GUIA DE PRACTICA DE BIOQUIMICA I

BIOQUIMICA I 1 Rubén Díaz Cabanillas

UNIVERSIDAD CATÓLICA LOS ÁNGELES DE CHIMBOTE

ESCUELA PROFESIONAL DE

FARMACIA Y BIOQUÍMICA

GUÍA PRACTICA DE BIOQUÍMICA I

Q.F: LALO RUBÉN DÍAZ CABANILLAS

CHIMBOTE – PERÚ

2011

NOMBRE:………………………………………………………………..


Q.F: LALO RUBÉN DÍAZ CABANILLAS


INDICE

01.-IDENTIFICACIÓN DE BIOMOLECULAS-------------------------------------------4

02.-PROPIEDADES FISICOQUÍMICAS DE LAS PROTEÍNAS

DETERMINACIÓN DEL PUNTO ISOELÉCTRICO------------------------------------6

03.-FACTORES QUE MODIFICAN LA VELOCIDAD DE REACCIONES

ENZIMATICAS: CONCENTRACIÓN DEL SUSTRATO CONCENTRACIÓN DE

LA ENZIMA, COFACTORES, pH, TEMPERATURA, TIEMPO.--------------------9

04.-DETERMINACIÓN DE GLUCOSA EN SANGRE----------------------------------12

05.-INDICE DE GLICEMIA-------------------------------------------------------------------16

06.-REGULACIÓN HORMONAL DE LA GLUCOSA SANGUÍNEA---------------19

07.-CADENA RESPIRATORIA Y FOSFORILACIÓN OXIDATIVA----------------23

08.-DIGESTIÓN DE LIPIDOS: EMULSIFICACION DE LAS GRASAS Y ACCIÓN

DE LA LIPASA PANCREÁTICA.------------------------------------------------------------26

09.-DETERMINACIÓN DE TRIGLICERIDOS EN SUERO --------------------------29

10.-DETERMINACIÓN DE COLESTEROL EN SANGRE ----------------------------32

11.-DETERMINACIÓN DE UREA EN SANGRE ----------------------------------------36

12.-DETERMINACIÓN DE ACIDO ÚRICO EN SANGRE----------------------------39


PRÁCTICA Nº 01

IDENTIFICACIÓN DE BIOMOLECULAS

OBJETIVOS . En esta práctica se realizarán reacciones químicas y pruebas

características para identificar la presencia de una o varias biomoléculas en una mezcla y

para cuantificar alguna de ellas.

1.- Identificación de glúcidos con poder reductor

Sobre la mesa hay dos soluciones de glúcidos: GLÚCIDO I y GLÚCIDO II. Hay que

determinar si son reductores.

Procedimiento:

1. Poner en un tubo de ensayo 2 ml de glúcido I y en otro tubo 2ml de glúcido II.

2. Añadir a cada tubo 0.5 mL de Fehling A y 0.5 mL de Fehling B.

3. Calentar a la llama.

El reactivo de Fehling consta de :

-Fehling A: CuSO4 disuelto en H2O

-Fehling B: NaOH y tartrato Na-K disuletos en agua

Después del Fundamento teórico responder las siguientes preguntas:

Cuestiones

1. ¿Cúal o cúales son los azúcares reductores?

2. ¿Quién se oxida y quién se reduce en la reacción?

3. ¿Para qué sirven el tartrato Na-K y el calor?

4. ¿Que resultado daría la reacción de Fehling con glucosa? ¿y con sacarosa?

2.- Identificación de polisacáridos: identificación de almidón mediante la prueba del

Lugol.Sobre la mesa hay dos soluciones, solución A y solución B. Hay que identificar cuál

de ellas tiene almidón.

Procedimiento:

1. Poner en un tubo de ensayo 2 mL de la solución A y en otro 2 mL de la solución B.

2. Añadir a cada uno de los tubos de ensayo 1 gota de Lugol (solución acuosa de iodo y

ioduro potásico). Observar el resultado.

3. Calentar a la llama el tubo que contiene almidón (teñido de azul con I), hasta que

desaparezca el color azul.

4. Enfriar en el grifo y observar la aparición de nuevo de color azul.

Después del Fundamento teórico responder las siguientes preguntas:

Cuestiones

1. ¿Cuál de los dos soluciones contiene almidón?

2. ¿El almidón daría positiva la reacción de Fehling?

3. ¿La celulosa daría positiva la prueba del Lugol?

4. ¿Porqué desaparece el color azul al calentar el tubo que contiene almidón, que tipo de

reacción se produce, química o física?

5. ¿El azul que aparece tras calentar y enfriar es igual de intenso? ¿Por qué?


II.RESULTADOS

III.DISCUSIÓN:

IV.CONCLUSIONES

V.BIBLIOGRAFIA


PRÁCTICA Nº 02

PROPIEDADES FISICOQUÍMICAS DE LAS PROTEÍNAS

DETERMINACIÓN DEL PUNTO ISOELÉCTRICO

I. INTRODUCCION:

El punto isoeléctrico es la concentración de iones hidrogeno en el cual la proteína

es eléctricamente neutra, porque el número total de cargas positivas es igual al

número total de cargas negativas contenidas en la proteína.

Cada proteína tiene un determinado punto Isoeléctrico (PI).

Cuando una proteína se encuentra en diferentes soluciones que tienen valores de pH

menores, igual o mayores al PI, la proteína sufre variaciones en la constitución de

sus grupos químicos, produciéndose en consecuencia variaciones en su estructura

terciaria o cuaternaria y por lo tanto en su función biológica.

A parte de otras propiedades que presentan las proteínas cuando se encuentran en

una solución que tiene pH igual al PI, algunas proteínas son difícilmente solubles y

precipitan. Aprovechando este comportamiento, se puede determinar el PI de una

proteína observando los cambios de solubilidad que se producen cuando la proteína

se encuentra en varias soluciones que tienen pH conocidos.

En la presente práctica se determinara el PI de una proteína relacionando la

solubilidad mínima con el pH de la solución en que ella se produce, con el fin de

contribuir a establecer la importancia de conocer las propiedades de las proteínas.

II. REACTIVOS:

- Ac. Acético 1N

- Sol. de caseína en acetato de sodio 0.1 N.

- Sol .de Fenoftaleína

-NaOH 10%

III. PROCEDIMIENTO:

- Marcar una serie de tubos de ensayo del 1 al 9.

- En el tubo 1 medir 3.2 ml. de ácido acético 1 N y 6.8 ml. de agua destilada.

- Medir 5 ml. de agua destilada en cada uno de los otros 8 tubos.

