UNIVERSIDAD DE CARABOBOFACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUDESCUELA DE CIENCIAS BIOMÉDICAS Y
TECNOLÓGICASDEPARTAMENTO DE CIENCIAS MORFOLÓGICAS Y FORENSESHISTOLOGÌA Y EMBRIOLOGÌA
INTRODUCCIÓN A LA HISTOLOGÌA Y
MORFOLOGIA CELULAR
Prof. MSc. Vita M Calzolaio
Histología: Concepto y aplicaciones científicas y clínicas.
Técnica histológica: Etapas en la preparación de tejidos para su estudio al microscopio óptico y electrónico.
Histoquímica y Citoquímica: Aplicación, tipos, fundamentos químicos de la coloración.
Microscopía: Tipos de microscopios y aplicación. Microscopio óptico: partes, funcionamiento. Microscopio electrónico: de transmisión y de barrido.
INTRODUCCION AL ESTUDIO DE LA HISTOLOGIA Y MORFOLOGIA CELULAR
HISTOLOGIA : ¿QUÉ ES?
DEL GRIEGOHISTO = TEJIDO
LOGOS = ESTUDIO
FUNDADOR DE LA HISTOLOGIA: MARCELLO MALPIGHI
SIGLO XVII: PRIMERAS INVESTIGACIONES HISTOLOGICAS. INVENCION MO POR ANTONIO VAN LEEUWENHOEK
CIENCIA QUE ESTUDIA LA ANATOMIA MICROSCOPICA DE LAS CELULAS, ORGANOS Y SISTEMAS ASI COMO SU DESARROLLO Y SUS FUNCIONES
¿CON QUE OTRAS CIENCIAS SE RELACIONA?
ANATOMIAFISIOLOGIA BIOLOGIA CITOLOGIA BIOQUIMICA PATOLOGIA ONTOLOGIA
LA HISTOLOGIA REPRESENTA UN NEXO DE UNION ENTRE LA BIOQUIMICA, LA FISIOLOGIA, LA ANATOMIA, LA GENETICA, LA CLINICA Y LA PATOLOGIA
ENTONCES PODEMOS DECIR;
LA CELULA ES LA UNIDAD MORFOLOGICA Y FINCIONAL DE TODO SER VIVO. ES EL ELEMENTO DE MENOR TAMAÑO QUE PUEDE CONSIDERARSE VIVO
TEJIDOS: AGRUPACION DE CELULAS CON LA MISMA FUNCION
ORGANOS: UNIDAD FUNCIONAL MAYOR COMPUESTO POR DISTINTOS TIPOS DE TEJIDOS
SISTEMA DE ORGANOS: CONGUNTO DE ORGANOS CON FUNCIONES RELACIONADAS
PARA PODER OBSERVAR MICROSCOPICAMENTE ESTAS ESTRUCTURAS SE NECESITA:
TECNICA HISTOLOGICA
SERIE DE PASOS QUE DEBEN CUMPLIRSE PARA OBTENER UN PREPARADO OBSERVABLE AL MO
LA OBTENCION DE LA MUESTRA DE MATERIAL HUMANO PUEDEN PROVENIR DE NECROPSIAS, BIOPSIAS Y PIEZAS OPERADAS
NECROPSIA: LA MUESTRA SE OBTIENE DE UN CADAVER. PARA HISTOLOGIA NORMAL SE REQUIERE QUE SE TRATE DE UN CADAVER FRESCO.
BIOPSIA: TROZOS DE TEJIDOS QUE SE OBTIENEN DE UN SUJETO CON VIDA CON EL OBJETO DE ESTUDIARLO AL MO Y EFECTUAR UN DIAGNOSTICO HISTOPATOLOGICO.
