Epidemiología y su aplicación al diagnóstico de campo … · oficiales de diagnóstico de la...

Centro de Vigilancia Sanitaria Veterinaria (VISAVET) UCM

Epidemiología y su aplicación al diagnóstico de campo de la tuberculosis bovina y caprina. Importancia del uso de pruebas complementarias 1

Lucía de Juan FerréServicio de Micobacterias

EU-RL for Bovine Tuberculosis Centro de Vigilancia Sanitaria Veterinaria (VISAVET), UCM

Epidemiología y su aplicación al diagnóstico de campo de la tuberculosis bovina y caprina. Importancia del uso

de pruebas complementarias.

http://www.vigilanciasanitaria.es



14 Personal docente

40 Investigadores pre y postdoctorales

25 Personal de apoyo



www.vigilanciasanitaria.es



Líneas de Investigación· Aplicación de nuevas técnicas de diagnóstico: MGIT, real time PCR,técnica de extracción directa de ADN a partir de muestra clínica.

· Estudios de sensibilidad y especificidad de las pruebas diagnósticasde la tuberculosis. Interferencia de otras micobacterias(M.a.paratuberculosis).

· Estudios inmunológicos. Caracterización de la respuesta inmune.Nuevas citoquinas para diagnóstico.

· Caracterización molecular de miembros de los complejos M.tuberculosis (MLST, spoligotyping, VNTR) y M. avium (PCR, REAs).

· Epidemiología de la tuberculosis y paratuberculosis. Papel de losanimales salvajes. Control de la enfermedad. Vacunación.

· Puesta a punto de una técnica de validación de las tuberculinas sinuso de animales de experimentación (EU-RL).

Servicio de Micobacterias

Trabajo de Servicio· Cultivo microbiológico: tuberculosis y paratuberculosis.

· Identificación de complejo Mycobacterium tuberculosis yM. avium mediante la técnica de Reacción en Cadena de laPolimerasa (PCR).

· Caracterización molecular de aislados del géneroMycobacterium: DVR-spoligotyping, PFGE, VNTR.

· Pruebas inmunológicas:•Detección de gamma-interferon (PPD aviar y PPDbovina)•Detección de anticuerpos frente aM.a.paratuberculosis.




Trabajo de Servicio· Cultivo microbiológico: tuberculosis y paratuberculosis.

· Identificación de complejo Mycobacterium tuberculosis yM. avium mediante la técnica de Reacción en Cadena de laPolimerasa (PCR).

· Caracterización molecular de aislados del géneroMycobacterium: DVR-spoligotyping, PFGE, VNTR.

· Pruebas inmunológicas:•Detección de gamma-interferon (PPD aviar y PPDbovina)•Detección de anticuerpos frente aM.a.paratuberculosis.

Servicio de Micobacterias Acreditación

PE/003/MYC*PE/012/MYCCULTIVO

PE/005/MYC*PE/011/MYCPE/013/MYC

PCR

PE/007/MYCSPOLIGOS

PE/001/MYCTINCIÓN

PE/009/MYC*IFN TBC

PE/010/MYCSerología PTB

Muestra biológica Medio de cultivo ADN Perfiles de

spoligo

Flujo Servicio




Convenios de colaboración

- Apoyo en el diagnóstico de tuberculosis- Asesoría científica/técnica- Estudios de investigación

- Estudios epidemiológicos (DVR-spoligotyping, VNTRs).Gestión y actualización de la Base de Datos Nacional mycoDB.- Escuela de Tuberculosis para la formación del personalveterinario y desarrollo de una técnica de sensibilización enanimales sanos mediante la aplicación de antígenos deMycobacterium bovis.- Cultivo microbiológico de tuberculosis, identificación ycaracterización molecular de los aislados e interpretación deresultados de CCAA.- Estudio de la interferencia producida por la vacunación frentea la paratuberculosis y pseudotuberculosis o de la co-infecciónpor C. pseudotuberculosis en el diagnóstico de la tuberculosis.- Complementar al Laboratorio de Referencia Europeo deTuberculosis Bovina.- Tuberculosis en reservorios silvestres y análisis de la eficaciade un programa de vacunación en estas especies.- Valoración de la sensibilidad y especificidad de las pruebasoficiales de diagnóstico de la tuberculosis bovina y caprinamediante el empleo de PPDs.- Asesoría científica y técnica al MARM y CCAA (acreditación).