- Sacar 5 ml. de solución del tubo 1 y agregarlos al tubo 2 .

MEZCLAR

Sacar 5 ml. del tubo 2 y transferir al tubo 3, etc. continuando del mismo modo

hasta completar la serie.

En el tubo 9 una vez efectuada la mezcla se saca 5 ml. de solución que se

elimina.

Agregar rápidamente 1 ml de solución de caseína en acetato de sodio 0.1 N a

cada tubo. Mezclar al instante por inversión

Observar el efecto inmediato que se produce en la solubilidad de la proteína en

los diferentes tubos.

Anotar en el cuadro que sigue:

Observar después de 30 minutos. Anotar en el cuadro el pH de cada tubo.(ver

nota al final).


Calentar ligeramente cada uno de los tubos y apreciar el efecto sobre la

solubilidad. Anotar.

Agregar una gota de Fenoftaleína. Mezclar.

Agregar NaOH al 10% gota a gota, agitando, hasta la aparición color

rosado y observar el efecto sobre la solubilidad. Anotar:

# de tubos 1 2 3 4 5 6 7 oo 9

pH de cada Tubo

Enturbiamiento mezclar

Enturbiamiento o ppdo A 30'

Solubil. después de calentar

Solubil. después de agregar

NaOH 10 %

Emplear los símbolos siguientes: O = no cambia

+ = Opalescencia

x = Ppdo.

Determinar el tubo que presenta el máximo de precipitación lo cual se produciera

en el tubo que tiene un pH próximo a la solubilidad mínima de la proteína.

Interpretar los resultados e indicar el PI aproximado de la proteína.

NOTA:

El pH de las soluciones de los diferentes tubos debe traerse calculado a la Reunión

de Laboratorio y se obtiene por aplicación de la Ecuación de Henderson -

Hasselbach:

pH = pK + Log. Ácido

Sal

pK Ac. Acético = 4.7

La concentración de sal es 1 ml. de acetato 0.1 N en cada caso.

La concentración de ácido es 1.6 ml de ácido N en el tubo 1 (1.6ml.

lN=16ml 0.1 N)

En el tubo 2, la concentración de ácido es 8 ml De 0.1N etc. Así en el tubo 3, por

ejemplo:

pH = pK + Log. 4

1

= 4.7 – 0.6 = 4.1

IV.RESULTADOS


V.DISCUSIÓN

VI.CONCLUSIONES

VII.BIBLIOGRAFIA


PRÁCTICA Nº 03

FACTORES QUE MODIFICAN LA VELOCIDAD DE REACCIONES

ENZIMATICAS: CONCENTRACIÓN DEL SUSTRATO CONCENTRACIÓN DE

LA ENZIMA, COFACTORES, pH, TEMPERATURA, TIEMPO.

I. INTRODUCCION:

En general todas las enzimas, cualquiera sea el tipo de reacción en que intervenga,

presentan características comunes, en cuanto a los factores que participan

favoreciendo, retardando o impidiendo su actividad. Dichos factores se investigan

teniendo en cuenta la velocidad de acción enzimática sobre un sustrato adecuado y

en determinadas condiciones.

Tomando una determinada enzima como patrón es posible tener una idea más o

menos clara de la influencia de los factores ( tiempo, temperatura, concentración de

enzima, pH, etc.); sobre la serie infinita de enzima que se conocen este patrón

general como se comprenderá varía en forma característica para cada enzima en

particular.

Para estudiar cada uno de estos factores es necesario que los otros permanezcan

constantes de tal manera que la investigación del factor variable no se vea afectado

por la variación que puedan sufrir los otros.

El objetivo de esta practica es estudiar algunos de los factores que inciden en la

velocidad de una reacción enzimatica, utilizando como ejemplo la amilasa salival,

controlando la actividad enzimatica por medio del sustrato no transformado o por

los productos de la reacción formados ( azúcar reductor ).

II. REACTIVOS:

- Solución de almidón al 1%. - Buffer fosfato 0.1 M pH 6.6.

- Buffer acetato 0.1 M pH 4.6. - Buffer borato 0.1 M pH 9.

- Solución de cloruro de sodio al 0.2 %. - Amilasa salival al 0.25 % dializada-

- Acido clorhídrico 0.05 N.

III. PROCEDIMIENTO:

COMPONENTES / TUBOS I II III IV V . VI VII VIII.

Sol. de almidón 1 % ml. 1 1 1 1 1 2 1 1

Buffer Acetato 0.1M pH 4.6 — — 5 — — — — —

Buffer Fosfato 0.1M pH 6.6 5 5 — 5 5 5 5

Buffer Borato 0.1M pH 9 — — — — 5 — — —

Sol. de NaCl 0.2% 1.4 — 1.4 1.4 1.4 1.4 1.4 1.4

Agua destilada 2.6 3.4 2.0 2.6 2.0 2.0 1.0 2.0

MEZCLAR, colocar los tubos del I al VI al baño de agua a 37° C, por 5'; el tubo VII

Colocar en baño helado entre 0 °C. y el tubo VIII en baño de 100 °C. a igual tiempo.

Agregar la soluc. Enzimática: 0.0 0.6 0.6 0.2 0.6 0.6 0.6 0.6

MEZCLAR, continuar la incubación, computar el tiempo desde el momento que el

preparado enzima tico fue agregado.


Los controles de la actividad enzimatica se realizaran a los 10 y 30 minutos de acuerdo a

los sistemas que a continuación se presentan.

Control de la actividad Enzimática:

Control del Sustrato no transformado.- Se realiza por la reacción con Iodo.

Con este objeto armar dos series paralelas de tubos marcados de igual manera que los

correspondientes sistemas de incubación enzimatica, una de las series se marcará además

con 10 minutos(AI) y la otra con 30 minutos (AII)

AI a los 10 minutos I II III IV V VI VII VII

A2 a los 30 minutos I - - - - VI VII -

Agregar a ambas series

HCL 0.05N 5ml. 5ml. 5ml. 5ml. 5ml. 5ml. 5ml. 5ml.

1. Control de la actividad enzimática a los 10 minutos de la incubación

Utilizar la serie de tubos control correspondiente a los 10 minutos:

a. Cumplidos los primeros 10 minutos de incubación de los respectivos sistemas de

incubación transferir 0.5 ml. del incubado a los correspondientes tubos control,

mezclar.

b. Agregar a cada tubo control 0.5 ml. de solución Iodada y mezclar.

c. Observar y anotar los resultados de las reacciones valorando en forma de cruces:

Una disminución ligera del color respecto al patrón 1= + otra algo mas intensa =

++, etc., si no hubiera cambio alguno = O.

