practica bioquimica 2013.doc

7/22/2019 practica bioquimica 2013.doc

1/63

Universidad Nacional

FEDERICO VILLARREAL

LABORATORIO DE BIOQUIMICA I

Lima, 2013


2/63

CURSO DE BIOQUIMICA

Ing.. Marleni Bautista Espinoza

CONTENIDO

ITEM LABORATORIOS Pgina

01 Reconocimiento del Laboratorio de Bioqumica

02 Preparacin de soluciones cidos y bases, medicin de Ph. 06

03 Propiedades fsico qumicas del agua 13

04 Preparacin de soluciones isotnicas, hipotnicas e hipertnicas. 16

05 Reconocimiento de protenas

06 Extraccin de la casena y determinacin del punto isoelctrico

07 Reconocimiento de la protena en la clara de huevo

08 Reconocimiento de carbohidratos

09 Reconocimiento e hidrlisis del almidn

10 Reconocimiento de lpidos11 Extraccin de ADN

12 Reconocimiento del ARN en el huevo

13 Verificacin de vitaminas en algunos alimentos.

14 Rutas metablicas

15 Fermentacin anaerbica

16 Fermentacin aerbica

17 Reaccin de mauller

18 Oxidacin redox

Pgina2


3/63

CURSO DE BIOQUIMICA


OBJETIVO GENERAL DEL CURSO

Al trmino de las prcticas de este manual, el alumno estar capacitado para identificar las

diferentes actividades realizadas en la qumica general, as como algunos conceptos de la

qumica orgnica, como requisito al estudio de la bioqumica.

ADVERTENCIAS SOBRE EXPERIMENTOS AL ALUMNO

1. El laboratorio es un lugar donde se desarrollan prcticas elegidas por el profesor para

confirmar y reafirmar los conocimientos tericos impartidos en el saln de clase.

2. Al realizar cada prctica deben seguirse las instrucciones, observar y registrar lo que

sucede.

3. No deber cambiar los reactivos de mesa, ya que los equipos de soluciones que son

necesarios para cada uno de los anlisis sern puestos completos en la mesa de

trabajo.

4. Se asesorar y resolvern las preguntas durante el anlisis de cada grupo.

5. Es importante sealar la necesidad de seguir todos los pasos indicados en cada

prctica para obtener los resultados correctos de cada experimento. En todas las

prcticas debern anotarse las observaciones, los resultados y las conclusiones.

6. En el caso de que el experimento no resultara como est planeado, el alumno deber

investigar, consultar y agotar todas las posibilidades para lograr un desarrollo correcto.

Si no se lograra el objetivo de la prctica, debe preguntar al docente, l le explicara en

donde est la falla y la manera de corregirla.

MEDIDAS DE SEGURIDAD EN UN LABORATORIO.

1. No deben efectuarse experimentos no autorizados, a menos que estn supervisados

por el docente.

2. Cualquier accidente debe ser notificado de inmediato al docente o al responsable del

laboratorio

3. Uso indispensable de bata como medida de proteccin.4. No pipete los cidos, puede llegar a ingerirlos

Pgina3


4/63

CURSO DE BIOQUIMICA


5. Lea cuidadosamente la etiqueta del frasco hasta estar seguro de que es el reactivo que

necesita, no utilice reactivos que estn en frascos sin etiqueta.

6. Despus de que utilice un reactivo tenga la precaucin de cerrar buen el frasco.

7. Los tubos y varillas de vidrio y objetos calientes deben colocarse sobre tela de asbesto

y en un lugar no muy accesible de la mesa de trabajo, para evitar quemaduras as

mismo o a un compaero.

8. Los tubos de ensaye calientes, con lquido o no, deben colocarse en una gradilla de

alambre o dentro de un vaso de precipitados.

9. Cuando se calientan sustancias contenidas en un tubo de ensaye, no se debe apuntarla boca del tubo al compaero o a s mismo, ya que pueden presentarse proyecciones

del liquido caliente

10.La dilucin de cidos concentrados debe hacerse de la siguiente manera:

Utilizar recipientes de pared delgada.

Aadir lentamente el cido al agua resbalndolo por las paredes del recipiente, al

mismo tiempo que se agita suavemente. NUNCA AADIR AGUA AL CIDO, ya que

puede formarse vapor con violencia explosiva.

Si el recipiente en el que se hace la dilucin se calentara demasiado, interrumpir deinmediato y continuar la operacin en bao de agua o hielo.

11.No se debe probar ninguna sustancia. Si algn reactivo se ingiere por accidente, se

notificar de inmediato al docente.

12.No manejar cristalera u otros objetos con las manos desnudas, si no se tiene la certeza

de que estn fros.

13.No se debe oler directamente una sustancia, sino que sus vapores deben abanicarse

con la mano hacia la nariz.

14. No tirar o arrojar sustancias qumicas, sobre nadantes del experimento o no, al

desage. En cada prctica deber preguntar al profesor sobre los productos que

pueden arrojar al desage para evitar la contaminacin de ros y lagunas.

15. Cuando en una reaccin se desprendan gases txicos o se evaporen cido, la

operacin deber hacerse bajo una campana de extraccin.

16. Los frascos que contengan los reactivos a emplear en la prctica deben mantenerse

tapados mientras no se usen.

17. No trasladar varios objetos de vidrio al mismo tiempo.

18. No ingerir alimentos ni fumar dentro del laboratorio.

19. Se deber mantener una adecuada disciplina durante la estancia en el

Pgina4


5/63

CURSO DE BIOQUIMICA


laboratorio.

20. Estar atento a las instrucciones del docente.

SUSTANCIAS QUE DEBEN USARSE CON PRECAUCIN

Todas las que se utilizan en las operaciones y reacciones en el laboratorio son

potencialmente peligrosas por los que, para evitar accidentes, debern trabajarse con

cautela y normar el comportamiento en el laboratorio por las exigencias de la

seguridad personal y del grupo que se encuentre realizando una prctica.

Nmerosas sustancias orgnicas e inorgnicas son corrosivas o se absorben fcilmente

por la piel, produciendo intoxicaciones o dermatitis, por lo que se ha de evitar su contacto

directo; si este ocurriera, deber lavarse inmediatamente con abundante agua la parte

afectada.

RECOMENDACIONES PARA EL MANEJO DE ALGUNAS SUSTANCIAS ESPECFICAS.

cido Fluorhdrico (HF):

Causa quemaduras de accin retardada en la piel, en contacto con las uas causa fuertes

dolores, y slo si se atiende a tiempo se puede evitar la destruccin de los tejidos incluso el

seo.

cido Ntrico (HNO3):

Este cido daa permanentemente los ojos en unos cuantos segundos y es sumamente

corrosivo en contacto con la piel, produciendo quemaduras, mancha las manos de amarillopor accin sobre las protenas.

cidos Sulfrico (H2SO4), Fosfrico (H3PO4) y Clorhdrico (HCl)

Las soluciones concentradas de estos cidos lesionan rpidamente la piel y los tejidos

internos. Sus quemaduras tardan en sanar y pueden dejar cicatrices. Los accidentes ms

frecuentes se producen por salpicaduras y quemaduras al pipetearlos directamente con la

boca.

QU HACER EN CASO DE ACCIDENTE?

Pgina5


6/63

CURSO DE BIOQUIMICA


En caso de accidente en el laboratorio, hay que comunicarlo inmediatamente al docente.

Salpicaduras por cidos y lcalis:

Lavarse inmediatamente y con abundante agua la parte afectada. Si la quemadura fuera en

lo ojos, despus de lavado, acudir al servicio medico.

Si la salpicadura fuera extensa, llevar al lesionado al chorro de la regadera inmediatamente

y acudir despus al servicio medico.

Quemaduras por objetos, lquidos o vapores calientes:

Aplicar pomada para quemaduras o pasta dental en la parte afectada. Es caso necesario,

proteger la piel con gasa y acudir al servicio medico.

Pgina6


7/63

CURSO DE BIOQUIMICA


LABORATORIO N 01

PREPARACION DE SOLUCIONES ACIDOS Y BASES, MEDICION

DE Ph

1. OBJETIVO:

Identificar e evaluar las condiciones de disociacin y asociacin de las diferentes

soluciones utilizadas en los laboratorios.

Conocer y expresar las diferentes escalas de medicin de cidos bases en las

sustancias.

Reconocer los diferentes mtodos de medicin, del potencial hidrogeno.

2. MARCO TEORICO

EL pH se define como el logaritmo negativo de la concentracin de iones hidronio (H+)

pH = -log [H+]

El pH es exclusivo de soluciones acuosas, que contienen tantos iones hidronios H3O +

como iones oxidrios OH-.

El ph es una expresin de equilibrio que ha sido calculada a 25 C a base del valor de

Ki= 1x10-14 (Ki constante o producto de ionizacin del agua pura). Por lo cual el valor de

este vara por la temperatura.

Ionizacion del agua:

Es la disociacin inica de las molculas en un electrolito es una reaccin reversible.

H2O + H2O H3O+ + OH -

H2O [H+] + [OH-]

Ki= [H+] + [OH-]

H2O

La disociacin del agua pura cambia muy poco por ello es indiferente (55.5 gr. / litro).

Ki= [H+] + [OH-]

Pgina7


8/63

CURSO DE BIOQUIMICA


[H+] = [H3O+] = [OH-] = 10-7 mol7lt.

pH = -log [H+] = -log [H3O+]

Potencial hidrogeno= -log [H+]

Potencial Hidroxido = -log [OH-]

pH + pOH = 14

Relacin de concentraciones H+ , pH , pOH

H+ Moles / litroOH-

moles / litropH pOH

100 1 10-14 0 1410-1 0.1 10-13 1 1210-3 0.001 10-11 3 1110-5 0.00001 10-9 5 910-7 0.0000001 10-7 7 7

10-9 0.000000001 10-9 9 510-11 0.00000000001 10-11 11 310-13 0.0000000000001 10-13 13 110-14 0.00000000000001 10-14 14 0

Ejemplo calcular el pH de HCL

HCL H+ + CL-

1 mol de HCL se disocia formando 1 mol de iones H+ = H3O+

[H+] = 1 mol / lt.

pH = -log [H+]

pH = -log [1] = 0

pOH = 14

Ejemplo calcular el pH de NaOH

Pgina8


9/63

CURSO DE BIOQUIMICA


NaOH Na+ + OH-

1 mol de NaOH se disocia formando 1 mol de iones OH-

[OH+] = 1 mol / lt.

pOH = -log [H+]

pOH = -log [1] = 0

pH = 14

De forma general

AH A+ + H-

Acido1 + Base2 Acido2 + Base1

Base 1 que resulta del Acido 1 se dice que es la base conjugada del acido

Acido2 que resulta de la base 2 es el acido conjugado a la base 2

Neutralizacin; se dice cuando se ha llegado a un punto neutral entre una acido y una

base, donde carecen de propiedades salvo lo referido a la conductividad elctrica.

