Practicas del Laboratorio

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    20-Jul-2015
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    Science

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Practica Numero 1: Preparacin de Medios de Cultivo.-Introduccin: Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que, en concentraciones adecuadas y en condiciones fsicas optimas, permiten el crecimiento de los microorganismos. Estos medios son esenciales en los Laboratorios de Microbiologa por lo que un control en su fabricacin, preparacin, conservacin y usos asegura la exactitud, confiabilidad y reproducibilidad de los resultados obtenidos.En los laboratorios de microbiologa se utilizan diferentes tipos de medios de cultivo que pueden ser preparados en forma lquida o slida. Usualmente para preparar un medio slido, se parte de un medio lquido al que se le aade un agente solidificante como el agar, la gelatina o la silicagel.Los medios de cultivo se pueden clasificar de acuerdo a la naturaleza de sus constituyentes en: MEDIOS NATURALES O COMPLEJOS: Constituidos por sustancias complejas de origen animal o vegetal, las que son usualmente complementadas por la adicin de minerales y otras sustancias. En ellos no se conocen todos los componentes, ni las cantidades exactas presentes de cada uno de ellos. MEDIOS DEFINIDOS O SINTETICOS: Son los medios que tienen una composicin qumica definida cuali y cuantitativamente. Generalmente se usan en trabajos de investigacin.

De acuerdo al uso del medio de cultivo, estos se clasifican en: MEDIOS DE ENRIQUECIMIENTO: Son medios lquidos que favorecen el crecimiento de un tipo de microorganismos en particular. Permiten aumentar el nmero de microorganismos de este tipo. Usualmente contienen una o ms sustancias inhibidores del crecimiento de los microorganismos con excepcin de los que se quieren cultivar. MEDIOS SELECTIVAS: Son parecidos a los de enriquecimiento, se diferencian por medios slidos y estn diseados para el aislamiento de microorganismos especficos. MEDIOS DIFERENCIALES: Son medios que contienen indicadores de productos derivados de la actividad microbiana de los microorganismos. No contienen ningn tipo de sustancia con actividad antimicrobiana. Permiten revelar caractersticas fisiolgicas de los microorganismos.Los medios de cultivo se pueden preparar en el laboratorio a partir de cada uno de sus constituyentes bsicos, o por simple rehidratacin de productos asequibles comercialmente (medios d cultivo deshidratado). Generalmente se prefiere el uso de los medios de cultivo deshidratados porque, adems de simplificar el trabajo, con ellos se tiene mayor probabilidad de obtener resultados reproducibles.Para su preparacin se deben tener en cuenta los siguientes aspectos: Prepararlos slo a partir de productos que provengan de fabricantes o proveedores que suministren productos de calidad. Utilizar agua destilada o desmineralizada con una calidad microbiolgica y fisicoqumica adecuada. Utilizar materiales de vidrio bien lavado y enjuagado con agua destilada o desmineralizada. Controlar el tiempo y la temperatura recomendada durante su esterilizacin. Nunca se deben exceder las condiciones sealadas por el fabricante.ALMACENAMIENTO DE LOS MEDIO DE CULTIVO.Los medios de cultivo deshidratados se deben almacenar en envases sellados bajo las condiciones que seale el fabricante. Generalmente se almacenan en un lugar fresco (entre 15 y 25), con poca humedad y protegidos de la luz solar directa. Nunca se deben almacenar cerca de autoclaves, hornos, ni otras fuentes de calor o vapor.Los medios de cultivo deshidratados son higroscpicos. Cuando los envases de estos medios de cultivo deshidratados son abiertos para su uso inicial, se debe tener la precaucin de cerrarlos tan pronto como sea posible y mantenerlos bien cerrados para prevenir la entrada de humedad. La absorcin de agua produce cambios de pH, formacin de grumos, decoloraciones del polvo, etc., lo cual indica que deben ser descartados porque pueden haber sufrido cambios qumicos o estar contaminados.Una vez que el medio de cultivo ha sido preparado y esterilizado, puede almacenarse a temperatura ambiente por un periodo mximo de 2 semanas protegido de la luz, o por periodos mayores a 12-15C. Sin embargo, almacenados bajo refrigeracin entre 2 y 8C se prolonga la vida til de los mismos, (nunca por debajo de 0C porque se destruye la estructura del gel). Los medios de cultivo se deben mantener en recipientes bien cerrados para evitar su deshidratacin y cuando se usa tapn de algodn, se debe colocar por encima una envoltura de papel (Craft).Otro punto importante a tomar en cuenta, es que cada lote de medio de cultivo preparado debe pasar por un riguroso proceso de control de calidad, en donde se determinan sus propiedades fisicoqumicas (apariencia, pH, etc.) y microbiolgicas (esterilidad y promocin de crecimiento) verificando que cumplan con los requisitos de calidad establecidos y por ende demostrar que son aptos para su uso.-Objetivo: Al finalizar el trabajo prctico nosotros como estudiantes estaremos en capacidad de: Preparar medios de cultivo a partir de sus ingredientes y a partir de medios de cultivo deshidratados. Indicando el mtodo de esterilizacin apropiado.-Fundamento: La preparacin adecuada de un medio de cultivo nos permite disponer de los nutrientes y condiciones necesarias para favorecer el crecimiento de los microorganismos en el laboratorio.-Materiales: Cajas de Petri (5).Abatelenguas (1).Mechero (1).Jeringa (1).

