 ml) en el frasco

estéril (teniendo la precaución de destaparlo sólo en el momento de usar y taparlo

rápidamente para evitar que se contamine).

•    Descartar el último chorro en el inodoro.

TOMA DE MUESTRA:TOMA DE MUESTRA:

TÉCNICA PARA MUJERES ADULTAS:

• La paciente debe quitarse la ropa interior.

• Se lavará las manos cuidadosamente con agua y jabón, las enjuagará con

agua y las secará con una toalla limpia.

• Se separarán los labios mayores y menores, y los mantendrá separados en

todo momento hasta que se haya recogido la orina.

• Con una gasa enjabonada se lava bien la vulva pasándola de delante hacia

atrás, se repetirá el proceso un total de 4 veces.

• Enjuagar cuidadosamente con agua hervida para eliminar los restos de jabón.

• Seguidamente enjuagar con abundante agua, sin secarse, orinar en el

frasco estéril provisto por el laboratorio, de la siguiente manera:

•    Descartar el primer chorro en el inodoro.

•  Colectar el “chorro medio”“chorro medio” en el frasco estéril (teniendo la precaución

de destaparlo sólo en el momento de usar y taparlo rápidamente para evitar

que se contamine).

•    Descartar el último chorro en el inodoro.

TÉCNICA PARA NIÑOS:

• En niños y niñas mayores la orina se recoge de forma similar a los adultos.

• En niños y niñas más pequeños, la orina se recogerá en colectores o bolsas estériles especialmente diseñadas para ellos de la siguiente forma:

• Lavado cuidadoso de los genitales y área perineal igual que en los adultos.

• Colocar la bolsa de plástico o el colector.

• Vigilar la bolsa cada 30 minutos y tan pronto como el niño haya orinado, deben retirarse y enviarse al laboratorio para su procesamiento.

• Si la micción no se ha realizado en una hora, se repite la operación colocando una nueva bolsa.

EN NIÑOS Y ADULTOS QUE NO CONTROLAN LOS ESFÍNTERES:

Nunca utilizar bolsas colectoras para el estudio de Nunca utilizar bolsas colectoras para el estudio de urocultivo.urocultivo. Existen, otras alternativas como:

a- Al acecho: el método se aplica con los lactantes. La dificultad estriba en que se desconoce cual será el momento en que se va a producir la micción. El operador deberá esperar entonces a que se produzca y recogerá en un frasco estéril lo que seguramente será la porción media del chorro miccional.

b- Punción suprapúbica: procedimiento debe ser efectuado por médicos entrenados. En principio, se reserva para casos especiales, como neonatos graves, pacientes cuyos urocultivos previos presenten resultados conflictivos, sospecha de microorganismos de difícil desarrollo, etc.

Primeramente se verifica que el paciente presente globo vesical palpable, se desinfecta zona pubiana con alcohol yodado y se deja actuar 1 min., se limpia con alcohol 70% y se punza con aguja adecuada en la zona ubicada 1 o 2 cm encima del pubis. Se aspira la orina y se vuelca en frasco estéril.

• Mejor recurso cuando el paciente se encuentra en estado de

coma

• Resultados con otras técnicas resultan confusos

Después de Colectar la muestra se realiza el análisis

correspondiente:

CUANTITATIVO debido a la alta frecuencia con la que las

muestras se contaminan durante su obtención

(excepto para las muestras de punciones

suprapúbicas)

Punción con aspiración suprapúbicaPunción con aspiración suprapúbica

• Transporte al laboratorio lo antes posible

• Cultivar las muestras dentro de las dos horas posteriores a la recolección;

refrigerar y cultivar dentro de las siguientes 8 h cuando sea posible

• Colocar un preservativo bacteriostático para orina/ tubo de transporte (3ml)-

no necesaria refrigeración

• Las muestras de orina refrigeradas pueden ser conservadas 24 h o menos,

las cuentas bacterianas a menudo permanecen estables durante 24 h a 4ºC

TRANSPORTE DE LA MUESTRA:TRANSPORTE DE LA MUESTRA:

Requerir una nueva muestra cuando:

•No hay evidencias de que la muestra

haya sido refrigerada o tenga más de 2h

en ser obtenida

•Tiempo y método de colecta no han sido

observados

• En caso de que la muestra no pueda ser

remplazada y no haya sido colectada,

transportada y manejada adecuadamente,

se DOCUMENTA en el reporte final la

calidad de la muestra como NO ADECUADA

VOLUMEN MINIMO DE LA MUESTRA.Es suficiente un volumen de orina de 5 – 10 ml

DETERMINACION VOLUMEN (ML) (COMENTARIOS

BACTERIAS 0,5 - 1 PRIMERA ORINA DE LA MAÑANA

HONGOS >20 PRIMERA ORINA DE LA MAÑANA.

