Dianóstoco Laboratorial de Estreptococos y Estafilococos

7/24/2019 Dianstoco Laboratorial de Estreptococos y Estafilococos

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UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADORFACULTAD DE CIENCIAS MDICASESCUELA DE TECNOLOGA MDICAREA DE LABORATORIO CLNICO

CUARTO SEMESTRE BACTERIOLOGA2014

TEMA:TOMA DE MUESTRAS, STAPHYLOCOCCUS Y STREPTOCOCCUS

1. OBJETIVOS

Identificar las caractersticas macromorfolgicas de las colonias

de Staphylococcus y Streptococcus en los medios de cultivo.

Determinar los diferentes tipos de hemlisis que se producen en

el agar sangre por las especies del gnero Staphylococcus yStreptococcus.

Realizar pruebas bioqumicas para poder identificar y diferenciar

las especies del nero Staphylococcus.

Realizar pruebas bioqumicas para poder identificar y diferenciar

las especies del nero Streptococcus.

2. MARCO TERICO

!"#D$D% &$S$'(

!sta muestra solo se utiliza para buscar portadores de S.aureus o en eldiagnstico etiolgico de imptigo. &o es )til para el diagnstico etiolgico encasos de rinitis* rinosinusitis ni en casos de otitis media ni cuadros respiratoriosaltos prolongados

$lrededor del +,- de la poblacin es portadora de este microorganismo a nivelnasofarngeo por lo cual su hallazgo no tiene habitualmente significancia clnicasalvo en situaciones especiales. !n el personal de salud slo se realizar lab)squeda de portadores en el caso de brotes de infecciones en los que no seha encontrado otra fuente de infeccin. !ste tipo de investigacin se realizaren coordinacin con el

D. /R$&S0%R/! 1 2%&S!R3$2I%&.!nvo inmediato al laboratorio 4no superior a 5 horas6.


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!"#D$D% 7$RI&!%

Se utiliza para el diagnstico de faringitis estreptocccica. !8cepcionalmente sepueden requerir b)squeda de otros patgenos 4por e9emplo( &eisseriagonorrhoeae6 consultar con el laboratorio.

D. /R$&S0%R/! 1 2%&S!R3$2I%&.!nvo inmediato al laboratorio 4no superior a 5 horas6.Si no es posible* conservar en heladera a :;2 hasta hemoltico delgrupo $ 4S.pyogenes6 y otros grupos beta hemolticos como 2 y .

Gn!" S#$%&'(")"))*+STA,-LOCOCCUS AUREUS/ STA,-LOCOCCUS E,IDERMIDIS

STA,-LOCOCCUS SA,RO,-TICUS.

'os Staphylococcusque se asocian con infecciones humanas son colonizadoresprincipalmente de superficies cutneas y mucosas. !l crecimiento de las coloniasbacterianas son visibles casi sobre todos los medios de cultivo* en especial en agarsangre.

Son bacterias en forma de coco ram positivas producen catalasa* son aerobiosfacultativos. 'a temperatura ideal de crecimiento es de +?;2*2onsumen lpidos* protenas y fermenta una gran variedad de azucares* no esformadora de esporas y crecen en niveles de salinidad ?.@>


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!n agar sangre* nutritivo chocolate* soya tripticasa* etc* se ven colonias pequeAas*blanquecinas* de forma circular* bordes redondeados* superficie lisa y conve8a.$lgunas cepas producen un pigmento carotenoide que les da un color dorado4Staphylococcus aureus6.

Cultivos

'os estafilococos crecen rpidamente en casitodos los medios bacteriolgicos ba9o condiciones

aerobias o microaeroflicas.Se desarrollan con ms rapidez a una temperaturade +?B2 pero forman pigmento me9or a una temperatura ambiente 45, a 5@B26.'as colonias en medios slidos son redondas* lisas* elevadas y brillantes.

Staphylococcus aureus

$lgunas cepas de S. aureus pueden producirun pigmento carotenoide que les da un coloramarillo* el color es ms evidente en agares

nutritivos como agar sangre* agar chocolate*agar infusin cerebro corazn* agar nutritivo*entre otros.

