PRUEBAS MICROBIOLÓGICAS

Mg. María Pareja VásquezEsp. Ricardo Benza bedoya

Son solo algunas bacterias las que están asociadas con la enfermedad periodontal.

Algunas incluso pueden vivir en la boca en estado de salud periodontal, pero cundo estas aumentan considerablemente en número, se altera el contenido de l microflora o bajan las defensas del huésped, se produce enfermedad.

Existen algunos pacientes que no responden bien al tratamiento periodontal tradicional, (RAR , Fisioterapia bucal) y que continúan perdiendo inserción clínica a pesar mantener una higiene bucal adecuada.

En estos paciente se debe seguir un protocolo de evaluación que incluye pruebas microbiologicas.

                                                                   

Enrojecimiento de las encías, sangramiento, edema (aumento de volumen), acumulación de placa y sarro.

Periodontitis severa con todos los signos Periodontitis crónica severa en un paciente varón de avanzada edad

Imágenes de periodontitis

La placa subgingival puede recogerse según dos métodos principales para su análisis:

- Recolección mediante curetas - Adsorción con puntas de papel para

endodoncia. Ambos requieren una eliminación previa de la placa supragingival en el sitio de muestreo,

Toma de muestras para cultivo y paramétodos de identificación rápida

Se pueden analizar de inmediato o Se colocan en un medio de transporte y se

envían al laboratorio para su análisis.

Los resultados del análisis pueden variar si se toman con curetas o con puntas de papel.

Estos resultados pueden no ser muy exactos si se toma muestras de un solo lugar, y con eso se pretende determinar el perfil microbiológico de un paciente;

Técnicas para analizar muestras de placa: microscopía, cultivo bacteriano,

- análisis enzimáticos, - inmunoanálisis, - sondas de ácido nucleico - análisis de reacción en cadena de la

polimerasa.

Existen pruebas están disponibles para: - Porphyromonas gingivalis, - Prevotella intermedia, - Eikenella corrodens, - A.actinomycetemcomitans, - Fusobacterium nucleatum, - Tannerella forsythensis (Bacteroides forsythus), - Parvomonas micra (Peptostreptococcus Micros), - especies de Eubacterium y varias especies de Treponema, microorganismos

entéricos y levaduras como Candida albicans.

Se han utilizado la microscopia de contraste de fase y de campo oscuro para la evaluación de muestras de placa. Con estas técnicas visuales solo se puede determinar la proporción de microorganismos de acuerdo a su forma y

movimiento: Ejm. Cocos, bacilos y espiroquetas (22, 51 la principal utilidad de la identificación microscópica es la observación de cambios en la apariencia de la flora con el tratamiento periodontal. Un tratamiento efectivo resultará en un cambio de una flora

predominantemente de bacilos y espiroquetas a una flora mas inofensiva con predominio de formas cocoides.

DESVENTAJA : No se pueden identificar las especies microbianas.

Colonias de bacterias anaeróbicas pigmentadas

Los métodos de cultivo se consideran los métodos de referencia, con los cuales se comparan los otros procedimientos de identificación microbiológica. La técnica está disponible para la identificación positiva de muchos microorganismos periodontopatógenos a través del uso de medios de cultivo selectivos y no selectivos, a veces en combinación con otros criterios bioquímicos VENTAJA: permite evaluar la sensibilidad a los antibióticos. DESVENTAJAS: No detecta bajos niveles de microorganismos, el alto coste, Los resultados no son inmediatos

Es una prueba que detecta las bacterias que poseen enzimas similares a la Tripsina. Estas bacterias son: - T. forsythensis - Treponema denticola - P. gingivalis. Cuando una muestra de placa conteniendo cualquier combinación de estas tres bacterias se pone en una tira de papel impregnada con el sustrato incoloro (BANA), N-benzoil-DL-arginina-2-naftilamida, la descomposición del sustrato de BANA produce un color negro azulado cuya intensidad es proporcional a la cantidad total de los tres organismos . DESVENTAJA: No distingue entre las proporciones relativas de las tres bacterias. No identifica otros microorganismos orales

VENTAJA: Se ha demostrado que se asocia con la profundidad de sondaje en sitios con

enfermedad periodontal (24).

