Inmunofenotipode leucemias agudas

Mauricio Chandía C, MD MSc.Hematología-HGGB

Leucemias AgudasMieloblásticas

Eventos históricos en elinmunofenotipo de las LMA:

• 1953: El Principio Coulter & instrumento• 1965/68: CMF multicolor y multiparamétrica• 1975: Producción de Anticuerpos Monoclonales• 1977: Compensación de Fluorescencias• 1980: Inmunofenotipo de células leucémicas• 1981: Definición de marcadores aberrantes en células leucémicas• 1985: Definición del subtipo FAB M7 empleando inmunofenotipo• 1986: Citómetros compactos de 3 colores• 1987: Análisis multiparamétrico mediante CMF de la hematopoyesis normal• 1988: Segunda clasificación MIC de las neoplasias hematológicas• 1993: El principio del gate mediante CD45• 1994: Clasificación REAL de las neoplasias linfoides• 2001/2008: Clasificación WHO de las neoplasias hematológicas

Clasificación FAB

• M0 (mínimamente diferenciada).• M1 (mieloblástica sin maduración).• M2 (mieloblástica con maduración).• M3 (promielocítica).• M4 (mielomonocítica).• M5 (monocítica).• M6 (eritroide).• M7 (megacarioblástica).

Clasificación WHO 2008 leucemias agudasmieloides y entidades relacionadas

• LMA con alteraciones genéticas recurrentes.• LMA con cambios asociados a MDS.• LMA asociadas a quimio/radio terapias previas.• LMA no especificada (NOS).• Sarcoma mieloide.• Proliferaciones mieloides asociadas al Sd de

Down.• Neoplasias de células dendríticas

plasmocitoides blásticas.

CD45/SSC en MO normal

Aplicación clínica de CMF en LMA

• Para el diagnóstico sólo es necesario paradiferenciar entre M0 y M7.

• Permite evaluar displasia en poblaciónmieloide residual.

• Estudio de la población de blastos.

Información obtenida por CMFde blastos mieloides

• Identificación de linaje.• Cuantificación.• Tipo de maduración de poblaciones.• Identificación de aberraciones.• Seguimiento por enfermedad mínima

residual

Antígenos que permiten definir linajeen una población de blastos

• Mieloide:– cyMPO+ o– 2 de los siguientes CD14, CD64, CD11c, Lisozima.

• Linaje linfoide T:– cyCD3 o sCD3.

• Linaje linfoide B:– CD19 intenso con expresión de cyCD79a o cyCD22 o

CD10.– CD19+d con al menos 2 de los anteriores.

Información adicional de la CMF en en LMA

• Asociación con patronescitogenéticos/moleculares característicos

• Asociación con característicasmorfológicas FAB.

LAM M0 (mínimamente diferenciada)

• CD34++, HLA-DR+, CD117+, CD38-/+d.• cyMPO negativas.• Carecen por lo general de antígenos

panmieloides como el CD33 o el CD13,pero tiene uno de los 2.

• Frecuente CD7 o nTdT.• Carecen de ag de diferenciación.

LMA M0 (mínimamente diferenciada).

LMA M0 (mínimamente diferenciada).

LAM M1 (mieloblástica sin maduración)

• CD34+, HLA-DR+, CD117+.• cyMPO (<10%).• CD33+ y CD13+.• Carecen de ag de diferenciación

(CD15- CD14- CD11b- CD16-).• Tienen menos TdT. El CD7 se

puede ver en un 30%

LAM M1 (mieloblástica sin maduración)

LAM M1 (mieloblástica sin maduración)

LAM M2 (mieloblástica con maduración).

• CD34+, HLA-DR+, CD13+, CD33+.• cyMPO+ > 10% de los blastos.• Han adquirido CD15 y CD65.• Pueden tener CD11b-/+.• t(8;21): CD56+, CD19.• Sin diferenciación a monocito.• CD7 en un 20-30%.

LAM M2 (mieloblástica con maduración).

LMA M3 (Promielocítica)

• Asociadas a la t(15;17).• CD34-, HLA-DR-, CD117+.• cyMPO++, CD33++.• CD15-, CD65-.• CD64+.• Aberrantes: CD56 y CD2.• M3v hipogranular:

– Bajo SSC/FSC– a veces CD34+/CD2+.

•

M3

M3v

LMA M3 (Promielocítica)

LMA M3 (Promielocítica)

LMA M3 variante hipogranular

LMA M3 variante hipogranular

LMA M4/M4-Eo(Mielomonocítica/con eosinofilia)• 2 poblaciones.

– Una de maduración monocítica, gana CD15 sinperder CD34, y carece de ags de madurez como elCD11b y el CD14 (CD34+, HLA-DR+, CD13+,CD33+, CD15+, CD11b-, CD14-).

– La otra población es de maduración granulocítica,pierden el CD34 una vez que ganan el CD15 ypueden tener ags de madurez (CD34-, HLA-DR+,CD13+, CD33+, CD15+, CD11b+, CD14+, CD56+).

• Debe descartarse en este subtipo la inv(16) ot(16;16).