11,1411,77

11,17

10,2110,78

9,18

7,46

5,91

5,68

5,215,35

4,57

3,44

2,492,11

2,812,24 2,141,801,52

1,76 1,63 1,59 1,65

1,51

4,2

3,67

4,01

3,08

3,69 3,68

2,14

1,72 1,63

1,28

1,38

1,26

0,89

0,75 0,66 0,58 0,520,47 0,40 0,31 0,42 0,49 0,48 0,41

0,360

2

4

6

8

10

12

14

1986 1987 1988 1989 1990 1991 1992 1993 1994 1995 1996 1997 1998 1999 2000 2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010

PREVALENCIA DE REBAÑO E INCIDENCIA EN ANIMALES 1986-2010 TUBERCULOSIS BOVINA

PREVALENCIA DE REBAÑO

INCIDENCIA EN ANIMALES

ESP

AÑ

A

Problemas de diagnóstico

Estudios epidemiológicos

Animales salvajes

La erradicación de la tuberculosis bovina esposible siempre y cuando se mantenga laintegridad del rebaño (considerado como unidadepidemiológica) y todos los reservorios y factoresde riesgo se eliminen o controlen

Objetivo: Detectar el mayor número de animales infectados



El problema de la erradicación... • Existencia de gran variedad de sistemas

de explotación.• Epidemiología compleja.• Medidas que deben mantenerse mucho

tiempo.• Colaboración necesaria de todas las

partes (ganadero, matadero, …)

Bac

ilos

Bac

ilos

Res

pu

esta

inm

un

e

Tiempo

Inmunidadcelular

Inmunidad humoral

- Inmunidad de base humoral: Detección de anticuerpos

- Inmunidad de base celular- Intradermotuberculinización (IDTB): simple / comparada- Técnica de gamma-interferon

Diagnóstico inmunológico de la tuberculosis



IDTB simple

• sensibilidad individual

• Interpretación estándar

• Imprescindible para

clasificar rebaños

• Especificidad falsos positivos exposición a micobacteriasno tuberculosas (ej. Complejo M. avium). Solución IDTBcomparada

Resultado Medida (mm) Signos clínicos

Negativo 2 NO

Dudoso >2 y <4 NO

Positivo 4 SÍy/o

En ciertas circunstancias losanimales dudosos se consideranpositivos

IDTB comparada - Técnica de aplicación (PPDbov/PPDav)- Lectura - Interpretación estándar:

- Permite discriminar paratuberculosis u otrasmicobacterias en rebaños sin tuberculosis.- ↑ especificidad, pero ↓ sensibilidad uso estratégicoen ciertos casos!!

Resultado Interpretación

NegativoReacción negativa a la tuberculina bovina o reacción positiva o dudosa ala tuberculina bovina pero igual o inferior a una reacción positiva odudosa a la tuberculina aviar, con ausencia de signos clínicos.

Dudoso Reacción a la tuberculina bovina positiva o dudosa y superior en 1 a 4 mma la reacción a la tuberculina aviar, con ausencia de signos clínicos.

Positivo Reacción a la tuberculina bovina superior en más de 4 mm a la reacción ala tuberculina aviar o presencia de signos clínicos.

En ciertas circunstancias los animales dudosos se consideranpositivos



• Mide la respuesta inmune celular in-vitro

•Ventajas: interpretación objetiva de losresultados, reduce los problemasprácticos intrínsecos a las pruebas deintradermotuberculinización…

•Detecta animales en fases más tempranas de la infección

•Buena sensibilidad, pero problemas de especificidad

EMPLEO COMO UN TEST COMPLEMENTARIO PARADETECTAR EL MAYOR NÚMERO DE ANIMALESINFECTADOS EN CIERTAS SITUACIONESEPIDEMIOLÓGICAS

Test de detección de gamma-interferon

Prueba del gamma-interferón(SANCO/10200/2006)

- Prueba complementaria para permitir la detección delmáximo número de animales infectados (Directiva64/432/CEE).

