1.) Introducción a la Histología - Prof. Vita Calzolaio

UNIVERSIDAD DE CARABOBOFACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUDESCUELA DE CIENCIAS BIOMÉDICAS Y

TECNOLÓGICASDEPARTAMENTO DE CIENCIAS MORFOLÓGICAS Y FORENSESHISTOLOGÌA Y EMBRIOLOGÌA

INTRODUCCIÓN A LA HISTOLOGÌA Y

MORFOLOGIA CELULAR

Prof. MSc. Vita M Calzolaio

Histología: Concepto y aplicaciones científicas y clínicas.

Técnica histológica: Etapas en la preparación de tejidos para su estudio al microscopio óptico y electrónico.

Histoquímica y Citoquímica: Aplicación, tipos, fundamentos químicos de la coloración.

Microscopía: Tipos de microscopios y aplicación. Microscopio óptico: partes, funcionamiento. Microscopio electrónico: de transmisión y de barrido.

INTRODUCCION AL ESTUDIO DE LA HISTOLOGIA Y MORFOLOGIA CELULAR

HISTOLOGIA : ¿QUÉ ES?

DEL GRIEGOHISTO = TEJIDO

LOGOS = ESTUDIO

FUNDADOR DE LA HISTOLOGIA: MARCELLO MALPIGHI

SIGLO XVII: PRIMERAS INVESTIGACIONES HISTOLOGICAS. INVENCION MO POR ANTONIO VAN LEEUWENHOEK

CIENCIA QUE ESTUDIA LA ANATOMIA MICROSCOPICA DE LAS CELULAS, ORGANOS Y SISTEMAS ASI COMO SU DESARROLLO Y SUS FUNCIONES

¿CON QUE OTRAS CIENCIAS SE RELACIONA?

ANATOMIAFISIOLOGIA BIOLOGIA CITOLOGIA BIOQUIMICA PATOLOGIA ONTOLOGIA

LA HISTOLOGIA REPRESENTA UN NEXO DE UNION ENTRE LA BIOQUIMICA, LA FISIOLOGIA, LA ANATOMIA, LA GENETICA, LA CLINICA Y LA PATOLOGIA

ENTONCES PODEMOS DECIR;

LA CELULA ES LA UNIDAD MORFOLOGICA Y FINCIONAL DE TODO SER VIVO. ES EL ELEMENTO DE MENOR TAMAÑO QUE PUEDE CONSIDERARSE VIVO

TEJIDOS: AGRUPACION DE CELULAS CON LA MISMA FUNCION

ORGANOS: UNIDAD FUNCIONAL MAYOR COMPUESTO POR DISTINTOS TIPOS DE TEJIDOS

SISTEMA DE ORGANOS: CONGUNTO DE ORGANOS CON FUNCIONES RELACIONADAS

PARA PODER OBSERVAR MICROSCOPICAMENTE ESTAS ESTRUCTURAS SE NECESITA:

TECNICA HISTOLOGICA

SERIE DE PASOS QUE DEBEN CUMPLIRSE PARA OBTENER UN PREPARADO OBSERVABLE AL MO

LA OBTENCION DE LA MUESTRA DE MATERIAL HUMANO PUEDEN PROVENIR DE NECROPSIAS, BIOPSIAS Y PIEZAS OPERADAS

NECROPSIA: LA MUESTRA SE OBTIENE DE UN CADAVER. PARA HISTOLOGIA NORMAL SE REQUIERE QUE SE TRATE DE UN CADAVER FRESCO.

BIOPSIA: TROZOS DE TEJIDOS QUE SE OBTIENEN DE UN SUJETO CON VIDA CON EL OBJETO DE ESTUDIARLO AL MO Y EFECTUAR UN DIAGNOSTICO HISTOPATOLOGICO.