2. Control de la actividad enzimática a los 30 minutos de la incubaciuón

Utilizar la serie de tubos control correspondiente a los 30 minutos

a. Cumplidos los primeros 30 minutos de incubación de los respectivos sistemas de

incubación transferir 0.5 mil del incubado a los correspondientes tubos control,

mezclar.

b. y c. Son exactamente iguales a los 1 (b) y (c).

IV.RESULTADOS


V.DISCUSIÓN

VI. CONCLUSIONES

VII.BIBLIOGRAFIA


PRÁCTICA Nº 04

DETERMINACIÓN DE GLUCOSA EN SANGRE

I. INTRODUCCON:

Los hidratos de carbono desempeñan en los organismos vivos diversas funciones.

Los animales los emplean de preferencia como combustible para producir energía;

cuando se encuentra en exceso se almacena como un polisacárido el glucógeno o

los convierten en grasa para ser utilizados en el momento oportuno.

Luego de pasar por proceso digestivo y de absorción los monosacaridos sobretodo

la glucosa pasa al torrente sanguíneo para luego ser utilizada en forma adecuada por

el organismo por lo tanto es necesario llevar un control de los niveles de glucosa en

sangre ya que probables desviaciones de los rangos normales indicaría alguna

alteración en el organismo.

En la presente práctica se determinara la glicemia según el método enzimático de

la glucosa oxidasa.

II. PROCEDIMIENTO:

MÉTODO ENZIMATICO

Significaría Clínica.

La patología más común relacionada con el metabolismo de los hidratos de carbono es la

diabetes mellitus. El diagnóstico precoz y el control de los pacientes diabéticos, tienen por

objeto evitar la cetoacidosis y las complicaciones de los síntomas resultantes de la

hiperglicemia, mediante el tratamiento adecuado.

Dado que existen múltiples factores causales de hiper o hipoglicemia, debe considerarse en

cacln caso la condición fisiológica y/o la patología en y/o paciento en cuestión.

Fundamento Del método

La glucosa es oxidada enzimáticamente por la glucosa oxidasa (GOD; D-glucosa oxígeno

1-óxidorreductasa; a ácido glucónico y agua oxigenada); el agua oxigenada en presencia de

peroxidasa (POD; donador: hidrógeno-peróxido óxidorreductasa); produce la copulación

oxidativa del fenol con la 4-amino fenazona (4-AF) dando lugar a la formación del fenol

con la 4-aminofenazona(4-AF) dando lugar a la formación de un cromógeno rojo-cereza

con absorbancia máxima a 505 nm. El esquema reaccional es el sgte.:

GOD

GOD Glucosa +O2 + H2O --------> Ácido glucónico + H2O2

POD

2 H2O2 + 4-AF + fenol ----------> 4-(p-benzoquinona-monoimino)-fenazona + 4 H2O

Reactivos Provistos:

Standard: sol. de glucosa 1 g/1.

GOD/POD: sol. de glucosa oxidasa (1000 U/ml) y peroxidasa (120 U/ml)

Reactivo 4-AF.: sol. de 4-aminofenazona 25 mM en Buffers Tris 0.92 M.

Reactivo Fenol: sol. de fenol 55 mol/L.

Reactivo de Trabajo: de acuerdo al volumen de trabajo, colocar en una probeta 500

partes de agua destilada, 50 partes de Reactivo de 4-AF, 50 partes de Reactivo de Fenol y

llevar a 1000 partes con agua destilada. Agregar 3 partes de GOD/POD previamente

homogenizadas. Mezclar por inversión, sin agitar. Rotular y fechar.


Pueden prepararse distintas cantidades respetando las proporciones antedichas. Es

importante además, respetar el orden de agregado de los reactivos y asegurar una perfecta

homogenización de los mismos, a fin de que el Reactivo Fenol no deteriore el Reactivo de

Trabajo. Mantener en refrigerador (2-10°C) y en frasco color caramelo es estable un mes a

partir de la fecha de su preparación.

Muestra

A) Recolección: se debe obtener suero o plasma de la manera usual. También es posible

realizar la determinación en líquido cefalorraquídeo.

B) Aditivos: en caso de que la muestra a emplear sea plasma, se recomienda el uso de

Anticoagulante G de Wiener lab. para su obtención

C) Sustancias interferentes conocidas: los sueros o plasmas con hemolisis visible o intensa

deben ser desproteinizados. Las muestras de líquido cefalorraquídeo hemorrágicas

deben ser centrifugadas antes de procesar. No se observan interferencias por:

bilirrubina hasta 200 mg/1, ácido ascórbico hasta 75 mg/1, ácido úrico hasta 200 mg/1,

hemolisis ligera.

D) Estabilidad e instrucción de almacenamiento: los hematíes y los leucocitos son los

responsables de la destrucción enzimática de la glucosa sanguínea, siendo máxima a

37°C, razón por la cual debe de centrifugarse la sangre dentro de las dos horas

posteriores a la extracción, hasta obtener un sobrenadante límpido y transferir a otro

tuvo para su conservación

III. PROCEDIMIENTO:

En tres tubos de fotocolorímetro marcados B (Blanco), S (Standard) y D

B S D

Suero o Patrón -- 10 ul --

Muestra -- -- 10 ul

Reactivo de Trabajo 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml

Incubar 10 minutos en baño de agua a 37 ° C. Luego leer en Espectrofotómetro a

505 nm. llevando a cero con el Blanco.

El color de reacción final es estable 1 hora por lo que la absorbancia debe ser leída

dentro de ese lapso.

Glucosa mg/dl = D x f. f = S

dlmg /100

TAREAS


1.-Elabore un esquema del mecanismo de liberación de la insulina en las células beta

del páncreas estimulado por glucosa y glibenclamida

.

2.-Elabore un esquema del mecanismo de interacción de la insulina con su receptor y el

mensaje a los GLUT-4.

IV.RESULTADOS


V.DISCUSIÓN

VI.CONCLUSIONES

VII.BIBLIOGRAFIA


PRÁCTICA Nº 05

INDICE DE GLICEMIA

I. INTRODUCCION:

La prueba de lía tolerancia a la glucosa es un test que permite establecer la

respuesta insulínica a un estímulo fisiológico por glucosa. La rápida absorción de

glucosa desencadena la liberación de insulina preformada en las células beta del

páncreas, en cantidad suficiente para cubrir las necesidades que aumenta k

captación de la glucosa por los tejidos y especialmente por el hígado en donde $**

utiliza y almacena como glucógeno.