El inmunoanálisis identifica a las bacterias mediante anticuerpos monoclonales o policlonales contra antígenos específicos de cada especie. Se han comercializado varios métodos de detección que emplean inmunonálisis, como: - microscopia de inmunofluorescencia, - análisis de inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA), - análisis de membrana - análisis de aglutinación en látex VENTAJAS : - tienen umbrales de detección bastante bajos - su costo es relativamente moderado - son rápidos DESVENTAJA: - No permiten evaluar la sensibilidad de los M.O. a los antibióticos

Consisten en secuencias de ácido nucleico marcadas con un indicador colorimétrico radiactivo o enzimático que se une a secuencias complementarias de ácidos nucleicos del microorganismo correspondiente.

Estas secuencias pueden ser : - Del genoma completo, - De ácidos nucleicos clonadas al azar - De oligonucleóticos sintéticos (conocidos también como

sondas de ARNr 16S

Las sondas de oligonucleótidos sintéticos son las que tienen mayor especificidad y menor reactividad cruzada porque están dirigidas a genes específicos de una especie bacteriana.

VENTAJAS - Tienen mayor sensibilidad que los métodos de cultivo. - La viabilidad de los microorganismos no imprescindible.

La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es una técnica de biología molecular para replicación de alto rendimiento del ADN.

Permite sintetizar un amplio número de copias a partir de muestras mínimas de ADN.

La técnica de PCR «en tiempo real», permite la detección de microorganismos específicos en la placa y su cuantificación.

Cuando se usan en combinación con sondas de ARNr 16S sintéticas , permiten la detección de virtualmente cualquier microorganismo en una muestra de placa

VENTAJA: Es la técnica es la más sensible de todas las expuestas.

* Es cuestionable la importancia de la detección de los microorganismos que

se encuentran en la placa en cantidades mínimas.

Cada prueba microbiológica proporciona información útil con respecto a la presencia y/o cantidad de patógenos

periodontales presentes en una muestra de placa. Como ninguna técnica por sí sola proporciona, a partir de una muestra de placa, la información necesaria para que el clínico pueda tomar decisiones terapéuticas con respecto a la necesidad de tratamiento antibiótico Complementario Se requiere una combinación de varias pruebas microbiológicas para obtener

información sobre el tipo de antibiotico que sería mas recomendable utilizar.

Los resultados no proporcionan información sobre el riesgo de progresión de la enfermedad.

Es imprescindible contar además con los datos clínicos , radiográficos y otros exámenes auxiliares complementarios para establecer el diagnostico.

Además, la información recogida, al ser tomada, de determinadas áreas puede no ser representativa del patógeno mas prevalente.

Las pruebas genéticas para PERIODONTITIS Actualmente, es posible realizar pruebas genéticas para identificar las personas que lleven mutaciones de genes responsables por varias formas de periodontitis incluyendo la deficiencia de adhesión leucocitaria (LAD) tipo 1 y 2,47 Papillon-LEF »evre síndrome, 18 Haim-Munk síndrome, 48 síndrome de Chediak-Higashi, 19 y algunos formas de Ehlers-Danlos syndrome.

Hasta la fecha, no hay ninguna prueba de que las mutaciones en los genes responsables en estas condiciones son responsables de la más formas predominantes de la periodontitis agresiva o crónica. Si bien hay informes aislados de mutaciones en pacientes con periodontitis agresiva, estos resultados no han demostrado que se puede generalizar a los pacientes con estas enfermedades.

Antecedentes / Objetivos: Los diferentes genotipos de citoquinas han sido descritas en la enfermedad periodontal. El objetivo del presente estudio fue investigar la asociación genética de los descritos anteriormente, la interleuquina 10 (IL-10) en pacientes con polimorfismos agresivo (AP) y periodontitis crónica (PC) y para investigar posibles asociaciones con las manifestaciones clínicas.

Conclusión: Se concluye que los polimorfismos no están asociados con la enfermedad periodontal