Hay neutralizacin si el total de la base, reacciona estequiometricamente con un

numero igual de molculas del acido. Las soluciones de acido y base que han

reaccionado, son inica y la solucin resultante continua siendo inica De all que la

reacciones tienen mas sentido y mayor proximidad a la realidad se les expresa en

forma inica.

La reaccin de neutralizacin es el encuentro entre ambos iones, entonces la

neutralizacin acido-base la definimos como la reaccin de igual numero de moles de

iones [H+] + [OH-]

TITULACION (acidez):

Anlisis volumtrico que consiste en determinar el volumen de una solucin de

concentracin desconocido que es qumicamente equivalente a un volumen dado de

Pgina9


10/63

CURSO DE BIOQUIMICA


una solucin de concentracin conocida llamada Standard primario, se adiciona la

disolucin Standard desde una bureta graduada hasta que se ha aadido la cantidad

de reactivo equivalente (punto equivalente) a la sustancia que se determina. El punto

de equivalente o punto final terico se observa con un reactivo indicador.

Al completar la reaccin entre la solucin Standard y la sustancia valorada, el indicador

cambia o vira de color o forma un precipitado. El punto en que esto ocurre se llama

punto final de la titilacin y no necesariamente coincide con el punto final terico,

aunque esta muy cercano.

La acidez de un producto natural se considera como su contenido en sustancias cidas.

Habitualmente se determina mediante tcnicas de valoracin o titulacin cido-base y

se puede expresar como la cantidad equivalente de un cido caracterstico de ese

producto natural.

ndice de acidez: Expresa el nmero de miligramos de base necesarios para

neutralizar 1 gramo de sustancia problema.

% de acidez = Gx N x meq. De acido x 100

g. muestra

G= gasto de la solucin de NaOH

N = normalidad de la solucin NaOH

Meq. Del acido= mili equivalente del acido en que se expresa la acidez (acido

predominante)

g. muestra= peso de la muestra a analizar.

INDICADORES

Son cidos orgnicos o bases orgnicas dbiles que presentan distinto color segn se

encuentren en su forma disociada o no disociada, lo cual depender del pH de la

solucin en que se encuentren, dado que el grupo disociable de estos puede ser acido

o base.

INDICADORCAMBIO DE COLOR INTERVALO DE

pHacido BaseAzul de timol rojo Amarillo 1.2 2.8Azul de bromofenol amarillo Azu 3.0 4.6Anaranjado de metilo rojo Amarillo 3.1 4.4

Pgina10


11/63

CURSO DE BIOQUIMICA


INDICADOR

CAMBIO DE COLOR INTERVALO DE

pHacido BaseVerde de bromocresol amarillo Azul 3.8 5.4Rojo de metilo rojo Amarillo 4.2 6.2Tornasol rojo Azul 4.5 8.3Azul de bromotimol amarillo Azul 6.0 7.6Rojo de fenol amarillo Rojo 6.8 8.4Fenoltaleina Incoloro Rojo 8.3 10.0Amarillo de alizarina Amarillo violeta 10.1 12.01,3,5 trinitro benceno incoloro anaranjado 12.0 14.0

POTENCIOMETRIAEs la tcnica as conveniente y confiable APRA medir el pH de las soluciones y fluidos

biolgico, este mtodo utiliza el Potencimetro (pHmetro) como instrumento para medir

el pH de las soluciones

Estas tcnicas potencio mtricas son importante ya que nos pueden proporcionar

medidas de actividad, concentracin y coeficientes de actividad de muchas soluciones.

La potenciometria esta basada en la medida de la diferencia de potencial (voltaje) entre

dos electrodos sumergidos en una solucin, bajo condiciones de equilibrio corriente

cero. Se opera en un rango de concentraciones de 10 -8 a 10-3 moles/lt. Y las medidasson hechas en volmenes muy pequeos de muestra.

3. MATERIALES Y EQUIPOS

Equipos materiales Reactivos

pHmetro

Bureta

Soporte universal

Balanza analitica

Vagetas

Papel pHmetro

Papel de tonasol

Pipeta de 10 ml.

Vasos precipitados 250 ml.

Vasos precipitados de 100 ml.

Matraz de 100 ml

Fiolas 100 ml.

NaOH 0.1 N

HCL 0.1 N

KOH 0.1 N

Fenoltaleina

Anaranjado de metilo

Mezcla 1:1 de etanol y eter dietlico

neutralizada exactamente con KOH 0,1N

Agua destilada

Aceite

Leche vinagre

Pgina11


12/63

CURSO DE BIOQUIMICA


4. METODOLOGIA

El alumno tendr que aplicar el mtodo experimental para el desarrollo de esta practica

as como el mtodo analtico para obtener los resultados citados.

5. DESCRIPCION DE LA PRACTICA

Neutralizacin de un acido:

Titular 10 ml. HCL a 0.1 N con NaOH a 0.1 N (tomar como indicador fenoltaleina),

anotar las observaciones

Neutralizacin de una base:

Titular 10 ml. NaOH a 0.1 N con HCL a 0.1 N (tomar como indicador Anaranjado de

metilo), anotar las observaciones

Medir la acidez pH de

1.- Aceite:

-Pesar con una aproximacin de 0,01 g entre 10 g de aceite en un erlenmeyer,

previamente tarado.

-Aadir 50 ml de la mezcla disolvente (alcohol-ter etlico) previamente neutralizada

con KOH 0,01 y agitar.

-Aadir 5 ml de indicador fenolftalena.

-Cargar la bureta con la disolucin de KOH 0,5 N 0,1N, segn se indique. Enrasar y

comenzar la valoracin, agitando continuamente, hasta viraje del indicador.

Anotar los ml de KOH gastados.

2.- Leche:

-Tomar 10 ml de leche exactamente medidos con una pipeta aforada y verterlos en un

matraz erlenmeyer.

-Aadir con una probeta unos 25 ml de agua destilada

-Aadir unas gotas de la disolucin de fenolftalena.

-Valorar NaOH 0.1N segn el mismo procedimiento usado en la valoracin del aceite

hasta viraje del indicador (coloracin rosa persistente durante unos 20 segundos).

3.- Vinagre:

Pgina12


13/63

CURSO DE BIOQUIMICA


-Medir exactamente 2 ml de vinagre, con una pipeta aforada de 2 mL o con una

graduada de 5 ml. y verterlos en un erlenmeyer.

-Diluir con unos 25 ml de agua destilada medidos en una probeta.

-Aadir 2 o 3 gotas de la disolucin de fenolftalena.

-Valorar con NaOH 0,1N hasta el punto final indicado por el viraje del indicador.

Medir el pH de aceite, leche, vinagre.

6. RESULTADOS Y DISCUSION

Presentar lo reportes de las diferentes practicas de la siguiente manera.

TITULACION DE UN ACIDO TITULACION DE UNA BASE

Gasto de base Gasto de acidopH de la solucin pH de la solucin

Productos pH Acidez

AceiteLecheVinagre

7. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

El pH de todo sustancia es identificado en funcin a su estado acido o base de los

mismos, de la practica se concluye que el estado de alcalinidad o acides de toda

sustancia depender de su composicin y para su medicin exacta se requiere de unequipo exclusivo, as mismo la acidez en un indicativo indirecto para el calculo del pH.

8. BIBLIOGRAFIA

Qumica General: Frederick R, Longo

Traductor; Orlando Guerrero; Libros McGraw-Hill

9. CUESTIONARIO

1. Existe alguna correlacin entre el pH de los alimentos y la cantidad decarbohidratos, lpidos, protenas en el mismo. Explicar?

2. Medir el pH del siguiente problema:

Pgina13


14/63

CURSO DE BIOQUIMICA


3. Se disolvieron 20 ml. De acido actico (CH3COOC) 0.5 N hasta 100 ml. Y la

solucin resultante se titulo con NaOH 0.2 N calcular el pH

a.- Antes de aadir la base

b.- Despus de aadir 8 ml. De NaOH

c.- en el punto de equivalencia despus de aadir 20ml de NaOH

d.- Cuando se aadi un total de 30 ml. De NAOH

e.- Trazar la curva correspondiente (pH-titilacin)

Pgina14


15/63

CURSO DE BIOQUIMICA


LABORATORIO N 02

PROPIEDADES FISICO QUIMICAS DEL AGUA

1. OBJETIVO

Comprender la relacin existente entre las propiedades fsicas y qumicas del agua con

las fuerzas de interaccin intermolecular.

Observar el comportamiento de dos grasas distintas en diferentes medios acuosos para

identificar las propiedades fisicoqumicas del agua.

2. MARCO TEORICO

Cuando un compuesto soluble en agua es colocado en sta, desaparece rpidamente

en el lquido. Por el contrario, si no es soluble, entonces permanece donde se le coloca.

Si posee una solubilidad intermedia, entonces se puede dispersar sobre la superficie

del agua hasta que se vuelve invisiblemente delgada.

Lo que determina el comportamiento de un compuesto en una solucin son las

complejas interacciones de tipo elctrico en las superficies de las molculas.

Por ejemplo, la solubilidad de un compuesto qumico en agua depende de la magnitud

de las interacciones de unin entre sus molculas y las del agua. El grado de

solubilidad resulta de una competencia entre los enlaces que mantienen a cada

molcula unida y las oportunidades alternas de unirse con la otra sustancia.

Los compuestos orgnicos varan grandemente en su solubilidad en agua. La vida en la

Tierra no existira sin esta variabilidad. Los compuestos orgnicos insolubles tienen

grupos componentes de tomos que forman pocas uniones (ninguna en algunos casos)

con molculas de agua.