Medio de Cultivo Agar Sangre (1).Agua Destilada (1).Tapn (1).Campana Extractora (1).

Balanza Granataria (1).Matraz (1).Autoclave (1).Sangre (5 mililitros).

Pedazo de Papel Aluminio (1).Agitador (1).Cinta Mstil (1).Guantes (2).

-Procedimiento: En el siguiente procedimiento relataremos el medio de cultivo que nos asign la doctora para realizarlo, el cual fue AGAR SANGRE, aunque tambin se realizaron otros medios como Agar Macconkey, Agar Nutritivo, Eosina y Azul de Metileno (EMB), Salmonella Shigella, Agar Sal y Manitol y de todos estos solo mencionares como son, cules son sus ingredientes y para que nos sirve. AGAR SANGRE: El agar sangre es una combinacin de un agar base (agar nutritivo) con el agregado de 5% de sangre humano en nuestro caso de esta prctica ya que tambin se utiliza sangre ovina. Aporta muchos factores de enriquecimiento. Se usa tambin para ver la capacidad hemoltica de los microorganismos patgenos (que es un factor de virulencia). Observando los halos hemolticos alrededor de las colonias se determina el tipo de hemolisis que posee:-Alfa: Halos verdosos (reduccin de la hemoglobina de los glbulos rojos a metahemoglobina en el medio). -Bata: Halos incoloros (hemolisis total).-Gamma: Inexistencia de halos (sin hemolisis).No permite el crecimiento de Neisseria y Haemophilus.

Hemolisis de Streptococcus: Izquierda: alfa hemolisis (hemolisis parcial) por S. mitis. Centro: beta hemolisis (hemolisis total) por S. pyogenes. Derecha gamma hemolisis (sin hemolisis) por S. salivarius.Agar sangre para el diagnstico de infecciones. Ala Izquierda positivo para infeccin por Staphylococcus, ala Derecha positivo para un cultivo de Streptococcus.Beta hemolisis en agar sangre, se observan tres colonias centrales y sus halos de hemolisis.

AGAR MACCONKEY: Es un medio de cultivo especfico para bacterias Gram negativas y cepas que fermentan la lactosa. Los ingredientes necesarios para este medio son los siguientes: Sales Biliares (medio inhspito para el crecimiento de bacterias Gram positivos, excepto Enterococcus y algunas especies de Staphylococcus), Colorante Crista Violeta (inhspito para cierto tipo de bacterias Gram-Positivo), Colorante Rojo Neutro (el cual marca microorganismos que fermentan lactosa). Lactosa, Peptona y Cloruro Sdico.Sirve como indicador visual de pH, distinguiendo as las bacterias Gram negativas que pueden fermentar Lactosa (Lac+) y las que no pueden (Lac-).-LAC+: Al utilizar la lactosa en el medio, bacterias Lac+ como Escherichia Coli, Enterobacter y Klebsiella producen acidez, lo cual baja el pH bajo 6,8 lo que tiene como consecuencia la aparicin de colonias de color rosadas o rojas.-LAC-: Bacterias que no fermenten la lactosa como Salmonella, Proteus y Shigella utilizaran peptona en su lugar, formando amoniaco, lo cual incrementa el pH del agar, formando colonias blancas o incoloras.-SLOW: Algunas bacterias en cambio fermentan la lactosa de manera lenta, y con consideraciones en una categora distinta, por ejemplo: Serratia y Citrobacter.Agar Macconkey con Bacterias Lac+ (izquierda), Lac- (derecha).