PIEZAS OPERADAS: TEJIDOS EXTRAIDOS DE INTERVENCIONES QUIRURGICAS COMO TUMORES, ORGANOS INFLAMADOS
PREPARACION HISTOLOGICA DE LOS TEJIDOS
1) OBTENCION DE LA MUESTRA: MEDIANTE LA OBTENCION DE PEQUEÑOS FRAGMENTOS DE TEJIDOS (HUMANO O ANIMAL) ANTES DE LA AUTOLISIS O PUTREFACCION 2) FIJACION: CONSISTE
EN MANTENER LA MORFOLOGIA DEL TEJIDO LO MAS PARECIDO POSIBLE A COMO ERA EN EL ORGANISMO ANTES DE HACER LA EXTRACCION (FORMALDEHIDO 37%)
QUIMICOS INMERSION ALCOHOLES
FISICOS CONGELACION
PREPARACION HISTOLOGICA DE LOS TEJIDOS
3.- DESHIDRATACION: PROCESO POR EL CUAL SE ELIMINA EL AGUA DE LA MUESTRA TANTO INTRA COMO EXTRACELULAR PARA QUE SE PUEDE EMBEBER ADECUADAMENTE EL TEJIDO EN AQUELLOS MEDIOS DE INCLUSION QUE NO SEAN HIDROSOLUBRES. ESTE PROCESO SE REALIZA UTILIZANDO ALCOHOL ETILICO EN CONCENTRACIONES CRECIENTES.
PREPARACION HISTOLOGICA DE LOS TEJIDOS
4) ACLARAMIENTO: PROCESO POR EL CUAL SE CONSIGUE SUSTITUIR EL AGENTE DESHIDRATANTE POR UNA SUSTANCIA MISCIBLE CON EL MEDIO DE INCLUSION. SE UTILIZA XILOL
PREPARACION HISTOLOGICA DE LOS TEJIDOS
5) IMPREGNACION (INCLUSION): PROCESO QUE TIENE POR OBJETO “RELLENAR, IMPREGNAR O INFILTRAR” LA MUESTRA HISTOLOGICA DESHIDRATADA CON EL MEDIO QUE SE VA A USAR PARA LA IMBIBICION DEL TEJIDO. SE REALIZA SUMERGIENDO LA PIEZA EN BAÑOS SUCESIVOS DE PARAFINA FUNDIDA
PREPARACION HISTOLOGICA DE LOS TEJIDOS
6) ENCASTRAMIENTO DEL TEJIDO Y PREPARACION DE LOS BLOQUES: CONSISTE EN LA OBTENCION DE UN BLOQUE SOLIDO DE TEJIDO MAS MEDIO DE INCLUSION MEDIANTE EL ENFRIAMIENTO LENTO 10-15 º C. EL BLOQUE SOLIDO SE LLAMA TACO
PREPARACION HISTOLOGICA DE LOS TEJIDOS
7) ORIENTACION DE LA PIEZA: PARA REALIZAR EL CORTE DE TEJIDO SE MONTA EL TACO EN POSICION ADECUADA SDE ACUERDO AL TIPO DE CORTE QUE SE DESEA REALIZAR EN EL MICROTOMO Y SE OBTIENEN CORTES MUY DELGADOS QUE PARA MICROSCOPIA OPTICA VARIAN ENTRE 5 -10 MICROMETROS
PREPARACION HISTOLOGICA DE LOS TEJIDOS
MICROTOMO DE PARAFINA PARA TEJIDOS BLANDOS
MICROTOMO DE CONGELACION SE USA PARA TEJIDOS FRESCOS CONGELADOS
MICROTOMO DE CRIOSTATO PARA TEJIDOS FRESCOS Y TIENE UNA CAMARA DE CONGELACION
PREPARACION HISTOLOGICA DE LOS TEJIDOS
8) MONTAJE: LOS CORTES SE COLOCAN SOBRE LAMINAS PORTAOBJETOS CUBIERTOS PREVIAMENTE CON CAPA DE ALBUMINA O GELATINA