La ingesta de glucosa va seguida de un aumento transitorio en el nivel de la

glicemia debido a que la velocidad de absorción intestinal excede a la capacidad del

hígado y los tejidos para su utilización. En sujetos normales el nivel máximo de

glucosa después de la absorción rara vez pasa de 150 mg/ dl. El organismo vuelve

ajustar el nivel de la glicemia a los valores del estado de ayuno con un período de 1

hora y media a dos horas y media de iniciada la prueba.

En condiciones anormales de utilización de glucosa, la elevación y reajuste de ¡a

glicemia se aparta del patrón normal teniendo estas variaciones valor diagnóstico y

prognóstico. A través de la prueba, la orina de personas 'aparentemente sanas se

presentan siempre libres de glucosa. La desventaja de esta prueba es que incluye un

factor que no guarda relación con la respuesta insulínica, la velocidad de absorción

a partir del tubo digestivo.

La finalidad del trabajo experimental es establecer la capacidad del sistema

(organismo) para manejar una dosis fija de glucosa administrada por vía oral eu\

condiciones standard.

Objetivos:

- Elaborar una curva de tolerancia a la glucosa.

- Establecer las relaciones causa y efecto entre los datos de glucosa en sangre y

orina a los 60 y 120 minutos

- Demostrar el funcionamiento del páncreas con la respuesta insulínica.

II. REACTIVOS:

- Reactivo de Trabajo de Glucosa enzimática

- Solución de glucosa al 25 %

III. PROCEDIMIENTO:

El paciente debe ser preparado para esta prueba, indicándole una dieta diaria que

contenga 300 mg de hidratos de carbono durante los tres días anteriores de la

prueba.

En niños el período de ayuno varía; así en niños menores de cuatro meses hasta un

ayuno de 4 horas, entre cuatro y ocho meses hacen falta 6 horas de ayuno y entre

8 meses y 2 años ocho horas.

Obtener una muestra de sangre en ayunas.

Administrar por vía oral una solución de 25 por 100 de glucosa , de tal manera

que el paciente ingiere en total 1,75 g de glucosa por kilogramo de peso ( no es

necesario dar más de 100 g en total, si se desea, puede mejorarse el sabor de la

solución con jugo de limón.


Extraer muestra de sangre a los 30, 60, 90 y 120 minutos. Colectar las muestras

de orina a los 60 y 120 minutos.

Determinar la concentración de glucosa en cada una de las muestras de sangre

obtenidas.

En un papel milimetrado, graficar los resultados obtenidos de glicemia en cada

muestra versus tiempo.

Durante la prueba el paciente debe permanecer en estado de reposo y no debe

fumar ni tomar bebidas alcohólicas.

El índice de glicemia puede ser modificada por el ejercicio, fiebre, enfermedades

agudas y estados pos-traumáticos.

Valores normales de referencia

Suero o plasma: 70-110 mg/dl (Enzimático)

Determinación

Tiempo

Basal

minutos

º Control

30 minutos

2º Control

60 minutos

3º Control

120 minutos

Glucosa en

sangre (mg/dl

Esquematizar en un papel milimetrado y explicar los mecanismos de cada caso

IV.RESULTADOS

V.DISCUSIÓN


VI. CONCLUSIONES

VII.BIBLIOGRAFIA


PRÁCTICA Nº 06

REGULACIÓN HORMONAL DE LA GLUCOSA SANGUÍNEA

I. INTRODUCCION:

La concentración de glucosa en sangre es la resultante de dos factores: Tasa de

llegada de glucosa a la sangre b. Tasa de salida de glucosa de la sangre. La glucosa

sanguínea puede provenir directamente de diversas fuentes: glucógeno hepático,

aminoácidos otros carbohidratos y de la glucosa absorbida por el intestino.

En condiciones normales en ayunas, la glicemia es muy constante y tiene en el

hombre tiene un valor entre 70 a 110 mg /dL. Siendo en la sangre arterial mayor

que en la venosa. La glicemia se eleva después de la ingestión de un alimento rico

en hidratos de carbono para luego descender poco a poco de modo que una hora y

media o dos horas des pues de la ingestión vuelve el nivel de ayunas.

La glucosa de la sangre es distribuida a los tejidos pues es utilizada por todas las

células para funciones más especializadas por ejemplo glucogenesis lipogenesis y

otras. Para poder afrontar con eficiencia las variaciones mas o menos bruscas que

pueden afectar a la glucosa sanguínea, el organismo dispone de mecanismos

reguladores que de diferentes maneras aceleran o retardan la entrega o el retiro de

glucosa desde o hacia los tejidos .Los mecanismo reguladores son nerviosos y

endocrinos y es muy posible que los primeros actúan en realidad mediante

modificaciones en la entrega de hormonas por las glándulas de secreción interna de

modo que el mantenimiento de la glicemia en niveles normales depende del

equilibrio entre la producción y la utilización de la glucosa sanguínea cuya

sensibilidad esta regida en medida importante por el balance entre la insulina por un

lado y las hormonas suprarrenales y de la adenohipofisis, por el otro.

La insulina ejerce profundos efectos sobre el metabolismo de la glucosa y otros

nutrientes. Esta hormona es producida por las células beta de los islotes de

Largerhans del páncreas y es secretada en respuesta directa al incremento de

glucosa en la sangre. El efecto más importante de una deficiencia insulínica es el de

un niel sanguíneo de glucosa extremadamente elevado (híperglicemia), una

excesiva excreción de glucosa por la orina (glucosuria) y un reducido nivel de

glucógeno en el hígado. La administración de insulina va seguida de descenso de la

glicemia (hipoglicemia) cuya magnitud depende de la dosis administrada; el efecto

se debe fundamentalmente a que la hormona favorece la formación de glucógeno en

el hígado y en el músculo a la vez que acelera la oxidación de la glucosa en

diferentes tejidos. La insulina también favorece la conversión de los hidratos de

carbono en ácidos grasos y por otro lado inhibe la gluconeogenesis a partir de los

aminoácidos. Se explica así que la falta de insulina determina una hiperglicemia

que es el significado fundamental del cuadro denominado diabetes.

La adrenalina, hormona secretada por la médula suprarrenal, tiene acción

hiperglicemiante; ello se debe a que favorece la conversión de glucógeno en

glucosa (glucogenólisis) en el hígado, además al actuar en el músculo, por la

ausencia en este de la glucosa 6-fosfatasa, la glucólisis se realiza con la formación

de glucosa y glucógeno en la célula hepática por los mecanismos

gluconeogéneticos. El efecto glucogenolítico de la adrenalina es debido a que activa

a la fosforilasa.