'as cepas de S. aureus son productoras decoagulasa y beta>hemolisinas 4algunas cepas

carecen de hemolisina6 presenta colonias de < a + mm de dimetro* lisas* levementeelevadas* de bordes enteros* levemente conve8as.

,!*$+ 3"5*63)$+ %$!$ ($ 37n#33)$)38n 7 Staphylococcus aureus.

$gar sales y manitol( positivo 4color amarilllo6.

0rueba de coagulasa( positivo.

Sensisbilidad a vancomicina( positivo.

Cnica especie de Staphylococcus que puede producir pigmentacinamarilla.

D&$asa( positiva.

Staphylococcus aureus en agar sangrea contra luz para observar la hemolisis

Staphylococcus aureus en agar sangrea contra luz para observar la hemolisis

Staphylococcus aureus en agar sangrea contra luz para observar la hemolisisStaphylococcus aureus en agar sangrea contra luz para observar la hemolisisStaphylococcus aureus en agar sangrea contra luz para observar la hemolisisStaphylococcus aureus en agar sangrea contra luz para observar la hemolisisStaphylococcus aureus en agar sangrea contra luz para observar la hemolisisStaphylococcus aureus en agar sangrea contra luz para observar la hemolisisStaphylococcus aureus en agar sangrea contra luz para observar la hemolisisStaphylococcus aureus en agar sangrea contra luz para observar la hemolisisStaphylococcus aureus en agar sangrea contra luz para observar la hemolisis


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Staphylococcus saprophyticus.

2asi nunca se asocia a enfermedades nosocomiales* muchas cepas son manitolpositivo* no producen beta>hemolisis en agar sangre* es causante de infecciones

urinarias*carece de coagulasa y no produce ningunapigmentacin.

B3"5*63)$+ %$!$ ($ 37n#33)$)38n 7 Staphylococcus saprophyticus.

$gar sales y manitol( negativo o positivo 49$!3$(6.

0rueba de coagulasa( negativo.

Sensibilidad a vancomicina( !+3+#n#.

D&$asa( negativo.

Staphylococcus epier!iis.

.

'as infecciones por S. epidermidis sonoportunistas* nosocomiales y generalmente

est asociado a los implantes de prtesis*

catteres e intervenciones quir)rgicas.

'as colonias de S. epidermidis por lo

general son grises a blancas en el

aislamiento primario muchas colonias

forman pigmento slo tras una incubacin

prolongada. &o se produce pigmento en

condiciones anaerobias o en caldo y presenta colonias generalmente de menor

tamaAo y estas no presentan pigmentacin.

,!*$+ 3"5*63)$+ %$!$ ($ 37n#33)$)38n 7 S#$%&'(")"))*+%37!6373+.

$gar sales y manitol( negativo 4da un color rosa6.

0rueba de coagulasa( negativo.


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Sensisbilidad a vancomicina( positivo..

,$!$ 37n#33)$! ( n!" *+$6"+ ($+ %!*$+ 3"5*63)$+ %!36$!3$+.

/incin de ram( 2ocos ram positivos* agrupados en racimos.

2atalasa( positiva.

%8idasa( positiva.

%E7( 7

'a prueba de %E7 es la que diferencia Staphylococcus sp. Del gnero

Ficrococcus sp. !ste )ltimo tiene metabolismoo8idativo.

Di"ere#ciaci$# e especies e Staphylococcus

=acteria. Fanitol. 2oagulasa. &ovobiocina. D&$asa.

S. aureus 0ositivo 0ositivo Sensible 0ositivo

S.saprophyticus 3ariable &egativo Resistente &egativo

S. epidermidis &egativo &egativo Sensible &egativo

GNERO STRE,TOCOCCUS

!l gnero Streptococcus es un grupo formado por diversos cocosgramposi tivos que normalmente se disponen en pare9as o en cadenas.'a mayora de las especies son anaerobios facultativos* y algunos crecen)nicamente en una atmsfera enriquecida con di8ido de carbono. Sus

e8igencias nutricionales son comple9as* y su aislamiento requiere el uso demedios enriquecidos con sangre o suero. Son capaces de fermentarhidratos de carbono* proceso que produce cido lctico* y son catalasa>negativos* a diferencia de las especies del gnero Staphylococcus