9) ACLARAMIENTO: EXTRACCION DE LA PARAFINA CON EL XILOL
PREPARACION HISTOLOGICA DE LOS TEJIDOS
10) REHIDRATACION: DESPLAZAR EL XILOL POR AGUA. ALCOHOL CON AGUA EN CONCENTRACIONES DECRECIENTES
11) TINCION O COLORACION: CON COLORANTES HISTOLOGICOS EN SU MAYORIA EN SOLUCION ACUOSA
PREPARACION HISTOLOGICA DE LOS TEJIDOS
PREPARACION DE TEJIDOS PARA MICROSCOPIA ELECTRONICA
1)FIJACION: GLUTARALDEHIDO O TETROXIDO DE OSMIO
2)DESHIDRATACION: ETANOL Y/O ACETONA EN CONCENTRACIONES CRECIENTES
3)ACLARACION: OXIDO DE PROPILENO4)INCLUSION: PLASTICOS (RESINAS)
EPOXIRRESINAS5)CONFECCION DE LOS BLOQUES: CORTES CON
ULTRAMICROTOMO CON CLUCHILLA DE VIDRIO O DIAMANTE ( 10-20 nm) EL CORTE SE CONTROLA CON UN MICROSCOPIO
6)MONTAJE: LOS CORTES ULTRA FINOS SE MONTAN EN UN RETICULADO DE COBRE (GRILLA) CUBIERTO POR UNA PELICULA PLASTICA DE SOSTEN DELGADA
FACTORES NECESARIOS PARA UNA BUENA TINCION
TIEMPO DE EXPOSICION
TEMPERATURA AMBIENTE
PH COLORANTE
CONCENTRACION COLORANTE
HISTOQUIMICA Y CITOQUIMICA
SE OCUPAN DE INVESTIGAR LA ACTIVIDAD QUIMICA QUE TIENE LUGAR EN LAS CELULAS Y LOS TEJIDOS. SE FUNDAMENTAN EN:
LA UNION ESPECIFICA DE UN COLORANTE EL USO DE UN ANTICUERPO MARCADO CON UN COLORANTE FLUORESCENTE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA INHERENTE A UN ELEMENTO CONSTITUTIVO DE LA CELULA
COMPOSICION QUIMICA DE LAS MUESTRAS BIOLOGICAS
DESPUES QUE OCURRE LA FIJACION LOS COMPONENTES QUE QUEDAN SON MACROMOLECULAS QUE NO SE DISUELVEN CON FACILIDAD LUEGO DE APLICAR EL FIJADOR
LA COMPOSICION QUIMICA DE UN TEJIDO PREPARADO PARA LA COLORACION DE RUTINA ES MUY DIFERENTE A LA DEL TEJIDO VIVOENTRE ESTAS
MACROMOLECULAS PODEMOS MENCIONAR: NUCLEOPROTEINAS, PROTEINAS INTRACELULARES DEL CITOESQUELETO, PROTEINAS EXTRACELULARES, COMPLEJOS FOSFOLIPIDOS - PROTEINAS (O CARBOHIDRATOS) DE LAS MEMBRANAS
ESTAS MOLECULAS CONSTITUYEN LA ESTRUCTURA DE LAS CELULAS Y TEJIDOS, SON LA BASE DE LA ORGANIZACIÓN VISIBLE EN LOS TEJIDOS AL MO
COMPOSICION QUIMICA DE LAS MUESTRAS BIOLOGICASMUCHOS
COMPONENTES DE LOS TEJIDOS DESAPARECEN DURANTE LA PREPARACION DE LOS CORTES TEÑIDOS CON HEMATOXILINA-EOSINA (HE)LOS COMPONENTES
SOLUBLES, LOS IONES Y LAS MOLECULAS PEQUEÑAS TAMBIEN DESAPARECEN DURANTE LA PREPARACION DE LAS MUESTRAS INCLUIDAS EN PARAFINA: GLUCOSA, SODIO, CLORO Y SUSTANCIAS SIMILARES