La secreción de insulina y adrenalina parecen estar condicionadas en forma

importante por el nivel de glicemia, de manera que cada vez que se eleva la

glicemia se produce más insulina que tiende a aminorarla por otra parte, se aparece

hipoglicemia se segrega más adrenalina (y glucagon) que aceleran la regulación que

en forma coordinada debe realizar hígado.

El objetivo de la práctica es establecer la técnica de dosaje de glucosa en su sangre

y observar las variaciones de la glicemia como consecuencia de la administración

de insulina y adrenalina.

II. REACTIVOS:

- Kid de Glucosa enzimática

III. PROCEDIMIENTO:

A) Efecto de la insulina sobre la Glicemia

Animales de experimentación: conejos, que hayan sido alimentados entre

6-8 horas de iniciar el experimento. Es necesario determinar el peso de los

animales con la finalidad de calcular la cantidad de insulina a inyectar. (El

peso mínimo debe ser de 2,5 Kg)

Insulina: se utiliza la forma cristalizada libre de combinaciones que retardan

su acción. La dosis a inyectar es de 1 UI por Kg. de peso corporal.

Una jeringa de tuberculina la cual facilita la medida de solución de insulina.

PROCEDIMIENTO

a) Extraer una primera muestra de la vena marginal del lóbulo posterior de la oreja

con aguja # 21 en capilares heparinizados y sellar el extremo con plastilina.

b) Inyectar por vía subcutánea la cantidad calculada de insulina.

c) Luego extraer muestra de sangre a los 15, 30 y 60 minutos, lo que hace un total

de muestras posteriores a la inyección de insulina.

d) En cada una de las citadas muestras realizar la determinación de glucosa.

e) Con los resultados obtenidos construir una gráfica tomando las variaciones de la

glicemia en relación con el tiempo.

B.- EFECTO DE LA ADRENALINA SOBRE LA GLICEMIA.-

- Animales de experimentación: conejos, bien alimentados se determinará el peso

corporal de estos animales para calcular la cantidad de adrenalina a inyectar.

- Solución de adrenalina: La dosis que debe inyectarse es de 0.025 mg. por cada

1000 g de peso corporal, o sea 0.25 ml. de la solución.

PROCEDIMIENTO

a) Extraer una primera muestra de la vena marginal del lóbulo posterior de la oreja

con aguja # 21 en capilares heparinizados y sellar el extremo con plastilina.

b) Inyectar por vía subcutánea la cantidad adecuada de adrenalina según el peso del

animal.

c) Luego extraer muestras de sangre a los 15 , 30 y 60 minutos los que hacen tres

nuestras posteriores a la adrenalina.

d) En cada una de las citadas muestras realizar los dosajes de glucosa según

método enzimático.


e) Si es posible obtener orina, realizar la investigación de glucosa en ella.

f) Con los resultados obtenidos así obtenidos construir una gráfica tomando las

variaciones de la glicemia en relación con el tiempo. Comparar los resultados

C- DETERMINACIÓN DE GLUCOSA

Método Enzimático: Utilizar suero o plasma y seguir los mismos pasos que la práctica

anterior.

TAREAS

1.-Esqematizar la glucogénesis y glucogenólisis .

2. Esquematizar los mecanismos de acción de la insulina y adrenalina con sus respectivos

efectos en la glicemia.


IV.RESULTADOS

V.DISCUSIÓN

VI.CONCLUSIONES

VII.BIBLIOGRAFIA


PRÁCTICA Nº 07

Teoria Quimiosmótica

1.-Esquematizar y explicar según la teoría quimiosmótica la cadena transportadora de

electrones( CTE) y fosforilación oxidativa (FO).

2.-Explicar los mecanismo de todas las sustancias que modifica la CTE y FO


Cuestiones Bioenergética.Desarrollar el cuestionario

1. ¿Cómo se puede explicar, de acuerdo con la teoría quimiosmótica, que el 2,4-

dinitrofenol estimule indefinidamente el consumo de oxígeno en una suspensión de

mitocondrias?. ¿Por qué la inyección de 2,4-dinitrofenol a una rata provoca el aumento

inmediato de la temperatura corporal?.

2. Si añadimos oligomicina a una suspensión de mitocondrias activas se observa una

disminución del transporte electrónico y de la sítesis de ATP. Si después de este

tratamiento con oligomicina se añade 2,4-dinitrofenol, se produce un aumento de la

velocidad del transporte de electrones sin variación en la síntesis de ATP. ¿Qué inhibe

la oligomicina?. Da una explicación en términos de la teoría quimiosmótica.

3. El hongo Bipolaris maydis ocasiona grandes pérdidas en agricultura. Esta enfermedad

que causa en las plantas es debida a una toxina que hace que únicamente la

membranainterna mitocondrial resulte permeable a iones y a moléculas pequeñas.

a. ¿qué proceso afecta esta toxina?. Explícalo en un esquema.

4. El atractilósido, un inhibidor de la translocasa ADP/ATP, bloquea la fosforilación

oxidativa en mitocondrias, en cambio, en partículas submitocondriales no tiene este

efecto. Por otro lado, los desacopladores, los inhibidores del transporte de electrones y

la oligomicina afectan a los dos sistemas. Explica estas observaciones

5. ¿Cabe esperar que el NADH añadido a una suspensión de particulas

submitocondriales se oxide?. Y si se añade citocromo c ¿se oxidaría?.

6. Una deficiencia en cobre en una célula puede causar una alteración en la fosforilación

oxidativa, ¿por qué?.

7. El tejido adiposo marrón es una forma de tejido adiposo que se encuentra en la parte

superior de la espalda de muchos animales jóvenes. Tienen mayor cantidad de

mitocondrias este tejido para la síntesis de ATP acoplada a la oxidación del NADH.

¿Cuál puede ser la función del tejido adiposo marrón?.

8. Si una suspensión de mitocondrias se incuba con un exceso de oxígeno, succinato y

fosfato inorgánico:

a. ¿Qué cambio se produciría si se añaden 2 mmoles de ADP?

b. ¿Qué pasaría si se añade 2,4-dinitrofenol inmediatamente despues de la adición de

ADP?.

c. Una vez consumido todo el ADP añadido, al cabo de un cierto tiempo despues de

añadir 2,4-dinitrofenol, resulta que hay 2 mmoles de ADP y, en cambio, nada de ATP.

¿Explícalo.

