Citologadelamedulasea 141009231852 Conversion Gate02
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MEDULA OSEA
Natalia molina Juan Fernando Ruiz
Sara cristina Londoño Julián Vasco
INDICACIONES
• Diagnostico de enfermedades hematopoyéticos
• Aporta información sobre la capacidad hematopoyética
• Evaluación de enfermedades infecciosas y neoplasias
• Indicado cuando en sangre periférica aparecen aumentos o descensos persistentes del # de células o anormalidad celular sin causa aparente
• Examen de medula ósea: evaluación citológica (ppal por aspiración) o biopsias para obtener un diagnostico completo
Causa más frecuentes
Citopenias Anemias no regenerativas, trombocitopenias, leucopenias(neutropenias, linfopenias)Bicitopenias, pancitopenas
Aumento persistente del # celular en sangre circulante
Eritrocitosis, leucocitosis, trombocitosis
Presencia de células anormales en sangre circulante
Leucemias, linfosarcomas, alteraciones morfológicas de GR
Dx o control de evolución de neoplasias hematopoyéticas
Leucemias (linfocitica, granulocitica, monocitica)
Evaluación de la afectación de la MO en ciertas neoplasias
Linfoma, mastocitoma
DX y evolución de enfermedades infecciosas
Leishmaniosis, ehrlichiosis, Histoplasmosis, toxoplasmosis
Control de los depósitos de hierro en MO Dx diferencial de anemias ferropenicas
Otras patologías Hiperproteinemia( sugestiva de mieloma)Fiebre de origen desconocido Hipercalcemia de origen desconocido
Obtención y procesamiento
• Agujas Para punción: 1. Agujas de Rosenthal 2. Agujas de
Jamshidi/illinois
• Son firmes para atravesar la superficie ósea
• Tienen un fijador interno que impide su obstrucción
• Calibre 16G(Perros medianos a grandes) 18G ( perros pequeños o gatos)
• CRESTA DEL ÍLEON • Colocación del
paciente: decúbito lateral o esternal
• Localizar por palpación: cresta iliaca
• Punto de inserción: parte dorsal del íleon
HUESOS CON ACTIVIDAD HEMATOPOYÉTICA
• ALA DEL ÍLEON • Colocación del
paciente: decúbito lateral
• Localizar por palpación: cresta y ala del íleon
• Punto de inserción: depresión central del ala del íleon
• COSTILLA • Colocación del paciente:
decúbito lateral.• Localizar por palpación:
unión costocondral (7, 8, 9 costilla).
• Punto de inserción: unión costocondral, en dirección ascendente al eje longitudinal
• ESTERNÓN • Colocación del
paciente: decúbito supino.
• Localizar por palpación: 3, 4 o 5 esternebra.
• Punto de inserción: línea media de la esternebra
• FÉMUR • Colocación del
paciente: decúbito lateral.
• Localizar por palpación: trocanter mayor del fémur.
• Punto de inserción: fosa trocanterica (cara medial)
• HÚMERO:• Colocación del paciente:
decúbito lateral • Localizar por palpación:
tuberosidad proximal • Punto de inserción:
superficie plana adyacente a la tuberosidad dorsal
PROCEDIMIENTO
• Infiltrar: piel, tejido subcutáneo, músculo, periostio Anestésia local 1-3ml (lidocaína 2%)
• Incisión hoja bisturí (#11) Introducir aguja (3-5mm en el hueso) Retirar fijador Acoplar Jeringa (10ml) Aspirar.
• Obtener sólo unas gotas de MO (mucho vlm de muestra se diluye con sangre).