LOS LIPIDOS NEUTROS SON DISUELTOS POR LOS SOLVENTES ORGANICOS
ESTOS IONES Y PEQUEÑAS MOLECULAS NO CONSTITUYEN ELEMENTOS MORFOGENICOS HISTICOS SINO QUE PARTICIPAN EN LOS PROCESOS DE SISTESIS O REACCIONES CELULARES
FUNDAMENTOS QUIMICOS DE LA COLORACION
EL FUNDAMENTO DE CUALQUIER METODO DE TINCION RADICA EN LA PROPIEDAD QUE TIENEN TODOS LO TEJIDOS PARA INCORPORAR Y FIJAR DE MODO VARIABLE DIVERSAS SUSTANCIAS COLOREADAS LLAMADAS COLORANTES
¿COLORANTE? SUSTANCIAS QUE PUEDEN CONFERIR COLOR A OTROS CUERPOS
COLORACIONES UTILIZADAS EN MICROSCOPIA OPTICA
COLORANTES BASICOS: POSEEN UNA CARGA GLOBAL POSITIVA (CATIONICA) QUE REACIONA CON LOS COMPONENTES ANIONICOS DE LAS CELULAS Y TEJIDOS. EJEM: HEMATOXILINA
COLORANTES ACIDOS: AQUELLOS QUE POSEEN UNA CARGA GENERAL NEGATIVA (ANIONICOS) QUE REACIONA CON LOS COMPONENTES CATIONICOS DE LAS CELULAS Y TEJIDOS. EJEM: EOSINA
COLORACIONES UTILIZADAS EN MICROSCOPIA OPTICACOLORANTES NEUTROS: SU CARGA
GLOBAL ES NEUTRA POR LO QUE CONSERVAN LA PROPIEDAD DE COLOREAR CONJUNTA O SEPARADAMENTE DIVERSAS ESTRUCTURAS. EJEM: COLORANTE DE GIEMSA
COLORANTES METACROMATICOS: COLORANTES BASICOS QUE PRODUCEN TONOS DE COLOR TOTALMENTE DISTINTOS AL QUE SE ESPERA POR EL COLORANTE EMPLEADO. EJEM: AZUL DE METILENO O TOLUIDINA
COLORANTES INDIFERENTES: NO POSEEN CARÁCTER ACIDO, BASICO O SALINO DEFINIDO. COLOREAN MEDIANTE IMPREGNACION
COLORACIONES UTILIZADAS EN MICROSCOPIA OPTICA
HEMATOXILINA-EOSINA (HE) : UTILIZA DOS TIPOS DE COLORANTES. LA HEMATOXILINA ES UN COLORANTE BÁSICO, COLOREA LOS COMPONENTES ACIDOS DE LA CELULA (NUCLEO) DE COLOR MORADO Y LA EOSINA ES UN COMPONENTE ACIDO QUE SE UNE A ESTRUCTURAS BASICAS DE LA CELULA (CITOPLASMA) OTORGANDOLE UNA COLORACION ROSADA
COLORACIONES UTILIZADAS EN MICROSCOPIA OPTICA
COLORACION INDIFERENTE: IMPREGNACION CON SALES DE PLATA
COLORANTE NEUTRO: GIEMSA
COLORACIONES UTILIZADAS EN MICROSCOPIA OPTICA
COLORANTE METACROMATICO: TINCION AZUL DE TOLUIDINA
COLORACIONES UTILIZADAS EN MICROSCOPIA OPTICACOLORACION CON PAS (ACIDO
PERIÓDICO SHIFF) PARA DETERMINAR MACROMOLECULAS RICAS EN GLUCOGENOS, GLUCOPROTEINAS Y GLUCOSAMINOGLUCANOS. SE OBSERVA COLOR FUSCIA AL MO.
