Técnicas diagnosticas en hematología
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Técnicas diagnosticas en hematología
Pr Marc Maynadié
Desde 2000 la clasificación de las enfermedades hematológicas se hace según varios elementos :
- Tipo celular : mieloide, linfoide B, T, NK- El nivel de diferenciación- La arquitectura de la invasión : nodular o difuso- Las anomalías citogenéticas - El perfil molecular
En Hematología, el diagnostico es multifactorial
– Morfología : • citología : células• y/o histología : arquitectura
– Immunofenotypo : • Immuno histo chimica• Citometria de flujo
– Cariotipo : formula cromosómica
– Biología molecular : mutación, amplificación, deleción
– Congelación : colección de tejido maligno
Técnicas de base en Hematología:
– Citología :• Leucemia agudas• Síndromes mielodisplasicos• Síndromes mieloproliferativos• Algunas proliferaciones linfoides
– Histología : • Todas las proliferaciones linfoides en tejidos solidos• Síndromes mieloproliferativos
LCM
LLALMASangre
LLC
LAM SMD
LLA LCMMedula osea
Infiltración difusa Infiltración nodular
Immunofenotipaje
• Immuno histo chimica : anticuerpos monoclonales que se usan en laminas. La fijación se revela con una reacción enzimática
• Citometria de flujo : anticuerpos monoclonales con molécula fluorescente, se usan en células en suspensión. Cada célula analizada individualmente a gran velocidad.
Immuno Histo chimica
Citometria de flujo
Células en suspensión
10 colores
Populacion linfoide B monoclonale
Leucemia aguda
Leucemia mieloide aguda
Leucemia linfoide aguda
• Fenotipo : – mieloide, – Linfoide B, T o NK– clonalidad– Nivel de diferenciación : células inmaduras o maduras– Marcadores de pronostico : CD34, …– Minoración del numero de células malignas– Enfermedad residual
Cariotipo convencional : técnicas de bandas R o G
Formula chromosomica : 46, XX
Hibridación in situ fluorescente( FISH) : sondas especificas de unas parte de cromosomas
Multi FISH
FISH multibandas
Hybridacion genomica comparativa (CGH)
MultiFISH métaphase normaleCyanine 5 : jaune - Aqua : bleu - Cyanine 3 : violet - FITC : vert- Texas Red :
rouge -
Multifish
Chromosome 1
der1
der 19
Leucemia linfoide aguda
Principio de la CGH
Zonas amplificadas
Biología molecular
Polymerase Chain reaction : PCRdiferentes tipos : - Reverse Transcriptase
- Real Time- nested pCR…
ADN Chip o microarray
miniaturisacion de tecnicas de
hybridacion
Loci a estudiar
ADN patiente ADN normal
Trisomia en rojoMonosomia en verde
Rouge : gène surexprimé Vert : gène sous exprimé
1500 ADNc del XADNc H : verdeADNc M : rojoAmarillo : equivalente genico
ADN ChipADNc celular : rojo ADNc de referencia : verdecluster de genes con expresión génica aumentada : rojo
• Congelación de tejido maligno
– Interés mayor– Importante para el diagnostico a posteriori : colección
sanitaria– Muy importante par la búsqueda : fundamental,
clínica y epidemiológica
– Tiene que ser automática y sistemática
Gracias por su atencion