LMA M4/M4-Eo(Mielomonocítica/con eosinofilia)

LMA M4-Eo (Mielomonocítica/con eosinofilia)

LMA M5a/M5b (monocítica)

• ≥ 80% de blastos a línea monocito y < 20% alínea neutrófilo.

• Tienen al menos 2 marcadores monocíticos(CD14, CD4, CD11b, CD11c, CD64, CD68,CD36, Lisozima).

• CD34+ en un tercio de los casos.• CD33++, CD13+ intensidad variable, HLA-DR+,

CD15+/CD65+.• Si tienen una población de monocitos son

cyMPO+.

Blastos M5a

Blastos M5b

LMA M5

LMA M6 (eritroide)

• Eritroleucemia:– eritroblástos >50% con 20% de blastos en

células nucleadas no eritroblastos.– Eritroblastos marcan CD105, CD71 y CD36,

pero son aberrantes.– Blastos son tipo M0-M1.

• LMA Eritroide pura:– >80% de eritroblastos, todos inmaduros.

LMA M6 (Eritroleucemia)

LMA M6 (Eritroleucemia)

Eritroblastos

P1P2

LMA M7 (megacarioblástica)

• Línea megacariocítica.• Negativas para cyMPO, CD34, CD45 y

HLA-DR.• CD41+ y/o cyCD61+.• CD4+, CD13+. CD33+, CD36+.• Expresión aberrante de CD7.

LMA M7 (megacarioblástica)

t(15;17) MLL 11q23 t(8; 21) Inv/del(16) mutNPM1

FAB LAP M4, M5 >M1, M2 M2 M4 Eo M4-M5

Autofluorescencia ++ - - - -

FSC/SSC ++ - - - -

cMPO + + ++ ++ +

CD34 - (*) - + + -

HLA-DR - + + + +

CD13 heterogéneo -/+d + + +

CD33 ++ + homogéneo + + ++

CD15 -/+d + + + +

CD11b -/+ + -/+ + -

CD11c - + - + -

CD14 - +/- - -/+ -/+

CD4 - + - + -

CD64 - + - -/+ -/+

7.1 (NG2) - + - - -

CD56 -/+ (**) + -/+ - -

CD19 - - -/+ - -

CD7 - - -/+ - -/+

CD2 -/+ - - -/+ -

(*) Puede ser positive en subpoblaciones. (**) Tiene valor pronóstico en LAM M3.

LMA t(8;21)

13% DE BLASTOS: CD45+d, CD34++, CD117+, HLA-DR++, CD38+, CD19+, CD56+.

Leucemia de Células dendríticas

LMA con tres poblaciones

C. dendrítica

Monocito

Inmadura

C. dendrítica

Leucemias Agudas linfoblásticas

Diferenciación B Normal

LLA-B Pro B

cyIgM

CD

22

CD45

SSC

CD10

CD

20

LLA-B Común

cyIgM

CD

22

CD45

SSC

CD10

CD

20

LLA-B Pre-B

cyIgM

CD

22

CD45

SSC

CD10

CD

20

Expresión inmunofenotípica deciertas variantes de LLA-B

• 11q23 (reordenamientos de MLL)– Pro-B.– Inmunofenotipo: 7.1+, CD10-, CD34+, CD24-

/+d, CD15+, CD65+, CD22+d, HLA-DR+d.• t(9;22).

– común (CALLA+).– CD10+ homogéneo en al menos parte de los

blastos, CD34+ homogéneo, CD13+ yCD33+, CD38+d heterogéneo, CD66c+.

LLA Pro-B con t(4;11)

LLA-B t(9;22)

Expresión inmunofenotípica deciertas variantes de LLA-B

• t(12;21)– B común (CALLA+)– CD10+, HLA-DR+ y CD38+ homogéneo,

CD34 -/+d heterogéneo, CD20-/ +d, CD45-/+d. El CD9 es característicamente negativo.

• t(1;19)– PreB– cyIgμ+, CD10+ homogéneo, CD19+

homogéneo, CD9+ ++homogéneo. CD24+,CD34-, CD20-.

LLA-B t(12,21)

LLA-B madura tipo Burkitt (8q24)

• t(8;14)(q24;q32); t(8;22)(q24;q11) yt(2;8)(p12;q24).

• Desregulación de c-MYC.• CD20, cadena ligera restringida

(Kappa/Lambda),• CD81++, CD19+, CD10+ y CD38+.

LLA-B madura tipo Burkitt

Clasificación LLA-T

• Pro-T:– cCD3+d ; CD3-; CD7+; CD45+d.

• Pre-T:– cCD3+ ; CD3-; CD7+; CD45+d ; CD2-/+ y/o CD5-/+.

• Cortical:– cCD3+/++ ; CD3-/+d; CD7+; CD45+d; CD2-/+ y/o

CD5-/+; CD1a+• Madura:

– cCD3+/++ ; CD3+d; CD7+; CD45+d; CD2-/+; CD5-/+;CD1a-; CD4+ o CD8+

Líquido pleural con blastos de LLA-Tcortical

97% DE BLASTOS: CD45+d, cyCD3+, CD3+, CD99+, CD1a+, CD8+d, CD7++.NEGATIVOS: CD34, CD10, CD4, nTdT.

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