Se dice que tales grupos son hidrofbicos, al igual que la molcula que tenga tales

grupos. Este trmino es confuso ya que implica una repulsin entre la molcula (o el

grupo) y el agua. El efecto no surge de la repulsin sino del hecho de que la unin es

tan dbil que la cohesin del agua mantiene afuera al compuesto hidrofbico.

Pgina15


16/63

CURSO DE BIOQUIMICA


Sin embargo, muchas molculas orgnicas son parcialmente solubles en agua debido a

que por lo menos algunos de sus grupos atmicos se unen al agua. Mientras ms de

estos grupos tenga el compuesto, ser ms soluble.



Balanza

Piceta

Placas petri

Esptula

Manguera de hule

Matraces volumtricos

Mechero

Pipetas

Micropipeta

Vasos de precipitado de 50 ml

Vaso de precipitado de 100 ml

Acetona.

cido clorhdrico concentrado.

Aceite de oliva. (cido oleico).

Agua destilada.

Bicarbonato de sodio.

Hidrxido de amonio.

Hidrxido de sodio.

Petrolato lquido. (Mezcla de

hidrocarburos del petrleo).

Sudn III.

4. METODOLOGIA

El alumno tendr que aplicar el mtodo experimental para el desarrollo de esta prctica



Antes de la prctica se debe preparar las siguientes soluciones:

Preparacin de soluciones:

1.- Prepare 100 ml de bicarbonato de sodio 20 % en agua.

2.- Prepare 25 ml de hidrxido de sodio 0.1 N en agua.

3.- Prepare 25 ml de cido clorhdrico 0.1 N en agua.

4.- Prepare 25 ml de hidroxido de amonio 0.1 N en agua.

Pgina16


17/63

CURSO DE BIOQUIMICA


Comportamiento del aceite mineral.

Vierta en una placa petri como se describe a continuacin:

1.- Vierta 10 ml de agua

2.- Vierta 10 ml de solucin de HCl .

3.- Vierta 10 ml de solucin de NaOH

A cada placa agregue una gota de aceite mineral con una pipeta. Observe.

Aada unas gotas ms y observe.

Mantenga las muestras en observacin durante 30 minutos.

Comportamiento del cido oleico (aceite de oliva).

1.- Vierta 10 ml de agua

2.- Vierta 10 ml de solucin de HCl .

3.- Vierta 10 ml de solucin de NaOH

4.- Vierta 10 ml de solucin de hidroxido de amonio

A cada placa agregue una gota de aceite de oliva coloreado con SUDAN III con una

pipeta Pasteur. Observe.

Aada unas gotas ms y observe.

Mantenga las muestras en observacin durante 30 minutos.

Lave y caliente al rojo la punta de un clip o pinza, posteriormente colocarlo en una

placa con agua adicionar una pequea gota de cido oleico. Observe.

Coloque una segunda gota sobre la superficie. Observe.

Nota: para la eliminacin de las sustancias, neutralizar los residuos cidos con

bicarbonato de sodio, y los residuos alcalinos con bicarbonato de sodio.


Revise las estructuras qumicas de los compuestos utilizados en el experimento.

Identifique las propiedades fsicas y qumicas de los grupos funcionales de los

compuestos utilizados.

Explique las variaciones en trminos de las fuerzas que actan entre el aceite de oliva,

el aceite mineral y las diferentes soluciones.

Pgina17


18/63

CURSO DE BIOQUIMICA



8. BIBLIOGRAFIA

Miller D.D. 2001. Qumica de Alimentos, Manual de Laboratorio. Limusa Wiley, Mxico

Pgina18


19/63

CURSO DE BIOQUIMICA


LABORATORIO N 03

PREPARACIN DE SOLUCIONES ISOTNICAS, HIPOTNICAS E

HIPERTNICAS.

1. OBJETIVO

Comparar los procesos fsicos de difusin, osmosis y dilisis con el proceso fisiolgico

mediante el cual las molculas se transportan a travs de las membranas celulares.

Visualizar y diferenciar los fenmenos de osmosis y dilisis en clulas y modelos

celulares.

Demostrar la importancia que tienen las concentraciones de distintas soluciones en el

mantenimiento de la integridad de las clulas vegetales y animales.

2. MARCO TEORICO

La existencia de la membrana plasmtica que rodea las clulas, funciona como una

especie de "muro comunicante" que separa dos compartimentos, el extracelular y el

intracelular. Esta separacin trae como consecuencia que las diferentes molculas e

iones se distribuyan de manera asimtrica estableciendo diferenciales de concentracin

y cargas elctricas que promueven el intercambio entre ambos compartimentos. Estas

molculas e iones, pueden atravesar las membranas biolgicas mediante diferentes

mecanismos, dependiendo de la naturaleza polar, el tamao de ellas y la diferencia de

concentracin. Dentro del grupo de molculas que pueden atravesar las membranas, elpaso de agua es muy importante para las clulas, porque utiliza un mecanismo

particular que puede contribuir a disminuir diferencias extremas en las concentraciones

de las sustancias disueltas entre los compartimentos, permitir la adaptacin celular al

medio ambiente o causar la destruccin de la misma. Este flujo de agua y/o de

diferentes sustancias puede traer como consecuencia cambios en la morfologa de

clula que pueden ser apreciables al microscopio.

El agua se mueve fcilmente cruzando las membranas celulares, a travs de canales

especiales revestidos de protena. Si el total de la concentracin de todos los solutos

disueltos no es igual en ambos lados, habr un movimiento neto de molculas de agua

Pgina19


20/63

CURSO DE BIOQUIMICA


hacia dentro o fuera de la clula. Para donde es el movimiento del agua, depende si el

medio donde se encuentra la clula es isotnico, hipotnico o hipertnico.



Microscopios

Porta y cubre objetos

Tubo de ensayo Gradilla para tubos de ensayos

Papel milimetrado

Lancetas estriles

Cuchillas

Vaso de precipitado de 250mL

Papel celofn

Goteros Algodn

Solucin de almidn

Solucin de lugol

Soluciones hipo, iso e hipertnicas decloruro de sodio

Solucin de permanganato de potasio.

Hojas de planta acuatica.

Hojas de lirio

4. METODOLOGIA

El alumno tendr que aplicar el mtodo experimental para el desarrollo de esta prctica



Difusin:

Coloque en tres tubos de ensayo 5 ml de agua destilada, a igual temperatura y

numrelos.

Agregue en cada tubo un nmero de gotas de permanganato de potasio en la siguiente

forma:

Tubo No. 1 = 1 gota

Tubo No. 2 = 3 gotasTubo No. 3 = 5 gotas

Pgina20


21/63

CURSO DE BIOQUIMICA


Mida el tiempo de difusin en cada caso, para ello anote el tiempo inicial cuando se

agreg el colorante y el tiempo final en que se difundi totalmente.

La diferencia entre ambos es el tiempo de difusin. Haga una grfica en papel

milimetrado de concentracin (# de gotas) vs. tiempo de difusin.

Osmosis:

1.- Deposite una hojita de planta acutica en un porta objeto, adicinele tres gotas de

solucin hipotnica, pngale el cubreobjeto y observe con menor y mayor aumento.

Dibuje. Observa algn movimiento en los cloroplastos? Que nombre recibe este

fenmeno? Segn el concepto de osmosis en qu sentido se debe difundir el agua?

2.- Deposite una hojita de planta acutica en un porta objeto y agrguele tres gotas de

una solucin hipertnica de cloruro de sodio, pngale el cubre objeto y observe con

menor y mayor aumento. Haga un esquema de lo observado. Que cambios se

presentan en el citoplasma de las clulas que usted observa? Que nombre recibe este

fenmeno?

Plasmolisis:

Extraiga con una cuchilla un pedacito de epidermis del envs de una hoja de lirio, trate

que quede libre de clorofila. Cuidando que no se arrugue depostela en el porta objeto y

adicinele tres gotas de solucin hipotnica. Ponga el cubre objeto y observe. Dibuje

Haga un nuevo montaje de epidermis de hoja de lirio, pero con una solucin

hipertnica. Observe y dibuje.

En cual de las dos muestras, planta acutica y epidermis de hoja de lirio, se observa

mejor el fenmeno de plasmlisis? Explique Por qu?

Dilisis:

Usando papel celofn, elabore una bolsa (tubo de dilisis) y coloque en ella una

solucin de almidn.

Amarre fuertemente el otro extremo de la bolsa y suspndala en un beaker o tubo de

ensayo con agua destilada.Luego aada solucin de yodo (lugol) al agua de dicho beaker o tubo de ensayo. Tome

nota de la coloracin caracterstica.

Pgina21


22/63

CURSO DE BIOQUIMICA



1S se vara la temperatura del agua en los tubos del numeral de la practica de difusin:

a) Qu efecto tiene la temperatura sobre la velocidad de difusin?

b) Cul es el efecto de la concentracin sobre la velocidad de difusin?

c) Investigue la ley de difusin de Graham y la primera ley de Fick.

1

2Qu diferencia observ entre las clulas de plantas acuacticas y la epidermis de

lirio?

3Como se llaman las estructuras respiratorias que hacen parte del tejido de epidermis

de lirio?

4Defina que son soluciones iso, hipo, e hipertnicas?

5Como se podra desplasmolizar una clula?

6Por que no estalla una clula vegetal cuando se encuentra en un medio hipotnico?

7Qu es permeabilidad diferencial?

8Qu es presin osmtica?

9Qu es presin de turgencia?

10A que se le llama transporte pasivo?

11En que consiste el transporte activo y el facilitado?

12Cual es la diferencia entre smosis y dilisis?


8. BIBLIOGRAFIA

Pgina22


23/63

CURSO DE BIOQUIMICA



LABORATORIO N 04

RECONOCIMIENTO DE LAS PROTEINAS

1. OBJETIVO

Identificar a travs de pruebas bioqumicas las protenas existentes en soluciones

problemas

2. MARCO TEORICO

Coagulacin de Protenas; Las protenas, debido al gran tamao de sus molculas,

forman con el agua soluciones coloidales. Estas soluciones pueden precipitar con

formacin de cogulos al ser calentadas a temperaturas superiores a los 70 C o al ser

tratadas con soluciones salinas, cidos, alcohol, etc.