PIEZAS OPERADAS: TEJIDOS EXTRAIDOS DE INTERVENCIONES QUIRURGICAS COMO TUMORES, ORGANOS INFLAMADOS

PREPARACION HISTOLOGICA DE LOS TEJIDOS

1) OBTENCION DE LA MUESTRA: MEDIANTE LA OBTENCION DE PEQUEÑOS FRAGMENTOS DE TEJIDOS (HUMANO O ANIMAL) ANTES DE LA AUTOLISIS O PUTREFACCION 2) FIJACION: CONSISTE

EN MANTENER LA MORFOLOGIA DEL TEJIDO LO MAS PARECIDO POSIBLE A COMO ERA EN EL ORGANISMO ANTES DE HACER LA EXTRACCION (FORMALDEHIDO 37%)

QUIMICOS INMERSION ALCOHOLES

FISICOS CONGELACION


3.- DESHIDRATACION: PROCESO POR EL CUAL SE ELIMINA EL AGUA DE LA MUESTRA TANTO INTRA COMO EXTRACELULAR PARA QUE SE PUEDE EMBEBER ADECUADAMENTE EL TEJIDO EN AQUELLOS MEDIOS DE INCLUSION QUE NO SEAN HIDROSOLUBRES. ESTE PROCESO SE REALIZA UTILIZANDO ALCOHOL ETILICO EN CONCENTRACIONES CRECIENTES.


4) ACLARAMIENTO: PROCESO POR EL CUAL SE CONSIGUE SUSTITUIR EL AGENTE DESHIDRATANTE POR UNA SUSTANCIA MISCIBLE CON EL MEDIO DE INCLUSION. SE UTILIZA XILOL


5) IMPREGNACION (INCLUSION): PROCESO QUE TIENE POR OBJETO “RELLENAR, IMPREGNAR O INFILTRAR” LA MUESTRA HISTOLOGICA DESHIDRATADA CON EL MEDIO QUE SE VA A USAR PARA LA IMBIBICION DEL TEJIDO. SE REALIZA SUMERGIENDO LA PIEZA EN BAÑOS SUCESIVOS DE PARAFINA FUNDIDA


6) ENCASTRAMIENTO DEL TEJIDO Y PREPARACION DE LOS BLOQUES: CONSISTE EN LA OBTENCION DE UN BLOQUE SOLIDO DE TEJIDO MAS MEDIO DE INCLUSION MEDIANTE EL ENFRIAMIENTO LENTO 10-15 º C. EL BLOQUE SOLIDO SE LLAMA TACO


7) ORIENTACION DE LA PIEZA: PARA REALIZAR EL CORTE DE TEJIDO SE MONTA EL TACO EN POSICION ADECUADA SDE ACUERDO AL TIPO DE CORTE QUE SE DESEA REALIZAR EN EL MICROTOMO Y SE OBTIENEN CORTES MUY DELGADOS QUE PARA MICROSCOPIA OPTICA VARIAN ENTRE 5 -10 MICROMETROS


MICROTOMO DE PARAFINA PARA TEJIDOS BLANDOS

MICROTOMO DE CONGELACION SE USA PARA TEJIDOS FRESCOS CONGELADOS

MICROTOMO DE CRIOSTATO PARA TEJIDOS FRESCOS Y TIENE UNA CAMARA DE CONGELACION


8) MONTAJE: LOS CORTES SE COLOCAN SOBRE LAMINAS PORTAOBJETOS CUBIERTOS PREVIAMENTE CON CAPA DE ALBUMINA O GELATINA

9) ACLARAMIENTO: EXTRACCION DE LA PARAFINA CON EL XILOL


10) REHIDRATACION: DESPLAZAR EL XILOL POR AGUA. ALCOHOL CON AGUA EN CONCENTRACIONES DECRECIENTES

11) TINCION O COLORACION: CON COLORANTES HISTOLOGICOS EN SU MAYORIA EN SOLUCION ACUOSA


PREPARACION DE TEJIDOS PARA MICROSCOPIA ELECTRONICA

1)FIJACION: GLUTARALDEHIDO O TETROXIDO DE OSMIO

2)DESHIDRATACION: ETANOL Y/O ACETONA EN CONCENTRACIONES CRECIENTES

3)ACLARACION: OXIDO DE PROPILENO4)INCLUSION: PLASTICOS (RESINAS)

