LECTURA DE

PRUEBAS

BIOQUIM

ICAS

CITRATO DE SIMMONS El Agar Citrato de Simmons es un medio

utilizado para la diferenciación de enterobacterias en base a su capacidad de utilizar el citrato.

Este medio es recomendado para el estudio de enterobacterias a partir de muestras clínicas, de agua y alimentos.

En base a la capacidad de usar citrato como única fuente de carbono y energía

Resultados  

-Positivo: crecimiento y color azul en el pico, alcalinidad.-Negativo: el medio permanece de color verde debido a que no hay desarrollo bacteriano y no hay cambio de color.MICROORGANISMO

CITRATO PERMEASA

COLOR DEL MEDIO

Klebsiella pneumoniae

POSITIVO AZUL

S. typhimurium

POSITIVO AZUL

E. coli NEGATIVO VERDE

S. flexneri NEGATIVO VERDE

AGAR HIERRO DE KLIGER (KIA) El agar Hierro de Kliger (KIA), es

un medio sólido y diferencial. El fundamento se basa en la

capacidad de fermentación de dos azucares (glucosa y lactosa), en la producción de ácido sulfhídrico y en la producción de gas.

Resultados

Pico alcalino/fondo ácido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente fermenta la glucosa.

Pico ácido/fondo ácido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta glucosa, y lactosa.

Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no fermentador de azúcares.

La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el microorganismo produce gas.

El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce ácido sulfhídrico.

AGAR DE HIERRO LISINA El Agar de Hierro y Lisina es un medio

utilizado para la diferenciación de microorganismos entéricos.

Basandose en su capacidad para desaminar o descarboxilar la lisina y de producir sulfuro de hidrógeno.

Este medio también es conocido como LIA

RESULTADOS 1- Decarboxilación de la lisina:

-Prueba Positiva: Pico violeta/fondo violeta.-Prueba Negativa: Pico violeta/fondo amarillo.

2-Desaminación de la lisina:

Pico rojizo/fondo amarillo. Esto sucede con cepas del género Proteus, Providencia y alguna cepas de Morganella spp.

3-Producción de ácido sulfhídrico:

-Prueba positiva: Ennegrecimiento del medio (especialmente en el límite del pico y fondo)

1 DESCARBOXILAXION DE LISINA (+) (VI+AM= -)3 DESAMINACION DE LISINA2 PRODUCCION DE ACIDO SULFHIDRICO

MIO El Medio MIO es utilizado para la

diferenciación de enterobacterias en base a su movilidad, capacidad para descarboxilar la lisina y la producción de indol.

Este medio también es conocido como Medio para Movilidad Indol y Ornitina.

RESULTADOS 1-Movilidad:

-Resultado positivo: presencia de turbidez o crecimiento mas allá de la línea de siembra.-Resultado negativo: crecimiento solamente en la línea de siembra.

2-Ornitina decarboxilasa:

-Resultado positivo: color púrpura.-Resultado negativo: color amarillo. A veces se puede desarrollar un color violáceo en la superficie del medio.

3-Prueba del indol:

La prueba de indol se realiza una vez que se ha determinado la movilidad y la prueba de ornitina. -Resultado positivo: color rojo al agregar el reactivo revelador.-Resultado negativo: el color del reactivo revelador permanece incoloro-amarillento.

ORNITINA:(+) PURPURA (-) AMARILLO

ROJO DE FENOL Y MANITOL , ROJO DE FENOL Y SACAROSA Determinar si la bacteria puede utilizar,

ese carbohidrato. El Caldo Rojo de Fenol y Sacarosa es

utilizado para la diferenciación de cultivos puros, en base

a su capacidad para fermentar la sacarosa.

Sirve para detectar si los gérmenes son capaces de fermentar el manitol liberando productos ácidos que serán detectados gracias al indicador rojo de fenol que cambiará a color amarillo.