La coagulacin de las protenas es un proceso irreversible y se debe a su desnaturalizacin

por los agentes indicados, que al actuar sobre la protena la desordenan por la destruccin

de su estructura terciaria y cuaternaria

Reaccin Xantoproteica: Es debida a la formacin de un compuesto aromtico nitrado de

color amarillo, cuando las protenas son tratadas con cido ntrico concentrado. La prueba

da resultado positivo en aquellas protenas con aminocidos portadores de grupos

bencnicos, especialmente en presencia de tirosina. Si una vez realizada la prueba se

neutraliza con un lcali vira a un color anaranjado oscuro.

Pgina23


24/63

CURSO DE BIOQUIMICA


Reaccin de Biuret: La producen los pptidos y las protenas, pero no los aminocidos, ya

que se debe a la presencia del enlace peptdico (- CO- NH -)que se destruye al liberarse los

aminocidos.

Cuando una protena se pone en contacto con un lcali concentrado, se forma una

sustancia compleja denominada Biuret, de frmula:

que en contacto con una solucin de sulfato cprico diluida, da una coloracin violeta

caracterstica.

Reaccin de los aminocidos azufrados: Se pone de manifiesto por la formacin de un

precipitado negruzco de sulfuro de plomo. Se basa esta reaccin en la separacin mediante

un lcali, del azufre de los aminocidos, el cual al reaccionar con una solucin de acetato

de plomo, forma el sulfuro de plomo.



Tubos de ensayo

Gradilla

Varillas de vidrio

Mechero

Vasos de precipitados

Pipetas

Bageta

Clara de huevo

Acido nitrico concentrado

Hidroxido de sodio a 40 %

Hidroxido de sodio al 20 %

Sulfato cuprico al 1 %

Acetato de plomo al 5 %

4. METODOLOGIA

Pgina24


25/63

CURSO DE BIOQUIMICA


El alumno tendr que aplicar el mtodo experimental para el desarrollo de esta practica as

como el mtodo analtico para obtener los resultados citados.


REACCIN XANTOPROTEICA:

1. Poner en el tubo de ensayo de 2 a 3 cc. de solucin problema (clara de huevo).

2. Aadir 1 cc. de HNO3 concentrado.

3. Calentar al bao mara a 100: C..

4. Enfriar en agua fra

5. Aadir gota a gota una disolucin de sosa al 40%.

REACCIN DE BIURET:

1. Tomar un tubo de ensayo y poner unos 3 cc. de albmina de huevo.

2. Aadir 2cc. de solucin de hidrxido sdico al 20%.

3. A continuacin 4 5 gotas de solucin de sulfato cprico diluida al 1%. Debe aparecer

una coloracin violeta-roscea caracterstica.

REACCIN DE LOS AMINOCIDOS AZUFRADOS

1. Poner en el tubo de ensayo de 2 a 3 cc. de albmina de huevo (clara de huevo).

2. Aadir 2 cc. de solucin de hidrxido sdico al 20%.

3. Aadir 10 gotas de solucin de acetato de plomo al 5%.

4. Calentar el tubo hasta ebullicin.

5. Si se forma un precipitado de color negruzco nos indica que se ha formado sulfuro de

plomo, utilizndose el azufre de los aminocidos, lo que nos sirve para identificarprotenas que tienen en su composicin aminocidos con azufre.


Describir lo encontrado en la experiencia realizada.


El reconocimiento de las protenas es importante para tener como base la composicin delos alimentos para su posterior reformulacin en los diferentes productos a realizar.

Pgina25


26/63

CURSO DE BIOQUIMICA


8. BIBLIOGRAFIA

Bioqumica de Lehninger; Ediciones Omega SA.

9. CUESTIONARIO

1. Cmo se manifiesta la desnaturalizacin de la clara de huevo?

2. Cul de los tres agentes utilizados tiene mayor poder de desnaturalizacin?

3. Cmo podramos saber que una sustancia desconocida es una protena?

4. Qu coloracin da la reaccin del Biuret?

5. Una protena coagulada podra dar la reaccin del Biuret?

6. Si se realiza la reaccin del Biuret sobre un aminocido como la Glicina es positiva o

negativa? Por qu?

Pgina26


27/63

LABORATORIO N 05

EXTRACCIN DE LA CASEINA Y DETERMINACIN DEL

PUNTO ISOELECTRICO

2. OBJETIVO

La determinacin del punto isoelctrico de la casena una vez extrada, mediante procedimiento

qumico de la leche entera liquida.

3. MARCO TEORICO

La leche contiene vitaminas (principalmente tiamina, riboflavina, cido pantotico y vitaminas A,

D y K), minerales (calcio, potasio, sodio, fsforo y metales en pequeas cantidades), protenas

(incluyendo todos los aminocidos esenciales), carbohidratos (lactosa) y lpidos. Los nicos

elementos importantes de los que carece la leche son el hierro y la vitamina C.

La casena es una protena conjugada de la leche del tipo fosfoprotena que se separa de la

leche por acidificacin y forma una masa blanca. Las fosfoproteinas son un grupo de protenas

que estn qumicamente unidas a una sustancia que contiene cido fosfrico. En la casena la

mayora de los grupos fosfato estn unidos por los grupos hidroxilo de los aminocidos serina y

treonina. La casena en la leche se encuentra en forma de sal clcica (caseinato clcico). La

casena representa cerca del 77% al 82% de las protenas presentes en la leche y el 2,7% en

composicin de la leche lquida.

La casena est formada por alpha(s1), alpha(s2)-casena, -casena, y kappa-casena

formando una micela o unidad soluble. Ni la alfa ni la beta casena son solubles en la leche,solas o combinadas. Si se aade la kappa casena a las dos anteriores o a cada una de ellas

por separado se forma un complejo de casena que es solubilizado en forma de micela. Esta

micela est estabilizada por la kappa casena mientras que las alfa y beta son fosfoprotenas

que precipitan en presencia de iones calcio.


28/63

CURSO DE BIOQUIMICA


La kappa casena, sin embargo, tiene pocos grupos fosfato y un alto contenido de carbohidratos

unidos a ella. Tambin tiene todos sus residuos de serina y treonina con sus correspondientes

grupos hidroxilo, as como los carbohidratos dispuestos en una sola cara de su superficie por lo

que esta parte exterior es fcilmente soluble en agua gracias a los grupos polares que posee.

La otra parte de su superficie se une fcilmente a las alfa y beta casena insolubles, lo que da

lugar a la formacin de la micela.

La propiedad caracterstica de la casena es su baja solubilidad a pH 4,6. El pH de la leche es

6,6 aproximadamente, estando a ese pH la casena cargada negativamente y solubilizada como

sal clcica. Si se aade cido a la leche, la carga negativa de la superficie de la micela se

neutraliza (los grupos fosfato se protonan) y la protena neutra precipita Ca2+ Caseinato + 2HCl

Casena + CaCl2 La conformacin de la casena es similar a las protenas desnaturalizadas

globulares.

El alto numero de residuos de prolina en la casena causa un especial plegamiento en la

cadena de protena e inhibe la formacin de una fuerte y ordenada estructura secundaria. La

casena no contiene puentes di sulfuro. De igual manera la falta de estructura secundaria esimportante para la estabilidad de la casena frente a la desnaturalizacin por calor.

La carencia de estructura terciaria facilita la situacin al exterior de los residuos hidrofbicos lo

que

facilita la unin entre unidades proteicas y la convierte en prcticamente insoluble en agua. En

cambio es fcilmente dispersable en lcalis diluidas y en soluciones salinas tales como oxalato

sdico y acetato sdico.

La funcin biolgica de las micelas de caseina es transportar grandes cantidades deCa y P altamente insoluble en forma liquida a los lactantes y formar un coagulo en el estomago

para favorecer una nutricin eficiente. Adems de casena, Ca y P la micela formada tambin

contiene citrato, iones, lipasa, enzimas plasmticos y suero. Estas micelas ocupan del 6-12%

del volumen total de la leche.

Las protenas que aparecern en el sobrenadante cuando precipitemos la casena en medio

cido son protenas globulares, hidrofilicas y fcilmente solubles en agua as como susceptibles


29/63

CURSO DE BIOQUIMICA


de desnaturalizacin por calor. Las principales son -lacto globulina, alphalactalbumina, bovine

serum albumin (BSA), y inmunoglobulinas (Ig).

La casena se emplea en la industria para la fabricacin de pinturas especiales y en el apresto

de tejidos, la clarificacin de vinos, la elaboracin de preparados farmacuticos y la fabricacin

de plsticos. La pintura de casena ha sido usada desde la antigedad por los egipcios.

PUNTO ISOELECTRICO: Todas las macromolculas de la naturaleza adquieren una carga

cuando se dispersan en agua. Una caracterstica de las protenas y otros biopolmeros es que la

carga total que adquieren depende del pH del medio.

As, todas las protenas tienen una carga neta dependiendo del pH del medio en el que se

encuentren y de los aminocidos que la componen, as como de las cargas de cualquier ligando

que se encuentre unido a la protena de forma covalente (irreversible). Debido a la composicin

en aminocidos de la protena, los radicales libres pueden existir en tres formas dependiendo

del pH del medio: catinicos, neutros y aninicos. Cualquier protena tendra una carga neta

positiva si se encuentra en un medio lo suficientemente cido debido a que los grupos COOH

de los aminocidos asprtico y glutmico estaran en su forma neutra pero los grupos amino deArginina y lysina estaran protonados (-NH3 +).

De igual forma si la protena se encuentra en un medio con un pH muy alto estara cargada

negativamente ya que en este caso los grupos carboxilo estaran desprotonados (COO-) y los

grupos amino estaran en su forma neutra (NH2). De lo anterior se deduce que las protenas

tienen un pH caracterstico al cual su carga neta es cero. A este pH se le denomina punto

isoelctrico (pI).

En el punto isoelctrico (pI), se encuentran en el equilibrio las cargas positivas y negativas por

lo que la protena presenta su mxima posibilidad para ser precipitada al disminuir susolubilidad y facilitar su agregacin.

Si suponemos una protena formada nicamente por aminocidos sin grupos laterales

ionizables la carga neta de la protena dependera exclusivamente de la protonacin /

desprotonacin de los grupos amino y carboxilo terminal. En la realidad las protenas estn

formadas por multitud de aminocidos unidos mediante enlaces peptdicos y la carga va a

depender de los grupos ionizables que poseen los aminocidos que la componen (anexo I) y del

pH del medio.