- En paralelo con la IDTB para aumentar sensibilidad.

- Punto de corte autorizado en el expendiente del registro delkit (0,05).

-En rebaños o regiones de alta prevalencia.

-En rebaños positivos confirmados, en la primera repeticiónjunto a la IDTB.

-- No uso como técnica de screening en áreas de bajaprevalencia.

- Los requerimientos logísticos implican dificultades en áreasremotas.



Técnica de gamma-interferon

Cultivo in vitro de la sangre

EIA

Plasma

Fun

dam

ento

de

la t

écn

ica

macrófagolinfocito T

GIFN

*

Ensayo -IFN: dos fases distintas

RECOGIDA Y ESTIMULACIÓN ELISA

¡¡¡PUNTOS CRÍTICOS!!!



Portal de la Red de Alerta Sanitaria Veterinaria: www.rasve.mapa.esCentro VISAVET: www.vigilanciasanitaria.es

1. IDTB > 60 días IDTB

Animales hipersensibilizados por la IDTB → Falsos positivos

Animales > 6 meses IFN

Tomar las muestras de sangre antes de inocular las tuberculinas

Material estéril, agujas para extracción de sangre

Tubos con anticoagulante (heparina de litio)

Volumen sangre > 4,5 ml (recomendado 5 ml)

Volumen de los tubos: 10 ml.

Invertir el tubo para homogeneizar la heparina

Personal especializado

2. Extracción de sangre



3. Transporte al laboratorio

Temperatura ambiente (no refrigerada)

4. Tiempo de estimulación

Inferior a 8h tras su recogida

Soporte científico: Se ha demostrado que es un factor

que afecta al ensayo de -IFN en bovino

Retraso de 24 horas: disminución de los valores de DO

5. Dispensar la sangre

Invertir el tubo para homogeneizar la sangre

Para una muestra dispensar en tres pocillos

consecutivos:1,5 ml

6. Estimulación sangre con PPDs

PPDs de campaña de erradicación

Concentración óptima: 20 g PPD/ml sangre

Concentración trabajo PPDs = 300 g/ml

Volumen: 100 l PPD/1,5 ml sangrePPDbov

PBS

PPDavPBS



7. Incubación Temperatura: 37ºC.

Tiempo: 18-24h.

8. Recogida plasma tras centrifugación 500-800 g / 10-15 minutos

9. Realización del ELISA

10. Interpretación de los resultados

-IFN bovino POSITIVO:

DO PPDbov – DO PBS 0,05

DO PPDbov > PPDav

-IFN bovino NEGATIVO

Cualquier otra posibilidadEjemplosDO PBS DO PPDav DO PPDbov IFNav IFNbov0,0086 0,0132 0,1717 0,0046 0,16310,0089 0,0325 0,0681 0,0236 0,06920,0072 0,0067 0,0077 -0,0005 0,00050,0072 0,0779 0,0763 0,0707 0,06910,0077 0,2071 0,0086 0,1994 0,00090,0101 0,2539 0,1606 0,2438 0,1505

RESULTADO IFN bovinoPOSITIVOPOSITIVO

NEGATIVONEGATIVONEGATIVO

NEGATIVO-REACTOR AVIARNEGATIVO-REACTOR AVIAR



Causas potenciales de fallos diagnósticos

• Tipo de explotación (manejo: carne-extensivo vs. leche-intensivo)

• Transmisión interespecífica: Pastoreo mixto (ovejas, cabras)

Reservorios de vida salvaje

•Factores relacionados con los tests diagnósticos disponibles:

Falta de sensibilidad: no se detectan animales infectados

Falta de especificidad: resultados positivos de animales libres

La existencia de Falsos Positivos/Negativos puedeser debida a factores relacionados con:

1. Reactivos (tuberculinas)

2. Realización de la prueba

Evitables

Formación personal

NRL






3. El estado inmunitario del animal analizado

Evitables

Difícil

Formación personal

NRL




3. El estado inmunitario del animal analizado

Evitables

Difícil

Formación personal

NRL



Animales falsos negativos

• Mantienen la infección en el rebaño

• Ralentizan la erradicación implicaciones económicas

• Varias posibles causas las más comunes y conocidas:

Infección con (Mico)bacterias ambientales

Demasiado pronto (pre-alérgico) / demasiado tarde (anérgico)

A VECES MUY DIFÍCILES DE CARACTERIZAR!!!