9 . ¿Cómo evolucionará el consumo de oxígeno y la síntesis de ATP en una suspensión

de mitocondrias despues de los siguientes tratamientos?:

a. adición de antimicina

b. adición de oligomicina

c. adición de atractilosido

d. adición de 2,4-dinitrofenol despues de cada uno de los tratamientos anteriores

e. rotura de las membranas por choque hipotónico

10. La adición de DCCD (diciclohexilcarbodiimida) a suspensiones de mitocondrias

disminuye la velocidad de síntesis de ATP y también la del transporte electrónico. Si

añadimos 2,4-dinitrofenol sólo se restablece el transporte de electrones. Explica estos

resultados.


11. El síndrome de Luft está causado, posiblemente, por una alteración de lapermeabilidad

de la membrana mitocondrial interna a los protones. Explicad los síntomas observados en

esta enfermedad: hipertermia, respiración aumentada y debilidad muscular.

12. Las subunidades c del componente F canal iónico a través de la membrana interna.

Cuando alguno de los residuos esenciales de glutámico o de aspártico de la subunidad c

reacciona con diciclohexilcarbodiimida (DCCD) la subunidad es incapaz de participar en

el transporte de H+.

a. ¿Cómo afectará el DCCD al transporte electrónico mitocondrial?

b. ¿Qué se podría esperar que pasara cuando se le añade un desacoplador (DNF) a las

mitocondrias tratadas con DCCD?.

c. ¿Cómo se vería afectada la síntesis de ATP en los casos anteriores?. Razona la respuesta.


PRÁCTICA Nº 08

DIGESTIÓN DE LIPIDOS: EMULSIFICACION DE LAS GRASAS Y ACCIÓN DE

LA LIPASA PANCREÁTICA.

I. INTRODUCCION:

Los lípidos ingeridos con los alimentos no sufren modificaciones en la boca, pues

la saliva carece de enzimas que actúan sobre ellos. Al llegar al duodeno se mezclan

con la bilis y el jugo pancreático iniciándose el ataque hidrolítico de la lipasa

pancreática, que es activada por las sales biliares. La acción combinada de la lipasa

pancreática, una isomerasa y la lipasa intestinal dan como resultados ácidos grasos

libres monoglicéridos y glicerol formas en que son absorbidas. Como la grasa

neutra original y los ácidos grasos son insolubles, en agua es necesario,

mecanismos que permitan su emulsificación y facilitan su digestión y absorción,

ello se logra en el intestino por la presencia de las sales biliares y ácidos biliares.

Contenidos en la bilis; que a causa del acentuado poder que tienen para disminuir la

tensión superficial de las soluciones, favorecen la emulsión ayudando en gran parte

a la digestión y absorción de las grasas en el intestino y probablemente por

combinaciones análogas, intervengan en la absorción de la colesterina, vitaminas

liposolubles y otras sustancias.

Objetivos:

1. Demostrar el efecto emulsificante de las sales biliares sobre las grasas.

2. Demostrar el efecto que tienen las sales biliares sobre la lipasa pancreática.

3. Demostrar la acción que tiene la lipasa pancreática sobre los triglicéridos

contenidos en el aceite vegetal.

4. Demostrar la presencia de lipasa en el extracto pancreático.

II. PROCEDIMIENTO:

COMPONENTES/TUBOS I II III IV

Aceite vegetal

Emulsión de aceite vegetal

Buffer fosfato 0.1 M pH 8.06.0

Solución de sales biliares

Solución de extracto pancreático

3.0

-

4.0

-

-

3.0

-

4.0

2.0

-

-

3.0

2.0

-

2.0

-

3.0

-

2.0

2.0

a) Agitar fuertemente los tubos Dejar en reposo. Observar los resultados.

b) Clocar al baño de agua a 37°C durante 30', agitando de vez en cuando.

c) Al finalizar el tiempo de incubación, retirar los tubos del baño y agregar a cada uno IV

gotas de fenolftaleína, mezclar bien y titular.

d) Titulación: De una pipeta graduada de 1 ml. Dejar caer gota a gota NaOH 0.1 N en el

fondo de cada tubo del sistema, hasta la aparición de un color rosado tenue. Anotar la


cantidad de NaOH gastado en cada uno de ellos. La actividad lipásica está dada por los

mililitros de NaOH 0.1 N gastados sustrayendo el blanco respectivo.

e) Anotar los resultados.

1ml NaOH 0.1 N ……………………………….0.0283 mg de acido oleico

TAREAS:

Esquematizar la emulsión, digestión y absorción de los diferentes lípidos

III.RESULTADOS


IV.DISCUSIÓN

V.CONCLUSIONES

VII.BIBLIOGRAFIA


PRÁCTICA Nº 09

DETERMINACIÓN DE TRIGLICERIDOS EN SUERO

I. INTRODUCCION:

Los triglicéridos son lípidos absorbidos en la dieta y también producidos en forma

endógena a partir de los carbohidratos. Su medición es importante en el diagnóstico

y manejo de las hiperlipidemias. Estas enfermedades pueden tener origen genético

o ser secundarias a otras tales como nefrosis, diabetes mellitus y disfunciones

endocrinas.. El aumento de triglicéridos se ha identificado como un factor de riesgo

en enfermedades ateroscleróticas.

Fundamento del Método

El esquema de la reacción es el siguiente :

Triglicéridos -----Lipasa-----> glicerol + ácidos grasos

Glicerol + ATP ---glicerolcinasa---> glicerol-1-P + ADP

Glicerol-1-P + O2 + H2O—GPD------>DHAP+ H2O2

2 H2O2 + 4-AF + fenol-----POD------> quinonimina roja + 4 H2O

II. REACTIVOS PROVISTOS

Enzimas: viales con LPL, GK; GPO; POD; ATP y 4-AF.

Standard: 200mg/dl

Reactivo de Trigliceridos

III. PROCEDIMIENTO

a) Recolección: Previo ayuno de 12 a 14 horas. Obtener suero o plasma

b) Sustancias interferentes conocidas: la hemolisis intensa y la bilirrubina mayor

de 50 mg/ 1. produce resultados erróneos .

Métodos

En tres tubos de fotocolorímetro marcados B (Blanco), S (Standard) y D

(Desconocido), colocar

B S D

Muestra

Standard

Rvo de Trabjo

-

-

1.0 ml

--

10 ul

1.0 ml

10 ul

--

1.0 ml


505 nm. llevando a cero con el Blanco.

El color de reacción final es estable 2 horas por lo que la absorbancia debe ser

leída dentro de ese lapso.

200mg/dl.