30/63

CURSO DE BIOQUIMICA




Dos vasos de precipitados de 50ml

Un vaso de precipitado de 250ml

Probeta de 50ml

Matraz aforado de 50 ml

pipeta graduada de 5,0 ml



Embudo de vidrio mediano

Papel de filtro

Termmetro

Agua destilada

Acetato sdico 0,1 N

cido actico 0,01 N

cido actico 0,1 N

cido actico 1,0 N

NaOH 1N

ter etlico

Etanol al 70%

Soluciones buffer pH 4,0 y 7,0 para

calibrar el potencimetro

Potencimetro (pH-metro)

Leche entera corriente ( 1 litro)5. METODOLOGIA




AISLAMIENTO DE LA CASENA:


31/63

CURSO DE BIOQUIMICA


1. Caliente en un vaso de precipitado 150ml de agua destilada a 38C, aada 50ml de leche y

luego gota a gota y con agitacin, adicione cido actico 1M hasta que observe que se

forma un precipitado (la leche se corta).

2. Deje sedimentar y filtre sobre papel de filtro usando un embudo de cristal.

3. Lave el precipitado con 20ml de etanol en el mismo filtro.

4. Seque el precipitado colocando varios pliegues de papel de filtro.

5. Coloque el precipitado en un vaso de precipitado pequeo previamente pesado, vuelva a

pesar el vaso con el precipitado y luego adicione 5ml/g de ter etlico.

6. Filtre nuevamente.7. Deseche el lquido quedando un precipitado blanco de fcil manipulacin que es la

8. casena.

PREPARACIN DE LA SOLUCIN DE CASENA:

1. Coloque aproximadamente 250 mg de casena en un vaso de 50ml.

2. Agregue 20ml de agua destilada y 5 ml de NaOH 1N; agite hasta lograr una solucin total de

la casena.

3. Una vez disuelta la casena, se vierte en un matraz aforado de 50 ml, adicione 5 ml de cido

actico 1N y diluya con agua destilada hasta 50ml y mezcle bien.

4. La solucin debe ser clara y limpia y si no es as, debe volver a filtrar.

DETERMINACIN DEL PI DE LA CASENA:

1. En diez vasos de 25 ml limpios y secos adicione exactamente los volmenes de los

reactivos segn la siguiente tabla:


32/63

CURSO DE BIOQUIMICA


2.

2.

2.

2.

2.

2.

2.

2.

2.

2.

2.

2.

2.

2.

2.Medir experimentalmente el pH de todos los vasos, que debe cubrir un rango aproximado

semejante al terico (3 a 6,5).

3. Anotar los valores reales en la Tabla, que deben ser semejantes a los expresados y en todo

caso crecientes.

4. Aadir 1 ml de disolucin de casena a cada tubo.

5. Agitar suavemente cada uno y esperar aproximadamente 3 minutos.

6. Medir la absorbancia de cada muestra a 640 nm con las cubetas de colorimetra de 1 cm de

paso ptico, teniendo la precaucin de agitar bien el contenido de cada tubo para obtener

una solucin / suspensin homognea antes de verter una parte en la cubeta.

7. Anotar resultados, representar la absorbancia frente al pH, y determinar el pI aproximado de

la casena.


Anotar los resultados obtenidos en la practica


33/63

CURSO DE BIOQUIMICA



El aislamiento de la casena en la leche se realiza para la determinacin de la existencia de

dicha protena en la misma as como el reconocimiento de su estado bsico o lcali, como

modelo para el aislamiento de otras protenas.

9. BIBLIOGRAFIA


10. CUESTIONARIO

1. Cul es el punto isoelctrico de la casena?

2. Por qu las protenas tienen solubilidad mnima en el pI?


34/63

CURSO DE BIOQUIMICA


LABORATORIO N 06

RECONOCIMIENTO DE LA PROTEINA EN LA CLARA DE HUEVO.

2. OBJETIVO

El objetivo de esta prctica consiste en reconocer la presencia de protenas en la clara de

huevo. Para ello utilizaremos la prueba Xantoproteica.

3. MARCO TEORICO

En el caso de haber protenas en la clara de huevo, al aadir HNO3 y calentarlo, sta

debe tomar un color amarillo suave, y al aadir NH3 deber tomar un tono anaranjado.

Experimentacin

Tenemos clara de huevo en un vaso de precipitado. Tomamos una muestra con una

jeringuilla y la vertemos en un tubo de ensayo. Aadimos el HNO3 y calentamos:

Resultados

Dado que los resultados de la prueba Xantoproteica dan positivos, queda demostrada la

presencia de protenas en la clara de huevo. El hecho de que la clara solidifique en

contacto con el HNO3 es debido a que al cambiar el pH de la disolucin, las protenas

que en ella hay se denaturalizan y se vuelven insolubles.



Dos vasos de precipitados de 50ml Un vaso de precipitado de 250ml

Probeta de 50ml





Tubo de ensayo

Agua destilada Acetato sdico 0,1 N

cido actico 0,01 N

cido actico 0,1 N

cido actico 1,0 N


35/63

CURSO DE BIOQUIMICA


5. METODOLOGIA




1. Colocar en un tubo de ensayo una pequea cantidad de clara de huevo.

2. Aadir 5 gotas de cido actico y calentar el tubo a la llama del mechero.

3. Observar al experiencia



9. BIBLIOGRAFIA



36/63

CURSO DE BIOQUIMICA


LABORATORIO N 07

RECONOCIMIENTO DE CARBOHIDRATOS

1. OBJETIVO:

Que el alumno reconozca la presencia de un monosacrido, as como su fundamente terico

establecido.

2. MARCO TEORICO:

Los glcidos son compuestos orgnicos constituidos por carbono, hidrgeno y oxgeno; en

algunos casos pueden tener adems otros elementos qumicos como nitrgeno o azufre.

Se les ha llamado hidratos de carbono porque algunos responden a la frmula general

Cn(H2O)m y azcares por su sabor dulce, aunque slo los de baja masa molecular lo tienen.

Qumicamente son polihidroxialdehdos, polihidroxicetonas, sus derivados o sus polmeros.

Algunos son molculas de relativamente baja masa molecular; la glucosa tiene una Mm=180 da.

Otros, como el almidn, tienen masas moleculares de ms de 100000 da y son grandes

molculas, macromolculas.

Sus propiedades fsicas y qumicas son muy variadas. Y en cuanto a sus funciones biolgicas:

La glucosa, sacarosa, glucgeno y almidn son sustancias energticas. Los seres

vivos obtienen energa de ellas o las usan para almacenar energa. Esta energa est contenida

en determinados enlaces que unen los tomos de estas molculas.

Celulosa y quitina son estructurales. Forman parte de las paredes de las clulasvegetales (celulosa) o de las cubiertas de ciertos animales (quitina).

Ribosa y desoxirribosa forman parte de los cidos nucleicos.

Estos son slo algunos ejemplos que nos pueden ilustrar sobre las funciones que cumplen los

glcidos.

CLASIFICACIN DE LOS GLCIDOS

Atendiendo a su complejidad se clasifican en:


37/63

CURSO DE BIOQUIMICA


A) Monosacridos u osas: Son los ms sencillos. No son hidrolizables; esto es, no se

pueden descomponer por hidrlisis en otros glcidos ms simples. Qumicamente son

polihidroxialdehdos, polihidroxicetonas o sus derivados.

Un polihidroxialdehdo es un compuesto orgnico que tiene una funcin aldehdo en

el primer carbono y en los restantes carbonos una funcin alcohol. Las polihidroxicetonas

en lugar de una funcin aldehdo tienen una funcin cetona, normalmente en el carbono 2. Los

monosacridos que tienen funcin aldehdo se llaman aldosas y cetosas los que tienen una

funcin cetona. Los monosacridos responden a la frmula emprica Cn(H2O)n, de aqu

proviene el nombre de hidratos de carbono. El valor de n normalmente est comprendido entre

3 y 7.

Segn el nmero de tomos de carbono se clasifican en :

Triosas........n=3

Tetrosas.......n=4

Pentosas.......n=5

Hexosas........n=6

Heptosas.......n=7As, un monosacrido con 6 tomos de carbono y con la funcin aldehdo ser una aldohexosa;

si tiene cuatro tomos de carbono y una funcin cetona, ser una cetotetrosa, y as

sucesivamente.

Constituyen los monmeros a partir de los cuales se forman los dems glcidos.

Fsicamente los monosacridos son slidos, cristalinos, incoloros o blancos, de sabor dulce.

Como los grupos hidroxilo son polares, los monosacridos son muy solubles en agua, pues se

establecen enlaces polares con las molculas de agua.Qumicamente el grupo carbonilo reduce fcilmente los compuestos de cobre (licor Fehling) y

de plata oxidndose y pasando a grupo cido. Esta propiedad es caracterstica de estas

sustancias y permite reconocer su presencia, pues la reduccin de las sales cpricas del licor

de Fehling a cuprosas hace virar el reactivo del azul al rojo ladrillo.

Cu+ +-----------------Cu+

Azul rojo


38/63

CURSO DE BIOQUIMICA


B) sidos: Formados por la unin de varios monosacridos mediante enlaces "O-

glicosdicos",pudiendo poseer en su molcula otros compuestos diferentes de los glcidos. Son

hidrolizables, descomponindose en los monosacridos y dems compuestos que los

constituyen. Se dividen en:

Holsidos: Son aquellos que estn constituidos por carbono, hidrgeno y oxgeno,

exclusivamente. A su vez se subclasifican en:

Oligosacridos, formados por entre 2 y 10 monosacridos unidos.

Polisacridos, formados por un gran nmero de monosacridos.

Hetersidos. Formados por osas y otros compuestos que no son glcidos. Por lo tanto, adems

de carbono, hidrgeno y oxgeno, contienen otros elementos qumicos.

ESQUEMA DE IDENTIFICACIN

(-) No azcar

Benedict (-) no reductor: Sacarosa (hidrlisis y selivanoff)

Baraun Barfoed (-) disacrido lactosa (hidrlisis y barfoed)

(+) Azcar (+) Reductor

Molisch

Fehling Espejo de (+) fructuosa

plata (+) mono- Selivanolf (+)galactosa

dacarido (-) tollens

(-) glucosa

I. REACCIN DE MOLISCH: Esta reaccin sirve para el reconocimiento de todo tipo de

azcares. Los azcares, en medio cido fuerte se deshidratan formando furfurales. Estos

furfurales al reaccionar con el a-naftol originan complejos de intenso color.