• Procesar muestra rápidamente (coagulación en menos de 30sg) Mezclar con EDTA
• Técnica de extensión: método squash o de aplastamiento
TIPOS DE TINCIÓN
1. Evaluación citológica simple Técnica Romanowsky (May-Grünwald, Wright-
Giemsa o tinción rápida) Áreas densas (teñidas de color azul-púrpura):
partículas medulares. Zonas claras o vacías: gotas de grasa
2. Evaluación depósitos de Fe Tinción: Azul de Prusia Hemosiderina dentro de los macrófagos (se tiñe
de azul)
3. Tinciones citoquímicas especiales Realizar Dx diferenciales de leucemias
Tinción Leucemia linfoide
Laucemia Mieloide
Leucemia Monocítica
Laucemia Mielo-Monocítica
Peroxidasa - + - +
Sudán Negro - + + +
Fosfatasa Ácida
- + + +
Esterasas no específicas
- - + +
Cloro-acetato-esterasa
- + + +
INTERPRETACIÓN CITOLÓGICA
• SERIE ERITROIDE Células de contorno muy redondeado con
citoplasma intensamente basófilo que se va aclarando con su maduración
Maduración: tamaño celular y relación núcleo-citoplasma disminuye Cromatina nuclear se condensa
MADURACIÓN SERIE ERITROIDE
1. Rubiblasto (proeritroblasto)
2. Prorrubricito (eritroblasto basófilo)
3. Rubricito (eritroblasto policromatófilo)
4. Metarrubricito (eritroblasto ortocrómatico o acidófilo)
5. Reticulocito6. Eritrocito Maduro
❶❷ ❸
❸ ❹
❹
INTERPRETACIÓN CITOLÓGICA
• SERIE GRANULOCÍTICA O MIELOIDEProducción: neutrófilos, eosinófilos, basófilosMaduración:
tamaño celular y relación núcleo-citoplasma disminuye Cromatina nuclear se condensa Núcleo pasa de ser redondeado a indentarse y
segmentarse Basofília citoplasmática disminuye
MADURACIÓN SERIE MIELOIDE
1. Mieloblasto2. Promielocito
(progranulocito)3. Mielocito4. Metamielocito 5. Célula en banda6. Célula segmentada
❶ ❷
❸
❹
❺
INTERPRETACIÓN CITOLÓGICA
• SERIE MONOCÍTICANo son abundantes en MO (<5%)Prácticamente imposible diferenciar las fases
inmadurasMaduración:
Monoblasto Promonocito Monocito Macrófago
INTERPRETACIÓN CITOLÓGICA
• SERIE MEGACARIOCÍTICAFormación de plaquetas (trombocitos)Células de mayor tamaño en el aspirado División celular por endomitosis: reduplicaciones
del núcleo que no se acompañan de divisiones de la célula
MADURACIÓN SERIE MEGACARIOCÍTICA
1. Megacarioblasto2. Promegacariocito3. Megacariocito basófilo4. Megacariocito5. Trombocito ó plaqueta
❷
❸
❹
INTERPRETACIÓN CITOLÓGICA
• SERIE LINFOCÍTICANumero de células
escaso en comparación con las demás
Prácticamente imposibles de identificar morfológicamente (inmaduros)
Superior en gatos (10-15%) que en perros (4-5%)
OTRAS CÉLULAS
• OSTEOCLASTOS Múltiples núcleos claramente
separados Citoplasma teñido de azul con
granulaciones rojizas-magenta. Ocasional en adultos,
frecuente en jóvenes adultos: sospechar de
patologías con aumento de la osteólisis (hipercalcemia asociada a patologías malignas).
• OSTEOBLASTOS FRECUENTES EN ANIMALES
JÓVENES CITOPLASMA BASÓFILO Y
ABUNDANTE, ASPECTO ESPUMOSO, NORMALMENTE CON NUCLEOLO VISIBLE.
APARECEN VARIOS JUNTOS FORMANDO GRUPOS.
• MISCELÁNEACélulas vasculares (células endoteliales de los
capilares medulares)Células conjuntivas (células reticulares)Adipocitos Mastocitos (procesos inflamatorios, aplasias
medulares o mielofibrosis, mastocitomas sistémicos).
• CÉLULAS DEGENERADAS Y NÚCLEOS LIBRES:Frecuente núcleos libres rotos por la obtención de la
muestra(granulocitos). También núcleos redondos y picnoticos por los
metarrubricitos.
• FIGURAS MITÓTICAS:Normal por ser un órgano hematopoyético la proporción no debe ser superior al 2%.
EVALUACIÓN CLÍNICA DE ASPIRADOS
• Evaluación conjunta de muestra de sangre periférica obtenida simultáneamente (recuento celular y examen de frotis).
1. Calidad de la muestra2. Celularidad3. # Relativo y morfología de los megacariocitos4. Relación mieloide: eritroide y recuento diferencial5. Maduración y morfología de las series eritroide y mieloide6. Presencia y morfología de otros tipos celulares habituales en
M.O7. Presencia de otras células, microorganismos
1. CALIDAD DE LA MUESTRA
• Poca contaminación con sangre periférica.• Zonas gruesas (partículas medulares): evaluar
celularidad.• Zonas finas (células disgregadas): evaluación
de morfología
2. CELULARIDAD
• Poco aumento: 20x – 40x• Se estima la proporción de
células hematopoyéticas nucleadas en comparación con la cantidad de tejido adiposo. Jóvenes 75% tejido
hematopoyético, 25% tejido adiposo.
Adultos: 25% tejido hematopoyético, 75% tejido adiposo
HIPOCELULARIDAD• Tejido hematopoyético inferior al
porcentaje normal.• CAUSAS
Técnica de aspirado incorrecta. Contaminación excesiva de sangre
periférica. Verdaderas patologías.
• No es confiable para diagnostico definitivo.
• Se recomienda repetir extracción.• Si persiste: posible patologías
medulares.• Se recomienda biopsia.
HIPERCELULARIDAD
• Excede el porcentaje normal (25% o 75%) de células hematopoyéticas.
• Asociado casi siempre a un aumento de la actividad hematopoyética (benigna o neoplásica) o a metástasis de neoplasias extramedulares.