Test statusEstado real

• Sacrificio innecesario de animales

• Pérdidas económicas

• Disminuye la confianza y el compromiso de los ganaderos

• Origen complejo (reacciones de hipersensibilidad inespecíficas)

Test statusEstado real

Vacunación vs. Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis

Infección con (Mico)bacterias ambientales

Animales falsos positivos



• Prueba de referencia: cultivo bacteriológico• Ventajas del cultivo: E=100%; S≈100% en

casos avanzados

• Inconvenientes:– S: en campañas NO hay (apenas) casos

avanzados sensibilidad limitada (yvariable en función del curso de laenfermedad)

– E: necesario medirlo en ausencia deenfermedad (por la limitada S) situaciones epidemiológicas distintas

En tuberculosis….

Por ello…

• Resultados muy variables de los estudios de campo (de la Rua-Domenech, 2006)

– IDTB: • Sensibilidad=63,2-100% (83,9%) • Especificidad=75,5-99% (96,8%)

– IFN-γ:• Sensibilidad=73-100% (87,6%)• Especificidad=85-99,6% (96,6%)



Abordaje tradicional vs. bayesiano

• Tradicional: no incorporamos experiencia

• Bayesiano: distribución a posteriori de unparámetro es consecuencia de unadistribución a priori más el efecto de losdatos observados…

• Es decir: además de tener en cuenta losdatos, introducimos nuestra experienciasobre el tema (más información)

MATERIAL Y MÉTODOS:6062 bovinos de 42 rebaños una vez detectada lainfección en la explotación.

RESULTADOS:IDTB: S muy variable (40-92%)

E muy elevada (>99%) Limitada sensibilidad a la hora de detectar animalesrecientemente infectados tras repetirse la prueba enun mismo rebaño 3-6 meses después del anterior test.

IFN-: S mayor (>80% dependiendo del punto de corteaplicado)E aceptable (>80%) Confirma su utilidad como prueba complementaria

Evaluación de las pruebas diagnósticasde tuberculosis bovina medianteanálisis bayesiano (IDTB y IFN-)



TBCPTB

España: diagnóstico en cuatro posibles situaciones

•Rebaño con infección mixta tuberculosis-paratuberculosis

•Rebaño libre de tuberculosis /infectado con paratuberculosis

•Rebaño con tuberculosis libre de paratuberculosis

•Rebaño libre de ambas enfermedades

Ejemplos prácticos de interpretación

PTB

TBC

1. Falsos negativos2. Falsos positivos3. Situación epidemiológica complicada4. Latencia

Ejemplos

Resultados de cultivo Map + Map - Total

Tuberculosis+ 24 107 131

Tuberculosis - 6 26 32

Total 30 133 163

Resultados de cultivo (n=163)

1. FALSOS NEGATIVOS

Diagnóstico en un rebañocaprino con una infecciónmixta de tuberculosis yparatuberculosis



IDTB simple vs. IDTB comparada

• Animales TBC+/PTB-(n=61)

IDTB COMP+ IDTB COMP - TotalIDTB SIMPLE+ 29 19 48 (S=78.7%)IDTB SIMPLE- 0 13 13

Total 29 (S=47.5%) 34 N=61

IDTB COMP+ IDTB COMP - TotalIDTB SIMPLE+ 7 6 13 (S=54.2%)IDTB SIMPLE- 0 11 11

Total 7 (S=29.2%) 17 N=24

• Animales TBC+/PTB+ (n=24)

Animales con tuberculosis (n=131)

IDTB COMP+ IDTB COMP - TotalIDTB SIMPLE+ 56 37 93 (S=71%)IDTB SIMPLE- 0 38 38

Total 56 (S=42.7%) 75 N=131

1. FALSOS NEGATIVOS

X D

0 2 4 6 8 10 12

0

2

4

6

8

10

12

14

16

18

Dif. Bov.

Dif. Aviar

¡No detectados mediante IDTB

comparada! (75/131)

¡Detectados por IDTB simple!