II. REACCIN DE FEHLING: Esta prueba se utiliza para el reconocimiento de azcares

reductores. El poder reductor que pueden presentar los azcares proviene de su grupo


39/63

CURSO DE BIOQUIMICA


carbonilo, que puede ser oxidado a grupo carboxilo con agentes oxidantes suaves. Si el grupo

carbonilo se encuentra combinado no puede presentar este poder reductor.

Los azcares reductores, en medio alcalino, son capaces de reducir el in Cu2+ de color azul a

Cu+ de color rojo. Para ello el grupo carbonilo del azcar se oxida a grupo carboxilo. En medio

fuertemente bsico como en nuestro caso el NaOH el in Cu2+ formara Cu (OH)2 insoluble por

eso aadimos tartrato sdico potsico que acta como estabilizador al formar un complejo con

el Cu2+.

III. REACCIN DE BENEDICT: Esta prueba sirve para el reconocimiento de azcares

reductores. Se basa en la reduccin de Cu2+ a Cu+ en medio bsico dbil. Aunque es similar a

la reaccin de Fehling, el medio bsico dbil (HNaCO3) y el estabilizante (citrato sdico) usados

hacen que este test sea ms sensible y estable.

IV. REACCIN DE BRAUN: Esta reaccin sirve para el reconocimiento de azcares

reductores. Los azcares reductores en medio alcalino pueden reducir el picrato, de color

amarillo, a picramato, de color rojo en medio alcalino (Na2CO3).

V. PRUEBA DE BARFOED: Esta prueba sirve para el reconocimiento de monosacridos. En

medio cido, tan slo los monosacridos son capaces de reducir el Cu2+ a Cu+. El Cu+ as

producido reduce al cido fosfomolbdico a un complejo de intenso color azul oscuro.

VI. PRUEBA DEL ESPEJO DE PLATA: Esta prueba sirve para el reconocimiento de

monosacridos. Los monosacridos son capaces de reducir, en medio amoniacal, el in Ag+ a

Ago (plata metlica), que se deposita en las paredes del tubo.

VII. PRUEBA DE SELIVANOFF: Esta prueba es especfica para las cetosas. Las cetosas se

deshidratan ms rpidamente que las aldosas, dando furfurales. Estos se condensan con el

resorcinol produciendo un complejo coloreado. Si el tiempo de ebullicin se prolonga, puede dar

tambin positivo para otros azcares.

VIII. PRUEBA DE TOLLENS: Esta prueba es anloga a la de Selivanoff, pero para el

reconocimiento de galactosa y sus derivados. La galactosa, algunas pentosas y el cido


40/63

CURSO DE BIOQUIMICA


glucurnico dan un color rojo con el HCl y floroglucina. La glucosa da tambin un color rojo con

la floroglucina, pero muy opaco, en contraste con el colorrojo transparente de la galactosa.

IX. HIDRLISIS CIDA DE UN DISACRIDO: En el caso de que la disolucin problema de

azcar fuese sacarosa o lactosa se hace una comprobacin. En primer lugar se hidroliza el

disacrido en sus componentes (sus dos monosacridos) mediante una hidrlisis cida

X. PRUEBA DEL AZUL DE METILENO:A una solucin de glucosa en medio bsica (20 g de

glucosa y 25 g de KOH en 1 l) se le agregan unas gotas de azul de metileno al 1%. Agitar,

observar su coloracin y dejar reposar unos minutos. Observar el cambio de color y agitar

nuevamente. Repetir el proceso numerosas veces.



Balanza analtica

Vagetas Tubos de ensayo

Gradilla

Mechero bunsen

Pipeta de 10 ml.

Vasos precipitados 250 ml.

Vasos precipitados de 100 ml.

Matraz de 100 ml

Fiolas 100 ml.

Glucosa

Sacarosa Fructosa

Lactosa

Galactosa

-naftol al 1%

Acido sulfurico concentrado

Fehling A

Fehling B

Reactivo benedict

Acido picrico saturado

Carbonato de sodio

Disolucin acida de cobre

Nitrato de plata

Amoniaco al 30%

Reactivo Saliwanoff

Acido clohidrico concentrado


41/63

CURSO DE BIOQUIMICA


Dloroglucina

Acido clohidrico al 0.1 N

Azul de metileno al 1 %

4. METODOLOGIA



5. DESCIPCION DE LA PRACTICA

Laboratorio 03-01:

REACCIN DE MOLISCH

Precaucin: el cido sulfrico concentrado puede causar quemaduras graves en la

piel. Manejarlo con mucho cuidado.

1. Pipetear en un tubo de ensayo 2 ml de disolucin de azcar problema

2. Aadir 2 gotas de -naftol al 1% y se mezclar bien.

3. Con una pipeta se dejan resbalar por la pared del tubo de ensayo 2 ml de cido sulfrico

concentrado con mucho cuidado procurando que no se mezcle para que forme una capa bajo la

disolucin de azcar.

En la superficie de separacin de ambas capas se producir la deshidratacin del azcar y su

reaccin con el a-naftol formndose un anillo de color oscuro en dicha interfase.

Molisch positivo: anillo oscuro.

REACCIN DE FEHLING

1. Mezclar en un tubo de ensayo:

Fehling A (CuSO4) 2 ml


42/63

CURSO DE BIOQUIMICA


Fehling B (Tartrato/NaOH) 2 ml

2. Agitar y calentar a ebullicin (aproximadamente 1 min).

3. Aadir 1 ml de la disolucin de azcar y hervir durante un minuto. Si se reduce el cobre se

forma un precipitado de Cu2O de color rojizo.

Fehling positivo: color rojizo.

REACCIN DE BENEDICT

1. Pipetear en un tubo de ensayo 5 ml de reactivo de Benedict

2. Calentar a ebullicin.

3. Aadir 1 ml de la solucin de azcar, mezclar bien y se volver a calentar a ebullicin. Si la

reaccin es positiva aparece un precipitado rojizo, aunque si la cantidad de azcar es pequea

puede dar color anaranjado o verdoso

REACCIN DE BRAUN

1. Aadir en un tubo de ensayo:

- Disolucin de azcar 4 ml

- cido pcrico saturado 2 ml (OJO, MUY VENENOSO)- Na2CO3 1M 2 ml

2. Calentar a ebullicin.

Si el test es positivo, el color amarillo pasa a rojo.

PRUEBA DE BARFOED

1. Pipetear en un tubo de ensayo:


- Disolucin cida de cobre 1 ml2. Calentar a ebullicin durante 3 minutos.

3. Enfriar en agua durante 2 min

4. Aadir 1 ml del reactivo de fosfomolibdato.

Si la prueba es positiva aparece un color azul oscuro muy intenso.

PRUEBA DEL ESPEJO DE PLATA

1. Aadir en un tubo de ensayo:

- AgNO3 1% 1 ml


43/63

CURSO DE BIOQUIMICA


- NH3 30% 1 ml


2. Mezclar bien y se calentar durante 2 minutos.

3. Sacar y dejar reposar.

Si el ensayo es positivo la plata metlica, que precipita, se va depositando en la pared

deltubo formando un espejo (espejo de plata).

PRUEBA DE SELIVANOFF

1. En un tubo de ensayo pyrex se aadir:

- Reac. Selivanoff (resorcinol/HCl) 1 ml


2. Hervir durante 1 minuto en el bao a ebullicin.

La aparicin de un color rojo o un precipitado rojo es indicativa de la presencia de

cetosas.

PRUEBA DE TOLLENS1. Aadir en un tubo:


- HCl (concentrado) 2 ml

- Floroglucina (Tollens) 0,1 ml

2. Calentar a ebullicin. El color puede aparecer hasta 5 minutos despus de calentar.

HIDRLISIS CIDA DE UN DISACRIDO

1. En un tubo de ensayo limpio aadir:- Disolucin problema 1 ml

- HCl 0,1N 1 ml

2. Hervir durante 1 minuto.

3. Realizar la prueba de Selivanoff si se trata de sacarosa o la reaccin de Barfoed si se trata de

lactosa.

PRUEBA DEL AZUL DE METILENO

A una solucin de glucosa en medio bsico (20 g de glucosa y 25 g de KOH en 1 l)


44/63

CURSO DE BIOQUIMICA


se le agregan unas gotas de azul de metileno al 1%. Agitar, observar su coloracin y

dejar reposar unos minutos. Observar el cambio de color y agitar nuevamente. Repetir el

proceso numerosas veces.


GLUCOSA SACAROSA FRUCTOSA LACTOSA GALACTOSA

MOLISCHFEHLINGBENEDICT

BRAUNBARFOEDESP. PLATASELIVANOFFTOLLENS

7. CONCLUSION Y RECOMENDACIONES

La prctica realizada indicara el reconocimiento cualitativo de los glusidos, basado en

reacciones con sustancias y permitiendo el reconocimiento.

Realizar la practica con gafas previniendo cualquier accidente.

8. BIBLIOGRAFIA


9. CUESTIONARIO

1. Explicar brevemente qu funcin tienen los siguientes compuestos:

- Citrato sdico.

- Cu2+

- H2SO4

- cido pcrico

- Ag+

- Tartrato sdico potsico

2. Cmo se explica el experimento del azul de metileno?

LABORATORIO N 08

RECONOCIMIENTO E HIDRLISIS DEL ALMIDON


45/63

CURSO DE BIOQUIMICA


1. OBJETIVO

Que el alumno reconozca un polisacrido y su hidrlisis.

2. MARCO TEORICO

Es un polisacarido de reserva vegetales. Para reconocerlo se utiliza la solucin de Lugol. (yodo

y yoduro potasico en medio acido). Al aadir tal solucin el almidn adquiere una coloracin

oscura, azul-violeta. Esta coloracin no es debida a ninguna reaccin qumica sino a que el

lugol se adsorbe a la superficie del almidn, de forma que si lo calentamos se separan y la

coloracin desaparece.

El almidn cuando se hidroliza libera amilasa y amilo pectina, si la hidrlisis prosigue se van

liberando oligosacardos de glucosa y finalmente glucosas.