EPOXIRRESINAS5)CONFECCION DE LOS BLOQUES: CORTES CON

ULTRAMICROTOMO CON CLUCHILLA DE VIDRIO O DIAMANTE ( 10-20 nm) EL CORTE SE CONTROLA CON UN MICROSCOPIO

6)MONTAJE: LOS CORTES ULTRA FINOS SE MONTAN EN UN RETICULADO DE COBRE (GRILLA) CUBIERTO POR UNA PELICULA PLASTICA DE SOSTEN DELGADA

FACTORES NECESARIOS PARA UNA BUENA TINCION

TIEMPO DE EXPOSICION

TEMPERATURA AMBIENTE

PH COLORANTE

CONCENTRACION COLORANTE

HISTOQUIMICA Y CITOQUIMICA

SE OCUPAN DE INVESTIGAR LA ACTIVIDAD QUIMICA QUE TIENE LUGAR EN LAS CELULAS Y LOS TEJIDOS. SE FUNDAMENTAN EN:

LA UNION ESPECIFICA DE UN COLORANTE EL USO DE UN ANTICUERPO MARCADO CON UN COLORANTE FLUORESCENTE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA INHERENTE A UN ELEMENTO CONSTITUTIVO DE LA CELULA

COMPOSICION QUIMICA DE LAS MUESTRAS BIOLOGICAS

DESPUES QUE OCURRE LA FIJACION LOS COMPONENTES QUE QUEDAN SON MACROMOLECULAS QUE NO SE DISUELVEN CON FACILIDAD LUEGO DE APLICAR EL FIJADOR

LA COMPOSICION QUIMICA DE UN TEJIDO PREPARADO PARA LA COLORACION DE RUTINA ES MUY DIFERENTE A LA DEL TEJIDO VIVOENTRE ESTAS

MACROMOLECULAS PODEMOS MENCIONAR: NUCLEOPROTEINAS, PROTEINAS INTRACELULARES DEL CITOESQUELETO, PROTEINAS EXTRACELULARES, COMPLEJOS FOSFOLIPIDOS - PROTEINAS (O CARBOHIDRATOS) DE LAS MEMBRANAS

ESTAS MOLECULAS CONSTITUYEN LA ESTRUCTURA DE LAS CELULAS Y TEJIDOS, SON LA BASE DE LA ORGANIZACIÓN VISIBLE EN LOS TEJIDOS AL MO

COMPOSICION QUIMICA DE LAS MUESTRAS BIOLOGICASMUCHOS

COMPONENTES DE LOS TEJIDOS DESAPARECEN DURANTE LA PREPARACION DE LOS CORTES TEÑIDOS CON HEMATOXILINA-EOSINA (HE)LOS COMPONENTES

SOLUBLES, LOS IONES Y LAS MOLECULAS PEQUEÑAS TAMBIEN DESAPARECEN DURANTE LA PREPARACION DE LAS MUESTRAS INCLUIDAS EN PARAFINA: GLUCOSA, SODIO, CLORO Y SUSTANCIAS SIMILARES

LOS LIPIDOS NEUTROS SON DISUELTOS POR LOS SOLVENTES ORGANICOS

ESTOS IONES Y PEQUEÑAS MOLECULAS NO CONSTITUYEN ELEMENTOS MORFOGENICOS HISTICOS SINO QUE PARTICIPAN EN LOS PROCESOS DE SISTESIS O REACCIONES CELULARES

FUNDAMENTOS QUIMICOS DE LA COLORACION

EL FUNDAMENTO DE CUALQUIER METODO DE TINCION RADICA EN LA PROPIEDAD QUE TIENEN TODOS LO TEJIDOS PARA INCORPORAR Y FIJAR DE MODO VARIABLE DIVERSAS SUSTANCIAS COLOREADAS LLAMADAS COLORANTES