AGAR NUTRITIVO: El agar nutritivo es un medio de cultivo usado normalmente como rutina para todo tipo de rutina para todo tipo de rutina. Es muy til porque permanece slido incluso a relativas altas temperaturas. Adems, el crecimiento bacteriano en este agar lo hace en la superficie, por lo que se distinguen mejor las colonias pequeas.El agar nutritivo contiene normalmente lo siguiente: 0,5% de Peptona. 0,3% de Extracto de carne/extracto de levadura. 1,5% de Agar. 0.5% de Cloruro de Sodio. Agua Destilada. pH casi neutro (6,8) a 25C.

En esta caja de Petri con Agar Nutritivo se inocularon los micro-organismos y ac se puede evidenciar el crecimiento de colonias de los mismos. Posteriormente se elabor una placa con el contenido de esta caja y se puede evidenciar la presencia de Bacillus Esporulados.

EOSINA AZUL DE METILENO (EMB): Es un medio de cultivo selectivo y diferencial: Inhibe el crecimiento de bacterias Gram positivas y algunas Gram negativas y muestra si las Gram Negativas que crecen son o no fermentadores de lactosa. Esto lo realiza gracia ala eosina y el azul de metileno:-La Eosina es un indicador de pH y, por tanto, de la presencia de fermentacin.-El Azul de Metileno es un compuesto que inhibe el crecimiento de bacterias Gram Positivas y ciertos grupos de Gram Negativas.

Cultivo de Escherichia Coli en medio de EMB. Es un medio selectivo y diferencial.Esta especialmente diseado para diferenciar entre E. Coli (colonias metlicas) de Enterobacter (sin este color).

AGAR SALMONELLA SHIGELLA: Es una modificacin del Agar Citrato Desoxicolato. Se le considera un medio moderadamente selectivo segn el nivel de inhibicin de los microorganismos Gram positivos y Enterobacteriaceae diferentes de Salmonella Shigella, que inhibe por contenido de Sales Biliares, Verde Brillante y Citratos.En BD Salmonella Shigella, la diferenciacin de los organismos entricos se logra mediante la incorporacin de lactosa en el medio. Los organismos que fermentan lactosa produce acido que, en presencia del indicador rojo neutro, propicia la formacin de colonias de color rojo. Los organismos no fermentadores de lactosa forman colonias incoloras. Este ltimo grupo incluye la mayora de los patgenos intestinales, incluidos Salmonella y Shigella.Agar Salmonella Shigella contiene lo siguiente: Extracto de Carne Bovina 5,0g. Digerido Pancretico de Casena 2,5. Digerido Pptido de Tejido Animal 2,5. Lactosa 10,0. Sales Biliares 8,5. Citrato Sdico 8,5. Tiosulfato Sdico 8,5. Citrato Frrico 1.0. Rojo Neutro 0,025. Agar 13,5. Verde Brillante 0,330mg.

AGAR SAL Y MANITOL: Es un medio de cultivo que se utiliza normalmente en el laboratorio de microbiologa. Permite el crecimiento de un determinado grupo de bacterias mientras que inhibe el crecimiento de otras. Este medio es importante debido que es capaz de distinguir microorganismos patgenos en corto periodo de tiempo. Contiene una alta concentracin de sal, asiendo selectivo para Staphylococci.Es coagulasa positivo Staphylococci produce colonias amarillas con zonas amarillas, mientras que coagulasa negativa Staphylococci producen colonias rojas o ligeramente rosadas sin cambio alguno del medio.Su composicin es la siguiente:-5,0 g/L enzima digestiva de cafena.-5,0 g/L enzima digestiva de tejido animal.-1.0 g/L extracto de carne de vaca.-10,0 g/L D-manitol.-75,0 g/L NaCI.-0,025 g/L rojo de fenol.-15,0 g/L agar.En este medio se logra apreciar lo siguiente: 1. Su color es rosado eso refiere ser coagulasa negativo.2. Su color es amarillo refiere ser coagulasa positivo.