Tubos de ensayo

Cuentagotas

Pipeta

Luna de reloj

Porta y cubre objetos

Microscopio

Vaso de precipitado

Tripo con rejilla

Mechero de ron

vidrio

Mechero


Pipetas

Cuchillo

Solucin de almidn.

Solucin de lugol

Reactivos de Fehling A y B

Papa


46/63

CURSO DE BIOQUIMICA


4. METODOLOGIA




HIDRLISIS DEL ALIMIDON

1. Colora en un tubo de ensayo 2 ml. De solucin de almidn, y aadir 2 o 3 gotas de lugol.

2. Observar y anotar la coloracin.

HIDRLISIS DEL ALIMIDON DE LA PAPA

1. Colorar el liquido re raspado de la papa en un portaobjetos, aadir un poco de lugol yobservar en un microscopio la forma de los granos de almidn.

2. Se puede hacer una observacin antes de la aplicacin del lugol.

3. Colocar en un tubo de ensayo 2ml de aceite y 2ml de NaOH al 20%..

4. Agitar enrgicamente y colocar el tubo al bao Mara de 20 a 30 minutos.

5. Pasado este tiempo, se pueden observar en el tubo 3 fases: una inferior clara que contiene

la solucin de sosa sobrante junto con la glicerina formada, otra intermedia semislida que

es el jabn formado y una superior lipdica de aceite inalterado.

PODER REDUCTOR DEL ALMIDON

1. Colocar en un tubo 2 ml. De almidn mas 1 ml. De fehling A mas 1 ml. De fehling B

2. Calentar al bao mara y observar lo que ocurre.

3. Colocar en un tubo 2 ml de almidn mas saliva, para que la hidrlisis se favorezca

calentamos el tubo en bao mara y dejamos transcurrir 10 minutos.

4. Aadir 1 ml. De reactivo Fehling a y 1 ml. De fehling B calentamos y observamos lo

ocurrido.


47/63

CURSO DE BIOQUIMICA



Colocar sus apreciaciones

Laboratorio 04-01 Laboratorio 04-02 Laboratorio 04-03



8. BIBLIOGRAFIA



48/63

CURSO DE BIOQUIMICA


LABORATORIO N 09

RECONOCIMIENTO DE LOS LIPIDOS

1. OBJETIVO

Identificar a travs de pruebas bioqumicas los lpidos en las muestras problemas.

Brindar al alumno los reconocimientos bsicos para desarrollar anlisis en grasas y aceites.

2. MARCO TEORICO

SAPONIFICACIN:

Las grasas reaccionan en caliente con el hidrxido sdico o potsico descomponindose en los

dos elementos que las integran: glicerina y cidos grasos. stos se combinan con los iones

sodio o potasio del hidrxido para dar jabones, que son en consecuencia las sales sdicas o

potsicas de los cidos grasos. En los seres vivos, la hidrlisis de los triglicridos se realiza

mediante la accin de enzimas especficos (lipasas) que dan lugar a la formacin de cidos

grasos y glicerina.

TINCIN:

Los lpidos se colorean selectivamente de rojo -anaranjado con el colorante Sudn III.

SOLUBILIDAD:

Los lpidos son insolubles en agua. Cuando se agitan fuertemente en ella se dividen en

pequesimas gotas formando una emulsin de aspecto lechoso, que es transitoria, pues

desaparece en reposo por reagrupacin de las gotitas de grasa en una capa que, por su menor

densidad, se sita sobre el agua. Por el contrario, las grasas son solubles en disolventes

orgnicos, como el ter, cloroformo, acetona, benceno, etc.


49/63

CURSO DE BIOQUIMICA




Tubos de ensayo

Gradilla

Varillas de vidrio

Mechero


Pipetas

Solucin de NaOH al 20%

Solucin de Sudn III

Tinta china roja

Eter, cloroformo o acetona

Aceite de oliva

4. METODOLOGIA




SAPONIFICACION

1. Colocar en un tubo de ensayo 2ml de aceite y 2ml de NaOH al 20%.

2. Agitar enrgicamente y colocar el tubo al bao Mara de 20 a 30 minutos.

3. Pasado este tiempo, se pueden observar en el tubo 3 fases: una inferior clara que contiene

la solucin de sosa sobrante junto con la glicerina formada, otra intermedia semislida que

es el jabn formado y una superior lipdica de aceite inalterado.

TINCIN:

1. Disponer en una gradilla 2 tubos de ensayo colocando en ambos 2ml de aceite.

2. Aadir a uno de los tubos 4-5 gotas de solucin alcohlica de Sudn III.

3. Al otro tubo aadir 4-5 gotas de tinta roja.

4. Agitar ambos tubos y dejar reposar.

5. Observar los resultados: en el tubo con Sudn III todo el aceite tiene que aparecer teido,

mientras que en el tubo con tinta, sta se ir al fondo y el aceite no estar teido.

SOLUBILIDAD:


50/63

CURSO DE BIOQUIMICA


1. Poner 2ml de aceite en dos tubos de ensayo.

2. Aadir a uno de ellos 2ml de agua y al otro 2ml de ter u otro disolvente orgnico,

3. Agitar fuertemente ambos tubos y dejar reposar.

4. Observar los resultados: Se ver cmo el aceite se ha disuelto en el ter y, en cambio no lo

hace en el agua y el aceite subir debido a su menor densidad.


Colocar sus apreciaciones

Laboratorio 04-01 Laboratorio 04-02 Laboratorio 04-03



8. BIBLIOGRAFIA


9. CUESTIONARIO

1. Qu son los jabones?

2. Cmo se pueden obtener los jabones?

3. Por qu en la saponificacin la glicerina aparece en la fase acuosa?

4. Qu enzima logra en el aparato digestivo la hidrlisis de las grasas?5. Indica lo que ocurre con la mezcla aceite-Sudn III y aceite-tinta y explica a qu se debe la

diferencia entre ambos resultados.

6. Qu ocurre con la emulsin de agua en aceite transcurridos unos minutos de reposo?Y

con la de benceno y aceite?A qu se deben las diferencias observadas entre ambas

emulsiones?


51/63

CURSO DE BIOQUIMICA


LABORATORIO N 10

EXTRACCION DE ADN

10. OBJETIVO

Realizar una extraccin casera de la presencia de ADN en vegetales.

11. MARCO TEORICO

La extraccin de ADN de una muestra celular se basa en el hecho de que los iones salinos son

atrados hacia las cargas negativas del ADN, permitiendo su disolucin y posterior extraccin de

la clula. Se empieza por lisar (romper) las clulas mediante un detergente, vacindose su

contenido molecular en una disolucin tampn en la que se disuelve el ADN. En ese momento,

el tampn contiene ADN y todo un surtido de restos moleculares: ARN, carbohidratos, protenas

y otras sustancias en menor proporcin. Las protenas asociadas al ADN, de gran longitud, se

habrn fraccionado en cadenas ms pequeas y separadas de l por accin del detergente.Slo queda, por tanto, extraer el ADN de esa mezcla de tampn y detergente, para lo cual se

utiliza alcohol isoamlico, probablemente el nico reactivo de esta prctica que no suele haber

en una cocina.



Muestra vegetal

Batidora

Nevera

Colador o centrfuga

Vaso precipitados

Tubo de ensayo

Varilla fina

Agua (destilada o mineral)

Sal de mesa

Bicarbonato sdico

Detergente lquido o champ

Alcohol isoamlico a 0C


52/63

CURSO DE BIOQUIMICA


13. METODOLOGIA

El alumno tendr que aplicar el mtodo experimental para el desarrollo de esta prctica as



1. Preparar el tampn con los siguientes ingredientes y mantener en la nevera o en un bao de

hielo triturado: 120 ml de agua, si es posible destilada y si no mineral. No usar agua del

grifo. 1,5 g de sal de mesa, preferiblemente pura. 5 g de bicarbonato sdico. 5 ml dedetergente lquido o champ.

2. Elegir la muestra que va a proporcionar el ADN entre los vegetales que pueda haber

(cebolla, ajo, tomates, etc.) y cortarla en cuadraditos.

3. Triturar la muestra con un poco de agua en la batidora accionando las cuchillas a impulsos

de 10 segundos. As se rompern muchas clulas y otras quedarn

4. expuestas a la accin del detergente.

5. Mezclar en un recipiente limpio 5 ml del triturado celular con 10 ml del tampn fro y agitarvigorosamente durante al menos 2 minutos. Separar despus los restos vegetales ms

grandes del caldo molecular hacindolo pasar por un colador lo ms fino posible. Lo ideal

es centrifugar a baja velocidad 5 minutos y despus pipetear el sobrenadante.

6. Retirar 5 ml del caldo molecular a un tubo de ensayo y aadir con pipeta 10 ml

7. de alcohol isoamlico enfriado a 0C. Se debe dejar escurrir lentamente el alcohol por la

cara interna del recipiente, teniendo ste inclinado. El alcohol quedar flotando sobre el

tampn.

8. Se introduce la punta de una varilla estrecha hasta justo debajo de la separacin entre el

alcohol y el tampn. Remover la varilla hacia delante y hacia atrs y poco a poco se irn

enrollando los fragmentos de mayor tamao de ADN. Pasado un minuto retirar la varilla

atravesando la capa de alcohol con lo cual el ADN quedar adherido a su estremo con el

aspecto de un copo de algodn mojado.



53/63

CURSO DE BIOQUIMICA



17. BIBLIOGRAFIA



54/63

CURSO DE BIOQUIMICA


LABORATORIO N 11

RUTAS METABOLICAS

1. OBJETIVO

Reconocer la degradacin de la glucosa, dando por consiguiente el proceso de la gluclisis y

respiracin (ciclo de Kreb).

2. MARCO TEORICO

La degradacin de la glucosa es realizada por el proceso de gluclisis en el citoplasma por la

accin del ADP obteniendo acido piruvico, De acuerdo a las circunstancias puede realizarse dos

procesos:

1.- Sin oxigeno obtenemos el proceso de fermentacin con la obtencin de etanol o acido

lactico.

2.- con oxigeno pasando al ciclo de Kreb obteniendo diferentes sustancia, la cual se realiza enel mitocondrias.