¿COLORANTE? SUSTANCIAS QUE PUEDEN CONFERIR COLOR A OTROS CUERPOS

COLORACIONES UTILIZADAS EN MICROSCOPIA OPTICA

COLORANTES BASICOS: POSEEN UNA CARGA GLOBAL POSITIVA (CATIONICA) QUE REACIONA CON LOS COMPONENTES ANIONICOS DE LAS CELULAS Y TEJIDOS. EJEM: HEMATOXILINA

COLORANTES ACIDOS: AQUELLOS QUE POSEEN UNA CARGA GENERAL NEGATIVA (ANIONICOS) QUE REACIONA CON LOS COMPONENTES CATIONICOS DE LAS CELULAS Y TEJIDOS. EJEM: EOSINA

COLORACIONES UTILIZADAS EN MICROSCOPIA OPTICACOLORANTES NEUTROS: SU CARGA

GLOBAL ES NEUTRA POR LO QUE CONSERVAN LA PROPIEDAD DE COLOREAR CONJUNTA O SEPARADAMENTE DIVERSAS ESTRUCTURAS. EJEM: COLORANTE DE GIEMSA

COLORANTES METACROMATICOS: COLORANTES BASICOS QUE PRODUCEN TONOS DE COLOR TOTALMENTE DISTINTOS AL QUE SE ESPERA POR EL COLORANTE EMPLEADO. EJEM: AZUL DE METILENO O TOLUIDINA

COLORANTES INDIFERENTES: NO POSEEN CARÁCTER ACIDO, BASICO O SALINO DEFINIDO. COLOREAN MEDIANTE IMPREGNACION


HEMATOXILINA-EOSINA (HE) : UTILIZA DOS TIPOS DE COLORANTES. LA HEMATOXILINA ES UN COLORANTE BÁSICO, COLOREA LOS COMPONENTES ACIDOS DE LA CELULA (NUCLEO) DE COLOR MORADO Y LA EOSINA ES UN COMPONENTE ACIDO QUE SE UNE A ESTRUCTURAS BASICAS DE LA CELULA (CITOPLASMA) OTORGANDOLE UNA COLORACION ROSADA


COLORACION INDIFERENTE: IMPREGNACION CON SALES DE PLATA

COLORANTE NEUTRO: GIEMSA


COLORANTE METACROMATICO: TINCION AZUL DE TOLUIDINA

COLORACIONES UTILIZADAS EN MICROSCOPIA OPTICACOLORACION CON PAS (ACIDO

PERIÓDICO SHIFF) PARA DETERMINAR MACROMOLECULAS RICAS EN GLUCOGENOS, GLUCOPROTEINAS Y GLUCOSAMINOGLUCANOS. SE OBSERVA COLOR FUSCIA AL MO.

COLORACION CON AZAN (TRICROMICA): SE OBTIENEN TRES COLORES DIFERENTES. AZUL OSCURO EN LOS NUCLEOS DE LA CELULA, ROJO EN EL MUSCULO, QUERATINA Y CITOPLASMA CELULAR,AZUL CLARO EN EL MUCOCINOGENO Y COLAGENO (TEJIDO CONJUNTIVO)

COLORACION CON METALES:ACTUAN IMPREGNANDO A CIERTOS COMPONENTES CELULARES. SE USAN PARA MOSTRAR APARATO DE GOLGI Y LA NEUROFIBRILLA

COLORACIONES UTILIZADAS EN MICROSCOPIA OPTICACOLORACION CON HEMATOXILINA FERRICA:

PARA ESTUDIAR DETALLES CELULARES FINOS. EJEMP. FIBRAS ELASTICAS Y MITOCONDRIAS PRESENTES EN EL CITOPLASMA DE CIERTAS CELULAS

TRICROMICO DE CAJAL Y GALLEGOS: USA TRES COLORANTES PARA DEMOSTRACION DIFERENCIAL Y SELECTIVA DE FIBRAS ELASTICAS Y MUSCULO

