Técnicas diagnosticas en hematología

Pr Marc Maynadié

Desde 2000 la clasificación de las enfermedades hematológicas se hace según varios elementos :

- Tipo celular : mieloide, linfoide B, T, NK- El nivel de diferenciación- La arquitectura de la invasión : nodular o difuso- Las anomalías citogenéticas - El perfil molecular

En Hematología, el diagnostico es multifactorial

– Morfología : • citología : células• y/o histología : arquitectura

– Immunofenotypo : • Immuno histo chimica• Citometria de flujo

– Cariotipo : formula cromosómica

– Biología molecular : mutación, amplificación, deleción

– Congelación : colección de tejido maligno

Técnicas de base en Hematología:

– Citología :• Leucemia agudas• Síndromes mielodisplasicos• Síndromes mieloproliferativos• Algunas proliferaciones linfoides

– Histología : • Todas las proliferaciones linfoides en tejidos solidos• Síndromes mieloproliferativos

LCM

LLALMASangre

LLC

LAM SMD

LLA LCMMedula osea

Infiltración difusa Infiltración nodular

Immunofenotipaje

• Immuno histo chimica : anticuerpos monoclonales que se usan en laminas. La fijación se revela con una reacción enzimática

• Citometria de flujo : anticuerpos monoclonales con molécula fluorescente, se usan en células en suspensión. Cada célula analizada individualmente a gran velocidad.

Immuno Histo chimica

Citometria de flujo

Células en suspensión

10 colores

Populacion linfoide B monoclonale

Leucemia aguda

Leucemia mieloide aguda

Leucemia linfoide aguda

• Fenotipo : – mieloide, – Linfoide B, T o NK– clonalidad– Nivel de diferenciación : células inmaduras o maduras– Marcadores de pronostico : CD34, …– Minoración del numero de células malignas– Enfermedad residual

Cariotipo convencional : técnicas de bandas R o G

Formula chromosomica : 46, XX

Hibridación in situ fluorescente( FISH) : sondas especificas de unas parte de cromosomas

Multi FISH

FISH multibandas

Hybridacion genomica comparativa (CGH)

MultiFISH métaphase normaleCyanine 5 : jaune - Aqua : bleu - Cyanine 3 : violet - FITC : vert- Texas Red :

rouge -

Multifish

Chromosome 1

der1

der 19

Leucemia linfoide aguda

Principio de la CGH

Zonas amplificadas

Biología molecular

Polymerase Chain reaction : PCRdiferentes tipos : - Reverse Transcriptase

- Real Time- nested pCR…

ADN Chip o microarray

miniaturisacion de tecnicas de

hybridacion

Loci a estudiar

ADN patiente ADN normal

Trisomia en rojoMonosomia en verde

Rouge : gène surexprimé Vert : gène sous exprimé

1500 ADNc del XADNc H : verdeADNc M : rojoAmarillo : equivalente genico

ADN ChipADNc celular : rojo ADNc de referencia : verdecluster de genes con expresión génica aumentada : rojo

• Congelación de tejido maligno

– Interés mayor– Importante para el diagnostico a posteriori : colección

sanitaria– Muy importante par la búsqueda : fundamental,

clínica y epidemiológica

– Tiene que ser automática y sistemática

Gracias por su atencion