Pt-001 Validacion de Tecnicas Analiticas

VALIDACION DE TECNICAS ANALITICAS

AREA DE CONTROL DE CALIDAD CODIGO: PT001-01

EFECTIVO DESDE: Página 1 de 8

1. OBJETIVO

Establecer un procedimiento para la validación de técnicas analíticas que sean desarrolladas y estandarizadas en Tesla Chemical.

2. ALCANCEEste procedimiento está dirigido a todo el personal del área técnica del laboratorio que realiza análisis físico químicos.

3. RESPONSABILIDADESEs responsabilidad del Director de laboratorio, exigir y verificar el cumplimiento del presente procedimiento.Es responsabilidad de los analistas del laboratorio ejecutar y cumplir este procedimiento.

4. DEFINICIONES

4.1. VALIDACION: Evidencia documentada que provee un alto grado de certeza de un proceso, procedimiento, método, equipo o sistema de que producirá consistentemente un producto o resultado de una calidad previamente establecida.4.2. VALIDACIÓN DE TÉCNICAS ANALÍTICAS: La validación de un método analítico es el proceso por el cual se establece, que las características de desempeño del método reúnen los requisitos para las aplicaciones analíticas requeridas. Demostración de manera experimental y documentada, de que una técnica analítica es adecuada para la aplicación que se pretende, considerando todas las variables del método, preparación de la muestra, separación cromatográfica aplicación de la técnica de análisis, detección de los Principio Activos y evaluación de los datos.4.3. TÉCNICA ANALÍTICA: Documento que describe en detalle los pasos necesarios para llevar a cabo el ensayo analítico.4.4. REVALIDACIÓN: Cuando se realizan cambios en la técnica analítica, materias primas o en el producto, la revalidación se deberá ejecutar para asegurar que la técnica analítica mantiene sus características (selectividad, especificidad, etc.) y para demostrar que la misma continua asegurando la identidad, calidad, pureza y potencia de las materias primas y del producto. El grado de revalidación dependerá de la naturaleza del cambio.4.5. PLACEBO: Mezcla homogénea de los excipientes de un producto sin el (los) principio (s) activo (s) con las mismas proporciones declaradas en la formulación del mismo.4.6. PRINCIPIO ACTIVO: Un principio activo o ingrediente activo es aquella sustancia con actividad farmacológica.4.7. PRODUCTO DE DEGRADACIÓN: Posibles compuestos que se pueden formar a partir de la molécula original del activo por reacciones químicas.




4.8. SYSTEM SUITABILITY TEST (Técnicas HPLC): Término utilizado en métodos cromatográficos. Consiste en una serie de parámetros que deben ser revisados cada vez que se aplica la metodología analítica. Con estos parámetros se verifica que el sistema permanece idóneo en el tiempo. Estos parámetros son:Tiempo de Retención (Tr): es el tiempo medido entre la inyección y la elución de la concentración máxima del soluto enésimo (máxima señal).Resolución (R): Es el parámetro que expresa el grado desaparición que se puede obtener en un sistema cromatográfico parados componentes dados. Relaciona la capacidad separadora de un sistema cromatográfico para dos componentes. Se define como: R = 2 (t2 – t1) W1 + W2Dónde: R= Factor de resoluciónt= Tiempo de retención para cada pico (t+/- 10 %) W= Ancho del pico medido en su base.Número de Platos Teóricos (N): medida de dispersión de la columna cromatográfica y de su poder separativo, Se define como: N= 16 [tn / Wtan]2Dónde:tn= Tiempo de retención del pico enésimo Wtan= Ancho, medido sobre la línea base y expresado en unidades de tiempo. Factor de Asimetría (Tailing): Mide el grado de Asimetría de un pico cromatográfico. Un valor de 1 indica un pico completamente simétrico, el valor se aleja de 1 al aumentar las colas de los picos.Conformidad: Realizar 5 inyecciones del estándar y calcular el coeficiente de varianza o la desviación estándar relativa.Cv debe ser menor o igual al 2% a menos que la monografía individual especifique lo contrario.4.9.0 SELECTIVIDAD Y/O ESPECIFICIDAD: es la capacidad de un método analítico para medir exacta y específicamente el analito, sin ninguna interferencia que pueda encontrarse en el placebo o en los productos de degradación conocidos o probables.4.9.1. PRECISIÓN: La precisión de un método analítico mide el grado de concordancia de los resultados de la prueba, cuando el procedimiento se aplica repetidamente a muestras múltiples de una muestra homogénea. La precisión de un método analítico generalmente se expresa como la desviación estándar relativa (coeficiente de variación) de una serie de medidas.La precisión puede ser medida por el grado de REPRODUCIBILIDAD o de REPETIBILIDAD del método analítico bajo condiciones operativas normales.




Reproducibilidad: Es la precisión de los resultados realizados sobre la misma muestra pero ejecutados por analistas distintos en días diferentes.