(93/131)

¡No detectados mediante IDTB

simple! (38/131)

IFN+

IFN-

¡Detectados solo por IFNγ!

(26/38)

1. FALSOS NEGATIVOS

IDTB simple vs. IDTB comparadaAnimales con tuberculosis (n=131)



Sensibilidad de las pruebas diagnósticas según resultados de cultivo

1. FALSOS NEGATIVOS

· Primer saneamiento: 627 animales analizados

Interpretación IDTB Positivo Dudoso Negativo

Standard Simple 4 17 606Comparada 1 16 610

EstrictaSimple 21 606Comparada 17 610

· IDTB:21 animales sacrificados C.tbc: Neg!

C.ptb: 1+

· IFN-γ: 66+ (121+ sin PPD aviar)· Cultivo:

· Explotación de leche, en UVL de baja prevalencia

Diagnóstico en un rebaño bovinolibre de tuberculosis e

infectado de paratuberculosis

2. FALSOS POSITIVOS






Segundo saneamiento: 550 animales analizados· IFN-γ: 48+ (133+ sin PPD aviar)· Cultivo: 10 animales sacrificados todos negativos· IDTB:




Tercer saneamiento: 769 animales analizados• IFN-γ: 25+ (90+ sin PPD aviar)• IDTB:

2. FALSOS POSITIVOS

Diagnóstico en un rebañobovino con una infecciónmixta de tuberculosis y

paratuberculosis

• Más de 600 animales

• Infección por M. bovis y Map confirmada por cultivo

• Situación epidemiológica compleja:

M. bovis: 6 spoligotipos diferentes Map: cepas de tipo II y III

• Más de 200 animales sacrificados dependiendo deresultados de diagnóstico (SICCT, IFN-γ, serologíaparatuberculosis) en los últimos saneamientos

3. SITUACIÓN EPIDEMIOLÓGICA COMPLICADA/ ANIMALES ANÉRGICOS



Resultados de cultivo (n=218)Resultados de cultivo Map + Map - Total

Tuberculosis+ 18 30 48

Tuberculosis - 94 76 170

Total 112 106 218

3. SITUACIÓN EPIDEMIOLÓGICA COMPLICADA / ANIMALES ANÉRGICOS

Sensibilidad de la pruebas diagnósticas

3. SITUACIÓN EPIDEMIOLÓGICA COMPLICADA / ANIMALES ANÉRGICOS



4. LATENCIA

Diagnóstico en un rebaño bovinoinfectado con tuberculosis y

paratuberculosis

- Animales infectados que no responden a pruebasdiagnósticas

Progreso lento de erradicación de la tuberculosis. Calificación de rebaños infectados – fuente de infección. Existencia de animales coinfectados anérgicos (positivos aserología de paratuberculosis)

Abordar cada problema de forma individual NO HAY FÓRMULAS

MÁGICAS

•Valorar la presencia/ausencia de tuberculosis y paratuberculosis

•En zonas de tuberculosis (y paratuberculosis) el empleo de pruebascomparadas (SICCT) DISMINUYE LA SENSIBILIDAD DIAGNÓSTICA

•En zonas libres de tuberculosis el uso de pruebas comparadaspermite la diferenciación de falsos reactores disminuye elsacrificio innecesario de animales

En resumen…



1. Maximizar las interacciones entre los Estados Miembros mediantecolaboraciones activas2. Armonizar los protocolos entre los países de la Unión Europea3. Contribuir a los objetivos científicos, técnicos y relacionados con laregulación que sean propuestos por la Comisión.

Responsabilidades y tareas del EU-RL:

1. Coordinación de los métodos utilizados en los estadosmiembros para el diagnóstico de la tuberculosisbovina.- Aislamiento e identificación de Mycobacterium spp.- Caracterización de cepas de Mycobacterium spp.- Colección de cultivos de Mycobacterium spp.- Base de datos de cepas aisladas en la Unión Europea.- Validación de reactivos para pruebas inmunológicas.- Armonización de protocolos- Preparación y control de reactivos de referencia- Pruebas comparativas

2. Organización de workshops y formación de personal.

3. Asistencia técnica a la Comisión.

4. Actividades de investigación.



Programa de trabajo EU-RL 2011Principales actividades

1. Validación de las tuberculinas

2. Diagnóstico de tuberculosis en camélidos.

3. Determinar la eficacia de la pruebas diagnósticasen ganado bovino infectado con M. caprae.

4. Membrana de spoligos a NRL.

5. Manual de revisión de los protocolos.

6. Interlaboratorios.

7. Misiones.

8. Grupo de trabajo.

Subgrupo de la Task Force

- Comisión Europea, Suecia, Irlanda, Reino Unido, Italia, Portugal, EU-RL for Btb.