Tg = D x F F=-------------

S


Esquematizar el transporte y oxidación de triglicéridos

IV.RESULTADOS


V.DISCUSIÓN

VII.CONCLUSIONES

VII.BIBLIOGRAFIA


PRÁCTICA Nº 10

DETERMINACIÓN DE COLESTEROL EN SANGRE

I. INTRODUCCION:

El colesterol es un compuesto típico de los organismos animales, pero en el reino

vegetal existen moléculas de estructura semejante. Se ha comprobado que son

precursores de la molécula del colesterol a partir de fragmentos pequeños, como el

acetato y aceto acetato. Las unidades de "isopreno" que proviene de éstos, son

elementos formadores importantes en animales y vegetales. En los vegetales estas

unidades se condensan y forman terpenos, carotenoides y caucho. En los animales

la condensación produce escualeno hidrocarburo no saturado precursor del

colesterol.

En el hombre el intestino es la fuente principal del colesterol del plasma, en éste se

encuentra en forma libre o combinada con ácidos grasos, en la forma de esteres del

colesterol 75 %, ambos en asociación con lipopr o teínas. Los tejidos extrahepáticos

sintetizan su propio colesterol pero hay un equilibrio importante entre el colesterol

del plasma y el de los tejidos en el ser humano.

En el hombre el colesterol plasmático total es de 150 -250 mg. por 100 mi.,

elevándose con la edad. La lesión hepática acentuada a menudo causa una

disminución en la concentración de colesterol incluyendo las fracciones libres y

esterificadas. Se encuentra en niveles elevados (hipercolesterolemia) en la

ateroesclerosis, de diabetes mellitus, en enfermedades obstructivas del árbol biliar,

en el hipotiroidismo.

II. REACTIVOS:

Standard: sol. de colesterol 2 g/1.

CHOD/POD: sol. de colesterol oxidasa (60 U/1) y peroxidasa (4000 U/1)

Reactivo 4-AF.: sol. de 4-aminofenazona 25 mM en Buffers Tris 0.92 M.

Reactivo Fenol: sol. de fenol 55 mmol/L.

Reactivo de Trabajo: de acuerdo al volumen de trabajo, colocar en una probeta

50 partes de agua destilada, 5 partes de Reactivo de 4-AF, 5 partes de Reactivo

de Fenol y llevar a 100 partes con agua destilada. Agregar 2 partes de

CHOD/POD previamente homogenizadas. Mezclar por inversión, sin agitar.

Rotular y fechar.

Pueden prepararse distintas cantidades respetando las proporciones. Se debe

agregar los reactivos según el orden y mezclar suavemente. Mantener en

refrigerador (2-10°C) y en frasco color caramelo es estable un mes a partir de la

fecha de su preparación.

III. PROCEDIMIENTO:

2. MÉTODO ENZIMÁTICO

Fundamento: El colesterol es oxidado enzimáticamente por la colesterol oxidasa

previa hidrólisis enzimática de los esteres mediante una lipasa de origen fungal.

El agua oxigenada en presencia de peroxidasa (POD; donador: hidrógeno-

peróxido óxidorreductasa); produce la copulación oxidativa del fenol con ía 4-


amino fenazona (4-AF) dando lugar a la formación del fenol con la 4-

aminofenazona(4-AF) y forma un cromógeno rojo-cereza con absorbancia

máxima a 505 nm. La reacción es :

Esteres de colesterol Lipasa ----> colesterol + ácidos grasos

Colesterol + O2 + H2O GOD ----> colester-3-ona + H2O2

2 H2O2 + 4-AF + fenol POD 4->(p-benzQquinona-monoimino)-fenazona+4H2O

Mezcla

Recolección: se debe obtener suero o plasma de la manera usual. También es

posible realizar la determinación en líquido cefalorraquídeo.

Aditivos: en caso de que la muestra a emplear sea plasma, se recomienda el uso

de Anticoagulante G de Wiener lab. para su obtención

Sustancias interferentes conocidas: los sueros o plasmas con hemolisis visible

o intensa producen valores falsamente aumentados.. En sueros hiperlipémicos

hay turbidez entonces diluir el volumen de reacción a 1/2 o a 1/3 con blanco de

reactivos y multiplicar el resultado por el factor de lución. No interferencias con

bilirrubina

Método

En tres tubos marcados B (Blanco), S (Standard) y P (Problema), colocar:

B S P

Estándar o Patrón - 10 ul. -

Muestra de Suero - - 10 ul.

Reactivo de Trabajo 1,0 ml 1,0 ml. 1,0 ml.


505 nm. llevando a cero con el Blanco. El color de reacción final es estable 2

horas por lo que la absorbancia debe ser leída dentro de ese lapso.

CÁLCULOS:

Colesterol g/1 = D x f. f = S

dlmg /200

VALORES NORMALES:

Hasta 150 mg/dl


1.-Esquematizar el transporte y regulación de la síntesis de colesterol

2.-Esquematizar el perfil lipídico y el factor de riesgo de infarto de una persona

normal.


IV.RESULTADOS

V.DISCUSIÓN

VI.CONCLUSIONES

VII.BIBLIOGRAFIA


PRACTICA Nº 11

DETERMINACIÓN DE UREA EN SANGRE

I. INTRODUCCION:

Es el principal producto final del catabolismo proteico y es excretado en la orina en

mayor cantidad que cualquier otra sustancia o sea que es la forma bajo la cual se

elimina por la orina la mayor parte del nitrógeno de las proteínas, dada su gran

difusibilidad puede decirse que se distribuye, salvo raras excepciones, en todos los

fluidos del organismo, manteniendo una concentración muy similar a la de la

sangre que es vehículo que la transporta. Su contenido y las variaciones normales

dependen de: a) el contenido proteico de la dieta y b) De la diuresis (la urea es un

diurético natural y ejerce efecto continuo sobre el flujo de la orina). Cualquier

alteración de la función renal origina un aumento en la concentración de la urea

sanguínea.

La urea constituye la fracción de nitrógeno no proteico más importante en la

mayoría de los líquidos biológicos. En el hombre es el principal producto final del

metabolismo proteico. Se produce en el hígado y es excretada por la orina a través

de los riñones.

Una elevación de la concentración sérica de urea? se interpreta generalmente como

una posible disfunción renal. Sin embargo, no debe dejarse de lado el hecho de que

los valores séricos de urea se encuentran íntimamente relacionados con la dieta y el

metabolismo proteico, por lo que cualquier alteración en estas variables se traducirá

en un cambio de la concentración de urea en suero.

