IDENTIFICACION DE ESTREPTOCOCOS

Janet Salazar LBacterióloga IUCM

de A.

Generalidades

●Catalasa -●Oxidasa negativo●Bacterias Gram positivas●Crece en pares o en cadenas●Anaerobios facultativos●Homofermentadores* el único producto de

fermentación de la glucosa es el acido láctico sin producción de gas

1.Tinción de Gram2.Medios de cultivoContenga sangre de carnero al 5% * concentración es adecuadas de sangre para reconocer la HEMOLISISEstreptocococos de los grupos A, B,C,F,G ß-hemolíticos

Enterococcus , estreptocococos grupo D α-hemolíticos o no hemol

Los estreptococos en A-sangre pueden producir 3 tipos de hemolisis:

α-hemolisis: lisis parcial de los eritrocitos que rodea a una colonia, cambio de color gris verdoso o pardo en el medioß-hemolisis: lisis completa de los eritrocitos, produce una eliminación de la sangre del medio debajo de las colonias y alrededor -transparenteγ-hemolisis: sin hemolisis, sin cambio en el mediono hemolíticos

3. Sensibilidad a la bacitracina

Separa el Streptococcus pyogenes de losdemás estreptococos beta hemolíticos

Streptococcus pyogenes -grupo A ( S) es sensible a concentraciones bajas de Bacitracina 0.04 U * realiza sobre agar sangre

4. Sensibilidad a trimetropin-sulfametoxazol

●Distingue los estreptococos de los grupos A y B de los otros estreptococos B-hemolíticos

●Realizar sobre agar sangre●Cualquier zona de inhibición indica

sensibilidad a SXT(S) sensibles: estreptococos de los grupos D, no enterococos, C,F,G, estreptococos viridans y neumococos

5. Prueba de CAMP

Separar S.agalactiae de los demásestreptococos ß-hemolíticos

Se basa en que los estreptococos del grupo B producen un factor llamado CAMP (factor de monofosfato de adenina cíclica) que aumenta la zona de hemólisis producida por un estafilococo productor de ßlisina.

Se realiza estriando un cultivo deestreptococo ß-hemolítico en forma perpendicular a unaestría de un estafilococo productor de ß-lisina en A-SangreSe incuba 18-24 horas a 37ºC.Interpretación de los resultados: La prueba positiva seevidencia por la presencia de una zona de potenciaciónde la hemólisis en forma de puntas de flecha en el lugardonde se contactan las dos estrías.

●Reacción de CAMP positiva

●Reacción de CAMP negativa

6. Prueba de bilis esculina

Separar los estreptococos del grupo D de los demás grupos de estreptococos

Interpretación de resultados: Prueba positiva: (+) ennegrecimiento del medio.

Se basa en la capacidad de los estreptococos del grupo D de crecer en un medio de cultivo que contiene un 40% de bilis y de hidrolizar la esculina a esculetina, la cual se combina con el citratoferroso que posee el medio dando un complejo de colornegro.

●Prueba de bilis-esculina. Los estreptococos del grupo D son positivos para esta prueba

7. Prueba de tolerancia a la sal ( caldo de NaCL al 6.5 %)

Separar los enterococos capaces de crecer encaldo salado, de los demás estreptococos del grupo D

Interpretación de resultados: considera la pruebaPrueba(+) aparece turbidez con o sin acidificación del medio, que se observa como un viraje de color del púrpura al amarillo

Se basa en la capacidad de los enterococos de crecer en una concentración de 6,5% deNaCl

es un medio de cultivo líquido que contiene además de NaCl, glucosa y un indicador de pH:púrpura de bromocresol.

Crecimiento positivo en cloruro de sodio 6,5%)

8. Prueba de la Pirrolidonil arilamidasa PYR

útil para la identificación de Streptococcus pyogenes y Enterococcus spp

Es altamente sensible y reemplaza a la bacitracina y a la prueba de tolerancia a la sal (crecimiento en NaCl al 6.5%).

●Enzima detectada: PYR● Inculcación el caldo,

incubar por 4 horas*hidroliza PYR, luego se detecta B-naftilamida libre mediante el agregado del acoplador de colorante diazo o reactivo revelador: N-N dimetilamino cinamaldehído – 1 gota

Positivo: observación de color rosa-rojo en el disco.Negativo: la suspensión y/o el disco permanecen incoloros o de color amarillo.

9. Sensibilidad a la optoquina

Diferenciar S.pneumoniae de otros estreptococos α-hemolíticos

Interpretación de resultados: Halos de inhibición> de 15mm son característicos de S.pneumoniae

Se basa en la sensibilidad deS.pneumoniae a una concentración menor o igual a 5μg/ml de hidroxicuprina (optoquina).Procedimiento: Estriar un cuadrante de una placa deagar sangre en varias direcciones con una suspensión McFarland 0,5. Colocar luego un disco de optoquina en elcentro del área estriada. Incubar 18-24 horas a 37ºC.

10. Prueba de solubilidad en bilis

algunos microorganismos se lisan en presencia de bilis

Se inocula un caldo nutritivo sin glucosa y con pH alrededor de 7 con el microorganismo durante 24 h y se le añade la solución de bilis al 10% (generalmente desoxicolato de sodio)

Se incuba a 35-37°C y si antes de 3 h se produce un aclaramiento en el contenido del tubo se identifica Streptococcus pneumoniae

.Las colonias de Streptococcus pneumoniae se disuelven o lisan dentro de los 30 minutos en presencia de una solución de desoxicolato de sodio al 10%suspender las colonias sospechosas en 1 ml de NaCL 0.85% (turbiedad 1.0 escala de Mac Farland) bien densa. Dividir en mitades y a una de ellas agregarle 3 a 4 gotas de la solución de desoxicolato de sodio al10% y al otro tubo solución fisiológica. Incubar 2 h a 35°C y examinar luego para ver aclaramiento de la turbiedad por lisis.

Alfa hemólisis y producción de crecimiento tipo "Swarming" por la presencia de cápsula del S. pneumoniae