IDENTIFICACION DE AMINOACIDOS Y PROTEINA

1. INTRODUCCON:

En el presente tema abordaremos aspectos generales sobre estructura y función de los aminoácidos y las proteínas en el organismo, así como de los medios de laboratorio para identificar a los mismos.

Las proteínas son principios inmediatos orgánicos constituidos por largas cadenas de aminoácidos. Los cuales se unen entre sí mediante enlaces peptídicos. La existencia del enlace peptídico, de aminoácidos azufrado, puede ponerse de manifiesto en el laboratorio mediante una serie de reacciones coloreadas específicas. Que sirven para la identificación de las proteínas.

2. OBJETIVOS

Objetivo específico:

Reconocer la presencia de algunos aminoácidos en las proteínas.

Objetivo generales:

Adquirir información sobre algunas propiedades físicas y químicas de aminoácidos.

Conocer las propiedades de las proteínas. Someter soluciones de proteínas a desnaturalización con agentes físicos y

químicos.

2015

3. Marco Teórico

3.1 Proteínas:

Las proteínas naturales son polímeros lineales α-L-aminoácidos. Desempeñan

una gran cantidad de funciones: estructurales, como el colágeno; transportadoras,

como la hemoglobina o los citocromos; además de aquellas funciones catalíticas

que ejecutan las enzimas y que resultan necesarias en la homeostasis del

metabolismo.

En una proteína podemos distinguir varios niveles de organización. Una estructura

primaria, que hace referencia a la secuencia de aminoácidos en la cadena

polipeptídica y en la que se incluyen todos los enlaces covalentes entre los

diversos residuos: los enlaces peptídicos y los puentes disulfuro.

Una estructura secundaria, que se refiere a las disposiciones regulares en el

espacio de residuos adyacentes a la cadena polipeptídica. Ciertas secuencias de

aminoácidos favorecen a las hélices α o las cadenas β, así como giros que

conectan a unas estructuras regulares con otras. Algunos elementos con

estructura secundaria forman agregados regulares consecutivos que determinan

un nivel de organización superior, que denominamos estructura supersecundaria o

motivos. Algunos de estos se combinan, generalmente, para formar compactas

estructuras globulares que llamamos dominios. Dominios con secuencias de

aminoácidos homologas en diferentes proteínas tienen casi invariablemente la

misma estructura terciaria. Un dominio se define, entonces, como una parte de

una cadena polipeptídica que puede plegarse independientemente en una

estructura terciaria estable. Los dominios pueden ser también unidades de función

independientes dentro de las estructura de las proteínas.

Un nivel de estructuración superior de estos es la estructura terciaria, o disposición

espacial de todos y cada uno de los átomos que componen la molécula. Una

proteína con una determinada estructura terciaria puede estar constituida por uno

o varios dominios, que pueden llegar a tener funciones específicas y separadas.

La estructura terciaria constituye el último nivel de organización estructural de una

proteína monomérica. Sin embargo, existen macromoléculas oligoméricas,

formadas por la asociación no covalente de varias cadenas polipeptídicas. Este

nivel de jerarquización superior se llama estructura cuaternaria. Representa, por

tanto. La disposición espacial de las diversas subunidades de una proteína

oligomérica.1

3.2 Prueba de Ninhidrina (Hidrato de tricetohidrindeno).

El átomo de nitrógenos del anión proviene del aminoácido. El resto del aminoácido

se convierte en un aldehído y gas carbónico. Así que, todos los α-aminoácidos

producen el mismo colorante violeta, y la intensidad de su color es proporcional a

la cantidad de aminoácido. La prolina, que tiene un grupo amino secundario,

produce un colorante amarillo. No obstante, el color violeta no es específico para

aminoácidos debido a que el amoniaco y la mayoría de los polipeptídos y

proteínas desarrollan el color con la ninhidrina.