#n gran n)mero de especies estreptoccicas destacan por su papel comopatgenos humanos. 'amentablemente* la diferenciacin de las especies quecomponen este gnero es complicada debido a que se utilizan los tres sistemasdiferentes parcialmente coincidentes enumeradosa continuacin para clasificar a estos microorganismos(


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hemolticos y nohemolticos carecen de los antgenos de lapared celular especficos degrupo. !stos microorganismos se deben identificar a travs de pruebasbioqumicas. &oobstante* estos sistemas de clasificacin no son mutuamentee8cluyentes

STRE,TOCOCCUS ,OGENES.

!l S. pyogenes 4tambin conocido como $S6 pertenece al R#0% $ y es elagente causal en las infecciones estreptoccicas del rupo $* 4$S6incluyendo faringitis estreptoccica 4amigdalitis6* fiebre reumtica aguda*fiebre escarlata* glomerulonefritis aguda y fascitis necrotizante

!l hidrato de carbono especfico de grupo* es el antgeno del grupo $* es undmero de &>acetilglucosamina y de ramosa.

'a infeccin por !streptococo rupo $ es diagnosticada generalmente con una0rueba Rpida de !streptococos o mediante 2ultivo.

!l mtodo ms com)nmente empleado en los laboratorios clnicos para laidentificacin presuntiva en cultivos de Streptococcus =eta>hemoltico del grupo$ 4Streptococcus pyogenes6 es la prueba de susceptibilidad a la bacitracina o/a8o $. %tra manera es detectar el antgeno $ mediante enzimoinmunoanlisiso inmunoaglutinacin.


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STRE,TOCOCCUS AGALACTIAE

C$!$)#!+#3)$+ n!$(+S. agalactiae* o =S* pertenece al grupo = y causa neumona y meningitis enneonatos y en las personas ms 9venes* con bacteremia sistmica ocasional.!stos tambin pueden colonizar los intestinos y el tracto reproductor femenino*incrementando el riesgo de ruptura prematura de membranas y la transmisinal infante.

!s un coco grampositivo* catalasa y o8idasa negativo* anaerobio facultativo*que se presenta formando cadenas de longitud variable. !n medios

suplementados con sangre o suero se favorece su crecimiento. /ras 5: h deincubacin en agar sangre* las colonias son de unos 5 mm de dimetro* lisas yrodeadas por un halo de K>hemlisis* aunque e8isten algunas cepas nohemolticas.

!l empleo de medios selectivos favorece la recuperacin del !=. 2omoagentes selectivos se emplean* gentamicina* cido nalid8ico* colistina o cristalvioleta.

IDENTIFICACIN

'as pruebas bioqumicas ms utilizadas son el 2$F0>test* la hidrlisis delhipurato y la resistencia a discos debacitracina y cotrimo8azol* aunque ningunade ellas es especfica. !n medios de cultivo especiales* el != produce unpigmento de color ro9o naran9a* que es caracterstico* y que permite suidentificacin directa* sin necesidad de otras pruebas.


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STRE,TOCOCCUS ,NEUMONIAESe trata de una bacteria ram. 0ositiva que presenta una forma oval y ele8tremo distallanceolado. !s inmvil* no forma endosporas* y es un miembroalfa hemoltico del gnero Streptococcus. eneralmente* se presenta en formade diplococo* aunque e8isten algunos factores que pueden inducir la formacinde cadenas. &eumococo es un patgeno casi e8clusivamente humanocausante de un gran n)mero de infecciones como neumona* endocarditis y deprocesos invasivos severos como meningitis* septicemia* etc. particularmenteen ancianos* niAos y personas inmunodeprimidas. !l hbitat natural de

neumococo es la faringe

!l estreptococo pneumoniae se puede diferenciar del estreptococo viridans enque solo el primero es soluble en bilis*el viridans no. 1 la otra diferencia es queel estreptococo pneumoniae se inhibe en la presencia de optoquina.!lestreptococo viridans no se inhibe con la optoquina