COLORACION CON AZAN (TRICROMICA): SE OBTIENEN TRES COLORES DIFERENTES. AZUL OSCURO EN LOS NUCLEOS DE LA CELULA, ROJO EN EL MUSCULO, QUERATINA Y CITOPLASMA CELULAR,AZUL CLARO EN EL MUCOCINOGENO Y COLAGENO (TEJIDO CONJUNTIVO)
COLORACION CON METALES:ACTUAN IMPREGNANDO A CIERTOS COMPONENTES CELULARES. SE USAN PARA MOSTRAR APARATO DE GOLGI Y LA NEUROFIBRILLA
COLORACIONES UTILIZADAS EN MICROSCOPIA OPTICACOLORACION CON HEMATOXILINA FERRICA:
PARA ESTUDIAR DETALLES CELULARES FINOS. EJEMP. FIBRAS ELASTICAS Y MITOCONDRIAS PRESENTES EN EL CITOPLASMA DE CIERTAS CELULAS
TRICROMICO DE CAJAL Y GALLEGOS: USA TRES COLORANTES PARA DEMOSTRACION DIFERENCIAL Y SELECTIVA DE FIBRAS ELASTICAS Y MUSCULO
ORCEINA Y FUSCINA RESORCINA: COLOREAN LAS FIBRAS ELASTICAS. SE VEN ENTRE BORDEAU Y CASTAÑO OSCURO
CARMIN DE BEST: PARA TINCION NUCLEAR Y DETECCION DE GLUCOGENO
ELEMENTOS CELULARES QUE PRESENTAN BASOFILIA
HETEROCROMATINA Y NUCLEOLOS DEL NUCLEOALGUNOS COMPONENTES CITOPLASMATICOSMATERIAL EXTRACELULAR
AFINIDAD POR LOS COLORANTES ACIDOS
COLOR MORADO AL MO
ELEMENTOS CELULARES QUE PRESENTAN ACIDOFILIA
AFINIDAD POR LOS COLORANTES BASICOS
COLOR ROSADO AL MO
LA MAYORIA DE LOS FILAMENTOS CITOPLASMATICOSLA MAYORIA DE LOS COMPONENTES MEMBRANOSOS INTRACELULARESLA MAYORIA DE LAS FIBRAS EXTRACELULARES
MICROSCOPIA
MICROSCOPIO: ¿QUÉ ES?INSTRUMENTO QUE AUMENTA EL TAMAÑO DE UNA IMAGEN Y PERMITE VER MAYORES DETALLES
MICROSCOPIO OPTICO
LAS CELULAS OBSERVADAS BAJO EL MO PUEDES ESTAR VIVAS O FIJADAS Y TEÑIDAS
CAMPO CLAROCAMPO OSCUROCONTRASTE DE FASEFLUORESCENCIALUZ UV
MICROSCOPIO ELECTRONICO:
TRANSMISION (MET)BARRIDO (MEB)
EL PODER DE RESOLUCION ES LA CAPACIDAD DE LA LENTE O DEL SISTEMA OPTICO DE UN MICROSCOPIO DE PRODUCIR IMÁGENES SEPARADAS DE OBJETOS QUE SE ENCUENTRAN MUY PROXIMOS
LA RESOLUCION DEPENDE:ESPESOR DE LA MUESTRACALIDAD DE LA FIJACIONINTENSIDAD DE LA COLORACION
SISTEMA OPTICOFUENTE LUMINOSALONGITUD DE ONDA
PARTES DE UN MICROSCOPIO OPTICO
Partes Mecánicas:•El pie o base•El tubo•Brazo•El Revolver•La Platina•El carro•Tornillo macrométrico•Tornillo micrométrico
Partes Ópticas:•Condensador•Lámpara•Objetivos•Ocular
M.OPTICO DE CAMPO CLARO
USA LUZ VISIBLE D= 0,2um (micómetro)
LA LUZ ATRAVIESA EL OBJETO EXAMINADO Y EL OBJETIVO CAPTA LA LUZ DIRECTA PROVENIENTE DE LA FUENTE LUMINOSA UTILIDAD: ACADEMICO,
DIAGNOSTICO CLINICO (LAB. BIOANALISIS, PATOLOGICOS) INVESTIGACION
COMPONENTES PRINCIPALES:
FUENTE LUMINOSA: LAMPARA DEBAJO DE LA PLATINALENTE CONDENSADORA: PARA ENFOCAR EL HAZ DE LUZ A LA ALTURA DE LA MUESTRAPLATINA: SOBRE DONDE SE COLOCA LA LAMINA CON LA MUESTRALENTE OBJETIVO: RECOGE LA LUZ QUE HA ATRAVESADO LA MUESTRALENTE OCULAR: A TRAVES DEL CUAL SE PUEDE EXAMNINAR DIRECTAMENTE LA IMAGEN FORMADA POR LA LENTE OBJETIVO
MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASE
APROVECHA LAS PEQUEÑAS DIFERENCIAS DE LOS INDICES DE REFRACCION QUE HAY EN DIFERENTES PARTES DE UNA MUESTRA DE CELULAS O TEJIDOS.
