SALTING OUT

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    31-May-2015
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PRECIPITACIÓN EN PROTEÍNAS MEDIANTE EL MÉTODO SALTING OUT.

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  • 1. PRECIPITACIN DEPROTENASLa separacin de las protenaspresentes en sangre se consigue aladicionar ciertos electrolitos. Laprecipitacin salina SALTING OUTes un mtodo en el cual se logra laseparacin de las protenas y elplasma.Para sta precipitacin se uso elsulfato de amonio en dosconcentraciones al 0.88gr al 30% desaturacin y al 1.48 gr en unasaturacin del 70%.El procedimiento Salting Out precipitae insolubiliza las protenas, pero sinque se de lugar a la desnaturalizacinde las mismas

2. SALTING OUT EN ELLABORATORIODESARROLLO DE LA PRCTICA1. Una vez conocidas lasnormas de bioseguridady contando con personascapacitadas, se procedea la extraccin de sangrede uno de losparticipantes de laprctica utilizando elmtodo Vacutainer.2. Previamente se hadispuesto de 5 tubos deensayo de tapa colorlila; Adems 10 tubos decentrfuga y dos pipetasdesechables para usaruna en plasma y otra enhemoglobina.12 3. 3.Se centrifuganinmediatamente los 5 tubosa 2400 r.p.m.4.Luego de que se hacentrifugado se separa todoel plasma en un tubo, conuna pipeta de plstico sinmezclar el plasma con loscomponentes celulares. 4. 5.Se toma 1mL de loscomponentes celulares quehan quedado en el fondo deltubo a lo cual se adicionan 9mL de agua destilada9 mLSe observa elproceso deHemlisis 5. 6.Se toman dos tubos decentrfuga, se adiciona enuno 5mL de plasma y en elotro 5 mL de solucin dehemoglobina.Acto seguido se adicionaprogresivamente a cada unode los tubos sulfato deamonio; inicialmente 0.44 gmaproximadamente de Sulfatode amonio en concentracin30% de saturacin. Debemezclarse muy bien lasolucin de cada uno de lostubos, cuando ya se hayamezclado perfectamente lasolucin debe aadirse losotros 0.44 mg de sulfato deamonio a cada uno de lostubos, as se habrcompletado los 0.88 grrequeridos en sta practica.Una vez adicionados en sutotalidad los 0.88 mg desulfato de amonio a los dostubos se lleva a centrifugadodurante 10 minutos.plasmaSln dehemoglb.(0.44graprox(0.44graprox22 6. Del centrifugado anterior se pasa elsobrenadante a otro tubo sindescartarse el mismo.7.Al sobrenadante resultante se leaade ahora sulfato de amonio 1.48gr de igual forma dividido en su mitada cada uno de los dos tubos desolucin de hemoglobina y plasma.ste tiene una concentracin al 70%.Se centrifuga cada tubo 10 minutos,se separan los sobrenadantes y seaaden 4mL de agua destilada a cadauno. Ahora, se mezclan losprecipitados tanto de laconcentracin del 30% con laconcentracin del 70% y se observaque la hemoglobina no sedesnaturaliza, si se solubiliza dado laadicin de los electrolitosprovenientes del sulfato de amonio,pero, al final del mtodo deprecipitado Salting out se venuevamente la hemoglobina en suapariencia inicial2 En cada tubotanto en elde solucindehemoglobinacomo en elde plasma.