La reacción con el nitrito de sodio (NaNO2) puede utilizarse para detectar la

presencia de los grupos amino libres como –NH2, en tal caso, se podrá detectar si

el aminoácido se encuentra libre o está combinado formando péptidos.

1 Arboledas D. Jerarquía Estructural de las Proteínas. España: Editorial Club Universitario.

3.3 Prueba de Biuret

Se basa en la reacción colorada del reactivo de Biuret. Biuret produce un complejo

de color púrpura al reaccionar con una solución alcalina de sulfato de cobre.

Los péptidos (a partir de los tripéptidos) y las proteínas reaccionan con el reactivo

de Biuret. Los iones cúpricos forman un complejo de coordinación con los pares

de electrones no compartidos del N, presente en los aminoácidos de las proteínas.

Complejo de cobre formado en la reacción de Biuret

El complejo muestra una absorción máxima 330 y 545 nm. La absorbencia

generalmente se mide a 545 para propósitos cuantitativos. La absorción es mayor

a 330 nm, pero en esa longitud de onda es probable que haya interferencias.

Sustancias similares que contienen en lugar del grupo carbamino, grupos CS(NH),

también responden a la prueba. Esto implica que os compuestos no proteicos que

contienen los grupos necesarios responderán a la prueba. Las proteínas disuelven

el hidróxido cúprico del reactivo y forman compuestos coloreados violeta o violeta-

rosado que depende de la naturaleza de las proteínas.

3.4 Prueba xantoproteica

La reacción xantoproteica es una prueba de tipo cualitativa que indica la presencia

de proteínas.

Esquema de la reacción xantoproteica

Guarnizo A. & Martínez P. Experimentos de Química Orgánica con enfoques en ciencias

de la vida. Colombia: Ediciones Elizcom.

Es una reacción que reconoce los aminoácidos que poseen el grupo bencénico

(tirosina, fenilalanina, triptófano). Las proteínas que tienen en su composición

estos aminoácidos también darán la reacción. La positividad se reconoce por la

apararición de un color amarillo o verde debido a la formación de nitrocompuestos.

3.5 Prueba de los grupos SH

Es una prueba para identificar aminoácidos azufrados y las proteínas que los

contienen, se reconocen por la formación de una coloración negra o gris. La figura

siguiente muestra dicha reacción.

Fuente: Práctica N°4 de Bioquímica Ambiental

3.6 Prueba de Millón

Los compuestos que contienen el radical hidroxibenceno reaccionan con el

reactivo de Millón formando compuestos rojos. Los únicos aminoácidos fenólicos

son la tirosina y sus derivados y solamente ellos dan una reacción positiva.

Fuente: Práctica N°4 de Bioquímica Ambiental

Terry C.(2015). Identificación de Aminoácidos y Proteína. Práctica de Bioquímica, 4, 2-3.

Resultados y cálculos

Prueba de ninhidrina

La prueba de la ninhidrina nos dio como resultado una muestra violeta poco lo cual indica la presencia grupos aminos libres.

Prueba de Millón

En el caso del reactivo Millón y la clara de huevo se reconocio una mezcla resultante rojisa, lo cual indica que en la estructura presenta radicales hidroxibenceno.

Prueba xantoproteica

En esta prueba se logró comprobar la presencia de grupos bencénicos, pues luego de agregar los reactivos a la muestra esta tomo un color amarillo.

Reactivo de Biuret

La prueaba de Biuret se realiza para el reconocimiento de uniones peptídicas, de naturaleza amida, estas uniones se hallarón en la muestra de estudio luego del proceso para reconocer las uniones puesto que la coloración azulada violeta.

Prueba para los grupos SH

En esta prueba era necesario comprobar la existencia de amioácidos azufrados, es decir que contenga el elemento azufre en su estructura lo cual fue factible pues la muestra presento una coloración muy oscura, luego de añadir, con posterior exposición a una llama, el hidróxido de sodio y el acetato de plomo.

MATERIALES:

PROCEDIMIENTO: