PRODUCCION DE ACIDO PURIVICO DURANTE LA FERMENTACION DE LA GLUCOSA POR LA LEVADURA Y SU IDENTIFICACIONCarren Ramrez Guadalupe, Chaparro Reyes Desir, Patio Mercado Fernanda, Villegas Barrn Daniel

INTRODUCCIONLa gluclisis es un conjunto de reacciones que dan como resultado un colapso del azcar y es parte del proceso de respiracin celular, que es cuando la glucosa termina transformndose en energa til para la clula. Bajo condiciones aerbicas, la mayora de las clulasemplean larespiracinaerbica para generar ATP (adenosina trifosfato). El ATP proporciona la energa necesaria para impulsar la actividad celular. De todas formas, cuando los niveles de oxgeno son insuficientes para larespiracincelular aerbica, algunasclulasemplean la fermentacin del cido lctico para producir ATP. Uno de losproductosms importantes de la gluclisis es el cido pirvico o piruvato. El cido pirvico ocido a-cetopropanoicoes un lquido incoloro, de olor fuerte y picante,resultadode la degradacin de toda clase de biomolculas, glcidos,protenasy lpidos. El cido pirvico pasa a lamitocondriaa la vez que se convierte en acetil-CoenzimaA desprendiendo CO2. . En laslevadurasse produce un proceso defermentacinen el que el cido pirvico se reduce aetanol. En el proceso de fermentacin lctica, laglucosaes degradada mediante la ruta metablica de laglucolisishasta formar elcido pirvico. El cido pirvico se hidrogena formandocido lcticoOBJETIVO GENERAL

OBJETIVOS PECULIARES.

MATERIAL1. Tubos de ensaye de 13 x 102. Tubos de centrifuga3. Tripie, rejilla, anillo, mechero.4. Bao mara.5. Pipetas de 5 ml. Graduadas6. Centrifuga.7. Vasos de precipitados de 250 y 600 ml.8. Pinzas para tubos de ensaye.9. Solucin de glucosa a diversas concentraciones 0.5, 1.0, 2.0%10. Suspensin de levadura al 5 % en Na2HPO4 y KH2PO4 (18 hrs de fermentacin antes 11. de su utilizacin).12. cido tricloroactico al 10%13. Nitroprusiato de sodio.14. 2,4 dinitrofenil-hidracina.15. Hidrxido de amonio concentrado.16. Hidrxido de sodio 0.1N17. Sulfato de amonio slido

DESARROLLO EXPERIMENTALFormacin de Piruvato:

1. Marcar dos series de tubos de 3 cada una y adicionar 3 ml. de las soluciones de Glucosa a las diferentes concentraciones 0.5, 1.0, 2.0% a ambas series.

2. A una de las series de tubos adicionarles 3 ml. de suspensin de levadura con fosfatos de sodio (0.213 g/100 ml) a la otra serie adicionarle 3 ml. de la suspensin de levadura con fosfatos de potasio (0.09 g/100 ml) 3. Colocar todos los tubos en bao mara a 37.C por 30 minutos y aadir posteriormente a cada tubo 1 ml. de TCA al 10% mezclado vigorosamente 4. Centrifugar a 2500 r.p.m. por 10 minutos.

Identificacin de Piruvato:

Reaccin con nitroprusiato de sodio5. En un tubo de ensaye colocar 1 mlvdel sobrenadante obtenido y hervirlo.6. Adicionarle 0.5 gr. de sulfato de amonio slido y agitar. 7. Agregar dos gotas de nitropriosiato de sodio y mezclar vigorosamente y dejar deslizar por lasParedes del tubo unas gotas de hidrxido de amonio concentrado, hasta la formacin de dos capas

Reaccin con 2,4 dinitrofenil-hidracina.-

8. En un tubo de ensaye colocar 1 ml. del sobrenadante obtenido y adicionar 1 ml. del Reactivo, agitar con fuerza 9. Adicionar 1 ml. de NaOH 0.1N. La aparicin de un color rojo indica prueba afirmativa.RESULTADOSLevadura+K3PO4Levadura + H2OLevadura + glucosaLevadura + Na3PO4