3. EVALUACIÓN DEL NÚMERO RELATIVO YMORFOLOGÍA DE LOS MEGACARIOCITOS
• Objetivo 10x.• Normal encontrar 50 a 100 en una extensión
(2 a 7 por cada partícula medular).• Es frecuente encontrar neutrófilos dentro de
algún megacariocito (emperipolesis), sin importancia patológica.
• como respuesta compensatoria a una trombocitopenia por causas extramedularesHiperplasia
megacariocítica: proporcional de todas las fases de maduración.
Laucemia megacariocítica: desproporcionado de las fases inmaduras
4. EVALUACIÓN DE LA RELACIÓN MIELOIDE: ERITROIDE (RATIO M:E) Y RECUENTO DIFERENCIAL
• Se realizan cálculos de las proporciones relativas de las series mas abundantes en MO (relación o ratio mieloide: eritroide, ME) junto con una estimación de sus fases de maduración.
• Se cuentan 500 células nucleadas a 100x, (incluyendo granulocitos maduros) y se divide entre el numero de células eritroides.
• Valores normales: Perro: 0.75 – 2.53 Gato: 1.21 – 2.16
5. MADURACIÓN Y MORFOLOGÍA DE LAS SERIES ERITROIDE Y MIELOIDE:
• Necesario examinar 3 extensiones distintas de la misma muestra.
• En la morfología se evalúan cambios citoplasmáticos y nucleares.
• la mayoría de alteraciones morfológicas reflejan alteraciones en la maduración celular (displasia).
Hiperplasia granulocítica (neutrófilos), en perra con píometra.
Hiperplasia granulocítica (eosinófilos) en perra con linfoma mediastínico.
CLASIFICACIÓN DE LA MADURACIÓN
• Normal y ordenada: proporción normales de todas las fases de maduración.
• Desordenada: casi siempre un aumento de las fases mas inmaduras o cambios displásicos.
• Detenida: maduración se detiene en determinada fase.
• Neoplásica: severo aumento de la población de blastos.
MORFOLOGÍA Y MADURACIÓN DE LA SERIE ERITROIDE
• Deben de estar presentes todas las fases de maduración eritroide y en las proporciones adecuadas, y asimismo la morfología celular normal.
• proporcional de fases inmaduras y maduras, es una respuesta adecuada a una anemia por causas periféricas (anemia regenerativa).
• fases Inmaduras pero no las maduras, sugiere una alteración en la proliferación de esta serie.
Hiperplasia eritroide en paciente con anemia inmunomediada
MORFOLOGÍA Y MADURACIÓN DE LA SERIEGRANULOCÍTICA
• Se valora si la maduración es completa y ordenada, presencia de posibles alteraciones morfológicas como vacuolas citoplasmáticas, aumento anormal del tamaño celular etc.
• Posibles aumento patológicos de basófilos o eosinófilos asociados a procesos inflamatorios o alérgicos.
• Para evaluar objetivamente: calcular índice maduración eritroide (IME) y mieloide (IMM)
ÍNDICES DE MADURACIÓN
Índice IME• Es la suma de células
eritroides nucleadas en fase de maduración dívidido la suma de células eritroides en fase de proliferación.
• IME = Metarrubricitos / rubiblastos + prorrubricitos + rubricitos
• IME = 5,2±1,7
Índice IMM• Es la suma de células
mieloides en maduración divido la suma de células mieloides en proliferación.
• IMM = metamielocitos + bandas + células segmentadas / mieloblastos + promielocitos + mielocitos
• IMM= 4,4±1,4
6. Presencia y morfología de otros tipos celulares habituales en M.O
• SÍNDROME MIELODISPLÁSICO: 5-30% de todas las células nucleadas son blastos.
• ENFERMEDADES PROLIFERATIVAS AGUDAS: blastos superan el 30% del total de células nucleadas.
• LEUCEMIAS CRÓNICAS: aumento marcado de las fases maduras de la serie afectada (incremento significativo del numero de células maduras en sangre periférica)
• Las neoplasias hematopoyéticas se dividen en general en mieloproliferativas y linfoproliferativas, su diferenciación y clasificación es compleja por eso se requiere de tinciones especiales, biopsias e incluso inmunofenotipado.
7. EVALUACIÓN DE LA PRESENCIA DE OTRAS CÉLULAS O MICROORGANISMOS
• Evaluar posible presencia de células extrañas o poco habituales en MO (metástasis de neoplasias extramedulares).
• Metástasis medular: presencia de una población celular ajena a la MO con criterios de malignidad (poco común en veterinaria).
• Mielofibrosis: sustitución del Tejido hematopoyético por fibroblastos y colágeno.
• Paciente con aplasia medular por moquillo
Presencia de abundantes
amastigotes de Leishmania en
macrófago medular
ALTERACIONES MÁS FRECUENTES
BIBLIOGRAFÍA
• MARTÍNEZ DE MERLO, Elena M. Atlas de Citología Clínica del Perro y del gato. ED: SERVET. P:364-407 capitulo: citología de medula ósea.