55/63

CURSO DE BIOQUIMICA


LA GLUCLISIS:

Comienza con una molcula de glucosa. En este proceso, primero se invierte energa por

transferencia de un grupo fosfato desde una molcula de ATP, una por cada paso, a la molcula de

azcar. La molcula de 6 carbonos luegos se escinde y, de all en adelante, la secuencia produce

energa. En cierto momento se reduce una molcula de NAD+ a NADH y H+ almacenandose parte

de la energa producida por la oxidacin del gliceraldehdo fosfato. En los pasos finales las

molculas de ADP toman energa del sistema, fosforilndose a ATP.

Glucosa+2ATP+4ADP+2Pi+2NAD=>2cido pirvico+2ADP+4ATP+2NADH+2H+2H2O

De esta forma, una molcula de glucosa se convierte en dos molculas de cido pirvico. La

ganancia neta, la energa recuperada, es dos molculas de ATP y dos molculas de NADH por

molcula de glucosa. Las dos molculas de cido pirvico contienen todava una gran parte de la

energa que se encontraba almacenada en la molcula de glucosa original. La serie de reacciones

que constituyen la gluclisis se lleva a cabo virtualmente en todas las clulas vivas, desde las

clulas procariticas hasta las clulas eucariticas de nuestros propios cuerpos.

LAS VIAS AEROBICAS - RESPIRACIN:

En el curso de la respiracin, las molculas de tres carbonos de cido pirvico producido por la

gluclisis son degradadas a grupos acetilo de dos carbonos, que luego entran al ciclo de Krebs. En

una serie de reacciones en el ciclo de Krebs, el grupo acetilo de dos carbonos es oxidado

completamente a dixido de carbono. En el curso de la oxidacin de cada grupo acetilo se reducen

cuatro aceptores de electrones (tres NAD+ y un FAD) y se forma otra molcula de ATP.


56/63

CURSO DE BIOQUIMICA


El ciclo de Krebs.

En el ciclo de Krebs. los carbonos donados por el grupo acetilo se oxidan a dixido de carbono y los

electrones pasan a los transportadores de electrones. Lo mismo que en la gluclisis, en cada paso

interviene una enzima especfica. La coenzima A es el nexo entre la oxidacin del cido pirvico y


57/63

CURSO DE BIOQUIMICA


el ciclo de Krebs. A modo de resumen: en el ciclo de Krebs se producen una molcula de ATP, tres

molculas de NADH y una molcula de FADH2 que representan la produccin de energa de este

ciclo. Se necesitan dos vueltas del ciclo para completar la oxidacin de una molcula de glucosa.

As, el rendimiento energtico total del ciclo de Krebs para una molcula de glucosa es dos

molculas de ATP, seis molculas de NADH y dos molculas de FADH. La etapa final de la

respiracin es el transporte terminal de electrones, que involucra a una cadena de transportadores

de electrones y enzimas embutidas en la membrana interna de la mitocondria. A lo largo de esta

serie de transportadores de electrones, los electrones de alta energa transportados por el NADH

de la gluclisis y por el NADH y el FADH2 del ciclo de Krebs van "cuesta abajo" hasta el oxgeno.

En tres puntos de su pasaje a lo largo de toda la cadena de transporte de electrones, se

desprenden grandes cantidades de energa libre que impulsan el bombeo de protones (iones H+)

hacia el exterior de la matriz mitocondrial. Esto crea un gradiente electroqumico a travs de la

membrana interna de la mitocondria. Cuando los protones pasan a travs del complejo de ATP

sintetasa, a medida que vuelven a fluir a favor del gradiente electroqumico al interior de la matriz, la

energa liberada se utiliza para formar molculas de ATP a partir de ADP y fosfato inorgnico. Este

mecanismo, en virtud del cual se lleva a cabo la fosforilacin oxidativa, se conoce como

acoplamiento quimiosmtico.

En esta representacin de la cadena respiratoria, las molculas que se indican: flavina

mononucletido (FMN), coenzima Q (CoQ) y los citocromos b, c, a y a3, son los principales

transportadores de electrones de la cadena. Al menos otras nueve molculas transportadoras

funcionan como intermediarias adems de las que se muestran aqu. Los electrones transportados

por la NADH entran en la cadena cuando son transferidos a la FMN, que entonces se reduce (azul).

Casi instantneamente, el FMN cede los electrones al CoQ. El FMN vuelve as a su forma oxidada

(naranja), listo para recibir otro par de electrones, y la CoQ se reduce. CoQ entonces pasa loselectrones al siguiente aceptor, y vuelve a su forma oxidada. El proceso se repite en sentido

descendente. Los electrones, al pasar por la cadena respiratoria, van saltando a niveles energticos

sucesivamente inferiores. Los electrones que son transportados por el FADH2 se encuentran en un

nivel energtico ligeramente inferior que los del NADH. En consecuencia, entran en la cadena de

transporte ms abajo, a la altura de la CoQ. Los electrones finalmente son aceptados por el

oxgeno, que se combina con protones (iones hidrgeno) en solucin, y forman agua.

Los electrones que son transportados por el FADH2 se encuentran en un nivel energtico

ligeramente inferior que los del NADH. En consecuencia, entran en la cadena de transporte ms


58/63

CURSO DE BIOQUIMICA


abajo, a la altura de la CoQ. Los electrones finalmente son aceptados por el oxgeno, que se

combina con protones (iones hidrgeno) en solucin, para formar agua.

LAS VAS ANAEROBIAS: En ausencia de oxgeno, el cido pirvico puede seguir una de varias

vas llamadas anaerbicas. Veremos brevemente dos de las vas anaerbicas ms interesantes. El

cido pirvico puede convertirse en etanol (alcohol etlico) o en uno de varios cidos orgnicos

diferentes, de los cuales el cido lctico es el ms comn.

En el primer paso de la gluclisis se desprende dixido de carbono. En el segundo, se oxida el

NADH y se reduce el acetaldehdo. La mayor parte de la energa qumica de la glucosa permaneceen el alcohol, que es el producto final de la secuencia. Sin embargo, regenerando NAD+, estos

pasos permiten que la gluclisis contine, con su pequeo, pero en algunos casos vitalmente

necesario, rendimiento de ATP.

Pasos por los cuales el cido pirvico, formado en la gluclisis, se convierte anaerbicamente en

etanol.

El cido lctico se forma a partir del cido pirvico, por accin de una variedad de microorganismos

y tambin por algunas clulas animales cuando el O2 es escaso o est ausente.


59/63

CURSO DE BIOQUIMICA


Reaccin enzimtica que produce cido lctico anaerbicamente a partir de cido pirvico en las

clulas musculares.

En el curso de esta reaccin, el NADH se oxida y el cido pirvico se reduce. Las molculas de

NAD+ producidas en esta reaccin se reciclan en la secuencia glucoltica. Sin este reciclado, la

gluclisis no puede seguir adelante. La acumulacin de cido lctico da como resultado dolor y

fatiga muscular.

OTRAS VAS CATABLICAS Y ANABLICAS:

La mayora de los organismos no se alimentan directamente de glucosa. Otros alimentos sondegradados y convertidos a molculas que pueden entrar en esta va central.Dado que muchas de

estas sustancias, como las protenas y los lpidos, pueden degradarse y entrar en la va central, se

puede suponer que es posible el proceso inverso, o sea, que los distintos intermediarios de la

gluclisis y del ciclo de Krebs pueden servir como precursores para la biosntesis. Y as es. Sin

embargo, las vas biosintticas, aunque son semejantes a las catablicas, se diferencian de ellas.

Hay enzimas diferentes que controlan los pasos y hay varios pasos crticos del anabolismo que

difieren de los de los procesos catablicos.

Para que ocurran las reacciones de las vas catablica y anablica debe haber un suministroconstante de molculas orgnicas que puedan ser degradadas para producir energa y deben estar

presentes molculas que sern los ladrillos de construccin. Sin el suministro de estas molculas,

las vas metablicas dejan de funcionar y la vida del organismo finaliza. Las clulas hetertrofas

(incluyendo a las clulas hetertrofas de los vegetales, tales como las clulas de las races)

dependen de fuentes externas, especficamente de clulas auttrofas, para obtener las molculas

orgnicas que son esenciales para la vida. Las clulas auttrofas, por el contrario, son capaces de

sintetizar monosacridos a partir de molculas inorgnicas simples y de una fuente externa de

energa. Luego, estos monosacridos se utilizan no slo para suministrar energa, sino tambin


60/63

CURSO DE BIOQUIMICA


como sillares de construccin para la variedad de molculas orgnicas que se sintetizan en las vas

anablicas. Las clulas auttrofas ms importantes, sin lugar a dudas, son las clulas fotosintticas

de las algas y las plantas que capturan la energa de la luz solar y la utilizan para sintetizar las

molculas de monosacridos de las cuales depende la vida en este planeta.

Vas principales del catabolismo y el anabolismo en la clula.


61/63

CURSO DE BIOQUIMICA




Matraz

Tapon de jebe con dos agujeros.

Vasos precipitados

pHmetro

Bureta

Bageta




Tubo de ensayo

Termmetros

Agua destilada

Hidroxido de sodio

Levadura

Enzimas

4. METODOLOGIAEl alumno tendr que aplicar el mtodo experimental para el desarrollo de esta practica as



Laboratorio 09-01

1. Armar los instrumentos como el diseo:

Preparacin de un fermento sin aire. Preparacin de un fermento con aire

2. Aplicar en cada envase un

caldo de cultivo conformado por:


62/63

CURSO DE BIOQUIMICA


Azcar 200 g.

Agua 500 ml.

Levadura 50 gr.

3. Controlar los parmetros de pH, temperatura, acidez.

4. Por espacio de 6 dias

5. Apreciar los resultados y analizar.

6. RESULTADOS Y DISCUSIONDia/ fecha

Horas de

monitoreopH Acidez T

%

azucar

Apariencia

del caldoObservaciones

Inicial:

Hora:24

24

1212

1212

1212

8888

8888

8888

8888


63/63

CURSO DE BIOQUIMICA


7. CONCLUSIONES Y RECOMENDACUONES

Colocar sus apreciaciones asi mismo como va cambiando segn el crecimiento de las levaduras

a travez del experimento.

8. BIBLIOGRAFIA


9. CUESTIONARIO

1. Por qu el cido pirvico se convierte en cido lctico slo para volver a convertirse en

practica bioquimica 2013.doc

Documents

Transcript of practica bioquimica 2013.doc