Parte 1 (Calentamiento de Tubos con glucosa al 1%, 2% y 3%)Parte 2 Pruebas de identificacin de produccin de piruvatoParte 1 (Calentamiento de Tubos con glucosa al 1%, 2% y 3%)Parte 2 Pruebas de identificacin de produccin de piruvato.Parte 1 (Calentamiento de Tubos con glucosa al 1%, 2% y 3%)Parte 2 Pruebas de identificacin de produccin de piruvatoParte 1 (Calentamiento de Tubos con glucosa al 1%, 2% y 3%)Parte 2 Pruebas de identificacin de produccin de piruvato

Rx. Con Nitroprusiato de sodio.

Rx. Con Nitroprusiato de sodio.(No hay ningn cambio de color) Rx. Con Nitroprusiato de sodio.

Rx. Con Nitroprusiato de sodio.No se form ningn anillo.Rx. Con 2,4 dinitrofenilhidracina.No Rx.

Rx. Con 2,4 dinitrofenilhidracina.Rx. Con 2,4 dinitrofenilhidracina.

No Rx.

Rx. Con 2,4 dinitrofenilhidracina.

Ilustracin 1Precipitacin decolor blanco al agregar TCA.

Tubos con Dinitrofenil Hidracina + NaOHLevadura+K3PO4Tubos con Dinitrofenil Hidracina + NaOHLevadura + H2OTubos con Dinitrofenil Hidracina + NaOHLevadura + glucosaTubos con Dinitrofenil Hidracina + NaOHLevadura + Na3PO4

No Hubo Rx.No hubo cambio de color.

Tubo de ensayoLevadura + Na3PO4Tiempo y temperaturaReaccin

1% de glucosa39C ----- 10:20Se noto una pequea reaccion

2% de glucosa39c----------- 10:20No tuvo una reaccin notable

5% glucosa39c--------------------10:20Fue el momento en que mas reaccin tuvo

Levadura + H2OTemperatura (C)Reaccin

1% de glucosa38No hubo ningn burbujeo. (No Rx.)

2% de glucosa38No hubo reaccin.

5% glucosa38No hubo Reaccin.

DISCUSINA diferentes tubos se colocaron las diferentes mezclas de levadura con NaSO4, KSO4, H2O y Glucosa, calentamos s 37C, debido que al calentar a esta temperatura las enzimas de la levadura iban a activarse y comenzar su funcin de la catlisis.En el caso de la levadura con NaSO4, en las tres concentraciones hubo un burbujeo, lo que indico que haba una presencia de cido pirvico.En el caso de la levadura con KSO4, se form un anillo al igual que burbujas, lo cual nos demuestra que hubo una activacin de las enzimas y por lo tanto presencia de cido pirvico; igualmente en el caso de la levadura con glucosa. Por ultimo en los tubos con agua, no sufrieron cambio alguno, aunque tambin se colocaron a bao mara a la misma temperatura.Para rectificar si lo que haba en los tubos era acido pirvico, despus de centrifugar se coloco nitropruciato de sodio, el cual es un indicador de la presencia de acido pirvico, mediante la deteccin de los grupos cetnicos.

CONCLUSINEn la primera parte del procedimiento pudimos observar que la levadura con despus de 30 minutos fue la que tuvo ms reaccin y se form un anillo, que nos indica la presencia de piruvato, mientras que la levadura con no se observ ninguna reaccin. En la segunda parte del procedimiento, despus de hervir los tubos con glucosa al 1%, 2% y 5% y agregar el sulfato de amonio con el indicador(nitroprosiato de sodio) no se observ un cambio, no hubo reaccin, podemos concluir que alguno de nuestros reactivos no estaba en las proporciones correctas.

BIBLIOGRAFA. .