MYCOBACTERIAS >20 PRIMERA ORINA DE LA MAÑANA TRES DÍAS CONSECUTIVOS.

ANAEROBIOS 1 ASPIRADO SUPRAPÚBICO, ENVIAR EN UN SISTEMA DE TRANSPORTE PARA ANAEROBIOS

VIRUS 10-15 PRIMERA ORINA DE LA MANANA, ENVIAR CON HIELO Y TRANSPORTAR AL LABORATORIO INMEDIATAMENTE

PARÁSITOS. ORINA DE 24 HORAS

DETECCION DE BACTERIURIA ----------- Tinción de Gram Frotis: Colocar 10 μl de orina en un portaobjetos Fijar, teñir e identificar Determinar el N° de microorganismos por campo de inmersión Interpretación: La presencia de uno o más microorganismos por campo de inmersión

correlaciona con una cuenta > 0 = 105 UFC/ml --- IVU La presencia de muchas células epiteliales escamosas indica contaminación

---- repetir la muestra.

Tira reactiva

TIRAS REACTIVAS Las tiras reactivas se utilizan para el análisis rápido de la orina,

permiten detectar la presencia de eritrocitos, cristales, glucosa, cuerpos cetónicos o proteínas, así como pH.

La presencia de leucocitos en orina es un indicador muy sensible de ITU.

En pacientes sintomáticos, un sedimento urinario de 10 o más leucocitos por campo microscópico correlaciona, con bacteriuria significativa.

Se debe realizar cultivo de orina y antibiograma ante cualquier paciente con sospecha de IVU.

Tira reactiva

Existe una diversidad de medios de cultivo utilizados en el urocultivo, entre los cuales se encuentran:

Agar de MacConkey

Medio diferencial para la detección, aislamiento y enumeración de bacterias coliformes y patógenos intestinales en aguas, productos lácteos y muestras biológicas.

Agar Dextrosa de Sabouraud

Medio para el cultivo de hongos filamentosos y levaduras.

Agar Eosina Azul de Metileno (Modificado)

Medio ligeramente selectivo para el aislamiento y diferenciación de enterobacterias.

Base de Caldo Selenito

Base destinada a la preparación del medio de enriquecimiento utilizado para el aislamiento de Salmonella y Shigella en heces, orina, agua y otros materiales contaminados.

Base de Caldo Tetrationato

Base destinada a la preparación del medio selectivo de enriquecimiento para el aislamiento de Salmonella de las heces, orina, alimentos y otros materiales.

OTROS MEDIOS RECOMENDADOS PARA UROCULTIVO

Agar TergitolAgar Tergitol

Agar CLED (para Gram positivos y Gram negativos)Agar CLED (para Gram positivos y Gram negativos)

Agar  SangreAgar  Sangre

Agar  BiggyAgar  Biggy

E. coli MacConkey

Pruebas Bioquímicas para identificar Enterobacterias

La reducción de nitrato a nitrito refleja la presencia de organismos gram-negativos, excepto en el caso de Pseudomonas

aeruginosa.

Pruebas de degradación de aminoácidos: LIA (Lysine Iron Agar), MIO (Movilidad Indol Ornitina y Producción de H2S.

Citrato Simmons

Pruebas de fermentación de carbohidratos

Prueba de TSI (Triple azúcar hierro)  

En la infección urinaria complicada la proteína C reactiva sérica se encuentra elevada y su determinación periódica puede ser

de utilidad en la evaluación de la respuesta al tratamiento.

METODOS DE CULTIVO E INTERPRETACIÓN

METODO DE DILUCIÓN o MEDIO MINIMOProcedimiento 1. Se homogeniza la orina agitando el frasco por rotación.

2. Adicionar 0.1 ml de orina a 9.9 ml de sol salina estéril -Mezclar 3. Transferir 0.1 ml de la mezcla a otro tubo con 9.9 ml de sol salina estéril 4. Transferir 1 ml de cada tubo y colocar en una caja petri vacia 5. Colocar Agar nutritivo encima de las bacterias 6. Mezclar con mov. circulares 7. Incubar (toda la noche) 8. Contar colonias y multiplicar por el factor de dilución

METODO DE ASA CALIBRADA

Procedimiento

1. Con asa calibrada se toma una muestra de la orina (0.001

ml) y se descarga en Línea recta en el centro de la placa de

medio de cultivo

2. Se estría en forma cruzada a la primera descarga.

3. EL número de colonias deberá multiplicarse por 1,000 para

conocer la cantidad de UFC que la muestra contiene por ml

- Método de Kass. Se inocula el medio depositando la cantidad de muestra tomada con el asa calibrada en el centro del agar y a partir de ahí se traza la línea recta de extremo a extremo de la caja. Con la misma asa, sin esterilizarla, se realiza una estriación en zig-zag de manera que intercepte la línea central de lado a lado.