- Asesoría técnica

MinisterioVeterinarios

MataderoLaboratorioGanadero

Programa de erradicaciónEstrategia largo plazo

Fases finales

- Desarrollo del programa- Identificación de los animales (bases de datos)- Compensaciones- Problemas específicos- Estudios especiales (lidia, búfalo, fauna salvaje)



En Europa…

- Distinta prevalencia.- Análisis de los datos.- Animales positivos: reactores IDTB vs.cultivo y/o lesión.- Diferente epidemiología: gran variedad desistemas de explotación (pastos comunes,tipo explotación, …) y epidemiologíacompleja (fauna).- Diferentes programas: si/no, edadanimales, interpretación prueba, puntos decorte, frecuencia, etc.- Regionalización.

Comparación de la sensibilidad (ensayos de potencia) de diferentes

tuberculinas europeas en vacuno



Synthena McLintock

Dermo Jet

Pistolas de inoculación intradérmica

MUTO-Tuberkulina



Tuberculinas

WDT

Material y métodos:Animales:

- Animales infectados naturalmente.- 8 animales por cada tuberculina a analizar.- ≥ 60 días desde anterior IDTB.- Ideal: animales mansos, de fácil manejo.

Tuberculinas:- International Standard (IS): 32.500 U.I. - Tuberculinas a analizar: se compararán frente al IS (1mg/ml, 0,2 mg/ml).

Metodología:- Rasurar 4 zonas a cada lado del cuello, separadas entre sí 10-12 cm, en cada animal.- Medir espesor de piel con cutímetro de cada zona.Inyectar las tuberculinas: rotando las posiciones entre animales.- Lectura a las 72 horas.

1 23 4



Animales + con cada PPD (IDTB)

Animales + con IDTB y γ-IFN

(n=58)

- 4/5 PPD empleadas aptas.- Mayor nº de animales detectados a concentración1mg/ml.- Mayor nº de animales positivos detectados por γ-IFN.-Situación idónea realización de ambas pruebas enparalelo.

International Standard (IS): 32.500 U.I.

Según la OIE la potencia estimada de la tuberculina bovina deberíaestar comprendida entre el 66% y el 150% de la potencia del IS.



11,1411,77

11,17

10,2110,78

9,18

7,46

5,91

5,68

5,215,35

4,57

3,44

2,492,11

2,812,24 2,141,801,52

1,76 1,63 1,59 1,65

1,51

4,2

3,67

4,01

3,08

3,69 3,68

2,14

1,72 1,63

1,28

1,38

1,26

0,89

0,75 0,66 0,58 0,520,47 0,40 0,31 0,42 0,49 0,48 0,41

0,360

2

4

6

8

10

12

14

1986 1987 1988 1989 1990 1991 1992 1993 1994 1995 1996 1997 1998 1999 2000 2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010

PREVALENCIA DE REBAÑO E INCIDENCIA EN ANIMALES 1986-2010 TUBERCULOSIS BOVINA

PREVALENCIA DE REBAÑO

INCIDENCIA EN ANIMALES

ESP

AÑ

A

Problemas de diagnóstico

Estudios epidemiológicos

Animales salvajes

Factores relacionados con la enfermedad

Epidemiología compleja

- Epidemiología clásica Densidad (hacinamiento, tipo de ganadería, etc.) Comportamiento, movimiento de animales Estudio de las lesiones (cavidad torácica o abdominal) Interacciones (ganado, peridomésticos, salvajes, hombre)