Repetibilidad: Es la precisión de una metodología cuando se realiza bajo las mismas condiciones, en la misma muestra, por el mismo analista, en el mismo laboratorio, con los mismos equipos y reactivos en un mismo día.4.9.2. PRECISIÓN INTERMEDIA: Expresa la variación dentro del mismo laboratorio, en diferentes días, con diferentes analistas o equipos diferentes.4.9.3. EXACTITUD: la proximidad que existe entre el valor hallado en el análisis y el valor verdadero. La exactitud de un método analítico se expresa como el porcentaje de recuperación luego de la adición de cantidades conocidas del Principio activo al placebo de la muestra por medio de la aplicación de la técnica analítica.4.9.4 SENSIBILIDAD: La sensibilidad de un método analítico corresponde a la mínima cantidad de principio activo que puede producir un resultado significativo. Los parámetros a definir al evaluar la sensibilidad de un método son los límites de Detección y de Cuantificación.Límite de Detección: Es la concentración más baja de Principio Activo que puede detectarse, pero no necesariamente cuantificarse, bajo las condiciones experimentales establecidas, el cálculo del límite de detección es aceptable cuando el valor de la relación señal ruido es de 3:1. Límite de Cuantificación: Es la menor concentración del Principio Activo que puede determinarse con precisión y exactitud aceptables en una muestra, bajo las condiciones experimentales establecidas, el cálculo del límite de cuantificación es aceptable cuando el valor de la relación señal ruido es de 10:1, Se define como: S/N = 2H/hDónde:H: Altura del pico. h: Ruido

4.9.5. LINEALIDAD: Capacidad de un método analítico de obtener resultados que sean directamente, proporcionales a las concentraciones de los Principios Activos en las muestras dentro de un rango determinado.Linealidad del sistema: capacidad del método analítico para obtener resultados directamente proporcionales a la concentración o cantidad del analito en un rango determinado. Prueba que se realiza con la materia prima.Linealidad del Método: capacidad del método analítico para obtener resultados directamente proporcionales a la concentración o cantidad del analito en un rango determinado. Prueba que se realiza con el placebo cargado. (Placebo + materia prima).4.9.6 RANGO O INTERVALO: Verifica que el procedimiento analítico proporciona precisión y exactitud en los extremos del intervalo de la linealidad.




4.9.7. ROBUSTEZ: Es la medida de la capacidad de la técnica para permanecer inalterada frente a pequeños pero deliberados cambios, en los parámetros de la técnica y provee un indicio de confianza de la misma durante el análisis rutinario. En HPLC las variaciones típicas son:Influencia en la variación de pH en la fase móvil.Influencia en la variación de la composición de la fase móvil Diferente columna (diferente lote o proveedor)Diferente temperatura Diferente flujo Diferente Longitud de Onda

5.0. DESARROLLOEn el siguiente procedimiento se indica el método a seguir en la validación de una técnica analítica por HPLC o por UV, la cual es efectuada Analista de estabilidades y validaciones.ASPECTOS VALIDADOS: De acuerdo a las siguientes categorías en las que se encuentre la técnica analítica a validar se realizarán los diferentes parámetros.

CATEGORÍA I: Los métodos analíticos para la cuantificación de materias primas, principios activos (incluyendo persevantes) en productos farmacéuticos terminados, se encuentran bajo la categoría I.CATEGORÍA II: Los métodos analíticos para la determinación de impurezas en las materias primas o productos de degradación en los productos farmacéuticos terminados, se encuentran bajo la categoría II.CATEGORIA III: Los métodos analíticos para la determinación de las características de desempeño, como disolución y desintegración.CATEGORIA IV: Pruebas de identificación. (Se realiza una especificidad/selectividad)

En la tabla 1 se encuentran los parámetros a validar de acuerdo a la categoría en la que se encuentra el método analítico a validar.




TABLA No. 1PARAMETROS USUALMENTE EVALUADOS EN LA VALIDACIÓN DE

TECNICAS ANALÍTICAS DE ACUERDO A LA CATEGORÍA

PARAMETRO ANALITICO

CATEGORÍA

CATEGORÍA I

CATEGORIA IICATEGORIA

IIICUANTITATIVO ENSAYO LIMITE

EXACTITUD Sí Sí * *

PRECISIÓN Sí Sí No Sí

SELECTIVIDAD Sí Sí Sí *

LIMITE DE DETECCIÓN

No No Sí *

LIMITE DE CUANTIFICACIÓN

No Sí No *

LINEALIDAD Sí Sí No *

RANGO Sí Sí * *

5.1. CONFORMIDAD DEL SISTEMAPreparar un estándar al 100% de la concentración y determinar la eficacia del sistema operativo final antes de iniciar la validación, determinarla realizando 5 inyecciones de la solución estándar.

Criterios de Aceptación

Parámetro de Conformidad Criterio de aceptación

Eficiencia de la columna (N) No menos de 1000

Factor de cola (T) Menor a 2

Desviación estándar relativa Menor al 2%

Resolución Mayor a 2




A menos que la monografía individual especifique otra cosa.5.2. ESPECIFICIDAD/SELECTIVIDADPreparar soluciones de placebo, placebo cargado y estándar al 100% de la concentración de trabajo y someterlos a los siguientes procesos de estrés para generar los compuestos potencialmente interferentes:

Termólisis: preparar las soluciones a la concentración de trabajo y someterla a una temperatura de 60ªC durante 1 hora.