ORCEINA Y FUSCINA RESORCINA: COLOREAN LAS FIBRAS ELASTICAS. SE VEN ENTRE BORDEAU Y CASTAÑO OSCURO

CARMIN DE BEST: PARA TINCION NUCLEAR Y DETECCION DE GLUCOGENO

ELEMENTOS CELULARES QUE PRESENTAN BASOFILIA

HETEROCROMATINA Y NUCLEOLOS DEL NUCLEOALGUNOS COMPONENTES CITOPLASMATICOSMATERIAL EXTRACELULAR

AFINIDAD POR LOS COLORANTES ACIDOS

COLOR MORADO AL MO

ELEMENTOS CELULARES QUE PRESENTAN ACIDOFILIA

AFINIDAD POR LOS COLORANTES BASICOS

COLOR ROSADO AL MO

LA MAYORIA DE LOS FILAMENTOS CITOPLASMATICOSLA MAYORIA DE LOS COMPONENTES MEMBRANOSOS INTRACELULARESLA MAYORIA DE LAS FIBRAS EXTRACELULARES

MICROSCOPIA

MICROSCOPIO: ¿QUÉ ES?INSTRUMENTO QUE AUMENTA EL TAMAÑO DE UNA IMAGEN Y PERMITE VER MAYORES DETALLES

MICROSCOPIO OPTICO

LAS CELULAS OBSERVADAS BAJO EL MO PUEDES ESTAR VIVAS O FIJADAS Y TEÑIDAS

CAMPO CLAROCAMPO OSCUROCONTRASTE DE FASEFLUORESCENCIALUZ UV

MICROSCOPIO ELECTRONICO:

TRANSMISION (MET)BARRIDO (MEB)

EL PODER DE RESOLUCION ES LA CAPACIDAD DE LA LENTE O DEL SISTEMA OPTICO DE UN MICROSCOPIO DE PRODUCIR IMÁGENES SEPARADAS DE OBJETOS QUE SE ENCUENTRAN MUY PROXIMOS

LA RESOLUCION DEPENDE:ESPESOR DE LA MUESTRACALIDAD DE LA FIJACIONINTENSIDAD DE LA COLORACION

SISTEMA OPTICOFUENTE LUMINOSALONGITUD DE ONDA

PARTES DE UN MICROSCOPIO OPTICO

Partes Mecánicas:•El pie o base•El tubo•Brazo•El Revolver•La Platina•El carro•Tornillo macrométrico•Tornillo micrométrico

Partes Ópticas:•Condensador•Lámpara•Objetivos•Ocular

M.OPTICO DE CAMPO CLARO

USA LUZ VISIBLE D= 0,2um (micómetro)

LA LUZ ATRAVIESA EL OBJETO EXAMINADO Y EL OBJETIVO CAPTA LA LUZ DIRECTA PROVENIENTE DE LA FUENTE LUMINOSA UTILIDAD: ACADEMICO,

DIAGNOSTICO CLINICO (LAB. BIOANALISIS, PATOLOGICOS) INVESTIGACION

COMPONENTES PRINCIPALES:

FUENTE LUMINOSA: LAMPARA DEBAJO DE LA PLATINALENTE CONDENSADORA: PARA ENFOCAR EL HAZ DE LUZ A LA ALTURA DE LA MUESTRAPLATINA: SOBRE DONDE SE COLOCA LA LAMINA CON LA MUESTRALENTE OBJETIVO: RECOGE LA LUZ QUE HA ATRAVESADO LA MUESTRALENTE OCULAR: A TRAVES DEL CUAL SE PUEDE EXAMNINAR DIRECTAMENTE LA IMAGEN FORMADA POR LA LENTE OBJETIVO

MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASE

APROVECHA LAS PEQUEÑAS DIFERENCIAS DE LOS INDICES DE REFRACCION QUE HAY EN DIFERENTES PARTES DE UNA MUESTRA DE CELULAS O TEJIDOS.