Resistente a la optoquina 4S.viridans6*

Sensible a la optoquina 4S.pneumonae6

A)#3937$7 -6"(#3)$

'a hemlisis observada en los aislamientos de Streptococcus y !nterococcusen diferentes muestras clnicas es una de las primeras caractersticas


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sugestivas de posibles especies. $lgunas especies muestran una hemlisiscompleta 4hemlisis K6 alrededor de las colonias en agar sangre* como S.pyogenes* S. agalactiae 4aunque algunos aislamientos aparecen como no>hemolticos6* Streptococcus de los grupos 2* 7 y * as como algunas cepas de!nterococcus*

%tras especies pueden mostrar una hemlisis incompleta 4hemlisis alfa6alrededor de las colonias en agar sangre* incluyendo S. pneumoniae*Streptococcus del grupo D y del grupo viridans.

$l realizar la determinacin de los patrones hemolticos de los aislamientos deStreptococcus y !nterococcus es importante considerar que muchas de suscitolisinas 4hemolisinas6 son lbiles al %5* por lo que las bacterias deben serinoculadas dentro del agar para proporcionar un ambiente relativamenteanaerbico.

,RUEBA DE CAM,

'a prueba de 2$F0 se utiliza para la identificacin presuntiva de S. agalactiae4grupo = de 'ancefield6. !n esta prueba se observa un efecto sinrgico que seproduce al interactuar el factor 2$F0 producido por cepas de S. agalactiae conla hemolisina L de Staphylococcus aureus. $mbos son productos e8tracelularesque difunden en el medio de cultivo para producir dicho efecto en forma de

flecha cuando se utilizan placas de agar sangre preparada con eritrocitosovinos o bovinos. #na vez inoculados* los medios de cultivo deben serincubados a +@>+?B2 por 5: horas. $lgunos autores recomiendan no incubarlas placas de agar sangre para la prueba de 2$F0 en una atmsferaenriquecida con 2%5 debido a un probable efecto inhibitorio sobre elsinergismo.

,RUEBA DEL DISCO DE O,TOUINA

0rueba de resistencia al optoquina.

'a prueba de resistencia a la optoquina 4hidrocloruro de hidrocuprena6 permitela diferenciacin de Streptococcus pneumoniae 4sensible al optochin6 de otrosStreptococcus M> hemolticos como los Streptococcus del grupo viridans4resistentes al optochin6. 0ara la realizacin de esta prueba el microorganismoen estudio debe ser inoculado densamente en una placa de agar sangre ysobre el inculo se coloca un disco conteniendo optochin 4rotulado con una 06 *el cual se presiona levemente para que se adhiera a la superficie del medio.'as placas de agar sangre son posteriormente incubados a +@>+?o2 por unperodo de 5: horas en una atmsfera enriquecida con 2%5. 'a mayora delos discos conteniendo optochin disponibles comercialmente tienen un dimetrode N mm. #tilizando estos discos de N mm para la prueba de resistencia al


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optochin* un resultado se considera negativo 4susceptible6 cuando el halo deinhibicin mide al menos


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2loruro de sodio al N.@- Disco de optoquinina Regla milimetrada $sas bacteriolgicas 2a9as

con agar 4sangre6

Discos de bacitracina ,.,:u 0er8ido de hidrogeno 2epa de Staphylococcus

aureus


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4. ,ROCEDIMIENTO

!8udado nasal

/omar muestra profunda de ambas fosas nasales con el mismo hisopo*previamente embebido en suero fisiolgico estril.

E


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2olocamos en un portaob9etos limpio dos gotas de solucin salina 4una

como prueba y la otra como control6. 2ogemos un asa de siembra* la esterilizamos en el mechero de =unsen

y con dicha asa cogemos una colonia del agar sangre. Fezclamos la colonia con la gota de solucin salina de prueba que se

encuentra en la placa y colocamos una gota de plasma citratado. $gitamos hemolticos 2ogemos una agar sangre y con el asa de siembra esterilizada la

dividimos en la mitad y la parte inferior la dividimos en la mitad* de talmanera que el agar se divide en tres partes


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,!*$ 7 CAM, 2on un asa estril cogemos una colonia se Staphylococcus aureus beta>

hemoltico y de manera vertical en la primera divisin inoculamos. !sterilizamos el asa y cogemos una colonia de Streptococcus beta>

hemoltico del grupo $ e inoculamos de manera horizontal al otrolado dela lnea verical.