Seguidamente de esta explicacin detallada de cada medio ahora si indicaremos cual fue el procedimiento que utilizamos para hacer el medio de AGAR SANGRE.1. Como todo medio para hacer las medidas exactas pesamos en una Balanza Granataria el peso especfico del papel aluminio para poder pesar correctamente el medio, el peso total del medio fue de 5,00 gramos menos el peso especfico del papel aluminio que fue de 1,00 gramo y 4,00 gramos de medio.2. Este paso solo fue disolver el medio en un matraz, con una solucin salina, lo mezclamos bien.3. Cuando lo estbamos mezclando, lo acercamos al mechero para que hirviera y a si se tornara lquido.4. Lo tapamos con un tapn hecho de algodn y gasas por la tcnica ya conocida.5. Posteriormente lo llevamos a la autoclave con una temperatura de 100 C durante una hora.6. Cuando se complet la hora sacamos los medios de la autoclave y pues obvias razones estaba caliente, lo dejamos enfriar para tener un mejor manejo.7. Cuando ya estaba listo para su manejo, como el medio que nos toco fue AGAR SANGRE y como sabemos este medio necesita un porcentaje de sangre humana. Como paso principal fue extraer 5 mililitros de sangre a uno de mis compaeros e inmediatamente con la jeringa sin aguja, disolvimos la sangre por las paredes del matraz y a si mezclarlo hasta que est bien mezclado.8. Ya que se mezcl bien, proseguimos a disolver el medio en las cajas de Petri en la Campana de Extraccin, a si preparamos 5 cajas de este medio.9. Y como ltimo paso las dejamos guardadas, selladas y rotuladas las cajas de Petri con dicho medio. -Resultado: Como cada equipo hiso un medio especifico los cuales fueron AGAR SANGRE, AGAR NUTRITIVO, AGAR MACCONKEY, SAL Y MANITOL Y AGAR SALMONELLA SHIGELLA; se reparti una caja de medio a cada equipo para proseguir con la siguiente practica de Sembrado.AGAR SANGREAGAR NUTRITIVOAGAR MACCONKEYAGAR SAL Y MANITOL AGAR SALMONELLA SHIGELLAAGAR AZUL DE METILENO (EMB)

-Conclusin: Por medio de esta prctica se logr aprender, que tcnicas se utilizan para poder hacer un medio de cultivo, sea cual sea el que se utilice.

Practica Numero 2: Exudado Farngeo.-Introduccin: Los cultivos de exudado farngeo son importantes para determinar el diagnostico el diagnostico de infecciones como: amigdalitis y faringitis producidas por estafilococos y estreptococos, para establecer el foco infeccioso de enfermedades como fiebre reumtica, glomerulonefritis as como para determinar el estado de portador de microorganismos como Staphylococcus Aureus, Streptococcus Beta Hemolticos, etc.La obtencin de resultados confiables depende en gran parte de una buena toma de muestra que se le haga al paciente, a quien se le deben dar las instrucciones correspondientes para que se presente a la toma de muestra.Algunos de las Morfologas Bacterianas caractersticos del tracto respiratorio son los siguientes:Klebsiella Pneumoniae (AGAR MACCONKEY)Staphylococcus Aureus (AGAR SANGRE)

Colonias grandes planoconvexa, mucoides, brillantes, forma irregular, tambin se observan redondas, bordes ondulados, lactosa positivo (consume el carbohidrato lo cual acidifica el medio y el indicador rojo de fenol cambia rojo-rosado, por ello las colonias se ven de este color). Colonias medianas, convexas, de color blanco, forma circular, bordes redondos.