LAS PARTES OSCURAS CORRESPONDEN A LAS REGIONES DENSAS Y LAS PARTES CLARAS CORRESPONDEN A LAS REGIONES MENOS DENSAS.UTILIDAD: PERMITE ESTUDIAR LAS CELULAS EN ACCION Y ESTUDIAR LOS MOVIMIENTOS IMPLICADOS EN PROCESOS COMO LA MITOSIS O LA MIGRACION CELULAR. ESTUDIA CORTES SEMIFINOS NO TEÑIDOS

MICROSCOPIO OPTICO DE CAMPO OSCURO

LA LENTE OBJETIVO NO CAPTA LA LUZ DIRECTA PROVENIENTE DE LA FUENTE LUMINOSA

EL PRINCIPIO ESTA BASADO EN UN CONDENSADOR ESPECIFICO QUE TRANSMIRIR LA LUZ DE FORMA CIRCULAR, DEJANDO EL CENTRO OSCURO.

ESTO PERMITE QUE EL FONDO DE LA MUESTRA PERMANEZCA OSCURO Y LOS ESPECIMENES BRILLANTES

UTILIDAD: EN LA PRACTICA CLINICA PARA LA DETECCION DE CRISTALES EN LA ORINA Y LA IDENTIFICACION DE ESPIROQUETAS

MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA

APROVECHA LA CAPACIDAD DE ALGUNAS MOLECULAS DE FLUORESCER BAJO LA LUZ UV

UTILIDAD: DETECCION DE MOLECULAS CON AUTOFLUORESCENCIA COMO LA VITAMINA A Y ALGUNOS NEUROTRANSMISORES (FLUORESCENCIA NATURAL)EN TECNICAS DE INMUNOHISTOQUIMICA (FLUORESCENCIA SECUNDARIA)EN LA INVESTIGACION DE TRAYECTOS DE FIBRAS NERVIOSAS

MICROSCOPIO DE LUZ ULTRAVIOLETA

USA LENTES DE CUARZO CON UNA FUENTE DE LUZ UVLA IMAGEN DEPENDE DE LA ABSORCION DE LA LUZ UV POR LAS MOLECULAS DE LA MUESTRALA MUESTRA NO PUEDE INSPECCIONARSE DIRECTAMENTE A TRAVES DEL OCULOAR PORQUE LA LUZ UV NO ES VISIBLE Y LESIONA EL OJO.

UTILIDAD: DETECTAR ACIDOS NUCLEICOS EN ESPECIAL LAS PURINAS Y PIRAMIDINASDETECTAR LAS PROTEINAS QUE TIENEN CIERTOS AMINOACIDOS (ANTICUERPOS)

MICROSCOPIA ELECTRONICA

REPRESENTA UN GRAN ADELANTO DE LA MICROSCOPIA OPTICA, YA QUE:

REEMPLAZA LA LUZ VISIBLE POR UN HAZ DE ELECTRONES. ESTE HAZ DE ELECTRONES ES 2000 VECES MENOR QUE LA DEL HAZ DE LUZ, OTORGANDOLE UN PODER DE RESOLUCION MUY ELEVADO.LOS ELECTRONES NO PUEDEN ATRAVESAR EL VIDRIO POR LO QUE DEBEN REEMPLAZARSE POR BOBINAS O LENTES ELECTROMAGNETICOS

EXISTEN DOS TIPOS: MET Y MEB

UTILIZA UN HAZ DE ELECTRONES EN LUGAR DE UN HAZ DE LUZLA FUENTE ES UN FILAMENTO DE TUNGSTENO CALENTADO QUE EMITE ELECTRONESEL HAZ DE ELECTRONES ATRAVIESA UNA SERIE DE LENTES ELECTROMAGNETICAS QUE CUMPLEN LA MISMA FUNCION QUE LAS LENTES DE CRISTAL DE MOLA IMAGEN FINAL SE OBSERVA EN UNA PANTALLA FLUORESCENTE

MICROSCOPIO ELECTRONICO DE TRANSMICION

MICROSCOPIO ELECTRONICO DE BARRIDOEL HAZ DE ELCTRONES NO ATRAVIESA LA

MUESTRA SINO QUE EXPLORA (BARRE) SU SUPERFICIEFORMA UNA IMAGEN DE TIPO TRIDIMENSIONAL EWN UN TUBO DE RAYOS CATODICOS DE ALTA RESOLUCION

http://es.wikipedia.org/wiki/Imagen:JEOL_JSM-6340F.jpg

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