La determinación de la urea se realiza por reacciones de descomposición: la urea

por acción de diversos agentes: calor, reactivos químicos (Ac. Nitroso) y enzimas,

es susceptible de descomponerse, originando la formación de ciertos compuestos

que se utilizan en su valoración. Así la enzima ureasa (que se encuentra en la soya)

acelera su conversión en carbonato de amonio. Se ha supuesto que la acción es de

carácter hidrolítico y se representa por:

CO(NH2)2 + UREASA 2 H2O ---> CO3 + (NH4)2

La presente práctica tiene como finalidad:

Determinar las concentraciones séricas de la urea

Evaluar e interpretar los resultados

II. REACTIVOS Y EQUIPOS:

Reactivo 1: contiene fenol 532mM, niüoferricianuro de sodio 0,85 mM y

etilén-bis-ditiocarbamato manganoso 0,3 mM.

Reactivo 2: contiene Hipoclorito de sodio concentrado 36,6 mM y p-

toluén sulfoncloramida 0,12 mM en Hidróxido de sodio 0,625 M.

Standard : solución de urea 0.60 g /1. - Ureasa: Enzima.

Espectrofotómetro RA-50* spcctronic 20, Refrigeradora.


III. PROCEDIMIENTO:

A) TÉCNICA EN SUERO O PLASMA

En tres tubos marcados B (Blanco), S (Standard) y P (Problema). Colocar una o

dos gotas de agua y agregar:

Tubos de ensayo B S P

Estándar -- 10 ul --

Suero o plasma -- -- 10 ul

Ureasa+ Reactivo 1 1 ml 1ml 1ml

Mezclar por agitación suave e incubar a 37°C por 5 minutos

Reactivo 2 1 ml 1ml 1 ml

Mezclar por agitación suave e incubar a 37°C por 5 minutos y leer a 570 nm

CÁLCULO DE LOS RESULTADOS

Suero o plasma: Urea ( g /l) = D x Factor Factor = 0,60 g /1

S

VALORES DE REFERENCIA

Suero o plasma: los valores normales de urea entre 0,10 g/l -- 0,45 g/1.

Esquematizar las reacciones de transaminación, desaminación oxidativa y ciclo de la urea


IV.RESULTADOS

V.DISCUSIÓN

VII.CONCLUSIONES

VII.BIBLIOGRAFIA


PRACTICA Nº 12

DETERMINACIÓN DE ACIDO ÚRICO

I. INTRODUCCION:

El ácido úrico es el producto final del catabolismo de los núcleo-proteínas,

específicamente de los nucleósidos Adenosina y Guanosina compuestos que tienen

en su constitución a la Adenina y a la Guanina que son derivados púricos y que

representan las bases nitrogenadas púricas de los Ácidos ribonucleicos y

desoxirribonucleicos.

El ácido úrico, en solución acuosa se presenta bajo dos formas: Lactámica y

Lactímico, según se encuentra los carbones 2, 6 y 8 unidos a la función cetónica o

función alcohólica por migración de los hidrógenos a los grupos carboxilos

adyacentes, se piensa que estas formas estarían en equilibrio y que el predominio de

una sobre la otra depende de la concentración de los iones hidrógeno del medio, así

por ejemplo. Si la acidez aumenta, predomina la forma Lactámica; en cambio, la

forma Lactímica es más soluble a un pH 7.4 que la forma Lactámica, es así, que el

pH fisiológico el 9 % del contenido de ácido úrico del organismo está en forma de

urato de sodio.

Habitualmente la concentración de ácido úrico en suero varía de un individuo a otro

de acuerdo a diversos factores tales como: sexo, dieta, origen étnico, constitución

genética, embarazo. Los niveles anormales de ácido úrico en suero son índice de

desorden en el metabolismo de las sustancias que lo originan o de defectos en su

eliminación.

Los valores normales en suero oscilan entre 2 A 4 mg. 5 pudiéndose encontrar

valores elevados en la gota, en enfermedades con grandes destrucciones de material

protoplasmático del tipo de la leucemias, al final de procesos infecciosos como la

pulmonía, en disminución de la función renal o después de la ingestión de

alimentos ricos en nucleoproteínas por ejemplo hígado, riñones.

Los niveles de ácido úrico en orina son en general un reflejo de la descomposición

de ácido nucleico endógeno y de la cantidad de purinas ingeridas en la dieta,

amenos que la hiperuricemia se deba a disminución de la eliminación de ácido

úrico, en genera! va acompañada de aumento de los niveles de ácido úrico en orina.

Normalmente se elimina 250 a 750 mg por 24 horas en una dieta media en purinas,

más de 1 gm. Por 24 horas con dieta rica en purinas.

En general los procedimientos empleados para el dosaje de ácido se agrupa en dos:

a) Enzimáticos: Cuando se utiliza la Uricasa (enzima específica para el ácido

úrico).

b) Químicos: Que a su vez pueden ser directos e indirectos. Se utiliza el de Folin

Denis.

El objetivo de la práctica es demostrar el catabolismo de las nucleoproteínas

medíante la determinación de ácido úrico en sangre.

II. REACTIVOS Y EQUIPOS:

Standard: Sol. Ácido úrico 100 mg/1 - Uricasa: (UOD) mayor o igual a 3 U/1

Reactivo 4-AF/POD contiene 100 U de POD, 12,5mM de Buífer fosfatos pH

7,3 y 3 mM de 4-AF.


III. PROCEDIMIENTO:

Método Enzimático: El ácido úrico es oxidado por la uricasa a alantoína y

peróxido de hidrógeno. La reacción es la siguiente:

Ácido úrico -H O: + 2 H2O UOD alantoína + H2O 2 + CO2

2 H2O2 + 4-AF + clorofenol POD quinonimina roja + 4 H2O

COMPONENTES/TUBOS B S P

Muestra (suero .0 plasma) 20ul

Standard 20ul

Reactivo de trabajo l.0ml l.0ml l.0ml

Incubar 15 minutos en baño de agua a 37 ° C.

Leer en el espectrofotómetro a 505 nm o fotocolorímetro con filtro verde (490 -530

nm) llevando a cero con el blanco. El color de reacción final es estable 45 minutos

por lo que la absorbancia debe ser leída dentro de ese lapso.

CÁLCULOS:

100,0 mg/1

Ácido úrico mg/l= D x factor f = S

VALORES NORMALES

Hombres : 25 a 60 mg/1 - Mujeres : 20 a 50 mg/1

Esquematizar la formación y regulación de ácido úrico.


IV.RESULTADOS

V.DISCUSIÓN

VI.CONCLUSIONES

VII.BIBLIOGRAFIA

GUIA DE PRACTICA DE BIOQUIMICA I

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