LAS PARTES OSCURAS CORRESPONDEN A LAS REGIONES DENSAS Y LAS PARTES CLARAS CORRESPONDEN A LAS REGIONES MENOS DENSAS.UTILIDAD: PERMITE ESTUDIAR LAS CELULAS EN ACCION Y ESTUDIAR LOS MOVIMIENTOS IMPLICADOS EN PROCESOS COMO LA MITOSIS O LA MIGRACION CELULAR. ESTUDIA CORTES SEMIFINOS NO TEÑIDOS
MICROSCOPIO OPTICO DE CAMPO OSCURO
LA LENTE OBJETIVO NO CAPTA LA LUZ DIRECTA PROVENIENTE DE LA FUENTE LUMINOSA
EL PRINCIPIO ESTA BASADO EN UN CONDENSADOR ESPECIFICO QUE TRANSMIRIR LA LUZ DE FORMA CIRCULAR, DEJANDO EL CENTRO OSCURO.
ESTO PERMITE QUE EL FONDO DE LA MUESTRA PERMANEZCA OSCURO Y LOS ESPECIMENES BRILLANTES
UTILIDAD: EN LA PRACTICA CLINICA PARA LA DETECCION DE CRISTALES EN LA ORINA Y LA IDENTIFICACION DE ESPIROQUETAS
MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA
APROVECHA LA CAPACIDAD DE ALGUNAS MOLECULAS DE FLUORESCER BAJO LA LUZ UV
UTILIDAD: DETECCION DE MOLECULAS CON AUTOFLUORESCENCIA COMO LA VITAMINA A Y ALGUNOS NEUROTRANSMISORES (FLUORESCENCIA NATURAL)EN TECNICAS DE INMUNOHISTOQUIMICA (FLUORESCENCIA SECUNDARIA)EN LA INVESTIGACION DE TRAYECTOS DE FIBRAS NERVIOSAS
MICROSCOPIO DE LUZ ULTRAVIOLETA
USA LENTES DE CUARZO CON UNA FUENTE DE LUZ UVLA IMAGEN DEPENDE DE LA ABSORCION DE LA LUZ UV POR LAS MOLECULAS DE LA MUESTRALA MUESTRA NO PUEDE INSPECCIONARSE DIRECTAMENTE A TRAVES DEL OCULOAR PORQUE LA LUZ UV NO ES VISIBLE Y LESIONA EL OJO.
UTILIDAD: DETECTAR ACIDOS NUCLEICOS EN ESPECIAL LAS PURINAS Y PIRAMIDINASDETECTAR LAS PROTEINAS QUE TIENEN CIERTOS AMINOACIDOS (ANTICUERPOS)
MICROSCOPIA ELECTRONICA
REPRESENTA UN GRAN ADELANTO DE LA MICROSCOPIA OPTICA, YA QUE:
REEMPLAZA LA LUZ VISIBLE POR UN HAZ DE ELECTRONES. ESTE HAZ DE ELECTRONES ES 2000 VECES MENOR QUE LA DEL HAZ DE LUZ, OTORGANDOLE UN PODER DE RESOLUCION MUY ELEVADO.LOS ELECTRONES NO PUEDEN ATRAVESAR EL VIDRIO POR LO QUE DEBEN REEMPLAZARSE POR BOBINAS O LENTES ELECTROMAGNETICOS
EXISTEN DOS TIPOS: MET Y MEB
UTILIZA UN HAZ DE ELECTRONES EN LUGAR DE UN HAZ DE LUZLA FUENTE ES UN FILAMENTO DE TUNGSTENO CALENTADO QUE EMITE ELECTRONESEL HAZ DE ELECTRONES ATRAVIESA UNA SERIE DE LENTES ELECTROMAGNETICAS QUE CUMPLEN LA MISMA FUNCION QUE LAS LENTES DE CRISTAL DE MOLA IMAGEN FINAL SE OBSERVA EN UNA PANTALLA FLUORESCENTE
MICROSCOPIO ELECTRONICO DE TRANSMICION
MICROSCOPIO ELECTRONICO DE BARRIDOEL HAZ DE ELCTRONES NO ATRAVIESA LA
MUESTRA SINO QUE EXPLORA (BARRE) SU SUPERFICIEFORMA UNA IMAGEN DE TIPO TRIDIMENSIONAL EWN UN TUBO DE RAYOS CATODICOS DE ALTA RESOLUCION