Fotólisis: preparar las soluciones a la concentración de trabajo y someterla a la acción de la Luz U.V. (254 nm) durante 1 hora.

Hidrólisis Ácida: preparar las soluciones a la concentración de trabajo y someterla a la acción de Ácido Clorhídrico 3N y a una temperatura de 60ºC durante 1 hora.

Hidrólisis Básica: preparar las soluciones a la concentración de trabajo y someterla a la acción de Hidróxido de sodio 3N y a una temperatura de 60ºC durante 1 hora.

Oxidación: prepara las soluciones a la concentración de trabajo y someterlas a la acción de Peróxido de Hidrogeno al 30%.

Criterios de Aceptación Las muestras de especificidad / selectividad no deben degradarse más del

30% respecto a la muestra control. Ausencia de interferencias entre las señales cromatográficas de los solventes

utilizados en la preparación de la fase móvil y el diluente. Ausencia de interferencias entre los productos de degradación forzada y el

principio activo puro. Si se generan otras señales cromatografícas deben ser distintas a la del tiempo de retención del analito.

5.3. PRECISION DEL SISTEMAPreparar un estándar al 100% de la concentración y realizar 6 inyecciones de la solución estándar.

Criterios de AceptaciónEl coeficiente de variación debe ser igual o menor al 2%.

5.4. PRECISION DEL METODOPreparar 6 muestras independientes con placebo cargado al 100% de la concentración de trabajo y realizar inyecciones por duplicado de cada muestra.

Criterios de AceptaciónEl porcentaje obtenido debe estar entre el 98.0 y El 102% y el coeficiente de variación entre muestras debe ser igual o menor al 2%.




5.4.1 Precisión Intermedia:La precisión intermedia para el método se realizara en dos días de la siguiente manera:

Analista 1 y analista 2 día 1: preparar 3 muestras independientes con placebo cargado al 100% de la concentración de trabajo y realizar inyecciones por duplicado de cada muestra, esta acción la realizara cada analista.

Analista 1 día 2: preparar 3 muestras independientes con placebo cargado al 100% de la concentración de trabajo y realizar inyecciones por duplicado de cada muestra.

Criterios de AceptaciónEl porcentaje obtenido debe estar entre el 98.0 y El 102% y el coeficiente de variación entre muestras entre analistas y entre días debe ser igual o menor al 2%.

5.5. LINELIDAD DEL SITEMAPreparar una solución madre del estándar al 200% de la concentración de trabajo y realizar diluciones de tal manera que se obtengan concentraciones del 50, 80, 100,120 y 150% del principio activo, realizar inyecciones por triplicado de cada uno de los puntos de la linealidad.

5.6. LINEALIDAD DEL METODOPreparar una solución madre del placebo cargado al 200% de la concentración de trabajo y realizar diluciones de tal manera que se obtengan concentraciones del 50, 80, 100,120 y 150% del principio activo, realizar inyecciones por triplicado de cada uno de los puntos de la linealidad.

Criterios de Aceptación Coeficiente de correlación ( r2 ) ≥ 0,99

Pendiente distinta de cero

Intercepto cercano a cero

5.7. EXACTITUD

Preparar 3 muestras independientes con placebo cargado a concentraciones

del 50 ,100 y 150 de la concentración de trabajo y realizar inyecciones por

duplicado para cada una de las concentraciones.

Criterios de Aceptación El porcentaje de recuperación debe estar entre 98,0 – 102,0%

Obtener un t exp < t tabla para la recuperación.

r2 ≥ 0,99 para la curva de recuperación.




5.8. LIMITE DE DETECCION Y CUANTIFICACION

De la solución madre del 200% de la linealidad del sistema realizar diluciones

de tal manera que se obtengan concentraciones del 10%, 20% y 40% del

principio activo, realizar inyecciones por triplicado por cada uno de los puntos.

Criterios de Aceptación límite de detección es aceptable cuando el valor de la relación señal ruido es

de 3:1. límite de cuantificación es aceptable cuando el valor de la relación señal ruido

es de 10:1El límite de detección y cuantificación debe estar alejado y fuera de la concentración de trabajo.

5.9. ROBUSTEZSe debe especificar las variables con las cuales se probará la robustez del método analítico, Estas variables pueden ser:

Influencia en la variación de pH en la fase móvil: dependiendo de la naturaleza del analito el pH puede variar ± 0.2 unidades del valor o intervalo especificado.

Influencia en la variación de la composición de la fase móvil ± 10% del valor absoluto

Diferente columna (diferente lote o proveedor) Diferente temperatura ± 10°C Diferente flujo ± 50% Diferente Longitud de Onda ± 3nm

Para el parámetro de robustez se trabajaran 3 variables que se determinaran en el momento de la validación dependiendo del analito.

6.0 ANEXOS Anexo 1: Modelo de informe para la validación del método analítico, este puede variar dependiendo del analito y del número de analitos que se trabajen.

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Aprobado por:Cargo:Fecha:

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