Clasificación de los métodos cromatográficos en columna(4) Cromatografía líquido sólido:

permeación en geles

• Principios:• Se basa en los diferentes tamaños de

las moléculas cuando pasan a través de una columna rellena con un gel

Poros del gel

Clasificación de los métodos cromatográficos en columna(5)líquido sólido: Cromatografía por afinidad

• La separación depende de la interacción reversible de las moléculas con el ligando específico que se encuentra en la fase estacionaria

• Las moléculas del analito se distribuyen entre un líquido (fase móvil) y una superficie enlazada (fase estacionaria)

Equipo de cromatografía líquida

Depósito de fase móvil:

• Generalmente están equipados con contienen uno o más depósitos de 500 ml para el solvente. A menudo se incluyen accesorios para eliminar os gases disueltos y partículas es suspensión. Pues los gases producen dispersión en las bandas y las partículas interfieren con el funcionamiento del detector.

Sistema de bombeo:• Las exigencias que deben cumplir las bombas

que se utilizan en cromatografía de líquidos son:

• posibilidad de presión de hasta 480 atm, • salida libre de pulsaciones, • caudales entre 0,1 y 10 ml/min,• reproducibilidad de caudales de 0,5%• resistencia a la corrosión debida a los

solventes.

Sistema de inyección• Se puede inyectar la muestra mediante

una jeringa a través de un diafragma, pero este sistema no es muy reproducible. Otro sistema es usar dispositivos con un bucle de bombeo que inyecta la muestra directamente en la cabeza de la columna.

Columnas:• se construyen generalmente con tubos de acero

inoxidable, a veces de vidrio de paredes resistentes a presiones menores de 48 atm. Tiene una longitud de 10 a 30 cm y un diámetro de 4 a 10 mm. Los empaquetamientos típicos de columna son de un tamaño de partícula de 5 a 10μm. Tienen generalmente 40000 a 60000 platos/m.

• También existen microcolumnas que tienen un diámetro de 1 a 4,6 mm y una longitud de 3 a 7 cm, con empaquetamientos de 3 a 5 μm y tienen 100000 platos/m, son más ventajosas por su rapidez y bajo consumo de solvente. Los empaquetamientos pueden ser de sílice, alúmina, partículas de polímeros porosos que se recubre con una fina película orgánica que se una química o físicamente a la superficie.

Detectores:• no hay detectores universales, como en

cromatografía gaseosa, el sistema de detección depende de la naturaleza de la muestra.

• Los más empleados:UV-visibleIndice de refracción FlorescenciaInfrarrojoAmperométricoconductimétrico

Aplicaciones

• Conservantes antioxidantes• Carbohidratos en bebidas• Isómeros de carotenoides• Flavonoides y fenoles• Lípidos• Surfactantes no iónicos• Nutrientes liposolubes

Cromatografía plana

• Papel poroso o capa delgada de sólido poroso activo y la fase móvil líquida asciende por capilaridad o desciende por gravedad manteniéndose el sistema dentro de una cámara cerrada– Capa fina – Papel

Cromatografía en lecho abiertoCapa fina

• Fase estacionaria es una capa o película de milímetros de espesor. Formada por partículas unidas a una placa o soporte (aluminio, vidrio o plástico)

• Una ventaja de esta técnica es que permite analizar diversas muestras y estándares en forma simultánea.

• Para muestras difíciles de resolver se puede trabajar en sentido perpendicular: desarrollo bidimensional

Cromatografía en lecho abiertoCapa fina

• El análisis cualitativo se es el factor de retención o índice de retención

solventedelfrentealorigendelciadismanchalaaorigendelciadisRf tan

tan==

Cromatografía en lecho abiertoCapa fina

• Los valores de Rf dependen de la composición de la fase estacionaria, temperatura, compuestos. Por lo general se corren estándares sobre la misma placa para facilitar la identificación.

• Se usan reveladores para identificar