METODOS CROMATOGRÁFICOSIgor Ivan Villalta Sortoinvestigacionquimica@usam.edu.sv

METODOS CROMATOGRÁFICOS

• Son métodos para la separación de sustancias en mezclas y para la identificación o la cuantificación de los diferentes componentes.

• La separación se da a base de procesos de distribución y absorción.

• En los métodos cromatográficos se utilizan dos fases no miscibles una con otra.

• Una de las fases es estacionaria (absorbente) y la otra móvil.

• Por medio de la fase móvil se transporta la mezcla de sustancias a separar.

CROMATOGRAFÍA

De capa fina. Estas se comparan

con los estándares que se encuentran en las farmacopeas

CROMATOGRAFIA• La fase estacionaria

puede ser sólida o líquida

• La fase móvil puede ser líquida (eluente) o gaseosa (gas portador)

• LAS POSIBILIDADES• Gas-líquido• Gas-sólido• Líquido-líquido• Líquido-sólido

METODOS DE CROMATOGRAFÍA

•CROMATOGRAFÍA DE PAPEL

•CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA

• CROMATOGRAFÍA DE GAS

•CROMATOGRAFÍA DE LÍQUIDOS (EN COLUMNA; HPLC)

PRINCIPIOS FÍSICO-QUÍMICOS

DISTRIBUCIÓN ENTRE DOS FASES

Se basa en el hecho que cada sustancia muestra una distribución característica entre dos fases por su afinidad (polaridad), lo que se expresa en el coeficiente de distribución C

COEFICIENTE DE DISTRIBUCIÓN

C = concentración de sustancia fase 1 entre

Concentración de sustancia fase 2

C, depende de la temperatura.

EJEMPLOS

• CROMATOGRAFÍA DE PAPEL

• Fase estacionaria: capa de agua que se forma por la humedad ambiental en la superficie de la celulosa de papel

• Fase móvil: mezcla de solventes

• CROMATOGRAFÍA DE GAS

• Fase estacionaria: líquido

• Fase móvil: gas

TLC, revelada con la irradiación de luz UV 254 nm

TLC, revelada con la irradiación de luz UV 365 nm

Reunión de la columna cromatográfica de las raíces de Ambrosia cumanensis

Macerado de las raíces de Ambosia cumanensis

(EtOH, macerado de 20 días)

TLC, raíces de Ambrosia cumanensis(Revelador de vainilla en ácido sulfúrico)

Cámara reveladora Esprayador

Reunión de la columna cromatográfica de las raíces de Ambrosia cumanensis

SOLVENTES FRECUENTEMENTE UTILIZADOS EN CCF

SOLVENTES NO POLARES:- n-hexano- CCl4

- Tolueno- Éter de petróleo- n-heptano- Benceno (extremadamente tóxico)

SOLVENTES DE MEDIANA POLARIDAD:- CH2Cl2

- CHCl3

- Éter etílico

SOLVENTES POLARES:- Acetato de etilo- Acetona- Dioxano- Isopropanol- EtOH- MeOH- H2O

La fase móvil puede estar formada porun único solvente, por mezcla de dos(binaria) o tres (terciaria).

FASE MÓVIL DE “BATALLA”n-hex:AcOEt (1:1)

no polar:polar

Cromatografía en capa fina (CCF)Cromatografía en capa fina (CCF)- Fase estacionaria: celulosa, alumina, celita, poliamida, gel de sílice,

etc.

- Fase móvil: depende de las características de la muestra, disolventes de distintas polaridades.

- Detección con luz UV o rociando con un reactivo.

Cromatografía de Adsorción

- Se suele usar para el seguimiento de reacciones, para determinar

número de componentes de una mezcla, pureza de un producto y

seguimiento de columnas cromatográficas.

La mezcla a separar se deposita sobre lafase estacionario y la móvil atraviesa elsistema desplazando a los componentesde la mezcla a distinta velocidad, dependiendo de la magnitud de sus interacciones relativas con ambas fases. La repetición sucesiva de las operaciones elementales de retención y desplazamiento a lo largo del sistema cromatográfico da lugar a la separación de la mezcla original.(Figura 10.2).

El fenómeno de migración de los componentes de una mezclaa lo largo de la fase estacionaria, impulsados por la móvil,recibe el nombre de elución (Figura 10.2).

Método de Separación: Técnicas cromatográficasLa cromatrografía es una técnica que permite la separación de

los componentes de una mezcla debido a la influencia de dos efectos contrapuestos:

a) Retención: efecto ejercido sobre los componentes de la mezcla por una fase estacionaria, que puede ser un sólido o un líquido ancla- do a un soporte solidó.

b) Desplazamiento: efecto ejercido sobre los componentes de la mezcla por una fase móvil, que puede ser un líquido o un gas.

PASOS PARA UNA CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA

PASOS PARA UNA CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA

CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA

ABSORCIÓN• DEFINICIÓN• Acumulación de una

sustancia en la superficie de otra a base de interacciones específicas entre la superficie polar del absorbente y grupos polares de la sustancia absorbida.

• En menor concentración la sustancia puede correr más tiempo con la fase móvil, para comparar diferentes muestras hay que usar concentraciones parecidas.

• LA CAPACIDAD DE ABSORCIÓN DEPENDE DE:

• Temperatura (Tº mayor- menor absorción)

• Superficie del absorbente (superficie más grande-más absorción), se prefieren polvos finos como absorbentes.

• La cantidad de sustancia en la fase móvil.

FACTOR DE RETENCIÓN RF

Rf = distancia entre la línea de partida y la posición de la sustancia, distancia entre la línea de partida y el frente del solvente

Es un valor relativo que proporciona información acerca de la posición de las diferentes sustancias, lo que ayuda a identificarlas.

FACTOR DE RETENCIÓN RF

REVELACIÓN

• Definiciones• Se refiere al proceso

de separación de las sustancias o a la visualización de las sustancias después de la separación

• Algunas sustancias emiten fluorescencia en luz UV de 256 o 366 nm, otras desactivan la fluorescencia de placas de silicagel que contienen sustancias fluorescentes.

• Otras sustancias se visualizan por medio de calor o de reacciones químicas, se disperga un reactivo en la placa que forma un compuesto de color con la sustancia.