-Objetivo: Identificar los microorganismos presentes en la muestra problema (exudado farngeo).-Fundamento: El sistema respiratorio se divide en vas altas o superiores, que comprenden las reas anteriores a la laringe, incluyendo la nasofaringe, orofarngea, laringe, epiglotis, odo externo y medio, y los senos paranasales, y vas bajas o inferiores que incluyen todas las estructuras posteriores a la laringe.

El tracto respiratorio habitual (la faringe) est formado por distintos microorganismos entre los que destacan los siguientes grupos y especies:estreptococos, estafilococos, micrococos,neisserias, Moraxella catarrhalis, corinebacterias,Haemophilusspp, Porphyromonas, Prevotella, Fusobacterium, Veillonela, Peptostreptococcus, Actinomyces, etc. Sin embargo, cuando encontramos una patologa en la faringe, el agente etiolgico ms frecuentemente aislado es elStreptococcus pyogenes, pero tambin, otros microorganismos patgenos que podemos hallar son:Streptococcus pneumoniae. Para poder identificar el agente microbiano de la muestra problema, se proceder a la siembra del mismo en el medio de cultivo.-Material: Hisopos Estriles (1).Abatelenguas (1).Guantes (2).Placas de Agar Sal y Manitol (1).

Asas Bacteriolgicas (1).Mechero (1).Cinta Mstil (1). Plumn Permanente (1).

-Procedimiento:1. Para la toma de la muestra: Se tom un hisopo estril, se froto y raspo suavemente en la parte posterior de la garganta, tomando la muestra de las amgdalas.2. Descargamos el hisopo en la caja de Petri de Sal y Manitol, siempre cerca del mechero, como medida de precaucin.3. Se descarg el hisopo en una parte de la caja de Petri y as se fue girando a 90 grados la caja de Petri y con ayuda del aza bacteriolgico se fue arrastrando la descarga en forma de zigzag.4. Posteriormente serramos la caja de Petri y la rotulamos, para as guardarla y esperar si creci o no la bacteria.-Resultado: Como resultado final, despus de dejar crecer la bacteria nos percatamos que creci Staphylococcus ureos, donde sus colonias presentaron un color amarillo que esto nos dice que es coagulasa positivo. Tambin querindose mostrar un color rosado identificado como coagulasa negativo, pero no se extendi como debera de ser, as que nos quedamos con el amarillo.

-Conclusin: En esta prctica que podra decirse sencilla pero muy importante pudimos observar como se muestra una colonia, su forma color de Staphylococcus. Practica Numero 3: Siembra en Medios de Cultivo.-Introduccin: Un cultivo es un mtodo para la multiplicacin de microorganismos, tales como hongos, bacterias y parsitos, en el que se prepara un medio ptimo para favorecer el proceso deseado. Un cultivo es deseado como un mtodo fundamental para el estudio de las bacterias y otros microorganismos que causan enfermedades en medicina humana.Un microorganismo se puede sembrar en un medio lquido o solido de agar. Los medios de cultivo contiene distintos nutrientes que van, desde azcares simples asta sustancias complejas como la sangre o el extracto de caldo de carne. Para aislar o purificar una especie bacteriana a partir de una muestra de forma por muchos tipos de bacterias, se siembra en un medio de cultivo solido donde las clulas que se multiplican no cambian de localizacin; tras muchos ciclos reproductivos, cada bacteria individual genera por escisin binaria una colonia macroscpica compuesta por decenas de millones de clulas similares a la original. Si esta colonia individual se siembra a su vez en un nuevo medio crecer como cultivo puro de un solo tipo de bacteria.La principal diferencia entre en un medio de cultivo slido y uno liquido es que el medio de cultivo contiene 1,5-2% de agar-agar, mientras que el lquido no contiene agar-agar. Muchas especies bacterianas son tan parecidas morfolgicamente que es imposible diferenciarlas solo con el uso del microscopio. En este caso, para identificar cada tipo de bacteria, se estudian sus caractersticas bioqumicas sembrndolas en medios de cultivo especiales. As, algunos medios contienen un producto que inhibe el crecimiento de la mayora de las especies bacterianas, pero no la del tipo que se desea averiguar si est presente. Otra veces, el medio de cultivo contiene determinados azucares especiales que solo pueden utilizar algunas bacterias. En algunos medios se aaden indicadores de pH que cambian de color cuando uno de los nutrientes del medio es fermentado y se generan catabolismos cidos. Si las bacterias son capaces de producir fermentacin, generan gases que pueden ser detectados cuando el cultivo se realiza en un tubo cerrado.Con otros cultivos se puede identificar si las bacterias producen determinacin de enzimas que digieren los nutrientes. As, algunas bacterias con enzimas hemolticas (capaces de romper glbulos rojos) producen hidrolisis y cambios apreciables prosaicamente en las placas de agar-sangre.Los diferentes medios y tcnicas de cultivo son esenciales en un laboratorio de microbiologa de un hospital, pues sirven para identificar las bacterias causadas de las enfermedades infecciosas y los antibiticos a los que son sensibles esas bacterias. Los cultivos suelen usarse en medicina para determinar agentes patgenos en fluidos corporales (como por ejemplo la sangre y orina).Los medios de cultivo, para poder ser utilizados y garantizar que los resultados obtenidos a partir de ellos sean confiables, deben cumplir con los siguientes requisitos: -Disponibilidad de nutrientes.-Consistencia adecuada del medio.-Presencia o ausencia de oxgeno y otros gases.-Condiciones adecuadas de humedad (mantener en frigorfico).-Luz ambiental.-pH adecuado.-Temperatura.-Esterilidad.En la siembra en medios de cultivo estos son algunos ejemplos de lo que se puede observar en cada uno de ellos:AGAR SANGRE: Enterococcus cultivo en agar sangre donde creci a las 24 horas colonias de Enterococcus faecalis. Tienen un tamao entre 0.5 y 1 mm, a menudos opacos y blancos, que suelen ser hemolticos o no hemolticas, aunque algunos casos aparecen hemolticas.