- Técnica de cultivo de cuatro estrías. Se inocula con el asa calibrada, sin tomar más muestra cada vez y sin esterilizar entre una y otra línea.

Parámetros de interpretación. Existen diferentes normas de interpretación de cultivos de muestras de orina. El recuento bacteriano de la muestra es la parte más importante del urocultivo.

Criterios de Kass - Stanford Menos 1,000 UFC/ml o menos - se considera contaminación Menos 1,000 UFC/ml o menos - se considera contaminación

Entre 10,000 UFC/ml se considera sospecha de infección “hay que identificar con cultivos”/ Entre 10,000 UFC/ml se considera sospecha de infección “hay que identificar con cultivos”/

otra muestraotra muestra

Mayor a 100,000 UFC/ml se considera infección de vías urinarias (IVU).Mayor a 100,000 UFC/ml se considera infección de vías urinarias (IVU).

La detección de células epiteliales escamosas en la orina indica que la muestra es inadecuada para su procesamiento en el diagnóstico etiológico de una ITU.

Falsos negativos:

- Paciente bajo tratamiento antimicrobiano

- Agente etológico incapaz de crecer en medios o bajo las condiciones de incubación que se seleccionaron

- Recipiente c restos de detergente o desinfectante

- Paciente recibe liq intravenosos

- el “asa calibrada” recoge menos vol del esperado

- La muestra no se homogeneizó antes de introducir el asa

- La alicuota descargada en la superficie del medio no se distribuyó adecuadamente.

Falsos positivos:

- Paciente no efectuó la limpieza necesaria

- Siembra del especimen después de 1 h a TA

- El recipiente esta contaminado

- el “asa calibrada” recoge más vol del esperado

- La paciente suspendió la micción para recolectar la parte media

- Cateter contaminado.

METODOLOGIA 1a. SESION

ESTRIADO EN SUPERFICIE DE AGAR (ASA CALIBRADA)

HOMOGENIZAR LA ORINA AGITANDO EL FRASCO POR ROTACIÓN

CON EL ASA CALIBRADA ESTÉRIL, TOMAR UNA ASADA Y DESCARGAR EN LÍNEA RECTA EN EL CENTRO DE LA PLACA DE AGAR EMB.

ESTRIAR MASIVAMENTE EN FORMA CRUZADA A LA 1a. DESCARGA.

REPETIR EL PROCEDIMIENTO EN LA PLACA DE AGAR SANGRE.

INCUBAR LAS CAJAS A 37ºC DURANTE 24 – 72 HRS.

METODOLOGIA 2a. SESION

CONTAR EL NUMERO DE COLONIAS DESARROLLADAS EN LAS CAJAS DE CULTIVO

TOMAR EN CUENTA LOS CRITERIOS DE KASS – STANFORD

Menos 10,000 UFC/ml se considera contaminación Menos 10,000 UFC/ml se considera contaminación Entre 10,000 y 100,000 UFC/ml se considera sospecha de Entre 10,000 y 100,000 UFC/ml se considera sospecha de

infección “hay que identifiar con cultivos”infección “hay que identifiar con cultivos” Mayor a 100,000 UFC/ml se considera infección de vías urinarias Mayor a 100,000 UFC/ml se considera infección de vías urinarias

(IVU).(IVU). *UFC Unidades Formadoras de Colonias

P-8 UROCULTIVO NOV 06 M. EN C. YOLANDA GUEVARA G.

BACTERIURIA ASINTOMÁTICA:

Se define como la presencia de bacterias en orina en ausencia de síntomas. Su significado clínico se reduce a los niños con reflujo vesículouretral y a las mujeres embarazadas, en cualquier etapa de la gestación y a pacientes próximos a cirugías del tracto urinario.

CISTITIS

Es el término aplicado a la UTI confinado solamente a la vejiga. Sus síntomas comprenden disuria, aumento de frecuencia, urgencia y dolor . Esta patología es la más frecuente y la de mayor incidencia en mujeres de toda edad.

PIELONEFRITIS Y UTI FEBRIL

Son diagnósticos clínicos que comprometen infecciones más invasivas del tracto urinario.Se asume inflamación del riñón y de la pelvis renal, se acompañan de sintomatología como: dolor al costado del abdomen, respuesta inflamatoria sistémica con fiebre, malestar, cefalea, nauseas.  Pacientes con alteraciones de sus mecanismos de defensa o malformaciones del tracto urinario tienen un riesgo mayor , desarrollando serias secuelas y no responden al tratamiento.