!sterilizamos el asa y cogemos una colonia de Streptococcus beta>

hemoltico del grupo = e inoculamos de manera horizontal a un lado dela lnea verical.

,!*$ 7 +n+33(37$7 $ ($ "%#"5*3n$

#samos la segunda divisin del agar en la cual mediante un asa estril*

seleccionamos tres o cuatro colonias bien aisladas del microorganismo aprobar y estriarlas en la mitad de la divisin. 2olocamos un disco de optoquinina en el centro del rea sembrada 0resionamos suavemente el disco sobre el agar Incubamos en la estufa a +@o2 durante 5: horas.

,!*$ 7 +n+33(37$7 $ ($ $)3#!$)3n$

#samos la tercera divisin del agar sangre y cogemos tres o cuatro

colonias aisladas de Streptococcus beta hemoltico y estriamos elinculo hasta el centro de la mitad del agar sangre.

2on un hisopo estril diseminados por la divisin del agar sangre. 2olocamos un disco de bacitracina en el centro del rea sembrada 0resionamos suavemente el disco con pinzas flameadas sobre el agar. Incubar en la estufa a +@o2 durante 5: horas.

,!*$ 7 3(3+ +)*(3n$

2ogemos una colonia del agar sangre con el asa esterilizada Realizamos la picada en el tubo y la estriacin.

Resistencia al &a2l 2ogemos una colonia homogenizamos bien en el cloruro de sodio al


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STA,-LOCOCCUS

0rueba de 2atalasa

R+*(#$7": debido a la aparicin de burbu9as el resultado es positivo* ya que elper8ido de hidrgeno 4P5%56 se convierte en agua y o8geno.

0rueba de FanitolR+*(#$7": la prueba es positiva debido al cambio de color de ro9o a amarillo.

,!*$ 7 C"$*($+$ L3$7$

R+*(#$7": 'a presencia de aglutinacin en el portaob9etos a los 5, segundosnos indica que la prueba es positiva.

,!*$ 7 C"$*($+$ L3!

R+*(#$7": 'a reaccin positiva en tubo se considera cuando se forma elcogulo despus de : horas.


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R+*(#$7": !n el agar Fuller>Pinton obtuvimos como resultado resitente parala &ovobiocina la cual presenta un halo de inhibicion Q


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R+*(#$7" 7( C$6%R+*(#$7": Se form las flechas positivo para =eta Pemoltico.

R+*(#$7" 7 ($ +n+33(37$7Sensible a la =acictracina 4Palo . CONCLUSIONES

Se diferenci la micromorfologa de los Staphylococcus 4racimos6 con

los Streptococcus 4cadenas6 con la ayuda del microscopio. Se conoci que para diferenciar entre Staphylococcus y Streptococcus

debemos realizar la prueba de la catalasa* ya que los Staphylococcusson catalasa positiva* mientras que los Streptococcus son catalasanegativos.

'a prueba de coagulasa ya sea ligada o libre es fundamental para la

identificacin de Staphylococcus Se determin que con la prueba de =ilis esculina se identifica

Streptococcus y !nterococcus Se concluy que una prueba para la diferenciacin rpida del

Staphylococcus aureus es mediante la prueba de la coagulasa* ya queel S. aureus es el )nico coagulasa positivo.

?. RECOMENDACIONES

Debemos leer la prueba de la coagulasa a su debido tiempo* ya que

si pasa mucho tiempo el cogulo puede disolverse. $l coger la colonia con el asa de siembra no se debe tomar parte del

agar sangre porque la catalasa presente en los eritrocitos puedenproducir falsos positivos


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Siempre antes de coger una colonia de los diferentes agares se debe

esterilizar el asa de siembra para evitar contaminacin.

@. BIBLIOGRAFA

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