INVESTIGACIN DE VIBRIO PARAHAEMOLYTICO

ARGUMEDO PJARO BERNARDO ENRIQUEBALLESTAS BARRERA CINDY VANESSABRUNO SALABARRIA MILENA SOFA

FECHA DE LA PRACTICA: MARTES 14/ OCTUBRE / 2014FECHA DE ENTREGA DEL INFORME: MARTES 21 / OCTUBRE / 2014

ING. GILMA PADILLA

UNIVERSIDAD DE CRDOBAFACULTAD DE INGENIERAPROGRAMA DE INGENIERA DE ALIMENTOS

BERSTEGUI CRDOBA 2014INTRODUCCIN Vibrio parahaemolytico pertenece a la familia Vibriomaceae, es una bacteria Gram negativa halfila, no formadora de esporas, curvado en forma de vara, su tamao oscila entre 0.5 - 0.8 micras de ancho y 1.4 a 2.4 micras de longitud.Es un anaerobio facultativo, de crecimiento rpido a temperaturas entre 15 y 43C, a pH entre 5 y 9 y a concentraciones de sal entre 0.5 y 8% es oxidasa positivo que puede fermentar la glucosa sin produccion de gas. Tiene un flagelo polar que permite su motilidad alta en medios lquidos y sus flagelos laterales permitiendo que migren a travs de semislidos.Vibrio parahaemolytico es una bacterias productoras de intoxicacin alimentaria determinadas por el consumo de pescados y moluscos crudos. Agente que causa clera. Son habitantes del medio marino su principal caracterstica es que necesitan concentraciones salinas elevadas, similares a las marinas para desarrollarse, pero resisten concentraciones superiores por lo que adems de alimentos de origen marino fresco pueden contaminar tambin otros productos.La enfermedad a presentarse en un periodo de incubacin comprendido entre 24 a 48 horas produciendo nauseas, vmitos, diarrea, etc. En casos graves se puede observar la presencia de sangre y mocos en heces casi siempre hay fiebre ligera y dolor de cabeza. Los alimentos ms implicados son los de origen marino como lo son pescados y moluscos crudos o insuficientemente cocidos. La bacteria se encuentra en los alimentos con estas caractersticas; tras la muerte del pescado se multiplica activamente.Como medidas de control es conveniente limitar su crecimiento en los productos crudos conservndolos en refrigeracin o congelacin, adems de consumir pescados y mariscos suficientemente cocidos o hervidos e impedir su recontaminacin por los crudos. No se recomienda el uso de agua de mar para su limpieza o enjuague.

OBJETIVORealizar investigacin de Vibrio Parahaemolytico a partir de productos de origen marino.

PROCEDIMIENTOENRIQUECIMIENTO SELECTIVO

Pesar 10 g de la muestra de pescado Agregar 100 ml de agua de peptona con NaClHomogenizar La muestra 1 minuto en estomacherIncubar Por 18 24 horas a 30C

SIEMBRA EN MEDIOS SELECTIVOSTomar Inoculo del caldo GSTB anteriormente incubado Aislar En Agar TCBSIncubar Por 18 24 horas a 37CObservar Colonias caractersticas (colonias pequeas con centro verde ..azulado)

RESULTADOS

ANLISIS DE RESULTADOSPara el enriquecimiento selectivo de la muestra de pescado el agua peptona ms cloruro de sodio (NaCl) es utilizado como diluyente; en el medio la peptona proporciona nutrientes necesarios para el desarrollo microbiano y el cloruro de sodio mantiene el balance osmtico (Figura N1). En la siembra en medio selectivo despus de tomar inoculo del anterior procedimiento fue sembrado en Agar TCBS el cual es un medio selectivo para el aislamiento y cultivo de Vibrio Cholerae y Vibrio parahemolyticus y otras especies de Vibrio en el medio de cultivo el extracto de levadura, la peptona de la carne y la triptena aportan los nutrientes para el desarrollo microbiano. La bilis de buey, el citrato de sodio y el pH alcalino inhiben el desarrollo de la flora acompaante, favoreciendo el crecimiento de Vibrio spp. El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico y debido a su alta concentracin tambin contribuye a la selectividad del medio. La sacarosa es el hidrato de carbono fermentable y el azul de bromotimol y azul de timol son los indicadores de pH que en un ambiente alcalino le otorgan al medio de cultivo el color verde azulado y viran al color amarillo en medio acido (por utilizacin de la sacarosa). El Tiosulfato de sodio es la fuente de azufre y junto con el citrato ferrico permiten la deteccin de la produccion de acido sulhidrico por formacin de un compuesto color negro. El agar es el agente solidificante. Pasado el periodo de incubacin de la siembra el resultado obtenido fue crecimiento pero no de colonias caractersticas de Vibrio parahemolyticus las cuales deban ser observadas como colonias pequeas con centro verde azulado (Figura N2) lo que indica que el resultado es negativo con lo cual podemos decir que la muestra llevada al laboratorio de pescado de mar no contena este microorganismo en su carne, el crecimiento que se presento en la lnea de siembra en el agar se puede decir que son causas de flora interferente.

INVESTIGACIN FUNDAMENTO DEL AGAR TCBSEn el medio de cultivo el extracto de levadura, la peptona de la carne y la triptena aportan los nutrientes para el desarrollo microbiano. Es este, el medio selectivo ms adecuado para el aislamiento de las especies de Vibrio e inhibidor para la mayora de enterobacterias esto se basa en la bilis de buey, el citrato de sodio y el pH alcalino que inhiben el desarrollo de la flora acompaante, favoreciendo el crecimiento de Vibrio spp. El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico y debido a su alta concentracin tambin contribuye a la selectividad del medio. La sacarosa es el hidrato de carbono fermentable y el azul de bromotimol y azul de timol son los indicadores de pH que en un ambiente alcalino le otorgan al medio de cultivo el color verde azulado y viran al color amarillo en medio acido (por utilizacin de la sacarosa). El Tiosulfato de sodio es la fuente de azufre y junto con el citrato ferrico permiten la deteccin de la produccion de acido sulhidrico por formacin de un compuesto color negro. El agar es el agente solidificante.

CONCLUSIN De la anterior investigacin podemos concluir que el enriquecimiento selectivo realizado a la muestra de pescado fue correcto ya que el agua de peptona y el NaCl aportan tanto los nutrientes necesarios para que prolifere las bacterias y que posteriormente en la siembra no se obtuvieron resultados positivos para la identificacin de Vibrio parahemolyticus ya que no se observaron las colonias caractersticas de este lo que nos indica que el alimento no tenia presencia de esta bacteria, siendo de gran ayuda la realizacin de esta prctica para nosotros como futuros ingenieros de alimentos para as relacionarnos cada da mas con productos como estos (pescados de mar) realizar estudios e ir afianzado mayores conocimientos.

BIBLIOGRAFA www.apa.cl/archivos/vibrioparahemolitico1.pdf

http://www.britanialab.com/productos/363_hoja_tecnica_es.pdf

http://www.britanialab.com/productos/601_hoja_tecnica_es.pdf

http://www.bd.com/europe/regulatory/assets/ifu/hb/ce/pa/es-pa-254432.pdf