AGAR MACCONKEY: Es un medio diferencial porque contiene lactosa y un indicador de pH (rojo neutro).Las bacterias capaces de fermentar lactosa producirn un cambio en el pH del medio por liberacin de productos cidos. Como consecuencia sus colonias aparecern de color fucsia/violeta, contrastando con la coloracin amarillenta de las colonias incapaces de fermentar la lactosa.

AGAR AZUL DE METILENO (EMB): Las colonias fermentadoras son de color rosado. Escherichia Coli fermenta los azucares y forma colonias verdes con brillo metlico. Las colonias no fermentadoras son incoloras

AGAR SALMONELLA SHIGELLA: Las cepas de Shigella y la mayora de Salmonella presentan colonias incoloras. Colonias trasparentes con centro negro: Proteus y algunas Salmonellas. Las bacterias fermentadoras de Lactosa presentan colonias rojas a rosadas.

-Objetivo: Practicar el aislamiento de bacterias en el Laboratorio utilizando la tcnica de siembra en cajas de Petri.-Fundamento: En el manejo de muestras contaminadas o cultivos mixtos en los que se encuentran diversos microorganismos, el primer paso para proceder a su estudio es el aislamiento, es decir la separacin de cada uno de los posibles integrantes microbianos de la muestra.Existen diversos mtodos para conseguir esta separacin, la mayora de ellos basados enla inmovilizacin de las clulas microbianas en la superficie de los medios de cultivo slidos. Al depositar una clula bacteriana o una levadura en un punto del medio de cultivo, sta quedar inmovilizada en ese punto y en l se reproducir por absorcin de los nutrientes del medio. Las nuevas clulas generadas permanecern igualmente inmviles y tras sucesivas generaciones conformarn lo que denominamos una "colonia" que no es ms que un montn de clulas derivadas de una sola clula madre inicial, es decir, un clon de la bacteria o levadura depositada al sembrar. Esta colonia es visible al ojo humano y presenta diferentes caractersticas segn el microorganismo que la genera. Esto nos permite distinguir las diferentes poblaciones microbianas que se encuentran en la muestra sembrada y separarlas transfiriendo una colonia de cada tipo a un nuevo medio de cultivo estril, a estos cultivos los consideraremos "puros" por poseer un slo tipo de microorganismo. (El fundamento es vlido teniendo en cuenta slo microorganismos cultivables)-Material: Cajas de Petri con Agar Sangre (2).Caja de Petri con Agar Macconkey (1).Cepas de Streptococcus.Cepas de Staphylococcus ureos.

Mechero (1).Asa Bacteriolgica (1).Cinta Mstil (1).Marcador (1).

-Procedimiento: 1. Esterilizamos el asa bacteriolgica, enfriamos en el medio en un lado del cultivo, con el asa levantar la bacteria, para llevarla al nuevo cultivo, pero nunca separar el asa del mechero para un mejor funcionamiento. 2. Levantamos la tapa de la placa donde se va a sembrar, depositamos el inoculo en el primer sector (descarga) hacer un zigzag, pero solo tocando 2 o 3 veces la descarga.3. Y a si nuevamente esterilizamos el asa la dejamos enfriar en una parte de la placa sin tocar el inocuo, giramos e 90 grados e hicimos estras en zigzag y as lo repetimos dos veces ms, cerramos la placa.4. Las rotulamos y las dejamos incubar durante 24 horas, para as ver si creci alguna bacteria.-Resultados: En esta tabla se muestra que nos creci en los medios que nos toc:AGAR MACCONKEY: En esta podemos observar que torno un color rosado esto quiere decir que es fermentadora de lactosa y esto tambin hace que su pH baje a menos de 6,8 y ase este color caracterstico.

AGAR SANGRE: En este medio podemos observar un color blanquecino caracterstico de Staphylococcus ureos y son hemolticas, tambin podemos observar que sus colonias son redondas unas separadas y otras juntas.

AGAR SANGRE: En este medio podemos observar que es un Streptococcus hemolticos con un color como amarillento y en colonias redondas separadas y juntas.

-Conclusin: En esta prctica podemos observar cmo se manifiestan las bacterias en los diferentes cultivos bacteriolgicos.

Practica Numero 4: Antibiograma.-Introduccin: Es la prueba microbiolgica que se realiza para determinar la susceptibilidad (sensibilidad o resistencia) de unabacteriaa un grupo de antibiticos. Las tcnicas de antibiograma son las utilizadas en el laboratorio de microbiologa para estudiar la actividad de los antimicrobianos frente a los microorganismos responsables de las infecciones.Se considera como antimicrobiano cualquier sustancia con capacidad de matar o al menos de inhibir el crecimiento de los microorganismos y que sea susceptible de utilizacin como tratamiento en los pacientes. Pueden ser naturales, sintticos o semisintticos (modificacin qumica de un compuesto natural). La historia moderna de los antibiticos comienza con el descubrimiento de sustancias presentes en unos microorganismos capaces de matar a otros microorganismos. La utilizacin de antibiticos supuso un avance enorme en la esperanza de vida de las personas que padecan procesos infecciosos, aunque tambin supuso un aumento en los niveles de resistencia antibitica.El antibiograma tiene cuatro utilidades principales:La utilidad bsica del antibiograma es la instauracin de un tratamiento antibitico correcto al paciente. Es necesario conocer si el microorganismo responsable de la infeccin posee mecanismos que le confieran inmunidad frente a algn antibitico para no incluirlo como terapia.En cuanto al tratamiento el antibiograma no slo es necesario en la instauracin, tambin resulta til en el seguimiento e incluso en la confirmacin de tratamientos empricos. En ocasiones la enfermedad infecciosa resulta grave y se comienza el tratamiento antes de conocer los datos de sensibilidad de la cepa. El antibiograma tiene que confirmar, o en su caso corregir el tratamiento.Otra aplicacin de las tcnicas de estudio de resistencia es la epidemiologa. Es necesario detectar el aumento de los niveles de resistencia en los aislamientos clnicos para tomar medidas correctoras.Por otro lado tambin puede tener utilidad diagnstica porque el perfil de resistencia puede en algn caso orientar en la identificacin bacteriana.Existen multitud de antimicrobianos en el mercado y el nmero sigue creciendo porque el desarrollo de ms mecanismos de resistencia por parte de los microorganismos se traduce en un esfuerzo mayor por fabricar ms y mejores antibiticos. No es necesario contrastar la eficacia de todos los antibiticos para cada aislamiento bacteriano. Los criterios que se siguen para seleccionar que antimicrobianos se ensayan respondes a factores de diversa ndole:Factores microbiolgicos: Tipo de agente infeccioso y mecanismos de resistencia descritos previamente en su especie.Factores farmacolgicos: Tipo de antimicrobiano y parmetros de absorcin, distribucin y eliminacin.Factores del paciente: Tipo de infeccin. Factores de riesgo y estado general de salud. Situacin inmunolgica e hipersensibilidad.Experiencia anterior referente a los patrones de resistencia antibitica ms habituales para cada especie.Estos son los resultados que deberan de aparecer en un antibiograma:

Resultado del Disco anterior:PLANTAS DE ESTUDIORESISTENCIASUSCEPTIBLE

CUACHALALATEXSe observan cambios de coloracin.

ESTAFIATEX

EUCALIPTOXSe observan cambios de coloracin.

QUINA AMARILLAXSe observan cambios de coloracin.

TOMILLOX

ANTIBITICOSRESISTENCIASUSCEPTIBLE

AMIKACINAXXX

AMPICILINAXXX

CARBENICILINAXXX

CEFOTAXIMAXXX

CEFTRIAXONAXXX

CLORANFENICOLXXX

GENTAMICINAXXX

NETILMICINAXXX

NITROFURANTOINAXXX

TRIMETROPIM SULFAMEROXAZOLXXX

-Objetivo: Observar la sensibilidad de bacterias a la accin de diversos antibiticos.-Fundamento: El antibiograma lo que hace es evaluar la sensibilidad de un microorganismo a ciertos medicamentos.Los parmetros para elegir los antibiticos a probar son los siguientes:Factores microbiolgicos: Tipo de agente infeccioso y mecanismos de resistencia descritos previamente en su especie.Factores farmacolgicos: Tipo de antimicrobiano y parmetros de absorcin, distribucin y eliminacin.Factores del paciente: Tipo de infeccin. Factores de riesgo y estado general de salud. Situacin inmunolgica e hipersensibilidad.Experiencia anterior referente a los patrones de resistencia antibitica ms habituales para cada especie.-Material: Cepas de Streptococcus y Staphylococcus en placa de agar nutritivo.Caja de Petri con agar Mueller-Hinton en placa de agar nutritivo.Discos de antibiticos para gran positivos.Discos de antibiticos para gran negativos.

Pinzas metlicas.Tubos con solucin salina estril.Hisopos estriles.Mecheros.

Asas BacteriolgicasTuvo 0.5 del Nefelmetro de McFarland.Cinta Mstil.Plumn permanente.

-Procedimiento: 1. Con el asa bacteriolgica previamente esterilizada y enfriada, se tom una pequea porcin de la colonia bacteriana a estudiar.2. En un tubo conteniendo solucin salina estril, hicimos una suspensin al tubo 0.5 del Nefelmetro3. Con un hisopo estril tomamos bacterias de la suspensin, mojando y presionando el hisopo sobre las paredes del tubo de ensaye para evitar el exceso de suspensin.4. Se tom la placa de Mueller-Hinton, se sostuvo con la mano izquierda, se levant la tapa ligeramente y se procedi a realizar el extendido de la suspensin bacteriana rotando el hisopo uniformemente por toda la superficie de la placa, girando la placa varias veces.5. Se desech el hisopo en un recipiente ya flameado en el mechero.6. Con ayuda de la pinza, se coloc los discos individuales, sobre la superficie de la placa de cultivo de Mueller-Hinton, este procedimiento se hiso teniendo encendido un mechero para poder evitar cualquier tipo de contaminacin. 7. Incubamos las placas en un promedio de 24 horas, para as poder observar las reacciones.-Resultado: En este apartado tuvimos la mala suerte de no poder observar las reacciones correspondientes, esto fue por un mal manejo y un mal extendimiento de la suspensin.-Conclusin: En esta prctica debamos de haber observado un gran funcionamiento de lo que son las reacciones antibiticas, pero por un mal funcionamiento, no logramos hacerlo, pero esto nos llev a pensar que si llega a haber otra prctica de este tipo ahora si hacerlo bien.