RESULTADOS Sacarosa para la identificacion de

enterobacterias. Bacterias manitol (-) son, dentro de las

enterobacterias, Proteus mirabilis, Proteus vulgaris y Shigella dysenteriae.

Entre las bacterias de importancia clínica, la prueba del manitol sirve para diferenciar Staphylococcus aureus (+) de Staphylococcus epidermidis (-).

POSITIVO: Amarillo (producción de ácidos, fermentación del carbohidrato). Puede haber producción de gas

NEGATIVO: Rojo,  aumento o quedo igual del pH (producción de sustancias alcalinas por utilización de peptonas)

UREASA (CALDO DE UREA)

Medio utilizado para la identificación de microorganismos, en base a la actividad ureásica.

Es particularmente útil para diferenciar Proteus spp. de otros miembros de la familia Enterobacteriaceae.

RESULTADOS

ANTIBIOGRAMA DE GRAM

POSITIVOS

TÉCNICAS DE ANTIBIOGRAMA Las técnicas de antibiograma son las

utilizadas en el laboratorio de microbiología para estudiar la actividad de los antimicrobianos frente a los microorganismos responsables de las infecciones.

Se considera como antimicrobiana cualquier sustancia con capacidad de matar o al menos de inhibir el crecimiento de los microorganismos y que sea susceptible de utilización como tratamiento en los pacientes.

DESARROLLO O PROCEDIMIENTO

Método de la difusión en medio sólido Se siembra el microorganismo a estudiar esparciéndolo por toda la caja de

Petri. Las pinzas de disección se colocan en un vaso precipitado con alcohol al

96%. Se toman las pinzas de disección se pasan por la llama del mechero y se

toma un disco de papel filtro estéril y se coloca sobre la superficie del medio Se repite los paso 2,3 y 4 por cada disco Se le agrega a cada disco 5 l de un determinado antibiótico o

quimioterapéutico. Para que la concentración de antibiótico que impregna los discos no sea ni

excesiva ni insuficiente, realizar un banco de diluciones. La concentración de 100 g/ml ya es adecuada para trabajar.

Incubar a 37C por 24 hrs.

CONTENIDO DE MULTIDISCO GRAM POSITIVOS

Cada multidisco contiene aproximadamente: Ampicilina AM 10mcg Cefalotina CF 30mcg Cefotaxima CTX 30mcg Ceftazidimina CAZ 30mcg Cefurexima CMX 30mcg Dicloxacilina DO 1mcg Eritromicina E 15mcg Gentamicina GE 10mcg Pefloxacina PEF 5mcg Penicilina PE 10mcg Tetraciclina TE 30mcg Trimetoprim- Sulfametoxazol SXT 25mcg

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

Las cepas se clasificaran en: Resistentes(R) (no provoca

inhibición) Intermediarias (I) (menos de

5mm) Susceptibles (S) (mayor de

5mm) Todo esto depende del diámetro del halo

en inhibición (incluyendo la medida del disco).

UTILIDAD DE LA PRUEBA DE ANTIBIOGRAMA

La utilidad básica del antibiograma es la instauración de un tratamiento antibiótico correcto al paciente. Es necesario conocer si el microorganismo responsable de la infección posee mecanismos que le confieran inmunidad frente a algún antibiótico para no incluirlo como terapia.

En cuanto al tratamiento el antibiograma no sólo es necesario en la instauración, también resulta útil en el seguimiento e incluso en la confirmación de tratamientos empíricos. En ocasiones la enfermedad infecciosa resulta grave y se comienza el tratamiento antes de conocer los datos de sensibilidad de la cepa. El antibiograma tiene que confirmar, o en su caso corregir el tratamiento.

Otra aplicación de las técnicas de estudio de resistencia es la epidemiología. Es necesario detectar el aumento de los niveles de resistencia en los aislamientos clínicos para tomar medidas correctoras.

Por otro lado también puede tener utilidad diagnóstica porque el perfil de resistencia puede en algún caso orientar en la identificación bacteriana.

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