- Epidemiología molecular-DVR-spoligotyping-MIRU-VNTRs

Microbiología



Identificación por PCRPCR Múltiple

Género Mycobacterium

Complejo Mycobacterium tuberculosisMycobacterium avium subsp. paratuberculosis

Direct Variable Repeat - Spacer Oligonucleotide TypingDVR-SPOLIGOTYPING

DR DR

1 2 34

DR DR

1 3 4Locus DR

espaciador

Cepa 1

Cepa 2

1 2 3 4Cepa 1Cepa 2



SB0120

SB0132

M. bovis

M. tuberculosis

SIT58

SB0157

SB0415

M. caprae

SB0157

1101111101111110111101111000011111111100000 Código numérico (SB0121)

Bas

e d

e D

atos

Nac

ion

al d

e M

ycob

acte

riu

mb

ovis

yM

ycob

acte

riu

mca

pra

e



Objetivos:

- Centralización de la información de ADN de cepasdel complejo M. tuberculosis en una Base de DatosNacional.- Vigilancia y estudios epidemiológicos

Datos epidemiológicos:

1. Perfil espoligotipo www.Mbovis.org2. Fecha de recepción de la muestra3. Comunidad Autónoma y su código oficial4. Provincia y municipio y su código oficial5. Especie animal6. Identificación (Mycobacterium sp.)

Spoligotype Search



Spoligotype Search: SB0121

Spoligotype Search: SB1232



Transmisión entre explotaciones

Movimiento de un animal? Fallo diagnóstico? Nueva infección?

Isolate Search: M. bovis en salvajes



Isolate Search: M. bovis en salvajes

1. RESERVORIOS DE INFECCIÓN PARA GANADO DOMÉSTICO

Transmisión ganado fauna salvajes:• Solapamiento de hábitats(pastos, agua)• Cadáveres infectados• Supervivencia en el ambiente

2. ESPECIES PROTEGIDAS

3. IMPACTO EN SALUD PÚBLICA

Importancia de la tuberculosis en animales salvajes

Conservación de pequeñas poblaciones

• Directo: cazadores, manejo de carcasas• Productos (alimento) infectados: embutidos



¿Qué ocurre en España?1.Variedad de fauna salvaje, varias especies

susceptibles (jabalí, gamo, ciervo)

2. Proliferación especies receptoras (faltadepredadores)

3.Alta densidad de población (alimentaciónanimales salvajes)

4.Caza como actividad económica

5.Práctica ganaderas específicas (extensivo)

Aislados de M. bovisprocedentes de fauna salvaje

Aislados bovinos de M.

bovis

155

42

17

22

Total: 81

Aislados de M. bovis 2006-2007



Aislados de M. bovis

Bovino Fauna salvaje

Perfil Aislados % Aislados %SB0339 72 46,4 70 86,4SB0121 37 23,9SB0265 16 10,3SB0867 11 7,1SB0122 5 3,2SB0120 4 2,6SB0134 3 1,9 1 1,2SB0294 3 1,9SB0152 2 1,3SB0295 1 0,6SB1090 1 0,6SB1142 8 9,9SB1302 1 1,2SB1393 1 1,2

81 155 Total:

DVR-Spoligotyping: caracterización molecular

Número limitado de muestras: tejidos, articulacionesDos áreas de muestreo

Spoligotipos SB1232, SB1230 y SB0426 Jabalí y ciervo, vacuno

ESPECIES PROTEGIDASConservación de poblaciones

Lince ibérico



Isolate Maps

Objetivos futuros

Asesoría y apoyo a la base de datos Nacional.Completar con:

- Otras técnicas moleculares (VNTR).

Cepa 1

Cepa 2

Cep

a 1

Cep

a 2

Spoligotyping ETR-A MIRU-4 Especie Año de muestreo

17 cepasSB0121

5 4 7 vacuno4 jabalí

2001-20032002

7 3 5 vacuno1 jabalí

20012002

VNTR



Objetivos futuros


- Otras técnicas moleculares (VNTR).- Otras especies del complejo M. tuberculosis.

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Objetivos futuros


- Otras técnicas moleculares (VNTR).- Otras especies del complejo M. tuberculosis.- Sistema de información geográfica (GIS).



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Epidemiología y su aplicación al diagnóstico de campo … · oficiales de diagnóstico de la...

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